专利名称：由来自蜂蜡的高级脂肪伯醇组成的天然混合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及制备一种新的天然组合物，其由22—38个碳原子，特别是24—34个碳原子，更特别是24，26，28，30，32和34个碳原子的高级脂肪伯醇组成。该混合物每种醇的相对组成在每批之间有高度可重复性。
本发明主要涉及药物工业，特别是开发具有特异性能的药物配制品，因为它们可用于治疗胃和十二指肠溃疡，还可以作为抗炎剂。
这些配制品含有作为活性成分的，来自峰蜡的24—34个碳原子，特别是24，26，28，30，32和34个碳原子的线性高级脂肪伯醇的天然混合物(在下文中称为M.H.A.A.B.W.)。
这些以24—34个碳原子的饱和线性高级脂肪伯醇作为活性成分的，具有特异药理性能的药物是鲜为人知的。以前仅仅报道过得自甘蔗蜡的天然混合物(EPA0 488 928)。
自古以来，经验医学中已经使用蜜蜂生产物。随着分析方法的发展，在许多情况下，鉴别这些产物中的活性成分成为可能，这就使人们理解了它们的一些生物和药代动力学效应。这些具有治疗效果的产物可例举峰王浆、蜂蜜、花粉和蜂蜡。考虑到它们的营养性、清除作用和其他的药学特性以及其用做皮肤假面的可能性，蜂蜡一般用于药物和化妆品工业。蜂蜡主要由下列类型的化合物组成—21到37个碳原子的饱和和不饱和的长链烃(55—75％)；—脂肪酸酯(约30％)，其含线性长链醇(16—30个碳原子)；—16—30个碳原子的游离脂肪酸(约1—5％)，及占酸性部分30％的18∶1酸；—游离长链醇(约1—7％)，含量最丰富的是三十碳醇、二十八碳醇和二十六碳醇；—其它极性组分(约1—3％)。
本发明的步骤是基于预先熔化的蜂蜡用碱金属和碱土金属氢氧化物浓溶液均相皂化的方法，特别是用低分子量的碱金属碱土金属氢氧化物，更特别是用氢氧化钠、氢氧化钾或氢氧化钙。
氢氧化物溶液的浓度一定要使相应的氢氧化物的重量与待处理的蜂蜡的重量比大于5％，特别为8—25％，更特别为15—25％。皂化过程保持至少30分钟，特别为2—5小时。
将在此步中得到的固体置于一固—液提取器中，用足量的有机溶剂选择性地萃取M.H.A.A.B.W.，溶剂选自C3—8酮、C6—9烃、C1—5醇、卤代烃及芳香化合物如苯和其衍生物，包括它们的混合物。用于本发明的一些溶剂如下丙酮、甲基乙基酮、戊酮、己酮、庚酮、2—甲基戊酮、乙醇、甲醇、2—丙醇、丁醇、叔丁醇、戊烷、己烷、庚烷、辛烷、氯仿、1，2—二氯乙烷、二氯甲烷、三氯乙烷、1，2，3—三氯丙烷、苯、甲苯、苯酚、对二甲苯及其它。
萃取进行5—10小时，然后产物用上述溶剂或它们的混合物结晶。收率为约30％，而产物(M.H.A.A.B.W)的纯度为80—98％，特别是90—98％。
在本发明中如此得到的产物(M.H.A.A.B.W)为由C24—34的高级脂肪伯醇组成的混合物。其熔点为80.0—82.5℃。这里提出的从蜂蜡中获取M.H.A.A.B.W的方法与以前报导的其它方法相比有一些优点。一个优点是制备时间短，另一个是M.H.A.A.B.W的实际收率[近30％(重量)]高于以前描述的结果，另一个优点是所得产物的纯度明显高于以前所报导。在表1中报导了M.H.A.A.B.W的质和量的一般组成，表2中报导了M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
表1所得M.H.A.A.B.W的质和量的一般组成组分 在混合物中的百分比1—二十四碳醇9.0—15.0％1—二十六碳醇12.0—18.0％1—二十八碳醇13.0—20.0％1—三十碳醇 20.0—30.0％1—三十二碳醇13.0—21.0％
