专利名称：：肠液量调整剂的制作方法
技术领域：
：本发明涉及一种肠液量调整剂。更详细地说，涉及一种含有杂酚油或者属于杂酚油构成成分的苯酚衍生物作为有效成分的、可以通过促进肠液吸收等来减少肠液量的肠液量调整剂。迄今为止，杂酚油都是被用作肠内杀菌剂或基于肠内杀菌作用的止泻药、祛痰剂或者基于抑制肠管运动的止泻药及镇痉剂。也就是说，杂酚油是按照医药品制造指南(日本公定协会编)1988年版第240页的胃肠药制造承认标准，在该页的第V栏的止泻药部分中作为1项的杀菌剂而收录在该书中。另外，在伊藤宏著《药理学》((株)萤光堂，1983年1月5日修订第6版发行)第416页中也记载，杂酚油除了可用于肠内防腐之外，还可通过适量地吸入而显示祛痰作用。在日本药典中也记载了杂酚油可用于祛痰和治疗肠内异常发酵、食物中毒等。美国药典(TheUnitedStatesDispensatory)，第27版(1973)，第355页上也记载，杂酚油可作为外用的杀菌剂和内用的祛痰剂使用。另外，在《药物学》(Pharmacology)，46卷，(1933)，第173页上也记载，杂酚油具有基于抑制肠管运动的止泻作用(绪方规男(N.Ogata)等)。本发明人对上述的作为肠内杀菌剂或基于肠内杀菌作用的止泻药、作为祛痰剂、或者作为基于抑制肠管运动抑制作用的止泻药使用的杂酚油的新药理作用进行了研究，结果发现，杂酚油还具有一种迄今为止尚没有预料到的药理作用，也就是促进肠液吸收的作用和抑制肠液分泌的作用。本发明就是基于上述的发现而完成的。也就是说，本发明的肠液量调整剂，是一种含有杂酚油或者是其构成成分的苯酚衍生物作为有效成分，由于具有了这些有效成分，从而能够通过促进肠液的吸收和/或抑制异常的分泌作用而减少肠液量。作为上述的苯酚衍生物，优选是使用从愈疮木酚、甲氧甲酚、苯酚、甲酚及二甲苯酚中选择的1种或2种以上。本发明的肠液量调整剂，在人和动物中对于那些需要抑制肠液的异常分泌，或者需要促进肠液吸收的各种症状，例如过敏性(大)肠综合症、腹部不适感、腹部膨胀感、脱水症状、营养障碍、由于药物或毒物的作用而导致的肠液吸收不全或分泌亢进等的治疗是有效的。更具体地说，例如，它能有效地抑制由于大肠杆菌易热性肠毒素或大肠杆菌耐热性肠毒素所引起的肠液分泌亢进。〔对附图的简单说明〕图1是表示药理试验1结果的曲线图。图2是表示药理试验2(a)结果的曲线图。图3是表示药是试验2(b)结果的曲线衅。图4是表示药理试验3(a)结果的曲线圈。图5是表示药理试验3(b)结果的曲线图。图6是关于药理试验4的曲线图。图7是关于药理试验5的曲线图。〔用于实施本发明的较佳方案〕作为发明药剂的有效成分的杂酚油是一种早已公知的物质，在日本药典(第13次修改订本)和美国国家药典(NationalFormulary)XII卷中有收录。该杂酚油是通过把由山毛榉、青冈栎、鸡爪枫、松树等的树木，特别是从阔叶树获得的木焦油进行蒸馏和分馏而收集200-230℃左右(760mmHg)的馏分而获得的所谓木杂酚油，与由煤焦油获得的杂酚油有明显的区别(绪方规男、马场达也，著通化学病理学和药物学研究，第66期，411页-423页，1989(N.OgataandT.Baba，Res.Commun.Chem.Pathol.Pharmacol.66，411423，1989))。正如上所述文献等中所记载的那样，作为本发明药剂有效成分的杂酚油是一种除了含有愈疮木酚约20-35％、甲氧甲酚约15-25％之外，还含有苯酚、甲酚、二甲苯酚类等各种苯酚衍生物的混合物，是一种具有特征的烟臭及烧舌口感的无色至淡黄色的液体，其比重在1.064以上。在本发明的肠液量调整剂中，作为上述杂酚油及其构成成分的上述苯酚衍生物可以按一般医药制剂的形态使用。