专利名称：端粒酶抑制剂的制作方法
技术领域：
本发明涉及端粒酶抑制剂，该抑制剂中应用了儿茶素作为有效成分，并且可用作防癌剂，抗癌剂，能延迟癌症发展的药剂等等。
对于癌症的治疗，已经开发了各种外科，内科和放射学抗癌方法和它们的联合用于癌症的治疗。为了防止癌症或在预防癌症恶化的手段方面已经尽可能地作了广泛的研究以便防止癌症发展到致死阶段。不管怎样，显然，为了开发防止和治疗癌症的有效方法，进一步了解癌症的发生和发展的机制是必要的。
最近，称为端粒酶的酶的存在可作为癌症治疗的新靶已经引起关注。该端粒酶，一种逆转录酶，合成端粒DNA(下文称为端粒)，端粒在细胞生长过程中参与了染色体的稳定化。端粒是由染色体末端的线性DNA组成的部分，端粒的存在稳定了染色体本身并防止了染色体之间的结合引起的畸变。
研究已经发现，人组织中的端粒随着年龄的增长而缩短，并且细胞随着这一缩短过程的发展而死亡；因此端粒参与了老化过程和细胞分裂周期已经是清楚了。另外，已经有报道，癌细胞中的端粒比周围的正常细胞中的更短，这进一步引起了对端粒在癌症研究中作为有利的靶的关注。
另外，已经有报道，在所有癌症的85％的细胞中检测到端粒酶，即端粒合成酶的活性(例如，Kim,N.W.等人，科学，266,2011-2015,1994；Healy,K.C.，肿瘤学研究，7,121-130,1995；Raymond,E.等人，生物技术，7,583-591,1996)。相反，已知差不多所有正常的体细胞是端粒酶阴性的。在这些发现的基础上，端粒和端粒酶作为癌症治疗的潜在的靶已经引起进一步的关注。
同时，人们一直对茶叶在癌症的防止和控制中的作用进行研究。Yang等人(Yang,C.S.和Wang,Z-Y.，国家癌症研究杂志，85,1038-1049,1993)和Fujiki等人(Fujiki,H.等人，营养综述，54,67-70,1996)在他们的综述文章中从流行病学的观点讨论了绿茶的抗癌活性。另外，Liao等人(Liao,S.等人，癌症通讯，96,239-243,1995)报道了茶中含有的倍酸表倍儿茶素(EGCG)能有效地抑制用实验诱导的肿瘤的裸鼠中癌细胞的增长。另外Taniguchi等人(Taniguchi,S.等人，癌症通讯，65,51-54,1992)报道口服给药EGCG抑制恶性黑素瘤细胞的扩散。但是，这些报道中没有一个叙述绿茶或EGCG对癌症的这些作用中隐藏的机制。特别是，这些报道没有提到绿茶或EGCG对端粒酶的作用，或与端粒酶相关的抗癌活性的机制。
虽然，可以推测癌症治疗中端粒酶抑制剂的用途的基础是一个假说，即癌细胞中端粒酶活性受到抑制使染色体更加不稳定，从而缩短了癌细胞的生命周期。但是，至今还没有报道具有有效的端粒酶抑制活性和满足药物用途的特性的物质。同样还没有报道使用端粒酶抑制剂能有效地缩短癌细胞的生命周期的情况。
本发明的目的是提供具有端粒酶抑制活性的端粒酶抑制剂，它可用于提供对端粒和端粒酶不仅参与了癌症，而且与癌症的预防和治疗有关的认识，因此端粒酶抑制剂在药物用途上具有安全和合适的特性。
本发明的端粒酶抑制剂的特征是利用或含有儿茶素作为有效成分。本发明的端粒酶抑制剂可以用作在各种实验中使用的试剂，这些实验关于端粒酶抑制实验或涉及端粒酶抑制作用的那些实验，进一步通过将抑制剂制备成药物制剂用作防癌剂，抗癌剂等等。另外，通过利用本发明的端粒酶抑制剂，可以缩短癌细胞的生命周期以便杀死细胞，或者通过阻止它的生长和恶化可以有效地控制癌症的发展。