1—三十四碳醇1.5—3.5％表2所得M.H.A.A.B.W的质和量的具体组成组分 在混合物中的百分比1—二十四碳醇12.5+/-1.0％1—二十六碳醇14.5+/-1.2％1—二十八碳醇16.5+/-2.0％1—三十碳醇 24.6+/-1.6％1—三十二碳醇16.7+/-1.4％1—三十四碳醇2.3+/-0.5％M.H.A.A.B.W用于治疗不同疾病的日剂量为1—100mg/天，最有效的给药途径是口服，剂型为片剂及粒剂或胶囊。虽然考虑到本发明推荐的使用方法，此药可以经非肠道给药或局部给药。
药物配制品含有0.5—25.0％的活性成分M.H.A.A.B.W。通过将此M.H.A.A.B.W与不同的赋形剂如凝集剂、崩解剂、润滑剂、Slider或填充剂混合物获得此剂型。这些赋形剂包括乳糖、玉米淀粉、蔗糖、硬脂酸镁、微晶纤维素、交联的羧甲基纤维素钠、明胶、纤维素、乙酰邻苯二甲酸酯、二氧化钛、片剂专用滑石、聚乙二醇、聚乙烯吡咯烷酮和其它。
本发明的目的之一是从蜂蜡开始得到、分离和纯化由(C24—34的高级脂肪伯醇组成的天然混合物，特别是含24、26、28、30、32和34个碳原子的伯醇的天然混合物。
本发明的另一目的是将这些天然混合物以相对低的剂量用作治疗胃和十二指肠溃疡的药物中药物配方的成分。已证明此新的M.H.A.A.B.W可明显减轻由阿斯匹林、乙醇、消炎痛和其它有关药物(其在所治疗病人中能产生胃溃疡)引起的胃溃疡。另外，此M.H.A.A.B.W还明显减轻十二指肠溃疡。
本发明的另一目的是开发含M.H.A.A.B.W作为活性分成的药物配方，用作抗炎药，可口服给药或非肠道途径及局部给药。
最后，本发明中得到的这种M.H.A.A.B.W的全球商业价值和推荐用作药物配方的活性成份，可证明它是非常安全的和耐受性良好的混合物，这是一个重要的优点。这一点可得到在啮齿动物和兔中进行的急性、亚慢性和慢性毒性实验结果的支持，结果显示无药物有关毒性。另外，它在啮齿动物中没有显示任何致突变作用和致畸作用。在用本发明产品进行治疗的临床试验中没有发现任何付作用。
参考下列实施例将更详细地说明本发明的目的，但不限制其范围。实施例1取1000g切细的蜂蜡，在100—110℃熔化，加入溶于150ml水中的200g氢氧化钾。搅拌下保持30分钟。得到的固体M.H.A.A.B.W在固—液萃取系统中用庚烷萃取。将萃取液冷却至室温，用甲基乙基酮结晶。得到250g M.H.A.A.B.W，纯度为93.26％。混合物熔点为81.0—82.5℃。表3表示用此步骤得到的M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
表3所得M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
组分 每种醇的百分比1—二十四碳醇13.211—二十六碳醇15.501—二十八碳醇17.891—三十碳醇 26.031—三十二碳醇18.051—三十四碳醇2.58实施例2取2Kg蜂蜡，在90—100℃下熔化，加入溶于200ml水中的300g氢氧化钠。搅拌下保持3小时。得到的固体M.H.A.A.B.W在传统固—液萃取系统中用乙醇萃取12小时。将萃取液冷却至室温，用甲基醇重结晶所得固体。得到393g M.H.A.A.B.W，纯度为93.33％。混合物熔点为80.5—82.0℃。表4表示用此步骤得到的M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
表4所得M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
组分 每种醇的百分比1—二十四碳醇13.28