也就是说，可以使用一些在药学上允许的赋形剂或稀释剂，根据治疗的目的而将其制成各种形态。作为其代表性的剂型，可以举出片剂、丸剂、散剂、胶囊剂、颗粒剂、内服液等适合口服的剂型、注射剂等适合于静脉注射、肌肉注射、皮下或皮内注射等的剂型，以及栓剂等适合于直肠内给药的剂型等。在制成片剂、颗粒剂、散剂状态的剂型时，可以使用以往公知的广范围的载体，例如乳糖、白糖、葡萄糖、淀粉、结晶纤维素等赋形剂；羟丙基纤维素、甲基纤维素、明胶、西黄蓍胶、阿拉伯树胶、藻酸钠等粘合剂；淀粉、羧甲基纤维素、碳酸钙等崩解剂；硬脂酸镁、滑石、硬脂酸等润滑剂。对于片剂来说，可以根据需要，进行适当的包衣，例如可制成糖衣片、薄膜包衣片等，也可以将其制成二层片、多层片等。另外，对于颗粒剂或散剂，也可以附加通常的外包衣。在要制成丸剂的状态时，也可以使用在该领域中已往公知的各种载体，例如甘草末、葡萄糖、小麦粉等赋形剂；甘油、水糖浆、阿拉伯树胶、西黄蓍胶。明胶等粘合剂；药用酵母、木薯粉、昆布末等崩解剂。在要制成胶囊剂的状态时，可以使用在该领域中已往公知的各种载体，例如乳糖、橄榄油、大豆油等赋形剂。作为内用液剂，可以是水性或油性的悬浮液、溶液、糖浆及其他各种形态。在要制备这样的液体制剂时，可以使用普通的添加剂，例如，作为悬浮剂，可以使用山梨糖醇糖浆、甲基纤维素、明胶、羧甲基纤维素等；作为乳化剂，可以使用卵磷脂、单链烯酸山梨糖醇酐、阿拉伯树胶等。在要制成注射剂的形态时，其组合物可以是悬浮液、溶液、油性或水性载体中的乳液等形态，也可以含有悬浮剂、稳定剂和分散剂等各种辅剂。在要制成栓剂的形态时，可以使用已经公知的广泛载体。例如，可以使用可可豆脂、甘油明胶、聚乙二醇等基剂。可以根据需要在栓剂中使用乳化剂和悬浮剂。另外，在本发明的药剂中，可以根据需要添加着色剂和香味剂等。在本发明的药剂中作为有效成分含有的杂酚油的量或苯酚衍生物的量没有特别限制，可以根据制剂的形态等进行适宜的选择，但通常优选是相当于制剂总重量的0.2-60％左右。本发明的肠液量调整剂的给药量可以根据患者的性别、年龄、体重、症状的程度等进行适宜的选择，但通常在采用口服和直肠给药的情况下，对于成人来说，作为有效成分的杂酚油或作为其构成成分的苯酚衍生物的使用量相对于每1kg体重，每天用量为1-500mg左右，优选为2-100mg左右，更优选为2-25mg左右。在作为注射剂进行非口服给药的情况下，同样地相对于成人，作为有效成分的杂酚油或苯酚衍生物，相对于每1kg体重，每天用量可在0.2-300mg左右，优选为0.2-50mg左右，更优选为0.5-5mg左右。应予说明，所说的给药量可以每日分为2-4次左右给药。下面，关于本发明的肠液量调整剂进行药理试验的说明。药理试验1(在肠管内肠液的吸收促进作用)将一种体重1.7kg-2.0kg的雄性新西兰白兔(Kb1NZW8周龄)进行24小时绝食，然后通过耳静脉注射戊巴比妥(每1kg体重25-30mg)使其麻醉。对其腹部进行剃毛、消毒后，从正中剖开腹部，从空肠的起始部位朝向肛门一侧10cm的位置进行结扎。然后，以该点作为起点朝向肛门一侧每隔5cm结扎一处，共计分成8个小肠区。所有各处的结扎都注意不损伤其肠管膜及血管。使用一种装有29号针头的10ml注射筒对上述各小肠区段分别注射入含有0、3、10、20、30、50、100、300μg/ml杂酚油的6ml人工肠液(150mM氯化钠、10mM磷酸钠缓冲液(pH7.2)、1mg/ml牛血清白蛋白、1％(V/V)甲醇)进行局部给药。在给药完毕后使用一种加温至37℃的0.1％(W/V)苯特西林(ペントシリン)生理食盐水来洗涤腹腔内部，结节缝合腹部。