用于本发明的儿茶素具有不同一般的强端粒酶抑制活性，可以提供端粒酶抑制剂，它可用于认识端粒酶在癌症和它的预防和治疗，并且它在药物用途中具有安全和合适的特性。
附图的简要说明附
图1显示了不同化合物的端粒酶活性。
附图2显示了端粒酶活性的变化与EGCG浓度呈函数关系。
附图3显示了EGCG的端粒酶抑制活性的Dixon图样。
附图4显示了在细胞中EGCG的端粒酶抑制活性。
附图5显示了EGCG对细胞生长的作用。
附图6显示了EGCG对细胞生长的作用。
附图7显示了在存在或缺乏EGCG(15微摩尔浓度)时，在PD67到PD70时传代培养物中，来自HT29细胞的TRF长度的分布。
商业途径得到的儿茶素，或通过已知方法从茶中提取和分离的儿茶素可以用作本发明的端粒酶抑制剂的有效成分。
从茶中可以提取和分离儿茶素，例如通过用热水或亲水有机溶剂萃取茶叶，用氯仿萃取从萃取物中除去咖啡因，然后进一步用有机溶剂如乙酸乙酯提取得到茶-儿茶素混合物，并最后利用亲水有机溶剂如丙酮作为洗脱剂通过柱层析从混合物中分离儿茶素。
例如，可以使用从绿茶中提取含有儿茶素的萃取物，或使用从这些萃取物中制备的粗或纯化的产物。绿茶提取物的一个例子是THEA-FLAN 90S(产物名称，ITO EN有限公司)。
采用例如日本延迟公开专利(Kokai)号，182479/92，日本延迟公开专利(Kokai)号182480/92，日本延迟公开专利(Kokai)号9607/94，日本延迟公开专利号70105/75，和日本延迟公开专利号，2703241描述的方法从茶中可以分离这样的儿茶素。
另外，也可以使用如下制备的绿茶提取物。首先，用热水提取绿茶植株的叶子和茎以便分馏萃取物，然后浓缩这一提取物，同时必要的话，分离固体。
浓缩可以适当地在真空中进行。如果必要，通过加热对这样得到的浓缩物灭菌，然后干燥用作含有儿茶素的提取物。合适的是使用喷雾干燥。也可以使用未干燥的物质，但是干燥的粉末是优选，因为容易操作和优良的可储存性。
适当地可以使用绿茶萃取物，它至少含有35％重量，优选地至少90％重量的茶多酚，和至少含有10％重量，优选地40％重量(-)的倍酸表倍儿茶素。另外，提取物中的咖啡因的含量优选地是10％的重量或低于10％。提取物中的儿茶素含量随着纯化水平的提高而提高，纯化水平可以作为使用目的的函数来选定。通过传统的提取方法，分离方法，柱层析等等的适当联合可以纯化提取物中的儿茶素。
本发明中使用的儿茶素的例子包括(-)倍酸表倍儿茶素(EGCG),(-)表倍儿茶素(EGC),(-)倍酸表儿茶素(ECG),(-)表儿茶素(EC)和(+)儿茶素。也可以使用这些儿茶素的衍生物，只要能够达到本发明的效力。也可以将两个或更多的这些儿茶素的联合使用。在这些儿茶素中间，表倍儿茶素和倍酸表儿茶素是优选的，倍酸表倍儿茶素特别优选。
如果必要，通过在适当溶剂中掺入儿茶素作为有效成分可以制备本发明的端粒酶抑制剂。使用商品儿茶素或从茶中提取得到的高度纯化的儿茶素的最好方法是将儿茶素掺入水包油(O/W)乳剂，制备方法是例如将儿茶素与植物油，乳化剂(如，Tween或Emulgene)，和抗坏血酸(抗氧化剂)混合，然后冷冻干燥得到的乳化液。预期这一乳化液能使儿茶素获得更好的肠吸收，所以更具有潜在的抗端粒酶作用。在冷冻干燥之前的组合物的一个例子是5％重量的植物油，乳化剂，等等，0.1％重量的抗氧化剂，和5％重量的儿茶素。冷冻干燥后抑制剂中的儿茶素含量优选地是90-95％重量。如果需要，可以将抑制剂稀释使用。