1—二十六碳醇15.421—二十八碳醇18.111—三十碳醇 26.101—三十二碳醇17.731—三十四碳醇2.68实施例3取50kg蜂蜡，在100—120℃熔化，加入溶于101水中的12Kg氢氧化钙。搅拌下保持3.5小时。得到的M.H.A.A.B.W在固—液萃取器中用氯仿萃取12小时。将萃取液冷却至室温，随后用庚烷重结晶。得到14.5Kg M.H.A.A.B.W，纯度为93.77％。混合物熔点为81.5—82.5℃。表5表示用此步骤得到的M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
表5.所得M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
组分 每种醇的百分比1—二十四碳醇13.481—二十六碳醇16.121—二十八碳醇17.511—三十碳醇 26.551—三十二碳醇17.731—三十四碳醇2.38实施例4
取50Kg蜂蜡，在100—120℃熔化，加入溶于7.5 L甲醇/水1/1中的10.6Kg氢氧化钠。搅拌下保持4.5小时。得到的M.H.A.A.B.W在固—液萃取器中用2—丙醇萃取12小时。将萃取液冷却至室温，用甲苯∶氯仿1∶1的混合物中重结晶。得到9.3KgM.H.A.A.B.W，纯度为93.36％。混合物熔点为80.5—82.0℃。表6表示用此步骤得到的M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
表6所得M.H.A.A.B.W的质和量的组成。
组分 每种醇的百分比1—二十四碳醇13.331—二十六碳醇15.541—二十八碳醇17.021—三十碳醇 27.041—三十二碳醇17.831—三十四碳醇2.60实施例5用此M.H.A.A.B.W作为活性成分制备了两种不同的药物配制品。每种配制品的组成示于表7中。考虑到M.H.A.A.B.W的物理、化学和物化性质制备了这些配制品。
表7用M.H.A.A.B.W作为活性成分的药物配制品组分 配制品1 配制品2(％) (％)
M.H.A.A.B.W 5.0 15.0乳糖 56.5 55.0玉米淀粉 15.0 10.0聚乙烯吡咯烷酮 2.5 2.0交联羧甲基纤维素钠 5.0 4.0蔗糖 5.0 4.0滑石 2.0 2.0硬脂酸镁 1.5 1.0微晶纤维素 7.5 7.0实施例6使重200—250g的雌性Sprague Dawley大鼠和重300—400g的雄性豚鼠在实验室条件下适应7天。将大鼠随机地分成不同的试验组。禁食24小时后，一组大鼠腹膜内注射悬浮在2％Tween 20/水载体中的M.H.A.A.B.W，而对照组仅注射相同体积的载体(Tween20/水)。这些处理在诱导溃疡前1小时进行。用作溃疡诱导剂的是NaOH(0.2mol/L)、乙醇(60％)、ASA(40mg/kg)和消炎痛(50mg/kg)(消炎痛溶解在5％碳酸氢钠中)，通过胃饲管给药。乙醇诱导载体或1，5，25，50和100mg/kg的M.H.A.A.B.W给药1小时后，每只大鼠通过胃饲管口服60％乙醇(1ml/200g)。一小时后，将鼠杀死，对胃溃疡进行定量。ASA诱导将豚鼠分成4个试验组，一组作为对照，3组腹膜内注射M.H.A.A.B.W(5.25和100mg/kg)。对照组注射相等体积的载体。一小时后对鼠胃内给以ASA(40mg/kg)。2小时后，将鼠处死，测量胃溃疡。消炎痛诱导将大鼠随机地分成3个试验组一个为照组，两个腹膜内给以25和50mg/kg的M.H.A.A.B.W。一小时后通过胃饲管给以消炎痛，4小时后，处死动物，将胃溃疡定量。在每个诱导溃疡的例子中，迅速处死动物后，取出胃，从大弯处打开胃，用盐水溶液洗涤，测量溃疡的大小。结果用损伤的总和(mm)表示，损伤由两个不同的观察者测量。
在每例中，用非参量U de Mann Whitney检验进行治疗组和对照组的比较。M.H.A.A.B.W对乙醇、ASA和消炎痛诱导的胃溃疡的效果的结果分别示于表8、9和10中。
