专利名称：人工蛇胆及其制造方法和应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及制药原料及其应用。它是关于人工蛇胆的制造及其作天然蛇胆替代品的应用。
蛇胆是我国的一种传统中药，具行气化痰、搜风祛湿、清肝明目、止咳平喘等功用。现代药理学实验证明，蛇胆最主要的作用是镇咳、祛痰、平喘。它常与贝母、陈皮、半夏等其它中药配伍制成中成药，用于治疗中枢神经系统和呼吸系统等有关疾病，临床疗效确切，未见不良反应。近几年由于蛇胆为主药的中成药品种增加，产量扩大，制药工业对蛇胆的需求量日益增大，造成供不应求，价格不断上涨，并普遍发现商品蛇胆严重掺假，影响中成药的产品质量。据此，本发明为解决蛇胆供求矛盾，以满足制药工业和医疗卫生事业的需求，保证药用蛇胆的质量和效果，提出了人工制造天然蛇胆的替代品——人工蛇胆的构思和实施方案。
实施本发明的具体方案是这种替代天然蛇胆的人工组合物——人工蛇胆是含有牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠等成分的溶液或干品。当人工蛇胆为溶液时，其中牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠的浓度分别为6.0±2.0g/100ml和1.8±0.7g/100ml；当人工蛇胆为干品时，牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠的配比是(重量百分比)牛磺胆酸钠 40-81％牛磺去氧胆酸钠 11-25％
这种人工蛇胆还可含有下列各组辅助物质的一种、或几种或全部1组蝰胆酸钠、胆酸钠2组胆固醇、粘蛋白3组氯化锌、氯化钙、氯化铜、氯化镁上述物质的取值范围如下a.当人工蛇胆为水溶液时，上述各辅助物质在其中的含量(g/100ml人工蛇胆液)为蝰胆酸钠 0-0.3胆酸钠0-0.3胆固醇0-0.5粘蛋白0-0.3氯化锌0-0.5×10-4氯化钙0-3.5×10-2氯化镁0-4.5×10-2氯化铜0-3.0×10-4b.当人工蛇胆为干品时，上述各物质以及牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠在人工蛇胆中的含量配比为(重量比)蝰胆酸钠 0-2.6％胆酸钠0-2.6％胆固醇0-4.3％粘蛋白0-2.6％氯化锌0-0.04‰氯化钙0-0.035‰氯化镁0-0.04‰氯化铜0-0.003‰牛磺胆酸钠40-81％牛磺去氧胆酸钠11-25％
本发明的人工蛇胆还可含有鸡胆色素，其含量为每100ml人工蛇胆液中鸡胆色素的含量相当于0-20ml鸡胆汁中所含鸡胆色素。
本发明的人工蛇胆还可以用易于得到的某些动物胆汁(如鱼胆汁等)经科学处理后加入牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠制成。
现结合五种具体的实施方案对本发明作进一步阐明五种实施方案的处方组成如下处方I 牛 磺 胆 酸 钠 7.0±1.0g牛磺去氧胆酸钠 1.5±0.2g蒸馏水 加至100ml处方II 牛 磺 胆 酸 钠 7.0±1.0g牛磺去氧胆酸钠 1.3±0.2g蝰 胆 酸 钠 0.2±0.1g粘蛋白 0.4±0.1g氯化锌 (2.5±1.0)×10-4氯化钙 (3.0±1.0)×10-2氯化镁 (2.5±0.5)×10-2处理过的鸡胆汁 15±5ml蒸馏水 加至100ml处方III 牛 磺 胆 酸 钠 6.0±1.0g牛磺去氧胆酸钠 1.8±0.2g胆酸钠 0.2±0.1g胆固醇 0.4±0.1g氯化锌 (2.5±1.0)×10-4g氯化铜 (2.0±1.0)×10-4g氯化钙 (3.0±1.0)×10-2g氯化镁 (2.5±0.5)×10-2g处理过的鸡胆汁 10±5ml蒸馏水 加至100ml处方IV 牛 磺 胆 酸 钠 5.0±1.0g牛磺去氧胆酸钠 1.3±0.2g去毒的鱼胆汁 加至100ml处方V 牛 磺 胆 酸 钠 5.0±1.0g牛磺去氧胆酸钠 2.0±0.5g处理过的鸡胆汁 20ml蒸馏水 加至100ml处方药物来源说明以上处方中的牛磺胆酸钠、牛磺去氧胆酸钠、蝰胆酸钠等胆汁酸系用化学合成所得，纯度不低于96％。