另外，当使用上面提到的茶提取物时，可以利用提取物本身或加入适当溶剂的提取物，以得到本发明的端粒酶抑制剂。如果使用提取物，干燥粉末是优选的。
可以适当地使用含有儿茶素的药物组合物作为防癌剂或制癌剂，该儿茶素具有端粒酶抑制活性。制癌作用包括直接攻击癌细胞，的抗癌作用，延迟癌症(恶性肿瘤)的发展的作用，等等。为了适应治疗的目的，采用常规方法，利用药物可接受的载体，稀释剂等等可以将含有儿茶素作为有效成分的药物组合物配制成各种形式。这样的药物组合物的形式的例子包括固体配方如片剂，丸剂，可分散的粉末，颗粒，胶囊和栓剂，液体配方如注射剂，悬浮液，糖浆和乳剂，和半固体配方如膏药。
如果使用商业途径得到的儿茶素或纯化制剂，在药物组合物中用作有效组成的儿茶素的量在片剂或胶囊中例如可以为100到500毫克(约为组合物重量的90到95％)。在某些配方中也可以不经过进一步纯化使用茶叶提取物，或使用常规方法，在提取物中加入药物可接受载体，稀释剂等等将它配制成适应治疗目的的各种形式。
通常可以将药物组合物中使用的儿茶素的剂量作为治疗目的，治疗症状的特性等等的函数来决定。例如作为有效的化学成分的量，成人用的剂量范围可以在每天约500到2000毫克之间，但并不严格限制。另外，可以适当地使用上面提到的冷冻干燥的O/W乳化液作为配方或配方中的物质。
另外，在不抑制需要的儿茶素的作用的范围内，在本发明的药物组合物中可以掺入通常用于制剂的各种添加剂。而且，在治疗癌症时，通过与化学治疗剂(抗癌剂)一起对端粒酶抑制剂攻击的癌细胞共给药，本发明的端粒酶抑制剂可能更加有效。
本发明的端粒酶抑制剂的有效成分，儿茶素，可以从茶的成分中得到，非常安全，较小的量即显示有效的活性，因此非常适于用作药物，特别是防止或治疗癌，所述癌中表达了端粒酶。
下面的实施例将进一步说明本发明。除非特别说明，“％”意指“％重量”。
生产实施例1将绿茶叶子(20克)浸泡在300毫升热水(60℃)中15分钟以提取。然后过滤提取物，利用旋转蒸发器，将滤液在40℃，在真空中浓缩。在浓缩到约40毫升后，离心(3,000rpm,10分钟)得到的液体，将这样得到的上清液冷冻干燥得到棕黄色的干燥粉末(4.7克)(粉末样品1)。
对这样得到的干燥粉末中含有的多元酚，儿茶素和其它成分的含量的分析结果如下茶多酚41.5％重量(-)-倍酸表倍儿茶素15.1％重量(-)-表倍儿茶素6.6％重量(-)-倍酸表儿茶素 3.5％重量(-)-表儿茶素 2.3％重量咖啡因7.3％重量实施例1在无细胞系统中测量端粒酶抑制活性根据Kim等人叙述的方法，端粒重复扩增方案(TRAP)(Kim,N.W.等人，科学，266,2011-2015,1994)测量EGCG,EGC,ECG，和EC(所有为Sigma产品)的端粒酶抑制活性，过程如下(1)制备细胞提取物用冰冷的PBS(磷酸缓冲盐)洗涤细胞并再次悬浮于PBS中，以便对细胞计数。在离心这一细胞悬浮液后，将得到的细胞团悬浮于TRAP测试缓冲液(10毫摩尔浓度Tris-HCl,pH7.5,1毫摩尔浓度MgCl2,1毫摩尔浓度EDTA,0.5％CHAPS,10％甘油，5毫摩尔浓度2-巯基乙醇，和0.1毫摩尔浓度4-(2-氨乙基)-苯磺酰氟盐酸盐)，然后用液氮快速冷冻悬浮液。在熔化后，允许悬浮液在冰浴中停留30分钟以便萃取，然后离心得到的提取物，将得到的上清液作用于活性测量的细胞提取物。
