载脂蛋白a－i激动剂及其治疗脂血异常症的用途的制作方法

专利名称：载脂蛋白a－i激动剂及其治疗脂血异常症的用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及用于治疗与血脂蛋白异常有关病症的载脂蛋白A-I(Apo-I)激动剂组合物，例如血胆脂醇过多症、心血管病、动脉粥样硬化、再狭窄、以及其他病症，例如，脓毒性休克。
2.发明背景循环系统胆固醇携带者为血浆脂蛋白--能够转运血脂的由复合脂类和蛋白质形成的复合物颗粒。低密度脂蛋白(LDL)和高密度脂蛋白(HDL)是主要的胆固醇携带者。低密度脂蛋白负责把肝中的胆固醇输送到体内的肝外组织。术语“逆向胆固醇转运”是指把肝外组织的胆固醇转运到肝中的过程，胆固醇在肝中代谢并排泄。血浆HDL颗粒在逆向转运过程中起着重要的作用，扮演着组织胆固醇清洁工的角色。
大量的证据表明升高的血清脂蛋白与冠心病有关。例如，动脉粥样硬化是以在动脉壁上积聚胆固醇的慢性进行性过程。明显的证据支持如下事实储存在动脉粥样硬化病变处的脂类主要由从血浆LDL输送而来；因此，LDLs又被通俗地称为“坏”胆固醇。相反，HDL血清水平与冠心病负相关--实际上，高血清水平的HDL被认为是负危险度。认为高水平血浆脂蛋白不仅可以预防冠心病，而且确实可以导致动脉粥样硬化斑的衰退(例如，Badimon et al.，1992，Circulation86(Suppl.III)86-94)。因此，普遍地又将HDL称为“好”胆固醇。
2.1.胆固醇的转运脂肪转运系统可以分为两种途径一种为用于肠道吸收的胆固醇和甘油三酯的外源性途径，一种为用于从肝及其他非-肝组织进入血流的胆固醇和甘油三酯的内源性途径。
外源性途径中，饭食中的脂肪被包装成称为乳糜微粒的脂蛋白颗粒，乳糜微粒进入血流并将它们中的甘油三酯运输到脂肪组织(用于存储)和肌肉(用于氧化提供能量)。含有胆固醇酯的乳糜微粒剩余物被一种特殊受体从循环系统中清除，该受体只发现于肝细胞。然后，这种胆固醇又可以为细胞代谢所利用或者作为血浆脂蛋白再循环到肝外组织。
内源性途径中，肝向血流中分泌大的、极低密度脂蛋白(VLDL)。VLDLs的核心主要由肝中合成的甘油三脂组成，另有较少量的胆固醇脂(肝内合成或从乳糜微粒再循环而来)。两种主要的蛋白质，载脂蛋白B-100和载脂蛋白E。当VLDL到达脂肪组织或肌肉的毛细血管时，其中的甘油三脂被提出从而形成一种称为中间密度脂蛋白(IDL)的新颗粒，这种新颗粒大小减小并富集胆固醇酯，但仍保留了其两种载脂蛋白。
人体内，约一半的IDL颗粒被从循环系统中快速清除(它们合成的2～6小时内)，因为它们与肝细胞紧密结合，肝细胞提取出其中的胆固醇，生成新的VLDL和胆汁酸。未被肝细胞吸收的IDL颗粒则会在循环系统中保留更长的时间。此时，载脂蛋白E从循环颗粒中解离出来，使该颗粒转化为只有载脂蛋白B-100作为其唯一蛋白的LDL。
首先，肝细胞吸收并降解大部分胆固醇生成胆汁酸，胆汁酸是胆固醇代谢的终产物。含颗粒胆固醇的吸收由LDL受体介导，该受体以高浓度存在于肝细胞上。LDL受体结合载脂蛋白E和载脂蛋白B-100，并负责从循环系统中结合和去除IDLs和LDLs。但是，载脂蛋白E与LDL受体的结合力比载脂蛋白B-100大。因此，LDL颗粒具有比IDL颗粒大得多的半衰期范围--在结合肝和其他组织中LDL受体之前，LDL循环的时间段为2天半。高水平LDL(“坏”胆固醇)与冠心病正相关。例如，动脉硬化症中，来自循环LDLs的胆固醇积聚在动脉壁导致形成大块病变，这种大块病变抑制血流直到最终形成栓塞，阻塞动脉引发心肌梗塞或心绞痛。
最后，从LDLs从释放出的胞内胆固醇的量控制细胞胆固醇代谢。来自VDLs和LDLs细胞胆固醇的积聚控制着3个途径第一，它可以通过关闭HMGCoA还原酶-胆固醇生物合成途径中的一种关键酶，减少细胞胆固醇的合成。第二，通过激活ACAT-能够把胆固醇转化成储存在存储小滴中的胆固醇酯的酶，新进入的LDL-衍生胆固醇促进胆固醇的存储。第三，细胞中胆固醇的积聚驱动一种反馈机制，抑制新LDL受体的细胞合成。因此，细胞可以调节其对LDL受体的补充，从而能有足够量胆固醇满足代谢需要，而不过量。(综述，见Brown &Goldstein，In，The Pharmacological Basis Of Therapeutics，8thEd.，Goodman & Gilman，Pergamon Press，NY，1990，Ch.36，pp.874～896)。
2.2.逆向胆固醇转运总之，外周(非肝)细胞从原位合成以及吸收来自VLDLs和LDLs的预成固醇的结合，获得它们的胆固醇。反之，逆向胆固醇转运(RCT)是这样一种途径，即能够将外周细胞胆固醇返回到肝细胞，用于再循环到肝外组织，或者以胆汁排泄到肠道，经修饰或氧化形成胆汁酸。RCT途径是从大部分肝外组织中清除胆固醇的唯一方法，对维持体内多数细胞的结构和功能起着关键作用。
RCT主要包括3个步骤(a)胆固醇的流出，最初从外周细胞的各种库中移取胆固醇；(b)卵磷脂胆固醇脂酰基转移酶(LCAT)作用下的胆固醇酯化，防止流出的胆固醇再进入细胞；以及(c)把HDL胆固醇酯吸收/运输到肝细胞。RCT途径由HDLs介导。HDL是以其高密度为特征的脂蛋白颗粒的通用术语。HDL复合物中主要脂类成分有各种磷脂、胆固醇(酯)以及甘油三脂。最主要的载脂蛋白成分是A-I和A-II，这二者决定HDL的功能特征；另外还发现少量载脂蛋白C--I、C-II、C-III、D、E、J等。根据在代谢RCT级联反应过程中改形情况，HDL可以多种大小不同以及上述组分间混合比各异的形态存在。
参与RCT途径的关键酶是LCAT。LCAT主要由肝生成，并与HDL级分结合循环于血浆中。LCAT可以把细胞生成的胆固醇转化成胆固醇酯，胆固醇酯隐藏在运去消除的HDL中。另外，胆固醇酯转运蛋白(CETP)和磷脂转运蛋白(PLTP)也参与改形循环HDL群体。CETP能够把LCAT制备的胆固醇酯搬运到其他脂蛋白，具体为含ApoB脂蛋白，例如VLDL和LDL。PLTP向HDL供应卵磷脂。HDL甘油三脂可以被胞外肝甘油三酯脂酶代谢，脂蛋白被肝通过几种机制去除脂蛋白胆固醇。
每个HDL颗粒含有至少1个拷贝(通常为2～4拷贝)的ApoA-I。ApoA-I由肝和小肠作为前载脂蛋白原合成，前载脂蛋白原以蛋白原分泌，该蛋白原迅速地被切割生成具有243个氨基酸残基的成熟多肽。ApoA-I主要由6～8个不同的22氨基酸残基重复单元组成，该重复单元被连接单元间隔，该连接单元通常为脯氨酸、某些情况下由数个成串残基构成。ApoA-I形成3种类型的含脂稳定复合物称为前-β-1 HDL的小、贫脂复合物；称为前-β-2 HDL的含极性脂类(磷脂和胆固醇)的平盘状颗粒；以及称为球状或成熟HDL(HDL3和HDL2)的同时含极性和非极性脂类的球状颗粒。循环群体中的多数HDL含有ApoA-I和ApoA-II(次主要HDL蛋白)，本发明称其为HDL的AI/AII-HDL级分。但是，只含ApoA-I的HDL级分(本发明称为AI-HDL级分)在RCT中的效率更高。某些流行病学实验支持下列理论AI-HDL具有抗-粥样硬化的特性。(Parra et al.，1992，Arterioscler.Thromb.12701-707；Decossin et al.，1997，Eur.J.Clin.Invest.27299-307)。
尽管从细胞表面转运出胆固醇(即胆固醇外流)的机制还不清楚，但是可以肯定的是贫脂复合物，前-β-1 HDL是从参与RCT的外周组织转运而来胆固醇的优选受体。(See Davidson et al.，1994，J.Biol.Chem.26922975-22982；Bielicki et al.，1992，J.LipidRes.331699-1709；Rothblat et al.，1992，J.Lipid Res.3310911097；and Kawano et al.，1993，Biochemistry 325025-5028；Kawano et al.，1997，Biochemistry 369816-9825)。在这种从细胞表面补充胆固醇的过程中，前-β-1 HDL迅速转化成前-β-2HDL。PLTP可以加快前-β-2 HDL圆盘状的形成，但是有结果表明PLTP不参与RCT。LCAT优选与圆盘状或球状HDL反应，把卵磷脂或其他磷脂上的2-酰基转移到胆固醇的羟基上生成胆固醇酯(保留在HDL中)和溶血卵磷脂。LCAT反应需要ApoA-I作为激活剂；即，ApoA-I是LCAT的天然辅因子。隐藏在HDL中进行的胆固醇向其酯的转化可以防止胆固醇再进入到细胞中，结果为胆固醇酯必然被清除。AI-HDL级分(即，含ApoA-I而不含ApoA-II)中成熟HDL颗粒内的胆固醇酯被肝清除并处理成胆汁，而且比来自同时含ApoA-I和ApoA-II的HDL(AI/AII-HDL级分)中的胆固醇酯效率更高。这部分取决于AI-HDL与肝细胞膜的结合更有效。现已提出存在着HDL受体，而且最近一种清洁受体，SR-BI被鉴定为HDL受体(Acton et al.，1996，Science271518-520；Xu et al.，1997，J.Lipid Res.381289-1298)。SR-BI在类固醇生成组织(例如，肾上腺)和肝中的表达量最为丰富(Landshulz et al.，1996，J.Clin.Invest.98984-995；Rigottiet al.，1996，J.Biol.Chem.27133545-33549)。
CETP没在RCT中发挥主要作用，而是参与了VLDL-和LDL-衍生脂类的代谢。但是CETP活性或其受体VLDL和LDL的变化在“改形”HDL群体中发挥了作用。例如，在缺乏CETP的情况下，HDLs变成了无法清除的大颗粒。(有关RCT和HDLs的综述，见Fielding & Fielding，1995，J.Lipid Res.36211-228；Barrans et al.，1996，Biochem.Biophys.Acta.130073-85；Hirano et al.，1997，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.17(6)1053-1059)。
2.3.血脂蛋白异常目前的治疗方法目前，有大量治疗方法可以用于降低血清胆固醇及甘油三脂(见，例如，上述Brown & Goldstein)。但是，每种方法在治疗效果、副作用及确诊患者群体方面都存在着其固有的缺陷。
胆汁酸结合树脂是能阻断胆汁酸从肠道向肝再循环的一类药物；例如，胆苯烯胺(Questran Light，BristolMyers Squibb)和盐酸降胆宁(Colestid，The Upjohn Company)。当口服时，这些阳性电荷树脂与肠道中带阴性电荷的胆汁酸结合。由于树脂不能被肠道吸收，它们就携带着胆汁酸被排泄出去。但是，使用这类树脂最多只能减低约20％的血清胆固醇水平，并且伴随有胃肠道副作用，包括便秘及某些维生素缺乏。此外，由于树脂会结合药物，所以必须在摄取该树脂前至少1小时，或过后4～6小时才可服用其他的口服药物；因此，使心脏病患者的治疗方案复杂化。
抑制素是通过抑制HMGCoA还原酶阻断胆固醇合成的降胆固醇药物，HMGCoA还原酶是参与胆固醇合成途径的关键酶。上述抑制素，例如，洛伐他汀(Mevacor，Merck &Co.，Inc.)和帕伐他丁(Pravachol，Bristol-Myers Sguibb Co.)有时与胆汁酸结合树脂联合用药。上述抑制素主要降低血清胆固醇和LDL-血清水平，减缓冠状动脉粥样硬化的病程。LDL降低效应的机制包括降低VLDL浓度和诱导LDL-受体的细胞表达，导致LDLs生成的减少和/或代谢的增加。副作用，包括与服用这些药相关的肝及肾功能异常(Physicians DeskReference，Medical Economics Co.，Inc.，Montvale，N.J.，1997)。最近，FDA已批准将埃托伐丁(atorvastatin)(Parke-Davis开发的一种HMGCoA还原酶抑制剂)(Warner Lambert)投放市场用于治疗罕见但危急的家族性高胆甾醇血症病例(1995，Scrip20(19)10)。
烟酸是一种用作饮食补充及抗高血脂药的水溶性维生素B-复合物。烟酸可以减少VLDL的生成，有效降低LDL。某些情况下，它和胆汁酸结合树脂联用。足量使用烟酸可以增加HDL，但是如此高剂量使用带来的副作用限制了它的应用。
纤维是用于治疗各种高脂质血症(即血清甘油三脂升高)，也可以是与血胆脂醇过多有关。纤维可以减少VLDL级分并温和地增加HDL--但是这些药物对血清胆固醇的作用变化不定。在美国，纤维已被批准用作抗血脂药，但是还未被批准用作血胆脂醇过多药物。例如，安妥明(Atromid-S，Wyeth-Ayerst Laboratories)是一种能够通过减少VLDL级分减低血清甘油三脂的抗血脂药。尽管在特定患者亚群中血清胆固醇能够降低，而且对该药的生化反应各不相同，但是不总是能预见哪位患者将获得最好结果。还未表明Atromid-S能有效预防冠心病。化学或药学上相关的药物，吉非贝齐(Lopid，Parke-Davis)是一种脂类调节剂，能温和地减少血清甘油三脂和VLDL胆固醇，并能温和地增加HDL胆固醇--HDL2和HDL3亚级分以及ApoA-1和A-11二者(即，AI/AII-HDL级分)。但是，脂类反应是异源性的，尤其是在不同患者群之间。此外，虽然发现在年龄为40-55岁且无冠心病病史或症状的男性患者中能预防冠心病，但是还不清楚这些发现能在多大程度外推到其他患者群(例如，女性，年龄较大或较小的男性)。实际上，在已经患有冠心病的患者上未发现任何疗效。纤维的使用伴随着严重的副作用，包括毒性，例如恶性肿瘤(特别是胃肠癌)、胆囊疾病以及非-冠心病死亡率的增加。未指明这些药物能用于治疗只有高LDL或低HDL为唯一脂类异常的患者(Physician’sDesk Reference，1997，Medical Economics Co.，Inc.Montvale，N.J.)。