其中的牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠的合成系采用文献方法(Tserng KY，al，J.LipdRes，1977，(18))404～407)；蝰胆酸钠未见文献报道合成方法，自行设计合成路线以去氧胆酸为起始原料，通过乙酰化、酰氯化，α-溴代.水解得到目标化合物，鸡胆色素系从新鲜鸡胆汁中提取(醋酸乙酯)所得；去毒鱼胆汁系用正丁醇反复萃取除去鲤醇硫酸酯钠主要毒性物质后剩余底液。处方中的其它成分，均采用市售医用药品。
上述方案中主要单味药的具体制取方法(1)蝰胆酸钠的合成合成路线 操作手续①称取20g去氧胆酸钠，加入210ml冰醋酸和65ml醋酐，滴加70％HClO4溶液20ml，温度不超过35℃，滴完后继续搅拌0.5hr，将反应液倾入2L冰水中，搅拌后滤取白色沉淀，用冰水洗涤，真空干燥，得产物22.6g，mp83--85℃。
②取上步产物20g，溶于24ml SOCl2中，置40～50℃水浴中搅拌反应1hr，升温至70℃滴加溴—吡啶SOCl2，混合液24ml(其中Br2液2.6ml，吡啶3.9ml，其余为SOCl2)，滴完后继续搅拌6hr，减压蒸除过剩的SOCl2，待残留物冷却至室温后加入冰水，析出浅黄色沉淀，过滤，用冰水洗涤，干燥后得淡黄色固体22.5g(无须精制可作下步原料使用)。
③取上步产物20g，加200ml20％K2CO3溶液，搅拌回流24hr冷却后分出上层棕色油状物，加KOH的50％乙醇液，回流12hr，减压蒸去乙醇，调PH值至2，析出沉淀，用水洗涤，真空于燥，得蝰胆酸粗品19g，以硅胶G为吸附剂，对粗品进行柱层层析纯化，以甲醇—氯仿混合液洗脱，分出蝰胆酸纯组分(若有必要可与NaOH成盐)，经乙醚——石油醚混合液重结晶，测得蝰胆酸的熔点为227～228℃(温度计未较正)。经IR，MS及1HNMR测试，得下列数据IR(cm-1，KBr压片)，3402，2933，2866，1718，1448，1376，1254，1087，1039，942，920，616；MS(m/z)408，390，372，362，345，326，273，255；1H-NMR(ppm)3.54(C3OH)，4.00(C12OH)，4.16(C23OH)，0.70(18-CH3)，0.92(19-CH3)，1.03(21-CH3)。
(2)鸡胆汁的处理取40ml新鲜鸡胆汁，用醋酸乙酯提取5次(40ml/次)，合并提取液，适当浓缩或稀释至提取液在640nm波长处的吸收度为0.7左右即可。配方时，取该提取液100ml，(相当于原胆汁20ml)，减压蒸于后加到处方中。
(3)去毒的鱼胆汁的制备鱼胆汁具有类似于蛇胆的药理作用，其化学成分也具有相似性，尤其是胆绿素等成分，但鲤科鱼胆有明显毒性，据石朝周等报道，其主要毒性成分为鲤醇硫酸酯钠(Sodium Cyprinol sulphate)，它可被正丁醇萃取去除。发明者按下列方法制备去毒的鱼胆汁取新鲜草鱼胆汁150ml，用正丁醇萃取5-6(70ml/次)用薄层层析法跟踪萃液，直至不含鲤醇硫酸酯钠为止。而后将母液减压蒸干，石油醚洗涤残留物，真空干燥后加水至原体积(150ml)，溶解混匀即得去毒鱼胆汁，冷藏备用。
人工蛇胆的制备方法及工艺方案I称取牛磺胆酸钠8.0g和牛磺去氧胆酸钠1.5g，加适量蒸馏水溶解，用稀盐酸或稀碱调节PH值在7.1～7.5，追加蒸馏水至总体积为100ml，即得。
方案II按处方II制备，称取300mg粘蛋白，加适量水，滴加稀碱使PH值为8，追加水至100ml(称A液)。依次加入8.0g牛磺胆酸钠和1.5g牛磺去氧胆酸钠、0.3g蝰胆酸钠于80mlA液中，搅拌使溶，得β液。分别配制每每毫升含44mgMgCl2·6H2O、0.66mgZnCl2溶液，从中各取0.50ml加到B液中，得C液。取100ml鸡胆色素醋酸乙酯提取液减压蒸干后加到C液中，使溶，调节PH值约7.2，追加A液至100ml即得，冷藏备用。