(2)反应和反应后的处理在特定体积的细胞提取物(对应于200到1000个细胞)中加入测试混合物，TS引物(50纳克)，50微摩尔浓度dNTPs，和T4g32蛋白质(Behringer-Manheim)，并将混合物在20℃，温育30分钟。在反应后，在反应溶液中加入CX引物(100纳克)和PCR的内部标准，ITAS(10-18克)，然后在存在Ampli Taq DNA聚合酶(2U)时进行PCR，即(94℃,40秒→50℃,40秒→72℃,60秒)×30次循环→72℃,2分钟，得到PCR产物。
在上面提到的方法中应用的引物的碱基序列如下TS引物5’-AATCCGTCGAGCAGAGTT-3’(SEQ ID NO:1)CX引物5’-GTGCCCTTAACCCTTACCCTTACCCTAA-3’(SEQ ID NO:2)ITAS:
5′AATCCGTCGAGCAGAGTTGTGAATGAGGCCTTCGAGGCTCTGAAGAGAAGCACCCTGCTCAACCCCAACCAGCGGCTGCCTAAGGTGGAGATCCTGCGCAGTGCCATCCAGTACATTGAGCGCCTATTAGGGTAAGGGTAAGGGTAAGGG-3′(SEQ ID NO:3)在体外反应系统中，端粒酶在TS引物的3’末端进行端粒的添加合成。在CX引物的3’末端侧的24个碱基中，21个碱基与端粒的序列相同，所以利用TS引物和CX引物的联合，通过PCR可以扩增端粒产物。产生的ITAS序列的5’末端和3’末端部分分别与TS引物序列和CX引物序列相同。
(3)检测和定量分析反应产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离上面提到的程序中得到的PCR产物，用UV透射仪辐射检测用SYBR绿(Takara Shuzo)染色获得的DNA谱带。将检测到的谱带照相。利用NIH成象1.60软件程序定量分析各条谱带的强度。将端粒酶的活性表示为相对于ITAS片段的谱带(对照)的样品谱带的强度。
结果表示在图1。从图1证实了在5种儿茶素中EGCG具有最高的抑制活性。
实施例2
EGCG的端粒酶抑制活性测量范围在0.1到20微摩尔浓度的8个不同的EGCG浓度的反应溶液中的端粒酶活性，方法与实施例1所述的相类似，不同的是在两个浓度中使用引物PS。结果如图2所示。从图2的结果绘制Dixon图，得到约100纳米的Ki值(参见图2和3)。
实施例3茶提取物的端粒酶抑制活性测量含有生产实施例1中得到的粉末样品1，粉末样品2(茶儿茶素提取物THEA-FLAN 90S，商标名称，ITO EN，有限公司的产品)和EGCG的反应溶液的端粒酶活性，所含物质的浓度范围如下所述，测量方法与实施例1所述相同。
粉末样品10.30到1.00微克/毫升粉末样品20.10到0.30微克/毫升EGCG 0.10到0.30微克/毫升THEA-FLAN 90S的组成如下茶多酚 92％重量(-)-倍酸表倍儿茶素 50％重量(-)-表倍儿茶素 0％重量(-)-倍酸表儿茶素 13％重量(-)-表儿茶素 0％重量咖啡因 0.5％重量通过用计算机计算将对照中的DNA的扩增水平抑制到50％时的样品浓度评估抑制活性(IC50)。结果表示在表1。