也可以将口服雌性激素替代疗法用于绝经后女性所患的良性血胆脂醇过多症。但是，增加HDL会伴随着甘油三脂的升高。当然，雌性激素治疗限于特定患者群(绝经后女性)并与伴随着严重的副作用，包括诱发恶性肿瘤、胆囊疾病、血栓栓塞性疾病、肝细胞性腺瘤、高血压、葡萄糖不耐受性、以及血钙过多。
因此，需要发展能有效降低血清胆固醇、增高HDL血清水平的更安全的药物，预防冠心病、以及/或者治疗已有疾病，尤其是动脉粥样硬化。
2.4.以ApoA-I作靶目前，尚无一种降胆固醇药物能安全地升高HDL水平并刺激RCT--最可能控制胆固醇转运途径，调节胆固醇以及VLDL群的饮食摄入、再循环、合成。
希望发现能刺激胆固醇排出和去除的药物，RCT中存在着几个潜在目标--例如，LCAT、HDL及其各种成分(ApoA-I、ApoA-II及磷脂)、PLTP和CETP--但不知哪个目标在实现预期脂蛋白库和保护效应方面最有效。RCT途径中任一单个成分的混乱最终都会影响循环系统中脂蛋白群体的组成以及RCT的效率。
以体内获得结果为基础的几套证据表明，HDL及其主要蛋白成分ApoA-I能预防动脉粥样硬化斑，以及潜在地退化病变--使这些有吸引力的目标用于治疗干预。首先，男性的血清ApoA-I(HDL)浓度与动脉粥样化形成之间存在着负相关(Gordon & Rifkind，1989，N.Eng.J.Med.321131.1-1316；Gordon et al.，1989，Circulation 798-15)。实际上，已发现特定HDL亚群与人动脉粥样化发病率的减小有关(Miller，1987，AlDer.Heart 113589-597；Cheung et al.，1991，Lipid Res.32383-394)；Fruchart & Ailhaud，1992，Clin.Chem.3879)。
其次，动物实验证明了ApoA-I(HDL)的保护作用。用ApoA-I或HDL治疗饲喂胆固醇的兔减少了饲喂胆固醇兔中病变(脂肪条纹)的发生和进行。(Koizumi et al.，J.～86，J.Lipid Res.2～J.405-J.415；Badimon et al.，1989，Lab.Invest.60455-461；Badimon et al.，1990，J.Clin.Invest.851234-1241)。但是，治疗效率却因HDL的来源而不同(Beitz et al.，1992-，前列腺素，白三烯和必须脂肪酸47.149 152 Mezdour et al.，1995，Atherosclerosis 113237-246)。
第三，从使用转基因动物的实验中获得了有关ApoA-I作用的直接证据。遗传学上，转移到小鼠中的人ApoA-I基因的表达能提前保证饮食诱发的动脉粥样硬化不生成大动脉病变(Rubin et al.，1991，Nature 353265-267)。另外还发现ApoA-I转基因能抑制ApoE缺陷小鼠及Apo(a)转基因小鼠发生动脉粥样硬化(Paszty et al.，1994，J.Clin.Invest.94899-903；Plump et al.，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 919607-9611；Liu et al.，1994，J.Lipid Res.352263-2266)。在表达人ApoA-I的转基因兔(Duverger，1996，Circulation 94713717；Duverger et al.，1996，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.161424-1429)，和转基因大鼠中也观察了类似的结果，在转基因大鼠中人ApoA-I水平的升高防止了动脉粥样硬化形成并抑制球囊血管成形术后继发的再狭窄(Burkeyet al.，199.2，Circulation，Supplement I，86I-472，AbstractNo.1876；Burkey et al.，1995，J.Lipid Res.361463-1473)。
在RCT中，AI-HDL可能比AI/AII-HDL级分更有效。人ApoA-I或Apo-I以及ApoA-II(AI/AII)转基因小鼠的实验表明，HDL的蛋白组成会显著地影响它的作用--AI-HDL比AI/AII-HDL具有更强的抗-致动脉粥样硬化的性能(Schultz et al.，1993，Nature 365762-764)。用表达人LCAT基因的转基因小鼠进行的平行实验表明温和地增强LCAT活性能明显地改变脂蛋白胆固醇水平，而且LCAT对于含ApoA-I的HDL具有明显的偏嗜性(Francone et al.，1995，J.Clinic.Invest.961440-1448；Berard et al.，1997，NatureMedicine 3(7)744-749)。这些结果证实了ApoA-I在活化LCAT和刺激RCT中的作用，同时另外实验表明一种更加复杂假设HDL中能调节细胞胆固醇排出的主要成分是磷脂(Fournier et al.，1996，J.Lipid Res.371704-1711)。
鉴于HDL，即ApoA-I及其相关磷脂在预防动脉粥样硬化疾病方面的潜在作用，使用重组制备的ApoA-I的人临床试验被UCB比利时(Pharmaprojects，Oct.27，1995；IMS R&D Focus，June 30，1997；Drug Status Update，1997，Atherosclerosis 2(6)261-265)；另见M.Eriksson at Congress，″The Role of HDL in DiseasePrevention，″Nov.7-9，1996，Fort Worth；Lacko & Miller，1997，J.Lip.Res.381267-1273；and WO94/13819)开始、中断并且明确地再次开始，以及Bio-Tech(Pharmaprojects，April 7，1989)开始并中断。另外尝试了用ApoA-I治疗脓毒性休克的试验(Opal，″Reconstituted HDL as a Treatment Strategy for Sepsis，″IBC’s7th International Conference on Sepsis，April 28-30，1997，Washington，D.C.；Gouni et al.，1993，J.Lipid Res.94139-146；Levine，WO96/04916)。但是，存在着与ApoA-I的制备和使用有关的许多缺陷，这就使得它无法成为理想药物，例如，ApoA-I是一种制备困难并昂贵的大蛋白；关于存储稳定性、活性产物的运输和体内半衰期方面，必须克服明显的制备及重现性问题。
鉴于这些缺陷，已经尝试制备模拟ApoA-I的肽。由于ApoA-I的关键活性与该蛋白中独特的次级结构特征的多个重复单元-一种A类两亲性α-螺旋有关(Segrest，1974，FEBS Lett.38247-253)，所以设计模拟ApoA-I活性肽的大部分努力都集中在设计能形成A类两亲性α-螺旋的肽上。
A类两亲性α-螺旋具有下述独特的特性正电荷的氨基酸残基成簇于疏水性-亲水性界面，负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央。而且，A类α-螺旋肽具有一个小于180度的疏水角(Segrest etal.，1990，PROTEINSStructure，Function and Genetics 8103-117)。设计ApoA-I模拟物的初始从头策略不以天然生成载脂蛋白的一级序列为基础，而是在将这些独特的A类螺旋特性以及ApoA-I结构域一些特性引入到肽类似物序列中的基础上进行设计的(参见，例如，Davidson et al.，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.USA9313605-13610；Rogers et al.，1997，Biochemistry 36288-300；Lins et al.，1993，Biochim.Biophys.Actabiomembranes 1151137-142；Ji and Jonas，1995，J.Biol.Chem.27011290-11297；Collet et al.，1997，Journal of LipidResearch，38634-644；Sparrow and Gotto，1980，Ann.N.Y.Acad.Sci.348187-211；Sparrow and Got to，1982，CRC Crit.Rev.Biochem.1387-107；Sorci-Thomas et al.，1993，J.Biol.Chem.26821403-21409；Wang et al.，1996，Biochim.Biophys.Acta174-184；Minnich et al.，1992，J.Biol.Chem.26716553-16560；Holvoet et al.，1995，Biochemistry 3413334-13342；SorciThomas et al.，1997，J.Biol.Chem.272(11)7278-7284；and Frank et al.，1997，Biochemistry 361798-1806)。
在一项实验中，Fukushima等人合成了一段22残基肽，该肽完全由有规律分布的Glu、Lys和Leu残基组成从而形成具有均等亲水和疏水面的两亲性α-螺旋(″ELK peptide″)(Fukushima et al.，1979，J.Amer.Chem.Soc.10l(13)3703-3704；Fukushima et al.，1980，J.Biol.Chem.25510651-10657)。ELK肽与ApoA-I第198～219位残基节段见具有41％的序列同源性。通过定量超滤、凝胶渗透层析以及圆二色性研究，发现ELK肽能有效地与磷脂结合，并模拟了ApoA-I的一些理化特性(Kaiser et al.，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 801137-1140；Kaiser et al.，1984，Science 223249-255；Fukushima et al.，1980，上文.；Nakagawa et al.，1985，J.Am.Chem.Soc.1077087-7092)。Yokoyama等人从这类研究中推断出LCAT活化的关键因素仅是存在大量足够的两亲性结构(Yokoyama et al.，1980，J.Biol.Chem.255(15)7333-7339)。后来发现这种22残基肽的二聚体比其单体更精确地模拟了ApoA-I；根据这一结果，可以设想上述代表ApoA-I中最小功能结构域的44-残基被螺旋截断物(Gly或Pro)居中隔开。(Nakagawa et al.，1985，上述)。
另一项实验涉及模拟称为“LAP肽”的两亲性肽(Pownall et al.，1980，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 77(6)3154-3158；Sparrowetal.，1981，肽合成-结构-功能，Roch and Gross，Eds.，PierceChem.Co.，Rockford，IL，253-256)。在与原始载脂蛋白片段结合实验的基础上，设计了几种肽，定名为LAP-16，LAP-20和LAP-24(分别含16、20和24个氨基酸残基)。这些模拟两亲性肽与载脂蛋白间无同源性，而且被设计成具有以类似于载脂蛋白相关A类两亲性螺旋结构域的方式组成的亲水表面(Segrest et al.，1992，J.Lipid Res.33141-166)。从这些研究中，作者推断出20个残基的最小长度是赋予模拟两亲性肽脂类结合特性所必需的。
对在序列不同位置含有脯氨酸残基的LAP20突变体的研究表明，在脂类结合与LCAT活化间直接相关，但是肽的螺旋潜力单独不能导致LCAT活化(Ponsin et al.，1986 J.Biol.Chem.261(20)9202-9205)。而且这种紧靠该肽中点的螺旋截断物(Pro)能够减小其与磷脂表面的亲和力及其活化LCAT的能力。表明某些LAP肽能结合磷脂(Sparrow et al.，上述)，关于脂类存在的条件下LAP肽以多大程度螺旋还存在着争论(Buchko et al.，1996，J.Biol.Chem.271(6)3039-3045；Zhong et al.，1994，Peptide Research 7(2)99-106)。
Segrest等人已经合成了由18～24个氨基酸残基组成的肽，该肽与上述ApoA-I螺旋间无序列同源性(Kannelis et al.，1980，J.Biol.Chem.255(3)11464-11472；Segrest et al.，1983，J.Biol.Chem.2582290-2295)。在疏水矩(Eisenberg et al.，1982，Nature299371-374)和电荷分布(Segrest et al.，1990，Proteins 8103-117；U.S.Patent No.4,643,988)方面，这些序列特异性地被设计成模拟A类可交换载脂蛋白的两亲性螺旋结构域。一种18-残基肽，即“18A”肽被设计成为一种模拟A类α-螺旋(Segrest et al.，1990，上述)。对这些肽和其他具有翻转电荷分布的肽，象“18R”肽的研究，一致表明电荷分布对于活性是关键的；翻转电荷分布的肽表现出相对18A A类类似物减小的脂类亲和力以及存在脂类条件下较低的螺旋含量(Kanellis et al.，1980，J.Biol.Chem.25511464-11472；Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.26010248-10255；Chung et al.，1985，J.Biol.Chem.26010256-10262；Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.2629389-9396；Anantharamaiah et al.，1991，Adv.Exp.Med.Biol.285131-140)。