表8M.H.A.A.B.W对乙醇(60％)诱导的胃溃疡的效果(X+/-DE)治疗剂量(mg/kg) n溃疡大小(mm)对照25 35，46+/-4，81M.H.A.A.B.W. 1 10 35，28+/-9，135 10 4，11+/-1，57＊＊＊25 10 8，90+/-3，82＊＊＊100 10 9，35+/-3，88＊＊＊＊p＜＜0，01；＊＊＊p＜＜0，001(U de Mann Whitney检验)表9M.H.A.A.B.W对ASA(40mg/kg)诱导的胃溃疡的效果(X+/-ES)治疗 剂量(mg/kg)n 溃疡大小(mm)对照8 39，37+/-10，69M.H.A.A.B.W.5 6 38，00+/-13，9025 8 9，50+/-1，72＊100 6 25，83+/-3，77＊p＜＜0，05(U de Mann Whitney检验)
表10M.H.A.A.B.W对消炎痛(50mg/kg)诱导的胃溃疡的效果(X+/-ES)治疗 剂量(mg/kg) n 溃疡大小(mm)对照 11 38，65+/-9.48M.H.A.A.B.W.25 11 17，50+/-4，38＊50 10 13，14+/-3，60＊＊p＜＜0，05(U de Mann Whitney检验)。
M.H.A.A.B.W在乙醇、ASA和消炎痛诱导的溃疡模型中保护胃粘膜(表8、9和10)，明显减小溃疡的大小。实施例7本实验的目的是判定M.H.A.A.B.W对抗胃溃疡的保护作用是否依赖于前列腺素。用加libitum的水和食物使重150—200g的雄性Sprague Dawley鼠适应实验室条件7天，试验前48小时禁食。将动物随机地分为4个试验组。
腹膜内给以M.H.A.A.B.W在2％Tween 20/水中的悬浮液，将西莫替丁溶解在热水中，消炎痛溶解在5％碳酸氢钠中。四个试验组如下(n＝10)1)对照(载体)；2)和3)分别给25和50mg/kg的M.H.A.A.B.W，及4)25mg/kg的西莫替丁。腹膜内给动物注射后，皮下给以消炎痛10mg/kg。半小时后给60％乙醇，一小时后处死动物，取出胃，从大弯处打开胃，用3倍放大镜测量溃疡大小。结果用毫米表示。
在所有示例中，用非参量U de Mann Whitney检验比较治疗组和对照组。M.H.A.A.B.W对乙醇和消炎痛诱导的胃溃疡的效果的结果示于表11中。
表11M.H.A.A.B.W对乙醇100％和消炎痛(10mg/kg)诱导的胃溃疡的效果治疗 剂量(mg/kg)n 溃疡(mm) 抑制率(％)乙醇(60％)10 35，3+2，95消炎痛10 0消炎痛＋乙醇 9 54，6+/-8，55↑tweenM.H.A.A.B.W. 258 13，8+/-5，44＊72，85051 8，0+/-6，04＊64，5西莫替丁259 14，6+/-5，64＊71，2＊p＜＜0，05(U de Mann Whitney检验)
从表中可以看到，当使用所示剂量的M.H.A.A.B.W或西莫替丁时，由乙醇诱导的溃疡减小，在先服用消炎痛的情况下由是如此。消炎痛单独不产生溃疡，但能加重乙醇的溃疡效果。
试验设计是基于在用乙醇诱导溃疡前先服用消炎痛，如果化合物还保持对抗溃疡保护作用，则其不依赖于前列腺素。结果表明M.H.A.A.B.W在服用消炎痛后仍具有抗溃疡的作用，可以推断这种保护作用可能不依赖于前列腺素。实施例8上述实施例所得结果暗示其作用与酸化合物诱导的溃疡相关或不相关。为了克服对胃酸分泌抑制的抑制作用，在Pilorous结扎模型中测定M.H.A.A.B.W对胃酸分泌的作用。
用加libitum的水和食物使重150—200g的雌性Sprague Dawley鼠适应实验室条件15天。将动物随机地分为不同试验组，在结扎前48小时禁食。腹膜内给以M.H.A.A.B.W在2％Tween20/水中的悬浮液。