表1端粒酶抑制作用，IC50。实施例4
细胞中的端粒酶抑制活性在monoblastoid白血病U937细胞(美国典型培养物收藏处，ATCC)和结肠腺癌HT29细胞中测试EGCG的端粒酶抑制活性。
对U937细胞应用用10％的胎牛血清补充的RPMI1640(Nissui)培养基培养，对HT29细胞应用用5％的FBS和5％的小牛胚胎血清(FCS)补充的RPMI1640培养基培养。
将细胞在15微摩尔浓度EGCG溶液中温育2小时并在PBS中洗涤。在RPMI1640培养基(没有血清)中悬浮已经洗涤的细胞，细胞的浓度为2×106个细胞/毫升，然后加入链球菌溶血素O(Sigma,5U/毫升)，TS引物(10微摩尔浓度)，亚精胺(1毫摩尔浓度)，和丙咪嗪(50微摩尔浓度)，在室温下温育混合物10分钟。链球菌溶血素O是增强物质通过细胞膜的渗透性的物质，它能使TS引物和其它物质渗入细胞中。
加入同等体积的用10％的FBS补充的RPMI1640培养基以便终止渗透反应，然后进一步温育细胞悬浮液1小时以便封闭细胞膜。这样得到的细胞中掺入了TS引物和其它物质，将这些细胞在室温下温育1小时以便包衣细胞膜，同时，允许细胞内端粒酶反应进行。然后用PBS洗涤细胞两次，沉淀，冷冻用于TRAP测试以便检测端粒酶产物。
也就是，用冰冷的PBS洗涤细胞，再次悬浮于PBS中，对细胞计数。离心这一悬浮液，在TRAP测试缓冲液中悬浮得到的细胞团，然后用液氮快速冷冻悬浮液。在熔化后，允许悬浮液在冰浴中停留30分钟，然后，将得到的提取物离心以便得到作为细胞提取物的上清液。在特定体积的细胞提取物(对应于200到1000个细胞)中加入TS引物(344纳摩尔浓度)，ACX引物(385纳摩尔浓度)，50微摩尔浓度dNTPs,T4g32蛋白质(Behringer-Manheim),PCR的内部标准，TSNT(0.02皮摩尔浓度)，和NT引物(385纳摩尔浓度)，然后在存在GeneTaq DNA聚合酶(2U)时进行PCR，即(94℃,40秒→50℃,40秒→72℃,60秒)×35次循环→72℃,2分钟，得到PCR产物。
用于本反应的引物的碱基序列如下ACX引物5’-GCGCGGCTTACCCTTACCCTTACCCTAACC-3’(SEQ ID NO:4)TSNT:
5’-AATCCGTCGAGCAGAGTTAAAAGGCCGAGAAGCGAT-3’(SEQ ID NO:5)
NT引物5’-ATCGCTCGGCCTTTT-3’(SEQ ID NO:6)通过聚丙烯酰胺凝胶电泳可以分离这样得到的端粒酶产物，然后用SYBR绿(Takara Shuzo)将DNA谱带染色，并用UV透射仪辐射检测。利用NIH成象1.60软件程序定量分析每条谱带的强度，将端粒酶的活性表示为相对于ITAS片段(对照)的谱带的样品谱带强度。
在上面提到的PCR中，利用TS引物作为正向引物和ACX作为反向引物扩增由端粒酶催化延长的部分。另外，如Kim等人所述使用36bp的内部标准(TSNT)和它自身的反向引物(NT)(Kim,N.W.和Wu,F.，核酸研究，25,2595-2597,1997)。
结果表示在图4。结果显示用EGCG处理细胞明显地抑制细胞内端粒酶的活性。在缺乏TS引物时也检测到微弱的信号。人们认为这些信号来源于内源端粒序列等等，并同样受到EGCG处理的抑制。