与已被认定有限成功的与载脂蛋白间无同源性的其他合成肽包括18A肽(Anantharamaiah et al.，1986，蛋白质生物体液的3463-66)、GALA和EALA肽(Subbarao et al.，1988，蛋白质结构，功能和遗传学3187-198)和ID肽类(Labeur et al.，1997，动脉粥样硬化，血栓和血管生物学17580-588)以及18AM4肽(Brasseuret al.，1993，7).Biochim.Biophys.Acta 11701-7)的二聚体及三聚体。
另外，已经构建出了一种以人ApoA-I序列为基础的含22个氨基酸残基的“共有”肽(Anantharamaiah et al.，1990，动脉粥样硬化10(1)95-105；Venkatachalapathi et al.，1991，Mol.Conformati on and Biol.Interactions，Indian Acad S.B.585-596)。通过鉴定假定的人ApoA-I螺旋每个位置上的优势残基，构建出该序列。与上述肽一样，这种肽形成的螺旋也是正电荷氨基酸残基成簇于疏水性-亲水性界面，负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央，并且疏水角小于180度。这种肽的二聚体在活化LCAT方面有一定效果，但单体几乎未显示出任何脂类结合活性(Venkatachalapathi et al.，1991，上述)。
首先，对上述肽研究的基础上，已经显示出了设计模拟ApoA-I功能的肽的一套“规则”。重要的是，明白了正电荷残基成簇于疏水性-亲水性界面而且负电荷氨基酸残基成簇于亲水表面的中央，具有这样特征的两亲性α-螺旋是脂类亲和和LCAT活化所必需的(Venkatachalapathi et al.，1991，上述)。另外，Anantharamaiah等人还指出上述22-残基共有肽中第13位上带负电荷的Glu位于α-螺旋疏水面中，它在LCAT活化中起着重要作用(Ananthararnaiah etal.，1991，上述)。此外，Brasseur已经提出小于180度的疏水角(pho角)是实现脂类-载脂蛋白复合物最佳稳定性所必需的，而且也使得肽围绕脂双层边缘肽的球形颗粒能够得以形成(Brasseur，1991，J.Biol.Chem.66(24)16120-16127)。Rosseneu等认为小于180度的疏水角是LCAT活化所需的(WO93/25581)。
但是，尽管有了这些“规则”，但是迄今为止还没有人已经设计或制备出了与ApoA-I一样活性的肽--通过本发明描述的LCAT活化实验测量出最佳活性不及ApoA-I活性的40％。文献中描述的肽中还没有一个能够用作药物。
鉴于上述原因，需要发展一种模拟ApoA-I活性并且制备上相对简便和经济的稳定的ApoA-I激动剂。但是，用于设计有效ApoA-I模拟物的“规则”仍未阐明，用于设计具有ApoA-I功能的有机分子的原理还不清楚。
3.发明概述本发明涉及能够形成模拟ApoA-I活性的两亲性α-螺旋的ApoA-I激动剂，该类似物的特定活性，即活性单位(LCAT活性/质量单位)近似或超过天然分子。具体地说，本发明的ApoA-I激动剂是具有下述特性的肽或肽类似物形成两亲性螺旋(脂类存在)，结合脂类，形成前-β-类或HDL-类复合物，活化LCAT，增加HDL级分的血清水平，以及促进胆固醇的排出。
本发明部分以申请人对模拟ApoA-I功能的肽的设计和发现为基础。本发明肽的设计以从ApoA-I的螺旋重复单元衍生而来22氨基酸共有序列的假想螺旋结构及两亲性特性为基础。出人意料的是，本发明肽的特定活性优于现有文献中描述的ApoA-I衍生肽。实际上，本发明的一些实施方案接近原始ApoA-I活性的100％，而且本发明中描述的类似物超过了ApoA-I的特定活性。
本发明的一个方面部分上也是以申请人的下述发现为基础的Segrest的共有22-聚体的第14～17位氨基酸残基可以缺失而不丧失LCAT活性。一些情况下，上述氨基酸残基的缺失可以增强LCAT活性。本发明另一方面，还可以缺失所述共有序列的其他残基并增强活性。另外，一些实施方案中，缺失可以与氨基酸残基的取代结合使用。在一些优选实施方案中，将从Segrest的共有22-聚体肽中缺失4个残基与将第5、9和13位上的残基改变成疏水的亮氨酸结合使用。
通过描述具体两亲性肽的结构、制备和使用的操作实施例来说明本发明，所述两亲性肽能够形成螺旋(有脂类存在)，结合脂类，形成复合物，增强LCAT活性。在例举的实施方案的基础上，本申请人发明了能够用于设计出仍属于本发明范围之内的改进或突变形式的一套“规则”。
本发明还涉及含这类ApoA-I激动剂作为活性成分的药用制剂，以及制备这类制剂的方法和它们在治疗脂蛋白血异常相关疾病(例如，心血管疾病、动脉粥样硬、代谢综合征(metabolic syndrome)、再狭窄、或内毒素性血症(例如脓毒性休克)方面的用途。
3.1缩写本发明使用遗传学上编码L-异构体氨基酸的常规缩写，并于下面列出
遗传学上编码氨基酸D-异构体的缩写用单字母符号的对应小写形式表示。例如，“R”代表L-精氨酸，“r”代表D-精氨酸。
3.2.定义本发明使用的下列术语具有下述含义″烷基″代表饱和分枝、直链或环状烃基。典型烷基包括，但不限于甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、异丁基、叔丁基、戊基、异戊基、己基等。优选实施方案中，烷基基团为(C1～C6)烷基。
“烯基”是指具有至少1个碳-碳双键的不饱和分枝、直链或环状烃基。该基团的双键可以是顺式或反式构象。典型的烯基基团包括，但不限于乙烯基、丙烯基、异丙烯基、丁烯基、异丁烯基、叔丁烯基、戊烯基、己烯基等。优选实施方案中，烯基基团为(C1～C6)烯基。
“炔基”是指具有至少1个碳-碳三键的不饱和分枝、直链或环状烃基。典型的炔基基团包括，但不限于乙炔基、丙炔基、异丙炔基、丁炔基、异丁炔基、戊炔基、己炔基等。优选实施方案中，炔基基团为(C1～C6)炔基。
“芳基”是指具有1个π电子系统的不饱和环状烃基。典型的芳基基团包括，但不限于戊-2，4-二烯、苯基、萘基、蒽基、薁基、基、蔻基、荧蒽基、indacenyl、idenyl、卵烯基、苝基、phenalenyl、菲基、苉pleiadenyl、芘基、皮蒽基、玉红省基等。优选实施方案中，芳基基团为(C5～C20)芳基，(C5～C10)芳基为特别优选。
“烷芳基”是指其中结合到末端碳上一个氢原子被一个芳基取代的直链烷基、烯基、或炔基，。典型的烷芳基基团包括，但不限于苄基，苯亚甲基，次苄基，benzenobenzyl，naphthenobenzyl等。优选实施方案中，烷芳基基团为(C6～C26)烷芳基，即，烷芳基中的烷基、烯基或炔基为(C1～C6)，芳基为(C5～C20)。特别优选的实施方案中，所述烷芳基基团为(C6～C13)烷芳基，即，烷芳基中的烷基、烯基或炔基为(C1～C3)，芳基为(C5～C10)。
“杂芳基”是指其中的1个多个碳原子被N，P，O，S，As，Se，Si，Te，等所取代的一种芳基。例如典型的杂芳基包括，但不限于acridarsine，吖啶，arsanthridine，arsindole，arsindoline，咔唑，β-咔啉，色原烯，肉啉，呋喃，咪唑，吲唑，吲哚，indolizine，isoarsindole，isoarsinoline，异苯并呋喃，异色原烯，异吲哚，isophosphoindole，isophosPhinoline，异喹啉，异噻唑，异噁唑呤，naphthyridine，萘嵌间二氮杂苯，菲啶，菲咯啉，吩嗪，phosphoindole，phosphinoline，酞嗪，蝶啶，嘌呤，吡喃，吡嗪，吡唑，哒嗪，嘧啶，嘧啶，吡咯，pyrrolizine，喹唑啉，喹啉，喹嗪，对二氮萘，selenophene，tellurophene，噻吩以及氧杂蒽。优选实施方案中，所述杂芳基为5～20元杂芳基，5～10元芳基为特别优选。
“烷杂芳基”是指其中结合到末端碳上一个氢原子被一个杂芳基取代的直链烷基、烯基、或炔基。优选实施方案中，烷杂芳基基团为6～26元烷杂芳基，即，烷杂芳基中的烷基、烯基或炔基为(C1～C6)，杂芳基为5～20元的杂芳基。特别优选的实施方案中，所述烷杂芳基基团为6～13元的烷杂芳基，即，其中的杂芳基为5～10元的杂芳基。
“取代后的烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基”是指其中1个或多个氢原子被另一个取代基团代替。优选的取代基团包括-OR、-SR、-NRR、-NO2、-CN、卤素、-C(O)OR以及-C(O)NR，其中每个R都可以单独为氢原子、烷基、烯基、炔基、芳基、烷芳基、杂芳基或烷杂芳基。
4.附图简述

图1A和1B是一个理想两亲性α-螺旋的Schiffer-Edmundson螺旋轮简图，空心圆代表亲水氨基酸残基，阴影圆代表疏水氨基酸残基。
图1B是图1A的理想两亲性螺旋的螺旋网状图。
图1C是图1A的理想两亲性螺旋的螺旋柱状图。
图2A是结构(I)所示核心肽的Schiffer-Edmundson螺旋轮简图，该图用来说明螺旋的两亲性(空心圆代表亲水氨基酸残基，阴影圆代表疏水氨基酸残基，部分阴影圆代表两亲性氨基酸残基)。
图2B是结构(I)所示核心肽的螺旋网状图，该图用来显示螺旋的疏水面。
图2C是结构(I)所示核心肽的螺旋网状图，该图用来显示螺旋的亲水面。
图3A为螺旋网状图，用来显示Segrest 18A肽的亲水面(DWLKAFYDKVAEKLKEAF；SEQ ID NO244)。
图3B为螺旋网状图，用来显示典型核心肽210的亲水面(PVLDLFRELLEELKQKLK；SEQ ID NO210)。
图3C为螺旋网状图，用来显示Segrest共有22聚体肽的亲水面(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK；SEQ ID NO75)。
图4A为螺旋网状图，用来显示Segrest 18A肽的疏水面(SEQ IDNO244)。
图4B为螺旋网状图，用来显示典型核心肽210的疏水面(SEQ IDNO210)。
图4C为螺旋网状图，用来显示Segrest共有22聚体肽的疏水面(SEQ ID NO75)。
图5A为Segrest 18A肽(SEQ ID NO244)的Schiffer-Edmundson螺旋轮简图。
图5B为典型核心肽210 SEQ ID NO210)Schiffer-Edmundson螺旋轮简图。
图6A显示的是本发明的三级分枝网状结构。
图6B显示的是本发明的四级分枝网状结构。
图6C显示的是本发明的混合级分枝网状结构。
图6D显示的是本发明的典型“Lys-树”分枝网状结构。
图7A显示了对于肽210(SEQ ID NO210)和Segrest共有22聚体肽(SEQ ID NO75)而言，实际观察到的Hα化学位移与列表显示的无规卷曲Hα化学位移之间的差异。
图7B显示了对于肽210(SEQ ID NO210)和Segrest共有22聚体肽(SEQ ID NO75)而言，实际观察到的酰胺质子化学位移与列表显示的无规卷曲酰胺质子化学位移之间的差异。
图8A的卡通描绘出了用本发明ApoA-I激动剂可以得到的各种聚集形态以及肽-脂类复合物。左图描绘的是几个肽螺旋相互作用得到肽的多聚化过程，以及在特定的肽浓度、pH和离子强度下引起寡聚体的形成。中图肽(以这些聚集形态中的任一存在)与脂类实体(例如SUVs)之间的相互作用能够引起脂类重组。右图通过改变脂类∶肽之间的摩尔比，可以得到不同类型的肽-脂类复合物，从低脂类-肽摩尔比时的脂类-肽共胶束，到随着脂类∶肽之间摩尔比的升高而形成的圆盘状颗粒，直到最后形成大的多层复合物。
图8B显示的是特定脂类∶肽比例范围内形成的圆盘状肽-脂类复合物的通常接受模式。沿圆盘周缘的每个肽都与其最临近的两个肽紧密接触。
5.发明详述本发明的ApoA-I激动剂模拟ApoA-I的功能和活性。它们能够形成两亲性螺旋(脂类存在)，结合脂类，形成前-β-类或HDL-类复合物，活化LCAT，增加HDL级分的血清水平，以及促进胆固醇的排出。所述肽的生物功能与它们的螺旋结构，或者脂类存在时向螺旋结构的转化有关。
本发明的可以采用稳定大量或单位剂量形式来制备，例如，可以在体内使用前重组合或重配制的冻干产物。本发明包括药用制剂以及这类制剂在治疗高脂质血症、血胆脂醇过多、冠心病、动脉粥样硬化，以及能引起脓毒性休克的内毒素性血症等其他疾病。
用操作实施例对本发明加以说明，这些实施例表明本发明ApoA-I激动剂能极其有效地活化LCAT从而促进RCT。本发明的ApoA-I激动剂在动物模型体内使用能导致血清HDL浓度的增加。
下面分部分对本发明做更为详细的阐述，具体的各部分为ApoA-I肽激动剂的组成和结构；结构和功能特征；大量或单位剂量制剂的制备方法；以及使用方法。
5.1.肽的结构和功能通常，本发明的ApoA-I激动剂是指脂类存在时能形成两亲性α螺旋以及模拟ApoA-I活性的肽或其类似物。该激动剂的主要特征为由15～22氨基酸残基，优选由18个氨基酸残基组成的“核心”肽，或者其类似物，该类似物肽链中至少1个酰胺键被另一种酰胺、酰胺同电子排列体或酰胺模拟物取代。