将西莫替丁溶解在热水中，通过与M.H.A.A.B.W相同的途径给药。将动物分成6个试验组1)对照(载体)；2)、3)和4)分别给以25、50和100mg/kg的M.H.A.A.B.W，5)和6)(阳性对照)分别给以25和50mg/kg的西莫替丁。
将大鼠用乙醚麻醉并从腹部切开，取出胃，用丝线结扎Pilorous。然后立即腹膜内给以此化合物，并皮下注射3ml生理盐水。四小时后，处死动物，取出完整的胃，在食道处钳住。胃内物在3000min-1下离心10分钟，然后测量体积。用0.1 mol/L NaOH以酚酞为指示剂测定胃液的酸性。用非参量U de Mann Whitney检验比较治疗组和对照组结果。在Pilorons结扎中M.H.A.A.B.W对胃酸性的作用示于表12中。
表12在Pilorous结扎模型中M.H.A.A.B.W对胃酸性的影响治疗 剂量 η 胃液体积 酸性(mg/kg)(mL)(meq H+/mL)对照 12 8，18+/-0，51 0，109+/-0，002M.H.A.A.B.W. 25 10 5，00+/-0，58＊0，09+/-0，0150 11 5，51+/-0，54＊0，104+/-0，006100 10 5，4 9+/-0，65＊0，114+/-0，002西莫替丁 25 9 5，8 7+/-0，63＊0，080+/-0，009＊50 9 5，8 3+/-0，38＊＊0，083+/-0，006＊＊＊p＜＜0，05；＊＊p＜＜0，01(U de Mann Whitney检验)。
从中可以看出，当给以M.H.A.A.B.W(25、50和100mg/kg)时，Pilorous结扎鼠的胃液明显减少，最低剂量125mg/kg，得到了最大效果。25和50mg/kg的西莫替丁明显减少胃液体积还减低H+离子浓度。
此试验说明M.H.A.A.B.W(25、50和100mg/kg)在Pilorus模型中明显抑制胃液体积，而不影响H+离子含量，这实际上克服了西莫替丁或omeprazol类的抑制H+离子分泌作用。实施例9为了证实M.H.A.A.B.W的抗炎作用，使用了角叉菜甘诱导的胸膜炎和棉粒模型，这是评价抗炎药物的模型。
棉粒将重200—250g的雄性Sprague Dauley鼠以上试验的相同方法适应实验室条件。口服给以M.H.A.A.B.W在2％Tween 20/水中的悬浮液，而消炎痛溶解在5％碳酸氢钠中。二者都在植入棉花后6天内通过胃饲管给药。将鼠随机地分成5个试验组1)对照(载体)；2，3和4)分别给以25，50和100mg/kg的M.H.A.A.B.W，5)给以3mg/kg的消炎痛。鼠先用乙醚麻醉，在背部做一切口。在局麻下将50mg消毒棉花片植入皮下，最后缝合伤口。
在最后给药一天后，在乙醚氛中麻醉动物，小心剥离棉粒，在60℃炉中干燥24小时。从棉粒重中减去棉片重(50mg)。与对照组中形成的棉粒相比，计算抑制百分率。M.H.A.A.B.W对棉粒的作用结果示于表13中。表13服用M.H.A.A.B.W对棉粒模型的作用治疗 剂量 n 棉粒重 抑制率(mg/kg) (mg)(％)对照8258＋0.12M.H.A.A.B.KY25 8138＋0.05*46.5150 7162＋0.11**54.7100 9117＋0.04**54.7消炎痛 3 5 79＋0.02**69.3
*P＜0.05，**P＜0.01(U de Mann whithey检验)角叉菜苷诱导的胸膜炎使用雄性Sprague Dawley大鼠(200、250g)，用加Libitum的水和食物使其适应实验室条件15天。试验前12小时禁食。给以M.H.A.A.B.W在10mg/ml阿拉伯树胶/水中的悬浮液，以及三十碳醇，而消炎痛溶解在5％碳酸氢钠中。
所有给药都在注射角叉菜苷以前1小时用胃饲管进行。将鼠随机分为下列试验组1)对照组(载体)；2)、3)和4)分别给以25，50和100mg/kg的M.H.A.A.B.W；5)50mg/kg的三十碳醇和6)10mg/kg的消炎痛。