接着在给药6小时后再用戊巴比妥再度进行麻醉，在开腹后，使用装有23号针头的注射筒从各小肠区段中抽取肠液，根据注射筒的刻度来测定肠液的体积。其结果示于图1中。该结果示出了杂酚油对肠液吸收的促进作用。药理试验2〔对由于大肠易热性肠毒素(LT)引起的肠液分泌亢进的抑制效果〕(a)将一种体重1.7kg-2.0kg的雄性新西兰白兔(KbINZW8周龄)进行24小时绝食，然后通过耳静脉注射戊巴比妥(每1kg体重25-30mg)使其麻醉。对其腹部进行剃毛、消毒后，从正中剖开腹部。从空肠的始部位朝向肛门一侧10cm的位置进行结扎。然后，以该点作为起点朝向肛门一侧每隔5cm结扎一处，共计分成8个小肠区。所有各处的结扎都注意不损伤其肠管膜及血管。使用一处装有27号针头的10ml注射筒对上述各小肠区段分别注入含有0、0.0067、0.017、0.033、0.067、0.17、0.33μg/ml的LT的1.5ml的人工肠液(150mM氯化钠、10mM磷酸钠缓冲液(pH7.2)、1mg/ml牛血清白蛋白、1％(V/V)甲醇)进行局部给药。在给药完毕后，使用一种加温至37℃的0.1％(W/V)苯特西林生理食盐水来洗涤腹腔内部，结节缝合腹部。接着在给药18小时后再用戊马比妥再度进行麻醉，在开腹后，使用装有23号针头的注射筒从各小肠区段中抽取肠液，根据注射筒的刻度来测定肠液的体积。结果示于图2中。从该结果可以确认LT的浓度与肠液分泌亢进的相关性。(b)然后，与上述同样制成小肠的各区段，使用一种装有27号针头的10ml注射筒对上述各小肠区段分别注入含有0、3、10、20、30、50、100、300μg/ml杂酚油和0.033μg/mlLT的1.5ml人工肠液(150mM氯化钠、10mM磷酸钠缓冲液(pH7.2)、1mg/ml牛血清白蛋白、1％(V/V)甲醇)进行局部给药。在给药完毕后，使用一种加温至37℃的0.1％(W/V)。苯特西林生理食盐水来洗涤腹腔内部，结节缝合腹部。接着在给药18小时后再用戊巴比妥进行再度麻醉，在开腹后，使用装有23号针头的注射筒从各小肠区段中抽取肠液，根据注射筒的刻度来测定肠液的体积。结果示于图3中。这些结果表明，杂酚油对由于LT引起的肠液分泌亢进具有抑制作用。药理试验3〔对由于大肠杆菌耐热性毒素(ST)引起的肠液分泌亢进的抑制效果〕(a)与药理试验2同样地制成各个小肠区段，使用一种装有27号针头的2ml注射筒对上述各小肠区段分别注入含有0、0.0067、0.017、0.033、0.067、0.17、0.33μg/ml的ST的1.5ml的人工肠液(150mM氯化钠、10mM磷酸钠缓冲液(pH7.2)、1mg/ml牛血清白蛋白、1％(V/V)甲醇)进行局部给药。在给药完毕后，使用一种加温至37℃的0.1％(W.V)苯特西林生理食盐水洗涤腹腔内部，结节缝合腹部。接着在给药18小时后再用戊巴比妥再度进行麻醉，在开腹后，使用装有23号针头的注射筒的小小肠区段中抽取肠液。根据注射筒的刻度来测定肠液的体积。结果示于图4中。从这些结果可以确认，肠液分泌亢进与ST的浓度有相关性。(b)然后，与上述同样地制成各个小肠区段，使用一种装有27号针头的10ml注射筒对上述各小肠区段分别注入含有0、3、10、20、30、50、100、300μg/ml杂酚油及0.033μg/mlST的1.5ml的人工肠液(150mM氯化钠、10mM磷酸钠缓冲液(pH7.2)、1mg/ml牛血清白蛋白、1％(V/V)甲醇)进行局部给药。在给药完毕后，使用一种加温至37℃的0.1％(W/V)苯特西林生理食盐水洗涤腹腔内部，结节缝合腹部。接着在给药18小时后，再用戊巴比妥进行再度麻醉，在开腹后，使用装有23号针头的注射筒从各小肠区段中抽取肠液。根据注射筒的刻度来测定肠液的体积。结果示于图5中。