部分上，本发明的ApoA-I激动剂以本申请人的下述意外发现为基础缺失和/或取代22聚体共有序列一级序列中的特定氨基酸残基能够生产出活性近似，一些实施方案甚至能超过原始ApoA-I活性的合成肽，上述22聚体共有序列的描述见Venkatachalapathi et al.，1991，Mol.Conformation and Biol.Interactions，Indian Acad.Sci.B585-596(PVLDEFREKLNEELEALKQKLK；SEQ ID NO75；下称″Segrest共有22聚体″or″共有22聚体″)，它是产生活性的关键部分。本发明一方面，缺失了共有22聚体中的4个氨基酸残基，例如第14～17位残基，形成了能活化LCAT的18聚体。在另一个实施方案中，缺失了另外4个残基。一些实施方案中，用Leu等疏水残基取代产生活性的关键的3个带电氨基酸残基(Glu-5，Lys-9 andGlu-13)。
不受任一具体理论束缚，认为本发明ApoA-I激动剂更精确地模拟了原始ApoA-I的两亲性螺旋区域的结构和功能特性，该区域在影响脂类结合、胆固醇排出和LCAT活化方面比现有技术中描述的ApoA-I模拟肽所形成的α螺旋更为关键，因此导致所述肽表现出比其他那些肽明显高的类ApoA-I活性。实际上，本发明ApoA-I激动剂中的大部分都接近，某些实施方案甚至超过了ApoA-I的活性，本发明描述的LCAT活性实验测定结果表明，迄今为止，现有技术中描述的最佳的肽ApoA-I激动剂模拟物--肽18AM4(EWLEAFYKKVLEKLKELF；SEQ IDNO246)(Corinjn et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta 11708-16；Labeur et al.，Oct.1994，ArteriosclerosisAbstract Nos.186 and 187)和N-乙酰化，C-酰胺化肽18AM4(SEQ ID NO239)(Brasseur，1993，Biochim.Biophys.Acta 11701-7)--表现出的活性比ApoA-I的活性分别低4％和11％。
本发明的一个说明性实施方案中，组成本发明ApoA-I激动剂的核心肽(或其类似物)具有下述结构通式(I)X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18其中X1是Pro(P)，Ala(A)，Gly(G)，Asn(N)，Gln(Q)或D-Pro(P)；X2是脂肪族氨基酸；X3是Leu(L)；X4是酸性氨基酸；X5是Leu(L)或Phe(F)；X6是Leu(L)或Phe(F)；X7是一个碱性氨基酸；X8是一个酸性氨基酸；X9是Leu(L)或Trp(W)；X10是Leu(L)或Trp(W)；X11是一个酸性氨基酸或Asn(N)；X12是一个酸性氨基酸；X13是Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；X14是一个碱性氨基酸或Leu(L)；X15是Gln(Q)或Asn(N)；X16是一个碱性氨基酸；X17是Leu(L)，以及；X18是一个碱性氨基酸。
结构(I)的核心肽部分按照氨基酸的指定类别来定义。下面与结构(I)的突变或改进实施方案结合，提供各种指定类别的定义。
结构(I)的核心肽中，氨基酸残基Xn之间的符号“-”通常代表骨架的基本连接功能。因此，符号“-”通常代表1个肽键或酰胺键(-C(Q)NH-)。但是，应该理解的是本发明提供的肽类似物中的一个或多个酰胺键可任选被除酰胺之外的其他一种，优选被一种取代酰胺或酰胺同电子排列体取代。因此，尽管结构(I)中的各种Xn残基通常用氨基酸来描述，本发明的优选实施方案用肽来举例说明，但是本领域技术人员应该认识到在具有非-酰胺键的实施方案中，本发明使用的术语“氨基酸”或“残基”是指其他带有结构与氨基酸侧链近似的基团的双功能部分。
通常，取代酰胺包括，但不限于通式为-C(O)NR-，其中R为(C1-C6)烷基、取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、取代(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、取代(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、取代(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基、取代5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基以及取代6～26元烷杂芳基。
酰胺的同电子排列体通常包括，但不限于-CH2NH-、-CH2S-、-CH2CH2-、-CH＝CH-(顺式及反式)、-C(O)CH2-，-CH(OH)CH2-以及-CH～SO-。具有这类非酰胺键的化合物以及制备这类化合物的方法为本领域技术人员所熟知(见，例如Spatola，March 1983，Vega Data Vol.1，Issue 3；Spatola，1983，氨基酸、肽和蛋白质的化学和生物化学“肽骨架修饰”。Weinstein，ed.，Marcel Dekker，New York，p.267(综述)；Morley，1980，Trends Pharm.Sci.1463-468；Hudsonet al.，1979，Int.J.Prot.Res.14177-185(-CH2NH-，-CH2CH2-)；Spatola et al.，1986，Life Sci.381243-1249(-CH2-S)；Hann，1982，J.Chem.Soc.Perkin Trans.I.1307-314(-CH＝CH-，顺式和反式)；Almquist et al.，1980，J.Med.Chem.231392-1398(-COCH2-)；Jennings-White et al.，Tetrahedron.Lett.232533(-COCH2-)；欧洲专利申请EP 45665(1982)CA 9739405(-CH(OH)CH2-)；Holladay et al.，1983，Tetrahedron Lett.244401-4404(-C(OH)CH～-)；and Hruby，1982，Life Sci.31189-199(-CH～-S-)。
此外，可以用不明显破坏所述肽结构和活性的肽模拟(peptidomimetic)或酰胺模拟部分取代1个或多个酰胺键。合适的酰胺模拟部分的描述，例如，见Olson et al.，1993，J.Med.Chem.363039-3049。
结构(I)核心肽的关键特征为它们能够在存在脂类的情况下形成一个两亲性α-螺旋。所谓的两亲性就是指所述α-螺旋具有沿其长轴分布的相对的亲水面和疏水面，即，该螺旋结构的一个面主要是亲水侧链，而相对的面主要为疏水侧链。图1A和1B是一个典型的理想两亲性α-螺旋的相对亲水和疏水面。图1A是Schiffer-Edmundson螺旋轮简图(Schiffer and Edmundson，1967，Biophys.J.7121-135)。在该轮中，螺旋的长轴垂直于页面。从N-末端开始，连续的氨基酸残基(用圆圈表示)以100度间隔沿圆的周围呈放射状排列。因此，氨基酸残基n+1与残基n之间的夹角为100度，残基n+2与残基n+1之间的夹角为100度，依此类推。100度的分布使得每圈有3.6个氨基酸残基。图1A中，所述螺旋的相对的亲水面和疏水面清晰可见；亲水氨基酸用空心圆表示，而疏水氨基酸残基用阴影圆表示。
图1B是图1A的理想两亲性螺旋的螺旋网状图。(Lim，1978，FEBSLett.8910-14)。典型螺旋网状图中，α螺旋用一个已经沿其亲水面中线切开并展平的圆柱体来表示。因此，通过该螺旋的疏水矩测定，所述疏水面的中心位于图的中央，导向以致高出页面的平面(Eisenberg等，1982，Nature 299371-374)。图1C描绘的是切开并展平前螺旋圆柱体的图解。通过沿不同平面切开圆柱体，可以观察到同一两亲性螺旋的不同视图，得到关于该螺旋特性的不同信息。
图2给出的是脂类存在情况下结构(I)核心肽形成的α螺旋的两亲性实质。图2A是Schiffer-Edmundson螺旋轮简图，图2B代表的是说明疏水面的螺旋网状简图，图2C代表的是说明亲水面的螺旋网状简图。在图2A、2B和2C中，亲水残基用空心圆表示，疏水残基用阴影圆表示，两亲性残基用部分阴影圆表示。下面将结合结构(I)的改进或突变形式进行更完全的讨论，可以用其他氨基酸残基取代特定氨基酸残基，从而使所述肽形成的螺旋的亲水和疏水面可以不完全分别由亲水和疏水氨基酸组成。因此，可以理解的是，当谈及本发明核心肽形成的两亲性α螺旋时，术语“亲水面”是指具有全部网状疏水特征的肽的表面。
不受任一具体理论束缚，可以认为结构(I)核心肽形成的两亲性螺旋的特定结构和/或物理特性对于活性是重要的。这些特性包括两亲性程度，完全疏水性、平均疏水性、疏水和亲水角度、疏水矩、平均疏水矩、以及α螺旋的净电荷。
图2A的螺旋轮状简图提供的是观察结构(I)核心肽两亲性实质的便利方式，通过计算螺旋的疏水矩可以方便地对两亲性程度(疏水性不对称程度)定量。用于计算特定肽序列μH的方法是为本领域技术人员所熟知，并在文献中有描述，例如，Eisenberg，1984，Ann.Rev.Biochem.53595-623。对于一种具体肽获得的真实μH取决于组成肽的氨基酸的总数。因此，直接比较不同长度肽的μH通常不能提供有用信息。
可以用平均疏水矩(<μH>)对不同长度肽的两亲性进行比较。μH除以螺旋中的残基数目(即，<μH>＝μH/N)可以得到平均疏水矩。通常，用Eisenberg(Eisenberg，1984，J.Mol.Biol.179125-142)的标准化共有疏水秤(scale)测定时，<μH>为0.55～0.65的核心肽被认为在本发明的范围之内，优选<μH>为0.58～0.62。
通过求出肽中每个氨基酸参加疏水性的代数和(即，贴原文第31页第17行的公式)，可以方便地计算出肽的完全或全部疏水性(Ho)。平均疏水性(<Ho>)为疏水性除以氨基酸残基的数目(即，<Ho>＝Ho/N)。通常，用Eisenberg(Eisenberg，1984，J.Mol.Biol.179125-142)的标准化共有疏水秤测定时，平均疏水性为-0.150～-0.070的核心肽被认为在本发明的范围之内，优选平均疏水性为-0.130～-0.050。
通过求出落于疏水角中疏水氨基酸残基疏水性的总和，可以得到两亲性螺旋疏水面的完全疏水性(HoPho)(即，贴原文第32页第1行的公式，其中Hi与上述定义相同，NH为疏水面中疏水氨基酸的总数)。疏水面的平均疏水性<HoPho>为HoPho/NH，其中NH的定义同上。通常，用Eisenberg(Eisenberg，1984，上述；Eisenberg et al.，1982，上述)的标准化共有疏水秤测定时，<HoPho>为0.90～1.20的核心肽被认为在本发明的范围之内，优选<HoPho>为0.950～1.10。
疏水角(pho角)通常定义为当肽以Schiffer-Edmundson螺旋轮显示形式排列时，最长的连续疏水氨基酸残基串形成的角度或弧度(即，轮上的邻接疏水残基数目乘以20°)。亲水角(phi角)为360°与pho角之间的差值(即，360°-pho角)。本领域技术人员应该认识到pho和phi角部分取决于肽上的氨基酸残基的数目。例如，参照图5A和5B，可以看出只有18个氨基酸适合沿Schiffer-Edmundson螺旋轮环绕一周。较少的氨基酸会在轮上留下缺口；更多的氨基酸则导致轮的特定位置2个以上的氨基酸残基占据。
当肽中含有多于18个氨基酸残基时，“连续”疏水氨基酸残基串意味着，被2个或多个氨基酸取代的沿轮分布的至少1个氨基酸残基是疏水氨基酸。
典型地，由18个或更少氨基酸组成的pho角为120°～160°的核心肽属于本发明的范围之内，优选pho角为130°～150°。典型地，含多于18个氨基酸的实施方案的pho角为160°～220°，优选180°～200°。
图3和4对结构(I)核心肽的特定结构和/或物理特性做了说明。图3B给出的是本发明典型核心肽，肽210的螺旋网状简图，显示了沿螺旋亲水面的电荷分布。图3B中，螺旋圆柱体被沿疏水面的中央切开并展平。取代Segrest共有22聚体中亲水残基的3个疏水Leu(L)残基(残基5、9和13)(图3C)用阴影来表示。从图3B中可以看出，正电荷氨基酸残基成簇于螺旋的最后一个C-末端圈(C-末端是指页面的顶端)。不受具体理论的束缚，可以认为这个C-末端的碱性氨基酸簇(残基14、16和18)通过电荷(NH3+)-螺旋偶极静电相互作用使稳定该螺旋。也可以认为稳定是通过赖氨酸侧链和螺旋核心之间的疏水作用而发生的(见，Groebke et al.，1996，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.1140.25-40.29；Esposito et al.，1997，Biopolymers4127-35)。
除正电荷的C-末端簇(残基14、16和18)外，负电荷分布在亲水面的其余部分，每圈上有至少1个负电荷(酸性)氨基酸残基，导致沿螺旋亲水面形成一连串负电荷。
图4B给出的是用来说明典型核心肽210(SEQ ID NO210)形成的两亲螺旋疏水面的螺旋网状简图。图4B中，螺旋圆柱体沿亲水面中央切开并展平。该核心肽的疏水面由每圈上的2个疏水残基组成，最后的C-末端圈除外，其中主要为碱性氨基酸。NMR实验表明类似的22聚体肽(PVLDLFRELLNELLEALKQKLK；SEQ ID NO4)的第3、6、9和10位氨基酸残基在该螺旋的N-末端附近形成了一个疏水簇。Phe-6位于该簇的中心，在稳定该疏水簇方面起重要作用。
不受具体理论的束缚，可以认为由残基3、6、9和10形成的疏水簇能够明显地影响脂类结合和LCAT活性。两亲性肽被认为是通过通过将它们疏水面对准脂类部分的烷基链来结合脂类的。因此，认为这种高度疏水簇导致了本发明核心肽所观察到的强的脂类亲和力。由于结合脂类是LCAT活化的先决条件，所以可以认为这种疏水簇对于LCAT的活化也是必不可少的。