为了诱生水肿，用乙醚麻醉大鼠，在胸膜腔内注射0.3ml角叉菜苷在1％盐水中的溶液。5小时后，处死动物，收集渗出液，测其体积。用下式计算水肿抑制率抑制率(％)＝1－(VT)(VC)×100其中VT＝治疗组动物的水肿体积
VC＝对照组动物的水肿体积该试验的结果表示14中。
表14在角叉菜甘诱发的胸膜炎中口服M.H.A. A.B.W的作用治疗剂量 n渗出物体积 抑制率(mg/kg) (ml) (％)对照 151.24＋0.30M.H.A.A.B.W 25 101.13＋0.39 8.950 100.98＋0.36 20.9100110.85＋0.28*31.4三十碳醇 100100.96＋0.30*27.4消炎痛10 140.50＋0.15***59.6*P＜0.05***P＜0.001(U de Mann Whitney检验)。
从此表中可以看出，在最大试验剂量下，M.H.A.A.B.W显示中等抗炎作用，对胸膜渗出物抑制率为23.3％，此为观察到的最大作用，而消炎痛(10mg/kg)对水肿产生保护性效能，抑制率为59.6％。三十碳醇也有效，但其效力此相似剂量的M.H.A.A.B.W低。
这些结果表明M.H.A.A.B.W在棉粒模型中比在角叉菜苷诱导的胸膜炎模型中更有效。这两个试验的区别点在于棉粒模型中最重要特点是细胞迁移(嗜中性白细胞)，而角叉菜苷诱发的胸膜炎模型在于炎症渗出液(增加血管穿透性，引起水肿)，后一作用与前列腺素(E和F)密切相关。炎症介质leukotrienes，特别是LTB4表现多形核白细胞的强趋化(chemiotactic)作用，产生聚集、解聚及从它们中游离出lisosomal酶。
这一事实的一种可能解释是M.H.A.A.B.W在一定程度上抑制Leukotrienes的合成或释放，产生抗炎作用(抑制细胞迁移)，但还使氨基酸代谢形成初级前列腺素，它介导渗出液增加。这意味着M.H.A.A.B.W作为抗炎剂仅在涉及细胞迁移的过程中有效。实施例10平均体重280—350g的两性混合的一组豚鼠albines自由饮水取食，适应实验室条件一周。腹膜内给以苯巴比妥钠(50mg/kg)将这些动物麻醉。将一导管插入气管中，与呼吸泵连结(55次呼吸/分钟)。以3—4ml的体积人工给动物通气。用连有记录仪的压力传导器(MP 0.5)测定气管压力。
在给PAF(40μg/Kg)前，先将本发明的M.H.A.A.B.W通过静脉内途径给药，剂量为10、1和0.5mg/kg。为了测定M.H.A.A.B.W对PAF诱导的组胺反应的作用，在M.H.A.A.B.W给药前10分钟，给动物PAF或盐水(对照)，稍后就产生了可重复的组氨反应(2—12μg/kg.i.v)。所得结果示于表15和16中。
表15M.H.A.A.H.W对豚鼠中PAF诱导的支气管收缩的作用剂量 最大支气管收缩(mg/kg)(％)对照 - 39.60M.H.A.A.B.W 1.0 13.80*对照 - 21.28M.H.A.A.B.W 0.5 20.26 n.s*P＜0.05(U de Mann Whitney检验)。*P＜0.05(U de Mann Whitney检验)。
在每个试验结束时闭合气管，得到了支气管收缩的最大百分比。
表16M.H.A.A.B.W对豚鼠中PAF(40ng/kg)诱导的组胺hiper—反应的作用剂量 n 支气管收缩(％)(mg/kg) PAF前 PAF后对照 - 8100 157+/-28M.H.A.A.B.W 10 6100 105+/-13**对照 - 5100 199+/-47.6M.H.A.A.B.W 1.05100 117+/-25.3**对照 - 4100 183+/-18.0M.H.A.A.B.W 0.54100 172g+/-15n.s.