这些结果示出，杂酚油对由于ST引起的肠液分泌亢进具有抑制作用。药理试验4〔杂酚油对由LT所引起的促进产生环腺苷酸AMP(cAMP)的影响〕LT可以使作为存在于细胞膜中的G蛋白质之一的α亚单元进行核糖基化，从而能将腺苷酸环化酶活性维持在活化状态，因此它能通过促进cAMP的产生而引起分泌亢进(玛莉·杰斯维兹等著，分泌性腹泻教科书，第139-162页(MaryJacewiczetal.，TextbookofsecretoryDiarrhea，139-162，1990))。于是以了解上述药理试验2中杂酚油的作用机理为目的，研究它对促进cAMP产生作用的影响。将分别含有0、0.01、0.1、1mg/ml的杂酚油的反应溶液(80μg的鸽子红血球膜、100μg/mlLT、和10mM脱氧胸腺嘧啶核苷、5mM腺苷5’-三磷酸(ATP)、1mM烟酰胺腺嘌呤二核苷酸(NAD)、65％(V/V)细胞质(细胞液))在37℃下加热30分钟后，加入1ml的冷却溶液A(130mM氯化钠、0.1mg/ml叠氮化钠、10mMHepes缓冲液(pH7.0))，将离心获得的膜悬浮于MOPS缓冲液(ph7.5)中。然后，将该悬浮液加入到12mM肌磷酸、5μ肌酸脱磷酸化酶、2mM2-巯基乙醇、6mM氯化镁、5mM鸟苷5’-三磷酸(GTP)、25mMMOPS缓冲液(pH7.5)中，在37℃下加温40分钟后，在沸腾水浴中加热3分钟。然后进行离心，之后将获得的上清液用免疫分析用缓冲液稀释至10倍，从其中取50μl，利用cAMP免疫分析法(cAMP免疫分析试剂，沙依曼化学公司(cAMPImmunoassayKitCAYMANCHEMICAL))进行分析。结果示于表1中。结果表明，杂酚油在直到LT的cAMP产亢进时都没有起作用，可知杂酚油的作用点是在cAMP产生以后的阶段。换言之，由于LT的作用一旦产生了cAMP，就会在以后的若干阶段发生肠液分泌的亢进，但是，杂酚油在这些阶段的任一个阶段中都能抑制肠液的分泌。另外，根据预先进行的与腺苷酸环化酶的活化有关的浓度相关性的实验，将药理试验4中设定的LT浓度确定为100μg/ml(图6)。〔表1〕杂酚油对由于LT引起的腺苷酸环化酶活化的影响</tables>药理试验5〔杂酚油对由ST所引起的促进产生环腺苷酸GMP(cGMP)的影响〕ST能使处于细胞膜上的鸟苷酸环化酶活化，促进环腺苷酸GMP(cGMP)的产生，由此引起肠液分泌的亢进(玛莉·杰斯维兹等著，分泌性腹泻教科书，第139-162页(MaryJacewiczetal.，TextbookofSecretoryDiarrhea，139-162，1990))。因此，以了解杂酚油的作用机理为目的，研究它对Std促进cGMP产生作用的影响。将T84细胞(人大肠癌细胞，美国典型培养物中心(AmericanTypeCultureCollection)CCL-248)在一块加有培养液(哈姆兹(ハムズ)F12培养基和达贝可(グルベツコ)改良伊格尔(イ-グル)培养基的1∶1混合液)的24孔微量滴定板的各孔内培养至100％铺满，然后将这些T84细胞在一种含有1mM异丁基甲基黄嘌呤(isobutylmethylxanthine(IBMX))的0.5ml达贝可改良伊格尔培养基中，在37℃下加温10分钟。然后分别加入含有0、0.01、0.1、1mg/ml的杂酚油及10-7MST的培养液在37℃下加温30分钟，分离培养液中的上清液并加入冷却的0.5ml的0.1MHCl取出该溶液的一部分，使其干燥后，加入5mM的乙酸钠，利用cGMP免疫分析法(cGMP免疫分析试剂盒，沙依曼化学公司(cGMPImmunoassayKit，CAYMANCHEMICAL))进行分析。