常常可以发现，芳香族残基在将肽和蛋白质锚向脂类中发挥重要作用(De Kruijff，1990，Biosci.Rep.10127-130；O’Neil andDe Grado，1990，Science 250645-651；Blondelle et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta 1202331-336)。因此，可以进一步认为位于疏水簇中心的Phe-6也在将结构(I)核心肽锚向脂类中发挥重要作用。
本发明核心肽和脂类之间的相互作用导致形成肽-脂类复合物。如图8A中所示，得到的复合物的类型(共胶束(comicelles)、圆盘、囊泡或多层)取决于脂类∶肽摩尔比，通常在低脂类∶肽摩尔比时形成共胶束，并随着脂类∶肽摩尔比的增加形成圆盘状以及囊泡状或多层复合物。这种特性在两亲性肽(Epand，The Amphipathic Helix，1993)和ApoA-I(Jones，1992，Structure and Function ofApolipoproteins，Chapter 8，pp.21？250)中做了描述。脂类∶肽摩尔比还决定着该复合物的大小和组成(见，Section 5.3.1，上述)。
结构(I)核心肽形成的α螺旋的长轴具有完整曲线形状。在典型的两亲性螺旋中，已经发现亲水和疏水面的氢键的长度不同使得该螺旋疏水侧为凹形(Barlow and Thornton，1988，J.Mol.Biol.201601-619；Zhou et al.，1992，J.Am.Chem.Soc.331117411183；Gesell et al.，1997，J.Biomol.NMR 9127-135)。不受理论束缚，可以认为该螺旋疏水面的完整曲线在结合圆盘状复合物中起重要作用--曲线螺旋可以使得肽能沿圆盘颗粒边缘更好地吻合，从而增强了肽-圆盘复合物的稳定性。
在普遍接受的ApoA-I结构模型中，两亲性α螺旋包裹在圆盘状HDL的边缘(见图8B)。该模型中，该螺旋被设想为按它们疏水面对准脂类酰基侧链的方式排列的(Brasseur et al.，1990，Biochim.Biophys.Acta 1043245-252)。所述螺旋以反向平行的方式排列，螺旋的协同效应被认为对稳定圆盘状HDL复合物起作用(Brasseuret al.，上述)。现已提出对稳定HDL圆盘状复合物起作用的一个因素是，酸性和碱性残基间存在的离子作用导致在邻接的反向平行螺旋上的残基之间形成分子间盐桥或氢键。该模型中，肽并非已单独的完整形式存在，而是与至少2个其他相邻肽分子之间相互作用(图8B)。
通常可以接受的还有，分别位于螺旋i和i+3位上的酸性和碱性残基之间形成的分子内氢键或盐桥可以稳定螺旋结构(Marqusee etal.，1985，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 84(24)8898-8902)。位于第7位残基上的一个正电荷通过与一个酸性残基形成一个转角来发挥稳定螺旋的作用。
因此，结构(I)核心肽的另一个关键特性是当这些肽的疏水面对准同一方向，以反向平行方式排列时，它们彼此间形成分子间氢键的能力，例如这样一种情况，当肽结合到脂类上时，它们也能在螺旋的N-端或C-端形成分子间氢键或盐桥。可以认为当结构(I)核心肽以反向平行方式结合到脂类上时，它们紧密包裹以及离子间作用形成分子内和/或分子间盐桥和/或氢键的能力是本发明核心肽的一个重要特性。
脂类缺乏时核心肽也能形成良好的分子间肽-肽相互作用。本发明核心肽自身-联合部分起因于它们的高<μH>、<Ho>和疏水角(见，表1，上述)。自身联合现象取决于pH、肽浓度以及离子强度，能够形成几种联合状态，从单体到几个多聚体形式(图10A)。肽疏水核心的聚集有利于它们与脂类的结合。在肽聚集体的核心也发生肽-肽作用，并能同脂类-肽作用之间竞争。
除上述特性外，其他参数对于产生活性也是重要的，包括疏水残基的总数，带电残基的总数以及肽的净电荷。
下面表1中概括了结构(I)核心肽优选的物理和结构特性
表1优选的结构(I)Apo-I激动剂的物理特性
本发明核心肽形成的两亲性α螺旋的特性明显不同于A类两亲性α螺旋，特别不同于Segrest的18A和共有22聚体肽的A类α螺旋。具体的是，与18A肽(SEQ ID NO244)和共有22-聚体(SEQ ID NO75)相比，肽210(SEQ ID NO210)中的第9和13位残基(图4B中的阴影部分)是疏水Leu(L)残基。Segrest的18A和共有22聚体肽中的这两个带电残基被疏水Leu(L)残基取代导致该螺旋的两亲性、疏水性、pho角、以及其他特性发生显著变化。
下面的表2对肽210(SEQ ID NO210)与Segrest的18A肽(SEQ ID NO244)和共有22聚体肽(SEQ ID NO75)的物理和结构特性进行了比较
表2例举核心肽210(SEQ ID NO210)与Segrest的共有22聚体肽(SEQ ID NO75)和18A肽(SEQ ID NO244)之间特性的比较
特性的不同导致活性的明显差异。在本发明描述的实验中，与原始ApoA-I相比，Segrest的18A肽(SEQ ID NO244)和共有22聚体肽(SEQ ID NO75)只分别表现出5％和10％的LCAT活性，而同一实验中与原始ApoA-I相比，肽210(SEQ ID NO210)表现出46％的活性。同一实验中，肽210的N-末端乙酰化并且C-末端酰胺化形式的肽193(SEQ ID NO1-93)表现出96％的LCAT活性。
结构(I)核心肽中特定氨基酸残基可以被其他氨基酸残基取代，而不明显破坏，多数情况下甚至能增强肽的活性。因此，本发明还提供了结构(I)核心肽的改良或突变形式，其中该结构中最后1个限定的氨基酸残基被其他氨基酸残基取代。影响本发明核心肽的一个关键特征是，它们能够在存在脂类时形成α螺旋，表现出两亲性和其他上述特性，从本发明的优选实施例中可以看出，氨基酸取代是保守性的，即，取代氨基酸残基的物理和化学特性近似于被取代氨基酸残基。
为了测定保守的氨基酸取代，可以方便地把氨基酸分为两种主要类别--亲水和疏水--主要依据氨基酸侧链的理化特性。这两种主要类别可以进一步分为能更清楚限定氨基酸侧链特性的亚类。例如，亲水氨基酸可以进一步再分为酸性、碱性及极性氨基酸。疏水氨基酸可以进一步再分为非极性和芳香族氨基酸。限定结构(I)的氨基酸各种类别的定义如下“亲水氨基酸”是指根据Eisenberg et al.，1984，J.Mol.Biol.179125-142中标准化共有疏水秤测定结果疏水性小于零的氨基酸。遗传学编码的亲水氨基酸包括Thr(T)、Ser(S)、His(H)、Glu(E)、Asn(N)、Gln(Q)、Asp(D)、Lys(K)和Arg(R)。
“酸性氨基酸”是指侧链pK值小于7的亲水氨基酸。典型地，由于氢离子的丢失，在生理pH值下酸性氨基酸具有带负电的侧链。遗传学编码的酸性氨基酸包括Glu(E)和Asp(D)。
“碱性氨基酸”是指侧链pK值大于7的亲水氨基酸。典型地，由于氢离子的结合，在生理pH值下碱性氨基酸具有带正电的侧链。遗传学编码的碱性氨基酸包括His(H)、Arg(R)和Lys(K)。
“极性氨基酸”是指生理pH值下具有不带电侧链的亲水氨基酸，但具有至少1个这样的键，即其中被两个原子共同分享的电子对更靠近其中的一个原子。遗传学编码的极性氨基酸包括Asn(N)、Gln(Q)、Ser(S)和Thr(T)。
“疏水氨基酸”是指根据Eisenberg et al.，1984，J.Mol.Biol.179125-142中标准化共有疏水秤测定结果疏水性大于零的氨基酸。遗传学编码的疏水氨基酸包括Pro(P)、Ile(I)、Phe(F)、Val(V)、Leu(L)、Trp(W)、Met(M)、Ala(A)、Gly(G)和Tyr(Y)。
“芳香族氨基酸”是指侧链上具有至少1个芳香或杂合芳香环的疏水氨基酸。所述芳香或杂合芳香环可以包括1个或多个取代基，例如-OH、-SH、-CN、-F、-Cl、-Br、-I、-NO2、-NO、-NH2、-NHR、-NRR、-C(O)R、-C(O)OH、-C(O)OR、-C(O)NH2、-C(O)NHR、-C(O)NRR等，其中每个R都是独立的(C1-C6)烷基、取代(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、取代(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、取代(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、取代(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、取代(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基、取代5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基以及取代6～26元烷杂芳基。遗传学编码的芳香族氨基酸包括Phe(F)、Tyr(y)和Trp(W)。
“非极性氨基酸”是指生理pH值下具有不带电侧链的亲水氨基酸，但具有至少1个这样的键，即其中被两个原子共同分享的电子对通常被这两个原子同等程度地拥有(即侧链是非极性的)。遗传学编码的非极性氨基酸包括Leu(L)、Val(V)、Ile(I)、Met(M)、Gly(G)和Ala(A)。
“脂肪族氨基酸”是指具有一个脂肪族碳水化合物侧链的疏水氨基酸。遗传学编码的脂肪族氨基酸包括Ala(A)、Val(V)、Leu(L)和Ile(I)。
氨基酸残基Cys(C)的特别指出就在于它能与其他Cys(C)或其他含磺酰基(sulfanyl)的氨基酸形成二硫键。Cys(C)残基(或其他带有侧链的含-SH氨基酸)以还原态自由-SH或氧化态二硫键形式存在的能力能够影响Cys(C)残基是否会赋予肽疏水或亲水特性。根据Eisenberg(Eisenberg，1984，上述)标准化共有疏水秤测定结果当Cys(C)疏水性为0.29时，不管上述的常规分类如何，按照本发明Cys(C)都应该被归类为极性氨基酸。
本领域技术人员可以理解到，上述分类并不互斥。因此，表现出两种或多种理化特性的带侧链氨基酸可以分入多个类别中。例如，带有另外被极性取代基取代的芳香族基团的氨基酸，如Tyr(Y)可以表现出芳香族疏水特性以及极性或亲水特性，并因此可以归入芳香族或极性两种类别。任一种氨基酸的准确分类对于本领域技术人员来说都是显而易见的，尤其鉴于本发明提供的详细内容。
称为“螺旋破坏”残基的特定氨基酸残基当它们被包含在螺旋的内部时，能够破坏α螺旋的结构。具有螺旋破坏特性的氨基酸残基是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Chou和Fasman，Ann.Rev.Biochem.47251-276)，包括Pro(P)、Gly(G)以及潜在的所有D-氨基酸(当它们包括在L-肽中时，相反，当包括在D-肽中时，L-氨基酸则会破坏螺旋结构)。虽然这些螺旋破坏氨基酸残基可以归入上述类别，但是这些残基不能用于取代螺旋内部的残基--它们只能用于取代肽N-末端和/或C-末端1～3个氨基酸残基。
尽管上述类别已经按照遗传学编码氨基酸例举出来，但是氨基酸取代物不需，特定实施方案优选不限于遗传学编码氨基酸。事实上，优选的结构(I)肽中的多数包含遗传学非-编码氨基酸。因此，除天然生成的遗传学编码氨基酸外，结构(I)核心肽中的氨基酸残基可以被天然生成的非-编码氨基酸以及合成氨基酸所取代。
可以为结构(I)核心肽提供有用取代的特定常见氨基酸包括，但不限于，β-丙氨酸(β-Ala)以及其他Ω-氨基酸，例如3-丙氨酸，2，3-二氨基丙酸(Dpr)，4-氨基丁酸等；α-氨基异丁酸(Aib)；ε-氨基己酸(Aha)；δ-氨基戊酸(Ava)；N-甲基甘氨酸或肌氨酸(MeGly)；鸟氨酸(Orn)；瓜氨酸(Cit)；叔丁基丙氨酸(tBuA)；叔丁基甘氨酸(t-BuG)；N-甲基异亮氨酸(MeIle)；苯基甘氨酸(Phg)；环己基丙氨酸(Cha)；正亮氨酸(Nle)；萘基丙氨酸(Nal)；4-氯苯丙氨酸(Phe(4-Cl))；2-氟苯丙氨酸(Phe(2-F))；3-氟苯丙氨酸(Phe(3-F))；4-氟苯基丙氨酸(Phe(4-F))；3-巯基缬氨酸(Pen)；1，2，3，4-四氢异喹啉-3-羧酸(Tic)；β-2-噻吩丙氨酸(Thi)；亚砜甲硫氨酸(MSO)；高精氨酸(hArg)；N-乙酰赖氨酸(AcLys)；2，4-二氨基丁酸(Dbu)；2，3-二氨基丁酸(Dab)；对氨苯基丙氨酸(Phe(pNH2))；N-甲基缬氨酸(MeVal)；高半胱氨酸(hCys)，高苯基丙氨酸(hPhe)以及高丝氨酸(hSer)；羟脯氨酸(Hyp)，高脯氨酸(hPro)，N-甲基化氨基酸以及peptoids(N-取代甘氨酸)。
根据上述类别，对遗传学编码以及常见非编码氨基酸的分类概括于下列表III中。应该理解的是，表III只是用于说明，而并非为了穷举可以用于取代本发明所述核心肽的所有氨基酸。根据本发明提供的定义，本发明中未特别提及的其他氨基酸可以按照它们表现出的理化特性容易地进行分类。
表III常见氨基酸的分类
尽管多数情况下，结构(I)核心肽氨基酸被L-对映结构体氨基酸取代，但是这种取代并不限于L-对映结构体氨基酸。因此，下述情况也应被包括在“突变”或“改良”形式的定义中至少1个L-氨基酸被一个同一D-氨基酸取代(例如，L-Arg→D-Arg)或者被同一类别或同一亚类中的D-氨基酸取代(例如，L-Arg→D-Lys)，而且反之亦然。实际上，在适宜受试动物口服的实施方案中，所述肽可以有利地至少包括1个D-对映结构体氨基酸。含此类氨基酸的肽在口腔、胃或血清中比完全由L-氨基酸组成的肽更稳定。
如上所述，当D-氨基酸位于α螺旋L-肽内部时，往往能破坏α螺旋的结构。因此，不能用D-氨基酸取代内部的L-氨基酸；D-氨基酸取代应该仅限于肽的N-末端和/或C-末端的1～3个氨基酸残基。优选，用D-氨基酸只取代N-和/或C-末端氨基酸。