**P＜0.01(U de Mann Whitney检验)在每个动物中，在给PAF前的组胺反应作为100％。M.H.A.A.B.W促使组胺支气管收缩反应，但明显减低PAF诱导的支气管收缩以及该试剂在1—10mg/kg浓度诱导的组胺hiper反应。
该M.H.A.A.B.W表现对PAF和/或Leakotrienes激动剂和/或脂氧合酶抑制剂的受体的作用。此作用可以解释前边报导的抗溃疡和抗炎作用。可以看出，本发明的新M.H.A.A.B.W即不阻断也不增加组氨的支气管收缩作用，这就是它克服了抗组氨作用。实施例11进行了本发明的来自蜂蜡的高级脂肪伯醇天然混合物的性质与来自甘蔗蜂蜡的高级脂肪伯醇天然混合物的性质(EPO 0488 928)(在此称为M.H.A.A.S.C.W)的比较研究。此研究证明了此两个混合物不仅在醇的数目和相同醇的相对组成上不同，而且其在不同的传统用于药理筛选的试验模型中的药理表现不同。为此原因所进行的试验如下a)抗炎作用为了验证两个混合物的抗炎作用，使用了角叉菜甘诱导的胸膜炎和棉粒模型，剂量分别为100和200mg/kg。
b)抗溃疡作用为了验证两个混合物的抗溃疡作用，使用本发明实施例8中描述的试验方法，测混合物试剂为25mg/kg体重。
c)低脂作用用雄性新西兰兔，分为下列各组a)对照，b)M.H.A.A.B.W(5mg/kg)，c)M.H.A.A.S.C.W(5mg/kg)，口服一个月。每15天采一次血样，以测定脂质参数(总胆固醇，甘油三酯、HDL—C、LDL—C和VLDL—C)。
d)抗局部缺血作用为了分析两种混合物对脑局部缺血的作用，使用由蒙古沙土鼠动脉结扎产生的脑局部缺血模型。用重60—80g的雌性蒙古沙土鼠，自由取食和水使适应实验室条件。两种混合物均通过腹膜内给药。以2％Tween20/水作为载体。将动物分为下列试验组1)对照(载体2％Tween20/水)，2)M.H.A.A.B.W(200mg/kg)及3)M.H.A.A.S.C.W(200mg/kg)。
用乙醚氛麻醉动物，结扎左颈动脉。观察动物24小时，记录脑损伤的临床疽状表现，如转圈、滚动和抽搐，以及在试验过程中的死亡数目。
e)抗血小板凝集作用为了验证两混合物对由ADP或胶原诱生的鼠中血小板凝集，使用重250—350g的数只雄性Sprague Dawley大鼠。每种混合物通过胃饲管口服给药4周，为在阿拉伯树胶/水载体中的悬浮液(1ml/100g体重)。将动物随机地分为3个试验组，a)对照(仅用载体)，b)M.H.A.A.B.W(25mg/kg)，C)M.H.A.A.S.C.W(25mg/kg)。
为测定血小板凝集作用，用乙醚将鼠麻醉。打开腹部后，从腔静脉中取5ml血，与3.8％柠檬酸钠混合(9体积血用1体积的柠檬酸钠)。血液离心得到富血小板血浆(PRP)，PRP样份在330g下离心15分钟得到贫血小板血浆(PPP)。用ADP或胶原诱导血小板凝集，用Payton凝集计记录。
f)抗血栓形成作用作用了各种血柱形成模型研究抗血栓形成作用。给药情况如下1)对照，2，3，4)M.H.A.A.B.W(25，50和100mg/kg，5，6，7)M.H.A.A.S.C.W如(25，50和100mg/kg)。
腹膜内用苯巴比妥钠，将大鼠麻醇。随后通过腹静脉射低渗盐水(0.22％NaCl)。一分钟后，打开腹部，暴露腔静脉，分离并用丝线将此静脉结扎。缝合腹部，10分钟后再打开腹腔，在第一次结扎处下游2cm处再结扎。然后立即去除，并纵向切开，取出血栓，室温下置于一湿炉中，一小时后称重。
所有药理试验所得结果综合在下表17中。