实施例5EGCG对端粒酶的作用机制用15微摩尔浓度的EGCG处理细胞2小时，并用冰冷的PBS洗涤。将离心得到的细胞团悬浮于TRAP测试缓冲液中，用液氮快速冷冻得到的悬浮液。在熔化后，允许悬浮液停留在冰浴中30分钟，然后离心得到的提取物，获得作为细胞提取物的上清液。在特定体积的细胞提取物(对应于200到1000个细胞)中加入测试化合物，TS引物(50纳克)，50微摩尔浓度dNTP，和T4g32蛋白质(Behringer-Manheim)，将混合物在20℃温育30分钟。反应后，在反应溶液中加入CX引物(100纳克)，然后在存在Gene Taq DNA聚合酶(2U)和ITAS(10-18克)时进行PCR，即(94℃,40秒→50℃,40秒→72℃,60秒)×30次循环→72℃,2分钟，得到PCR产物。将这样得到的PCR产物通过聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，通过UV透射仪辐射检测用SYBR绿(Takara Shuzo)染色的DNA谱带。利用NIH成象1.60软件程序定量分析各条谱带的强度。将端粒酶活性表示为相对于对应于ITAS片段的谱带的样品谱带的强度。
对U937细胞和HT29细胞实施上面提到的程序。结果显示当在体外测试时，由于细胞溶解过程中的稀释作用，对细胞进行EGCG处理不影响端粒酶活性。这一发现以及实施例1,2和4的结果表明EGCG直接和可逆地抑制细胞中的端粒酶活性，并且这种抑制作用并不经过细胞内的信息转移系统(细胞内形成信号途径)。
实施例6将U937细胞和HT29细胞在有和没有EGCG的培养基上传代培养以便研究加入EGCG对细胞生长的作用。所用的培养基与实施例4中所用的相同。
制备5个U937细胞的传代培养系和9个HT29细胞的传代培养系。通过以每个10厘米的盘中5×105个细胞的密度接种每种储存培养物的细胞进行每个细胞系的第一次培养。对于每次传代培养，将两个系在没有EGCG的培养基上培养(对照系)，其余的细胞系在补充了15微摩尔浓度的EGCG的培养基上培养。
将细胞每4天传代，取样和计数一次。每天更换新鲜的温育培养基。
结果表示在图5(U937细胞)和图6(HT29细胞)中。符号○表示了在没有EGCG的培养基上培养的对照系。在图5中，符号●，▲，和■表示在用15微摩尔浓度EGCG补充的培养基上培养的细胞系。所有的细胞系的细胞分别在53天(●)，44天(▲)，和29天(■)进入细胞转捩期，然后显示出与细胞衰老相似的形态学变化。在图6中，符号▲和●显示在用15微摩尔浓度EGCG补充的培养基上培养的细胞系。两个系的细胞分别在75天(▲)和57天(●)进入细胞转捩期，然后显示与细胞衰老相似的形态学变化。
U937细胞和HT29细胞约分别在PD25和PD 60进入转捩期，显示出特征性的形态学变化(对于HT29细胞是集拢和脱附，对于U937细胞是质膜边缘破裂)。U937细胞在PD40时死亡，HT29细胞在PD70时死亡。PD是循环次数，其中在细胞生长过程中细胞数目增倍，该数目可以通过血细胞计数器检测细胞数来计算。
当将具有形态学变化的细胞转移到和培养在没有EGCG的培养基上时细胞的形式不逆转并被维持，这证明了形态学变化不是暂时的。
合并细胞转捩中从PD57到PD60的HT29细胞，并通过盐析/乙醇沉淀方法(Stratagene)制备基因组DNA。另外，通过凝胶电泳进一步证实分离的基因组DNA的整合(溴化乙锭染色)。