用上述氨基酸类别结合结构(I)核心肽的Schiffer-Edmundson螺旋轮或螺旋网简图，以及本发明提供的预期特性的详细描述，可以容易地制备出基本保留螺旋两亲性及其他特性的结构(I)核心肽的改良或突变形式，这些形式都属于本发明的范围之内。
本发明优选实施方案中，通过根据结构(I)固定亲水或疏水氨基酸，以及用另一个氨基酸取代至少1个氨基酸，优选保守取代，即用属于同一类别或亚类的另一氨基酸取代，可以获得结构(I)核心肽的改良或突变形式。也可以根据结构(I)固定组成碱性和/或疏水簇的残基，以及取代至少1个非固定残基，优选保守取代。
另一个优选实施方案中，通过根据结构(I)固定位于螺旋亲水面中的亲水氨基酸，以及用另一个氨基酸取代至少1个非固定氨基酸残基，优选用属于同一类别或亚类的另一氨基酸取代，可以获得结构(I)核心肽的改良或突变形式。从图2A中可以看出，残基1、4、7、8、11、12、14、15和18位于结构(I)核心肽形成的两亲性螺旋亲水面的内部。除残基1既可以是亲水性也可以是疏水性外，上述这些残基都是亲水性的。因此，在一个优选实施方案中，根据结构(I)，残基4、7、8、11、12、14、15和18是固定的，而且残基1、2、3、5、6、9、10、13、16和17中至少有1个被属于同一类别，优选属于同一亚类的另一个氨基酸取代。替代地，也可以根据结构(I)固定残基1而且残基2、3、5、6、9、10、13、16和17中至少1个被取代。
在一个特别优选的实施方案中，也可以根据结构(I)固定C-末端碱性簇(残基14、16和18)，而且只有残基2、3、5、6、9、10、13和/或17被取代。
还有另一个特别优选的实施方案中，可以把碱性和疏水簇二者都固定，而且只有残基2、5、13和/或17被取代。
本发明另一个优选实施方案中，通过固定位于螺旋疏水面中的疏水氨基酸残基，以及用另一个氨基酸取代至少1个非固定氨基酸残基，优选用属于同一类别或亚类的另一氨基酸取代，可以获得本发明核心肽的改良或突变形式。
从图2A中可以看出，残基2、3、5、6、9、10、13、16和17位于疏水面中。除残基16是亲水性氨基酸外，这些残基都是疏水性的。因此，在一个优选的实施方案中，根据结构(I)固定残基2、3、5、6、9、10、13和17，而且残基1、4、7、8、11、12、14、15、16和18中至少有1个被另一氨基酸残基取代，优选被属于同一类别或同一亚类的另一个氨基酸取代。
在一个特别优选的实施方案中，也可以根据结构(I)固定C-末端碱性簇(残基14、16和18)，而且只有残基1、4、7、8、11、12和/或15被取代。
另一个实施方案中，通过固定位于螺旋疏水或亲水面中的所有氨基酸残基，以及用另一个氨基酸取代位于另一面中的至少1个氨基酸，可以获得结构(I)肽的改良或突变形式。也可以按照上述讨论根据结构(I)任选地固定组成疏水簇和/或碱性簇的残基。
本发明的另一个实施方案中，用一个非保守氨基酸取代至少1个氨基酸，得到结构(I)的改良或突变形式。本领域技术人员应该认识到这类取代应该基本上不改变上述螺旋的两亲性和/或结构特性，下文。因此，在特定实例中，可以期望取代1个或多个氨基酸对从而保持该螺旋的基本特性(net properties)。列于表X(见，Section 8.3，下文)中的肽序列为适当的氨基酸取代提供了另外的指导。
在本发明另一个实施方案中，结构(I)核心肽N-末端和/或C-末端的前1～4个氨基酸残基被已知能赋予α螺旋二级结构稳定性的1个或多个氨基酸残基或者1段或或多段肽节段(“末端加帽”残基或节段)取代。这类末端加帽残基和节段是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Richardson and Richardson，1988，Science 2401648-1652；Harper et al.，1993，Biochemistry 32(30)7605-7609；Dasgupta and Bell，1993，Int.J.Peptide Protein Res.41499-511；Seale et al.，1994，Protein Science 31741-1745；Doig et al.，1994，Biochemistry 333396-3403；Zhou et al.，1994，Proteins 181-7；Doig and Baldwin，1995，Protein Science41325-1336；Odaert et al.，1995，Biochemistry3412820-12829；Petrukhov et al-，1996，Biochemistry 35387397；Doiget al.，1997，Protein Science 6147-155)。替代地，可以用模拟末端加帽参加或节段结构和/或特性的肽模拟基元取代结构(I)N-末端和/或C-末端的前1～4个氨基酸残基。合适的末端加帽基元是本领域技术人员众所周知的，并且在文献中已有描述，例如，Richardsonand Richardson，1988，Science 24016481652；Harper et al.，1993，Biochemistry 32(30)7605-7609；Dasgupta and Bell，1993，Int.J.Peptide Protein Res.41499511；Seale et al.，1994，Protein Science 31741-1745；Doig et al.，1994，Biochemistry333396-3403；Zhou et al.，1994，Proteins 181-7；Doig andBaldwin，1995，Protein Science 41325-1336；Odaert et al.，1995，Biochemistry 3412820-12829；Petrukhov et al.，1996，Biochemistry 35387-397；Doig et al.，1997，Protein Science6147-155)。
尽管结构(I)包括18个氨基酸残基的位置，但是可以理解本发明核心肽可以包括少于18个的氨基酸残基。实际上，包括少至14～15个氨基酸残基的结构(I)截短或内部缺失形式基本保留了结构(I)核心肽所形成螺旋的全部特征或特性，这些形式属于本发明范围之内。
通过缺失结构(I)N-末端和/或C-末端的1个或多个氨基酸，可以获得结构(I)肽的截短形式。通过缺失位于结构(I)肽内部的1个或多个氨基酸，可以获得结构(I)肽的内部缺失形式。
本领域技术人员应该认识到缺失结构(I)核心肽1个内部氨基酸可以导致该螺旋亲水-疏水交界的几何平面在缺失点旋转100度。由于这类旋转能明显地改变所得螺旋的两亲特性，所以在本发明优选实施方案中缺失氨基酸以便基本保持亲水-疏水交界的几何平面沿螺旋的整个长轴排列。
通过下述操作可以方便地实现这一点缺失足够数目的连续或非连续氨基酸残基使得1个完整螺圈被缺失。理想α螺旋每圈包括3.6个残基。因此，在一个优选实施方案中，成组缺失了3～4个连续或非连续氨基酸残基。是缺失3个氨基酸还是4个，这取决于被缺失的第1个残基在螺旋中的位置。从一个两亲性螺旋中任一特定起始点测定一个完整螺圈所包括连续或非连续氨基酸残基的确切数目的方法，是本领域技术人员众所周知的。
由于结构(I)核心肽C-末端碱性簇在稳定螺旋方面推定重要性，以及疏水簇在影响脂类结合和LCAT活性方面的重要性，本发明优选实施方案中，未缺失组成碱性簇和疏水簇的残基。因此，优选实施方案中，残基14、16和18(碱性簇)以及残基3、6、9和10(疏水簇)未被缺失。
也可以用另外的氨基酸残基在一端或两端或者内部扩展结构(I)核心肽，这些残基基本不破坏，某些实施方案甚至能增强，所述肽的结构和/或功能特性。实际上，扩展后的包括多达19、20、21、22或更多个氨基酸残基的核心肽也在本发明的范围之内。优选地，这类扩展后的肽基本保留了结构(I)核心肽的基本两亲性以及其他特性。当然，应该认识到在内部添加氨基酸将会以类似于上述内部缺失的方式在插入点旋转螺旋亲水-疏水交界的几何平面。因此，与内部缺失有关的上述讨论也适用于内部添加。
在一个实施方案中，在核心肽的N-末端和/或C-末端扩展至少1个螺圈。优选地，这类扩展能稳定脂类存在时的螺旋二级结构，例如上述末端加帽氨基酸和节段。
在一个特别优选的实施方案中，在结构(I)核心肽C-末端扩展单个碱性氨基酸残基，优选Lys(K)。
另外属于本发明范围之内的还有ApoA-I激动剂的“封闭”形式，即，这种形式的ApoA-I激动剂的N-和/或C-末端被一个能与N-末端-NH2或C-末端-C(O)OH反应的基团封闭。现已发现除去本发明含18或更少个氨基酸残基的ApoA-I激动剂N-和/或C-末端电荷(通过合成N--酰化肽氨化物/酯/酰肼/醇类及其取代物)能够得到近似于，某些实施方案中甚至超过该激动剂未封闭形式活性的激动剂。例如，与原始ApoA-I相比，肽210(SEQ ID NO21O)表现出46％的LCAT活性，但是这种肽的N-末端和C-末端封闭形式肽193(SEQ IDNO193)在同一实验中却表现出96％的LCAT活性。一些含22个氨基酸的实施方案中，封闭N-或C-末端能够得到活性低于未封闭形式的ApoA-I激动剂。但是，将含22个氨基酸的ApoA-I激动剂N-和C-末端都封闭则有望保持原有活性。因此，在本发明一个优选实施方案中，含18个或更少氨基酸的核心肽，封闭N-末端和/或C-末端(优选两端都封闭)，但是含多于18个氨基酸的肽的N-和C-末端则都要封闭或者都不封闭。典型的N-末端封闭集团包括RC(O)-，其中R是-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基。优选的N-末端封闭基团包括乙酰基、甲酰基和丹酰基。典型的C-末端封闭基团包括C(O)NRR和-C(O)OR，其中的每个R如上述单独定义。优选的C-末端封闭基团包括其中的每个R都单独为甲基的基团。不受任一特定理论束缚，可以认为这类末端封闭基团可以在存在脂类时稳定α螺旋(见，例如，Venkatachelapathi et al.，1993，蛋白质结构，功能和遗传学15349-359)。
ApoA-I的原始结构中含8个螺旋单元，这些螺旋单元协同结合脂类(Nakagawa et al.，1985，J.Am.Chem.Soc.10770877092；Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.2601024810262；Vanloo et al.，1991，J.Lipid Res.321253-1264；Mendez etal.，1994，J.Clin.Invest.941698-).705；Palgunari et al.，1996，Arterioscler.Thromb.Vasc.Biol.16328-338；Demooret al.，1996，Eur.J.Biochem.23974-84)。因此，本发明还包括由本发明所述核心肽二聚体、三聚体、四聚体以及更高级聚合体(“多聚体”)组成的ApoA-I激动剂。这类多聚体可以串联重复、分枝网状及其结合的形式存在。可以用一个或多个接头将核心肽直接彼此相连或者分隔。
包括多聚体的核心肽可以是结构(I)所示的肽、结构(I)的类似物、结构(I)突变形式、结构(I)截短或内部缺失形式、结构(I)扩展形式和/或其结合。核心肽可以头到尾方式连接(即，从N-末端到C-末端)、头到头方式连接(从N-末端到N-末端)、尾到尾方式连接(即，从C-末端到C-末端)或其组合存在。
本发明的一个实施方案中，多聚体为2、3、4直到约10个核心肽的串联重复。优选地，多聚体为2～8个核心肽串联重复。因此，一个实施方案中，本发明ApoA-I激动剂包括具有下述结构通式的多聚体 其中每个m都单独为0～1的整数，优选为1；n是0～10的整数，优选0～8；每个“HH”都单独代表一个结构(I)核心肽或结构(I)肽类似物或者本发明所述这些肽的突变、截短、内部缺失或扩展形式；每个“LL”都单独代表1个接头；以及每个“-”都单独定义为1个共价接头。
结构(II)中，接头LL可以是任一种能够将两个肽彼此共价相连的双功能分子。因此，合适的接头是其中的官能团能共价连接到肽的N-和/或C-末端的双功能分子。适于连接到肽N-或C-末端的官能团是本领域技术人员众所周知的，用于影响这类共价键形成的合适化学也同样如此。
根据多聚体期望特性的不同，所述接头可以是柔性的、刚性的或半刚性的。合适的接头包括，例如，Pro或Gly等氨基酸残基或者含约2～约5、10、15或20或更多个氨基酸的肽节段，H2N(CH2)nCOOH等双功能有机化合物，其中n是一个1～12的整数，等等。这类接头的实例，以及制备这类接头和引入这类接头肽的方法是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Hunig et al.，1974，Chem.Ber.1003039-3044；Basak et al.，1994，Bioconjug.Chem.5(4)301-305)。
本发明的一个优选实施方案中，用单个脯氨酸残基内部打断串联重复结构。为此，在核心肽N-或C-末端以脯氨酸结尾的情况下，例如，其中结构(I)中的X1是Pro(P)或D-Pro(p)，结构(II)中的m优选是0。在核心肽不含N-或C-末端脯氨酸的情况下，LL优选是Pro(P)或D-Pro(p)和m优选是1。
本发明特定实施方案中，可以期望使用在特定情况下能释放出1个或多个螺旋节段(HH)的可切割接头。合适的可切割接头包括具有能被蛋白酶识别氨基酸序列的肽、能被内切酶切割的寡核苷酸以及能用化学方法切割的有机化合物，例如在酸性、碱性或其他条件下。优选地，切割条件要相对温和以确保不变形或降解组成多聚ApoA-I激动剂的螺旋节段和/或未切割接头。