表17来自峰蜡的天然混合物与来自甘蔗蜡的混合物的作用比较试验 M.H.A.A.S.C.WM.H.A.A.B.W抗炎 +-低脂作用 -+++抗局部缺血 ++++抗溃疡 +++ +抗血小板凝集 -+抗血栓形成 -+活性(+)可见(++)中等(+++)高(-)无任何活性从这些结果可以看出，两种高级脂肪伯醇混合物的药理性质不同，两种混合物都有抗溃疡作用，但从表中可以看出，来自蜂蜡的醇混合物(M.H.A.A.B.W)比来自甘蔗蜡的混合物(M.H.A.A.S.C.W)要有效地多。
权利要求
1.治疗胃和十二指肠溃疡及作为抗炎剂的药物组合物，其含有C24—34的高级脂肪伯醇的混合物作为活性成分，醇混合物的一般组成如下1—二十四碳醇9.0—15.0％1—二十六碳醇12.0—18.0％1—二十八碳醇13.0—20.0％1—三十碳醇 20.0—30.0％1—三十二碳醇13.0—21.0％1—三十四碳醇1.5—3.5％
2.根据权利要求1的药物组合物，其中醇混合物的更具体组成如下1—二十四碳醇12.5+/-1.0％1—二十六碳醇14.5+/-1.2％1—二十八碳醇16.5+/-2.0％1—三十碳醇 24.6+/-1.6％1—三十二碳醇16.7+/-1.4％1—三十四碳醇2.3+/-0.5％
3.权利要求1或2定义的来自蜂蜡的由高分子量的脂肪伯醇组成的天然混合物的制备方法，其特征在于蜂蜡熔化后用碱金属或碱土金属氢氧化物溶液进行均相皂化，并萃取醇的天然混合物，萃取优选在固液萃取系统中用下列有机溶剂进行C6—9的烃、C3—8的酮、C1—5的醇、卤代烃和芳香化合物，以及它们的混合物；醇混合物任选地在上述溶剂或其混合物中重结晶。
4.根据权利要求3的方法，其特征在于蜂蜡熔点为90—150℃，氢氧化物浓度为5—30％，皂化时间至少30分钟，萃取时间为1—20小时。
5.根据权利要求3或4的方法，其特征在于用于蜂蜡皂化的氢氧化物为氢氧化钠、氢氧化钙或氢氧化钾。
6.根据权利要求3或4的方法，其特征在于萃取步骤所用烃为戊烷、己烷、庚烷或辛烷。
7.根据权利要求3或4的方法，其特征在于用于萃取的酮为丙酮、甲基乙基酮、甲基丁基酮、或3—庚酮。
8.根据权利要求3或4的方法，其特征在于用于萃取的醇为甲醇、乙醇、正丙醇、2—丙醇、正丁醇、2—丁醇、正戊醇或叔丁醇。
9.根据权利要求3或4的方法，其特征在于用于萃取的芳香溶剂为苯、甲苯、乙苯、苯酚或对二甲苯。
10.根据权利要求3或4的方法，其特征在于用于萃取的卤代烃为二氯甲烷、1，2—二氯乙烷、氯仿、三氯乙烷、1，2—二氯丙烷或1，2，3—三氯丙烷。
11.药物配制品如片剂、胶囊或gragees，其特征在于它们含有0.5～25.0％(重量)的权利要求1或2的来自蜂蜡的高分子量脂肪伯醇天然混合物作为活性成分，还含有填充剂、凝集剂、崩解剂、润滑剂和其它药物辅形剂。
12.权利要求1或2的得自蜂蜡的高级脂肪伯醇天然混合物或权利要求11的药物配制品治疗胃和十二指肠溃疡的用途。
13.权要求1或2的得自蜂蜡的高级脂肪伯醇天然混合物或权利要求11的药物配制品用作抗炎剂的作用。
14.权利要求1或2的得自蜂蜡的高级脂肪伯醇天然混合物或权利要求11的药物配制品的用途，其中天然醇混合物口服或非肠道给药，日剂量为1—100mg，特别是10—20mg。
全文摘要
本发明涉及制备由C
文档编号A61K31/045GK1125096SQ94119209
公开日1996年6月26日 申请日期1994年12月23日 优先权日1994年12月23日
发明者J·M·赫南德兹, A·L·格兰加, R·M·费雷洛, M·德·L·A·瓦尔马纳, D·C·昆塔纳, V·M·桑彻兹, S·V·加西亚, M·D·戈梅斯 申请人:戴默实验室股份公司