方案III按处方III配制，称取0.3g胆固醇，滴加数滴药用乙醇润湿，依次加入7.0g牛磺胆酸钠，2.0g牛磺去氧胆酸钠和0.3g胆酸钠，再加蒸馏水80ml，充分搅拌使溶(必要可适当温热)，继续加入下列无机盐溶液先分别配制每毫升含44mgCaCl2、84mgMgCl2、6H2O、0.66mgZnCl2、0.50mgCuCl2·2H2O溶液，而后从中各取0.50ml加到配方液中，再加方案II相同数量鸡胆色素干品，使溶，调节PH值约7.2，追加蒸馏水至100ml，冷藏备用(若使用时有少量沉淀，摇匀后使用)。
方案IV按处方IV配制。称取牛磺胆酸钠6.0g和牛磺去氧胆酸钠1.5g，加入去毒的鱼胆汁约80ml使溶，转移到100ml量瓶中，追加去毒鱼胆汁至刻度，摇匀即得，冷藏备用。
方案V按处方V配制，方法及用量同方案IV，仅以鸡胆汁代替去毒鱼胆汁。
按上述各实施例制备的人工蛇胆，其干品红处吸收光谱均具有与天然蛇胆干品(称″胆仁″)一致的下列特征吸收峰(KBr压片)3400，2940，2860，1640，1550，1470，1450，1375，1250，1200，1080，1047，980，920，610，530cm-1。图谱见
图1——6。
图1是天然蛇胆的红外光谱图2是按方案1制得的人工蛇胆的红外光谱图3是按方案2制得的人工蛇胆的红外光谱图4是按方案3制得的人工蛇胆的红外光谱图5是按方案4制得的人工蛇胆的红外光谱图6是按方案5制得的人工蛇胆的红外光谱下面为天然蛇胆和上述的五种人工蛇胆的镇咳、祛痰和平喘等动物实验的对比测定的数据实验方法及结果(一)镇咳作用小白鼠作实验动物，采用氨气引咳法[1]结果见表1组 别动物数 减咳率(%) 与空白相比较与天然胆比较(只) X±SD P值 P值空白对照10 -1.40±4.20＜0.01天然蛇胆10 30.7±6.09 ＜0.01处方I样品 10 27.2±4.60 ＜0.01 ＞0.05处方II样品 10 32.9±7.95 ＜0.01 ＞0.05处方III样品 10 34.4±14.4 ＜0.01 ＞0.05处方IV样品 10 30.6±7.79 ＜0.01 ＞0.05处方V样品 10 29.2±6.20 ＜0.01 ＞0.05注①灌胃给药，每只0.80ml；②样品浓度以天然蛇胆中牛磺胆酸钠含量为水平(每ml含10mg)各处方人工蛇胆按牛磺胆酸钠为指标均稀释每ml含10mg；③实验动物为小白鼠(昆明种)。
结果表明，五个处方制备的人工蛇胆与天然蛇胆一样具有显著的镇咳作用，在实验剂量下人工蛇胆与天然蛇胆的镇咳效果无显著性差异。
(二)祛痰作用小白鼠作实验动物，采用酚红排泌法[2]结果见表2表2，人工蛇胆与天然蛇胆的祛痰效果对比实验结果组别 动物数 酚红排泌量 与空白相比较与天然蛇胆相比较(只) (X±SD)，ug/mlP值 P值空白对照 10 0.17±0.14 ＜0.01天然蛇胆 10 1.55±0.44 ＜0.01处方I样品10 1.52±0.50 ＜0.01 ＞0.05处方II样品 10 1.57±0.58 ＜0.01 ＞0.05处方III样品 10 1.62±0.48 ＜0.01 ＞0.05处方IV样品 10 1.56±0.52 ＜0.01 ＞0.05处方V样品10 1.50±0.64 ＜0.01 ＞0.05结果表明，五种人工蛇胆与天然蛇胆一样，均有明显的祛痰作用，在实验剂量下人工蛇胆与天然蛇胆的祛痰作用无显著性差异。
(三)平喘作用豚鼠作实验动物，采用气管链法[3]，用二道生理仪测试。结果见表3表3，人工蛇胆与天然蛇胆解痉率对比实验结果组别 动物数解痉率(％) 与空白相比较 与天然蛇胆比较(只) X±SDP值 P值空白对照 9 0天然蛇胆 9 78.0±29.7 ＜0.001处方I样品 9 86.4±21.7 ＜0.001 ＞0.05处方II样品 9 95.7±17.5 ＜0.001 ＞0.05处方III样品9 98.5±18.4 ＜0.001 ＞0.05处方IV样品 9 90.0±18.0 ＜0.001 ＞0.05处方V样品 9 88.2±15.4 ＜0.001 ＞0.05以上三项指标表明，本发明的人工蛇胆与天然蛇胆一样，均具有明显的镇咳、祛痰、平喘作用，在实验剂量下人工蛇胆与天然蛇胆在镇咳、祛痰、平喘三方面的作用无显著性差异。