肽和寡核苷酸接头可以选择切割，以及用于切割接头的方法，这些都是本领域技术人员众所周知而且显而易见的。可以选择切割的合适有机化合物接头为本领域技术人员所熟知，其中包括，例如WO94/08051以及其中所引文献中描述的接头。
优选实施方案中，使用的接头是可以作为内源性环化酶的底物的肽，从而确保多聚ApoA-I激动剂可以在体内选择性切割，例如，载脂蛋白A-I蛋白酶原。合适的酶以及能作为这类酶的底物的肽节段是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Edelstein et al.，1983，J.Biol.Chem.25811430-11433；Zanis，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 802574-2578)。
正如上述讨论的那样，本发明核心肽的关键特性是它们在以反向平行方式排列时能形成分子间氢键或盐桥。因此，在本发明的一个优选实施方案中，使用足够长度和柔性的接头从而确保结构(II)的螺旋节段(HH)能以反向平行的方式排列，并且形成存在脂类时形成分子间氢键或盐桥。
长度和柔性足够的接头包括，但不限于，Pro(P)、Gly(G)、Cys-Cys、H2N(CH2)n-C(O)OH，其中n为1～12，优选为4～6；H2N-芳基-C(O)OH以及糖。
替代地，由于原始载脂蛋白能在反向平行螺旋节段之间协同结合，所以与连接原始载脂蛋白邻接螺旋的肽节段相对应的肽接头可以方便地用于连接核心肽，上述载脂蛋白包括，例如，ApoA-I、ApoA-II、ApoA-IV、ApoC-I、ApoC-II、ApoC-III、ApoD、ApoE和ApoJ。这些接头是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Rosseneu et al.，脂蛋白的结构和功能“脂蛋白一级结构和二级结构的分析”Ch.6，159-183，CRC Press，Inc.，1992)。
其他能够在反向平行螺旋节段的串联重复之间形成分子间氢键或盐桥的接头包括β-转角和γ-转角等肽反向转角，以及模拟β-转角和/或γ-转角结构的有机分子。通常，反向转角是与多肽方向相反以便使单个多肽链能采用反向平行β-折叠或反向平行α螺旋结构的区域。β-转角通常由4个氨基酸残基组成，γ-转角通常由3个氨基酸残基组成。
多数肽β-转角的构象和序列在现有技术中已有详细描述，包括，例如并且不限于I-型、I’-型、II-型、II’-型、III-型、III’-型、IV-型、V-型、V’-型、VIa-型、VIb-型、VII-型以及VIII-型(见Richardson，1981，Adv.Protein Chem.34167-339；Rose et al.，1985，Adv.Protein Chem.371-109；Wilmot et al.，1988，J.Mol.Biol.203221-232；Sibanda et al.，1989，J.Mol.Biol.206759-777；Tramontano et al.，1989，ProteinsStruct.Funct.Genet.6382-394)。
β-转角等短的肽转角的特定构象主要取决于该转角中特定氨基酸残基的位置(通常为Gly、Asn或Pro)。通常，除第3位上不能出现Pro外，Iβ-型-转角能与转角第1～4位任一氨基酸残基相容。在I-型和II-型转角中，第4位的优势氨基酸为Gly，第2位的优势氨基酸为Pro。Asp、Asn、Ser和Cys经常出现在第1位上，此处它们的侧链常常与残基3的NH形成氢键。
II-型转角中，Gly、Asn最常出现于位置3上，这是由于它们最易采取期望的骨架角度。理想地，I’-型转角第2和3位上是Gly，II’-型转角第2位上是Gly。III-型转角通常可以有最多的氨基酸残基，III’-但型转角通常需要第2和3位上是Gly。VIa-型和VIb-型转角通常具有1个cis肽键以及1个作为内部残基的Pro。蛋白质和肽中β-转角不同类型和序列的综述，读者可以参考Wilmot et al.，1988，J.Mol.Biol.203221-232。
多数肽γ-转角的构象和序列在现有技术中也已有详细描述(see，～，Rose et al.，1985，Adv.Protein Chem.371-109；Wilmer-White et al.，1987，Trends Biochem.Sci.12189-192；Wilmot et al.，1988，J.Mol.Biol.203221-232；Sibanda etal.，1989，J.Mol.Biol.206759-777；Tramontano et al.，1989，ProteinsStruct.Funct.Genet.6382-394)。本发明特别提供了所有这些类型β-转角和γ-转角的结构及它们的序列，以及最新发现的肽β-转角和γ-转角的结构和序列。
替代地，接头(LL)可以包括可以模拟肽β-转角和γ-转角结构的有机分子或基团。这类β-转角和/或γ-转角模拟基团，以及合成含这类基团的肽的方法，是本领域技术人员熟知的，其中包括下列文献中描述的那些Giannis and Kolter，1993 Angew.Chem.Intl.Ed.Eng.321244-1267；Kahn et al.，1988，J.MolecularRecognition 175-79；and Kahn et al.，1987，Tetrahedron Lett.281623-1626。
在本发明的另一实施方案中，多聚体以分枝网状的形式存在(见，图7)。使用多功能连接部分可以容易地得到这类网状形式，从而使得两个以上的螺旋单元能够结合到同一接头部分上。因此，分枝网状形式使用的分子具有3、4或多个能共价结合到肽N-和/或C-端上的官能团。合适的连接基元包括，例如具有带羟基、磺酰基、氨基、羧基、酰胺和或酯ester官能团的侧链的氨基酸残基，例如，Ser(S)、Thr(T)、Cys(C)、Tyr(Y)、Asn(N)、Gln(Q)、Lys(K)、Arg(R)、Orn、Asp(D)和Glu(E)；或者含这类官能团的其他有机分子。
连接到单个连接部分上的螺旋节段不需要是通过类似末端的方式来连接。实际上，在一些实施方案中，将螺旋节段连接到单个连接部分上，从而使得能以反向平行方式排列，即，这些螺旋中的一些是用它们的N-末端连接，而其余的则通过C-末端连接。
可以直接把螺旋节段连接到连接部分上，或者通过1个或多个上述双功能接头(LL)与连接部分间隔开。
从图7A和7B中可以看出，分枝网状可以用组成该网的“节点”数目来描述，其中每个多功能连接部分都是1个节点。图7A和7B中，螺旋节段(即，本发明核心肽)用柱体表示，多功能连接部分(或节点)用圆点(●)表示，其中从圆点中穿过的线的数目代表多功能连接部分的“级”(或官能团的数目)。
网中节点数目通常取决于螺旋节段的预期总数，典型地为约1～2。当然，可以理解的是对于给定数目的预期螺旋节段，较高级连接部分的网具有较少的节点。例如，图7A和7B中，7个螺旋单元的三级网有3个节点(图7A)，而7个螺旋单元的4级网只有2个节点(图7B)。
所述的网可以是同一级的，即其中的所有节点都是，例如，三功能或四功能连接部分，或者也可以是混合级的，例如，三功能和四功能连接部分。当然，可以理解到即使在同一级的网中，连接部分不必要是同样的。3级网可以使用，例如，2、3、4或更多个不同的三功能连接基元。
与线性多聚体相同，组成分枝网状形式的螺旋节段可以是，但不必须是，同样的。
这类混合级的分枝网的一个实例见图7C。图7C中，螺旋节段(即，本发明核心肽)用圆柱体表示，多功能连接部分用圆点来表示，其中从圆点中穿过的线的数目代表多功能连接部分的“级”(或官能团的数目)。如上所述，连接螺旋节段的线代表双功能接头LL如上所述，组成分枝网状形式的螺旋节段可以是核心肽的串联重复。
在一个说明性的实施方案中，本发明的分枝网状形式可以用下列通式来描述 其中每个X都单独为； 每个HH都单独代表一个结构(I)核心肽或者其类似物或本发明所述这些肽的突变、截短、内部缺失或扩展形式；每个LL都单独代表1个双功能接头；以及每个“-”都单独定义为1个共价接头；每个m都单独为一个0～1的整数；每个n都单独为一个0～8的整数；Nya和Nyb都各自代表一个多功能连接基元，其中ya和yb分别为Nya和Nyb上的官能团数目；每个ya或yb都单独是一个3～8的整数；p是一个0～7的整数；以及每个“-”都单独代表一个共价键。
在一个优选实施方案中，分枝网状形式包括一个“Lys-树”，即网中的多功能连接基元是1个或多个Lys(K)残基(见，例如，图7D)。
在一个说明性实施方案中，本发明的“Lys-树”分枝网状形式可用下述通式描述 或 其中每个X都单独为； 每个HH都单独代表一个结构(I)核心肽或者其类似物或本发明所述这些肽的突变、截短、内部缺失或扩展形式；每个LL都单独代表1个双功能接头；每个n都单独为一个0～8的整数；每个m都单独为一个0～1的整数；R1为-OR或-NRR；以及每个R都单独为-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基。
5.1.1.结构和功能的分析本发明核心肽或肽类似物的结构和功能，以及组成这类核心肽的ApoA-I激动剂，包括上述多聚体形式，这些都可以用来分析从中选择出ApoA-I的活性激动剂或模拟物。例如，可以对这些核心肽或肽类似物的下述能力进行分析脂类存在时形成α螺旋的能力、结合脂类的能力、与脂类形成复合物的能力、活化LCAT的能力、促进胆固醇排出的能力等等。
分析肽结构和/或功能的方法和实验是本领域技术人员众所周知的。操作实施例中提供了优选方法，下文。例如，第7节，上述中描述的圆二色性(CD)和核磁共振(NMR)实验，可以用于分析肽或肽类似物的结构--具体为存在脂类时的螺旋性程度。可以用第7节，下文中描述的荧光光谱分析测定结合脂类的能力。用第8节.下文中描述的LCAT活性可以容易地测定出肽和/或肽类似物活化LCAT的能力。第9，10和11节，下文中描述体外及体内实验可以用于测评半衰期、分布、胆固醇排出以及对RCT的影响。
通常，本发明中表现出下述表IV中所列特性的核心肽和/或肽类似物就可认为是有活性的。
表IV活性肽的特性
Ri是脂类肽摩尔比。
如操作实施例中所述，通常，表现出高度(≥38％)LCAT活性的核心肽在脂性小单层囊泡(SUVs)存在时具有明显的α螺旋结构(含22或更多个氨基酸残基的未封闭肽以及含18或更少个氨基酸残基的封闭后的肽存在时，≥60％)，几乎或根本无LCAT活性的肽几乎不具有α螺旋结构。但是，特定情况下，脂类存在时表现出明显螺旋结构的肽不产生明显的LCAT活性。
类似地，虽然表现出明显LCAT活性的核心肽典型地能结合脂类，但是特定情况下表现出脂类结合活性的肽却不能产生明显的LCAT活性。
因此，本领域技术人员应该认识到本发明核心肽形成α螺旋(脂类存在时)以及结合脂类的能力对于活性产生起着作用，多数情况下，这些活性可以不充分地体现出来。因此，对本发明一个优选实施方案核心肽进行筛选，从中选出表现出明显药物活性的核心肽。
第一步中，根据形成α螺旋的能力，用第7节，下文中描述的圆二色性(CD)实验对核心肽进行筛选。然后，根据结合脂类的能力，用第7节，下文中描述的荧光实验对满足下述条件的肽的肽进行筛选脂类存在时(浓度约为5μM，而且脂类∶肽的摩尔比约30)，至少形成40％螺旋(含18或更少个氨基酸的未封闭肽)或60％螺旋(含18或更少个氨基酸的未封闭肽；含22个或更多个氨基酸的封闭肽)。当然，只有那些含有荧光素标记的Trp(W)或Val残基的核心肽才可以通过荧光实验来进行脂类结合的筛选。然而，对于那些不含荧光素标记残基的肽而言，当脂类存在时螺旋增加的情况下与脂类的结合是显而易见的。
然后，对SUVs(0.5～10μM肽；脂类∶肽摩尔比为1～50)存在时表现出脂类结合核心肽进行药物活性的筛选。当然，所筛选的药物活性取决于ApoA-I激动剂的预期用途。在一个优选实施方案中，由于能够活化LCAT的核心肽在本发明描述的方法中是特别有用的，所以对核心肽进行的是活化LCAT能力的筛选。与原始的人ApoA-I相比表现出至少约38％LCAT活性的核心肽(采用第8节，下文中描述的LCAT活性实验测定)为优选核心肽，表现出50％、60％、70％、80％或者甚至90％或更高的核心肽是特别优选的。
5.1.2.优选实施方案可以通过优选实施方案对本发明的ApoA-I激动剂进行进一步说明。
在一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂是结构(I)所示的18个氨基酸残基肽，或其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式。
在另一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂是结构(I)所示的18个氨基酸残基肽，或其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式，其中X2是Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；X4是Asp(D)或G1u(E)；X7是Arg(R)、Lys(K)或Orn；
X8是Asp(D)或Glu(E)；X11是Glu(E)或Asn(N)；X12是Glu(E)；X14是Arg(R)、Lys(K)、Orn或Leu(L)；X16(K)是Arg(R)、Lys(K)或Orn；和/或X18(K)是Arg(R)、Lys(K)或Orn，以及X1、X3、X5、X6、X9、X10、X13、X15和X17同结构(I)中的在前定义。