用HinfⅠ和RsaⅠ消化分离的基因组DNA(10微克)，通过普通方法将得到的消化物进行Southern印迹分析，然后利用Telo Quant测试试剂盒(PharmMingen)检测DNA片段。
附图7显示了结果。虽然在正常的基因组DNA中限制性酶HinfⅠ和RsaⅠ识别的切割位点数目是巨大的，这样的切割位点不存在于亚端粒或端粒区。因此，如果用上面提到的限制性酶消化基因组DNA，只有端粒区仍然保持未消化。这一DNA片段称为终端限制片段(TRF)，这一片段可以通过Southern影印方法检测，以便分析端粒的长度。利用TeloQuant测试试剂盒检测如上所述获得的EGCG处理或未处理的HT29细胞的TRF。附图7显示了对检测信号进行光密度分析的结果。观察到由于EGCG处理(●)进入转捩期的细胞中的TRF与未处理细胞(O)相比缩短了约1.1kb。另外，已经证实连续地对HT细胞进行EGCG处理引起失去端粒。
另外，利用流式细胞计数仪的一般方法分析进入转捩期的细胞之前中的DNA含量，发现对于U937细胞和HT29细胞的非增倍性和细胞周期的G2/M部分分别增加了50到100％和10到20％。
总之，从这些结果可以证实EGCG在细胞内抑制端粒酶引起细胞转捩到死亡。
权利要求
1．含有儿茶素作为有效成分的端粒酶抑制剂。
2．根据权利要求1所述的端粒酶抑制剂，包括含有儿茶素的绿茶提取物。
3．根据权利要求1或2所述的端粒酶抑制剂，其中儿茶素是倍酸表倍儿茶素，表倍儿茶素，倍酸表儿茶素，或表儿茶素。
4．根据权利要求1,2或3所述的端粒酶抑制剂，进一步包括药物可接受载体或稀释剂。
5．根据权利要求1到4的任一项所述的端粒酶抑制剂，其中儿茶素的含量是总重量的90到95％。
6．含有儿茶素作为有效成分的防癌剂或抗癌症剂。
7．根据权利要求6所述的防癌剂或抗癌剂，包括含有儿茶素的绿茶提取物。
8．根据权利要求6或7所述的防癌剂或抗癌剂，其中儿茶素是倍酸表倍儿茶素，表倍儿茶素，倍酸表儿茶素，或表儿茶素。
9．根据权利要求6,7或8所述的防癌剂或抗癌剂，其中进一步含有药物可接受载体或稀释剂。
10．根据权利要求6到9的任一项所述的防癌剂或抗癌剂，其中儿茶素含量是总重量的90到95％。
11．抑制端粒酶活性的方法，包括与权利要求1到5所述的任一项要求保护的端粒酶抑制剂接触的步骤。
12．预防或治疗癌症的方法，包括以有效量的权利要求6到10所述的要求保护的防癌剂或抗癌剂给需要治疗的人给药。
13．儿茶素在生产端粒酶抑制剂中的应用。
14．儿茶素在生产防癌剂或抗癌剂中的应用。
15．生产端粒酶抑制剂的方法，包括利用儿茶素作为有效成分配制端粒酶抑制剂的步骤。
16．生产防癌剂或抗癌剂的方法，包括利用儿茶素作为有效成分配制防癌剂或抗癌剂的步骤。
全文摘要
已知是茶叶的成分的儿茶素,能抑制端粒酶的酶活性,端粒酶合成负责在细胞生长过程中固定染色体的颗粒DNA。这一端粒酶抑制活性显示儿茶素可作为防癌剂,抗癌剂,或延迟癌症发展的药剂等等。
文档编号A61K31/353GK1226423SQ9812695
公开日1999年8月25日 申请日期1998年12月24日 优先权日1997年12月26日
发明者鹤尾隆, N·伊马德, 清宫启之, 菅野晴夫 申请人:财团法人癌研究会, 鹤尾隆, 株式会社伊藤园