它的毒性亦不大于乌梢蛇胆(处方I、II、III、IV、V以及乌梢蛇胆对小白鼠最大耐受量分别为5.94g/kg、6.06g/kg、5.98g/kg、7.86g/kg、6.18g/kg、4.98g/kg)。
本发明的人工蛇胆与天然蛇胆相比较，还具有下列优点(1)不依赖于天然资源，可工业化生产，从根本上解决天然蛇胆资源短缺问题，并可得巨大经济效益；(2)质量容易控制，可提高中成药的内在质量和简化中成药的生产工艺；(3)可制成干品，易于包装和运输，使用的厂家可临用时(配料时)加水溶解。因此，本发明的人工蛇胆，不仅是天然蛇胆的理想替代品，而且它的广泛实施和应用还会给社会带来许多积极的有益效果。
权利要求
1)一种替代天然蛇胆的药用人工组合物——人工蛇胆，其主要特征在于它含有效成分牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠，产品可以是溶液或干品。
2)根据权利要求1所述的替代天然蛇胆的药用人工组合物——人工蛇胆，其特征在于它含主要有效成分牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠外，还含有下列各组辅助物质的一种，或某几种或全部(1)蝰胆酸钠、胆酸钠；(2)胆固醇、粘蛋白；(3)氯化锌、氯化钙、氯化镁、氯化铜。
3)根据权利要求1所述的人工蛇胆，其特征在于各组份的配比为a.当人工蛇胆为水溶液时，各组份的浓度(g/100ml人工蛇胆液)为牛磺胆酸钠4-8；牛磺去氧胆酸钠 1.1-2.5b.当人工蛇胆为干品时，下列两个主要组份配比为牛磺胆酸钠 40-81％；牛磺去氧胆酸钠 11-25％；
4)根据权利要求2所述的人工蛇胆，其特征在于备组份配比为a.当人工蛇胆为水溶液时，各组份的浓度范围是(g/100ml人工蛇胆液)牛磺胆酸钠4-8；牛磺去氧胆酸钠1.1-2.5；蝰胆酸钠0-0.3；胆酸钠0-0.3；胆固醇0-0.5；粘蛋白0-0.3；氯化锌0-0.5×10-4；氯化钙0-3.5×10-2；氯化铜0-3.0×10-4氯化镁0-4.0×10-2；b.当人工蛇胆为干品时，各组分的配比为(重量比)牛磺胆酸钠 40-81％；牛磺去氧胆酸钠 11-25％；蝰胆酸钠 0-2.6％；胆酸钠 0-2.6％；胆固醇 0-4.3％；粘蛋白 0-2.6％；氯化锌 0-0.04‰； 氯化钙 0-0.035‰氯化镁 0-0.04‰； 氯化铜 0-0.003‰
5)根据权利要求1、2、3、或4所述的人工蛇胆，其特征在于它还含有鸡胆色素或鱼的胆色素等成分。
6)根据权利要求2或4所述的人工蛇胆，其特征在于所说的蝰胆酸钠是按下列合成路线制取的 即以去氧胆酸为起始原料，通过乙酰化、酰氯化、α-溴代、水解得到。
7)根据权利要求1、2、3、4或5所述的人工蛇胆，其特征是它在制药中作原料应用，制备各种蛇胆制剂。
8)本发明的人工蛇胆的制造方法，亦包括利用某些动物胆汁中已有的成分再加入牛磺胆酸钠，牛磺去氧胆酸钠的方法在内。
9)根据权利要求8所述人工蛇胆，其特征在于所说的利用某些动物胆汁，系指去毒鱼胆汁或鸡胆汁等，利用其中的某些成分(胆绿素、氨基酸、微量元素等)。
10)根据权利要求9所述的制造人工蛇胆的方法之一，其特征在于每100ml去毒鱼胆汁中或在处理过的20ml鸡胆汁中所含牛磺胆酸钠4-8g及牛磺去氧胆酸钠1.1-2.5g。
全文摘要
一种替代天然蛇胆的药用人工组合物——人工蛇胆，其特征在于它是含有牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠的溶液或干品。其中还可有蝰胆酸钠、胆酸钠、胆固醇、粘蛋白、氯化锌、氯化钙、氯化镁、氯化铜、鸡胆色素等物质。该产品还可由去毒鱼胆汁、或处理过的鸡胆汁等动物胆汁中加入牛磺胆酸钠和牛磺去氧胆酸钠等制成。本发明的人工蛇胆经动物实验证实，有显著的镇咳、祛痰、平喘等功效，与天然蛇胆的功效相当，甚至超过天然蛇胆。其毒性亦不大于天然蛇胆。
文档编号A61P11/06GK1144657SQ9511244
公开日1997年3月12日 申请日期1995年9月7日 优先权日1995年9月7日
发明者石朝周 申请人:同济医科大学