结果示于表2中。结果表明，杂酚油在直到ST的cGMP产生亢进时都没有起作用，可知杂酚油的作用点是在cGMP产生以后的阶段。换言之，由于ST的作用一旦产生了cGMP，就会在以后的若干阶段中发生肠液分泌的亢进，但是，杂酚油在这些阶段的任一阶段中都能抑制肠液的分泌。另外，根据预先进行的鸟苷酸环化酶活化有关的浓度相关性的实验，将药理度验4中设定的ST浓度确定为10-7M(图7)。〔表2〕杂酚油对由于ST引起的鸟苷酸环化酶活化的影响<>应予说明，本发明的肠液量调整剂，可以按一般的各种不同的医药制剂形式使用。以下示出它的各种制剂例，但本发明不受这些制剂例的限定。制剂例1〔丸剂〕成分量(mg)杂酚油50甘草25甘油10水50将上述处方中的各种成分练合，用切丸机将这些丸剂的块状物切成小块，然后用成丸机成丸，制成一种每丸含有杂酚油50mg的丸剂。制剂例2〔胶囊剂〕成分量(mg)杂酚油100淀粉250将杂酚油与淀粉混合，制成混合粉末，将其填充入硬胶囊中，制成一种每一胶囊中含有杂酚油100mg的硬胶囊剂。制剂例3〔胶囊剂〕成分量(mg)杂酚油100橄榄油200将杂酚油溶解于橄榄油中获得溶液，将此溶液溶装入一种软胶囊中，从而制得一种每一胶囊中含有杂酚油100mg的胶囊剂。制剂例4〔片剂〕成分量(mg)杂酚油150乳糖250甲基纤维素3硬脂酸镁2羧甲基纤维素10将上述处方中除了硬脂酸镁以外的各种成分混合，将此混合物与水混炼并制成颗粒，待这些颗粒干燥后，再将其与硬脂酸镁混合并压缩成型，或者，将上述处方的各种成分一起混合，直接压缩成型，制成一种每片415mg的片剂。制剂例5〔注射剂〕成分量(mg)杂酚油50注射用蒸馏水2将杂酚油50mg溶解于注射用蒸馏水中，然后进行封装和灭菌，从而制成注射剂。制剂例6〔丸剂〕成分量(mg)愈疮木酚50甘草25甘油10水50将上述处方中的各种成分练合，用切丸机将这些丸剂的块状物切成小块，然后用成丸机成丸，制成一种每丸含有愈疮木酚50mg的丸剂。制剂例7〔胶囊剂〕成分量(mg)愈疮木酚50甲酚50橄榄油100按照上述的比例将愈疮木酚和甲酚溶解于橄榄油中，将其制成溶液，将该溶液灌装入一种软胶囊中，从而制得一种每1胶囊含有愈疮木酚50mg和甲酚50mg的软胶囊剂。制剂例8〔片剂〕成分量(mg)甲氧甲酚150乳糖250甲基纤维素3硬脂酸镁2羧甲基纤维素10将上述处方中除了硬脂酸镁以外的各种成分混合，将此混合物与水混炼并制成颗粒，待这些颗粒干燥后，再将其与硬脂酸镁混合并压缩成型，或者，将上述处方的各种成分一起混合，直接压缩成型，制成一种每片415mg的片剂。权利要求1.一种肠液量调整剂，它含有杂酚油或者属于杂酚油构成成分的苯酚衍生物作为有效成分。2.如权利要求1所述的肠液量调整剂，其特征在于，其中的有效成分由于具有促进肠液吸收的作用和抑制肠液分泌的作用而能减少肠液量。3.如权利要求2所述的肠液量调整剂，其特征在于，上述的苯酚衍生物是从愈疮木酚，甲氧甲酚、苯酚、甲酚和二甲苯酚中选择的1种或2种以上。4.如权利要求2所述的肠液量调整剂，其特征在于，它能抑制由于大肠杆菌易热性肠毒素或大肠杆菌耐热性肠毒素所引起的肠液分泌亢进。全文摘要本发明的肠液量调整剂含有杂酚油或者属于杂酚油构成成分的苯酚衍生物作为有效成分。这些有效成分由于具有促进肠液吸收的作用和/或抑制肠液分泌的作用而能减少肠液量。作为上述的苯酚衍生物,可以使用从愈疮木酚、甲氧甲酚、苯酚、甲酚和二甲苯酚中选择的1种或2种以上。文档编号A61K35/04GK1171237SQ97113540公开日1998年1月28日申请日期1997年6月27日优先权日1996年7月1日发明者柴田晃,柴田高,久下伦生,绪方规男,安宅弘司申请人:大幸药品株式会社