在另一个优选实施方案，所述ApoA-I激动剂是结构(I)所示的18个氨基酸残基肽，或其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式，其中当X11是Asn(N)时，X14是Leu(L)，当X11不是Asn(N)是，X14就不是Leu(L)。根据本发明这方面特别优选实施方案是那些肽，或其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式，其中结构(I)中的各种Xn同上段中的定义。本发明这方面的例举的具体优选实施方案是肽209(PVLDLFRELLNELLQKLK；SEQ ID NO209)，及其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式。
在另一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂是结构(I)所示肽的改良或突变形式，或其N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式，其中。
X1不是Asp(D)；X9不是Gly(G)；X10不是Gly(G)；X12不是Leu(L)；以及X13不是Gly(G)。
在另一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂选自下列肽肽 191 PVLDLLRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO191)；肽 192 PVLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO192)；肽 193 PVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO193)；肽 194 PVLELFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO194)；肽 195 PVLELFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO195)；肽 196 PVLDLFRELLEELKNKLK*(SEQ ID NO196)；肽 197 PLLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO197)；肽 198 GVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO198)；肽 199 PVLDLFRELWEELKQKLK*(SEQ ID NO199)；肽 200 NVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO200)；肽 201 PLLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO201)；肽 202 PALELFKDLLEELRQKLR*(SEQ ID NO202)；肽 203 AVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO203)；肽 204 PVLDFFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO204)；肽 205 PVLDLFREWLEELKQKLK*(SEQ ID NO205)；肽 206 PLLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO206)；肽 207 PVLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO207)；肽 208 PALELFKDLLEELRQRLK*(SEQ ID NO208)；肽 209 PVLDLFRELLNELLQKLK (SEQ ID NO209)；肽 210 PVLDLFRELLEELKQKLK (SEQ ID NO210)；肽 211 PVLDLFRELLEELOQOLO*(SEQ ID NO211)；肽 212 PVLDLFOELLEELOQOLK*(SEQ ID NO212)；肽 213 PALELFKDLLEEFRQRLK*(SEQ ID NO213)；肽 214 pVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO214)；肽 215 PVLDLFRELLEEWKQKLK*(SEQ ID NO215)；肽 229 PVLELFERLLEDLQKKLK (SEQ ID NO229)；肽 230 PVLDLFRELLEKLEQKLK (SEQ ID NO230)；肽 231 PLLELFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO231)；N-和/或C-末端封闭或未封闭形式。在另一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂选自下列肽
肽 191 PVLDLLRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO191)；肽 192 PVLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO192)；肽 193 PVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO193)；肽 194 PVLELFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO194)；肽 195 PVLELFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO195)；肽 196 PVLDLFRELLEELKNKLK*(SEQ ID NO196)；肽 197 PLLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO197)；肽 198 GVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO198)；肽 199 PVLDLFRELWEELKQKLK*(SEQ ID NO199)；肽 200 NVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO200)；肽 201 PLLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO201)；肽 202 PALELFKDLLEELRQKLR*(SEQ ID NO202)；肽 203 AVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO203)；肽 204 PVLDFFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO204)；肽 205 PVLDLFREWLEELKQKLK*(SEQ ID NO205)；肽 206 PLLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO206)；肽 207 PVLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO207)；肽 208 PALELFKDLLEELRQRLK*(SEQ ID NO208)；肽 209 PVLDLFRELLNELLQKLK (SEQ ID NO209)；肽 210 PVLDLFRELLEELKQKLK (SEQ ID NO210)；肽 211 PVLDLFRELLEELOQOLO*(SEQ ID NO211)；肽 212 PVLDLFOELLEELOQOLK*(SEQ ID NO212)；肽 213 PALELFKDLLEEFRQRLK*(SEQ ID NO213)；肽 214 pVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO214)；肽 215 PVLDLFRELLEEWKQKLK*(SEQ ID NO215)；N-和/或C-末端封闭或未封闭形式。
在另一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂是结构II、III和/或IV所示的多聚体形式，其中每个HH都单独为结构(I)所示肽或其N-末端N-末端酰化和/或C-末端酰胺化或酯化形式，或者是本发明描述的任一优选的结构(I)肽。
在另一个优选实施方案中，组成ApoA-I激动剂的核心肽不是下列肽中的任意一种肽 75 PVLDEFREKLNEELEALKQKLK (SEQ ID NO75)；肤 94 PVLDEFREKLNEALEALKQKLK (SEQ ID NO94)；肽 109PVLDEFREKLNERLEALKQKLK (SEQ ID NO109)；肽 237LDDLLQKWAEAFNQLLKK (SEQ ID NO237)；肽 238EWLKAFYEKVLEKLKELF*(SEQ ID NO238)；肽 241DWFKAFYDKVFEKFKEFF (SEQ ID NO241)；肽 242GIKKFLGSIWKFIKAFVG (SEQ ID NO242)；肽 243DWFKAFYDKVAEKFKEAF (SEQ ID NO243)；肽 244DWLKAFYDKVAEKLKEAF (SEQ ID NO244)；肽 245DWLKAFYDKVFEKFKEFF (SEQ ID NO245)；肽 246EWLEAFYKKVLEKLKELF (SEQ ID NO246)；肽 247DWFKAFYDKFFEKFKEFF (SEQ ID NO247)；肽 248EWLKAFYEKVLEKLKELF (SEQ ID NO248)；肽 249EWLKAEYEKVEEKLKELF*(SEQ ID NO249)；肽 250EWLKAEYEKVLEKLKELF*(SEQ ID NO250)；和肽 251EWLKAFYKKVLEKLKELF*(SEQ ID NO251).
在最后一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂不是表X中列出的肽中的任意一种(8.3节，下文)，表中列出的这些肽表现出的LCAT活性低于原始人ApoA-I的38％。
5.2.ApoA-I肽激动剂的合成及纯化本发明核心肽的制备可以采用实际上任一种本领域已知制备肽的技术。例如，可以用常规的梯度溶液或固相肽合成，或者重组DNA技术制备所述肽。
5.2.1.化学合成可以用常规梯度溶液或固相合成技术制备核心肽(见，例如，肽和蛋白质的化学合成方法Williams et al.，Eds.，1997，CRC Press，Boca Raton Florida，及其参考文献；固相肽合成实体操作，Atherton & Sheppard，Eds.，1989，IRL Press，Oxford，England，及其参考文献)。
替代地，可以用文献中描述的节段缩合来制备本发明所述的肽，例如，Liu et al.，1996，Tetrahedron Lett.37(7)933-936；al.，1995，J.Am.Chem.Soc.1171881-1887；Tam et al.，1995，Int.J.Peptide Protein Res.45209-216；Schnolzer and Kent，1992，Science 256221-225；Liu and Tam，1994，J.Am.Chem.Soc.116(10)4149-4153；Liu and Tam，1994，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 916584-6588；Yamashiro and Li，1988，Int.J.PeptideProtein Res.31322-334)。节段缩合是用于合成含内部甘氨酸残基的实施方案的特别有效方法。其他可以用于合成本发明肽的方法在下文的描述Nakagawa et al.，1985，J.Am.Chem.Soc.1077087-7092。
可以用有机化学标准技术制备含N-和/或C-末端封闭基团的ApoA-I激动剂。例如，酰化肽N-末端或者酰胺化或酯化肽C-末端的方法是本领域技术人员众所周知的。由于保护任一侧链官能团的模型都需要连接末端封闭基团，所以N-和/或C-末端带有其他修饰的模型对于本领域技术人员来说显而易见的。
用离子交换层析或本领域技术人员熟知的其他方法，可以方便地制备出药物学可接受的盐(反离子)。
通过在合成过程的合适步骤中向肽链添加接头，能够方便地合成出以串联多聚体形式存在的本发明化合物。替代地，可以合成螺旋节段，每个节段都与接头反应。当然，合成的真正方法取决于接头的组成。合适的保护方案和化学也是众所周知的，对于本领域技术人员是显而易见的。
用下述文献中描述的三聚物和四聚物树脂以及化学试剂，能够方便地合成出以分枝网状形式的本发明化合物Tam，1988，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 855409-5413 and Demoor et al.，1996，Bur.J.Biochem.23974-84。合成树脂的修饰，以及合成更高或更低目，或含有不同核心肽螺旋节段组合的分枝网的策略，这些都在肽化学和/或有机化学领域技术人员的能力范围之内。
如果需要，通常可以在温和氧化剂存在的条件下诱导形成二硫键。可以使用化学氧化剂，或者可以直接把化合物暴露到大气氧引发这些键的生成。各种方法都是本领域技术人员已知的，包括下述文献中描述的，例如，Tam et al.，1979，Synthesis 955-957；Stewartet al.，1984，Solid Phase Peptide Synthesis，2d Ed.，PierceChemical Company Rockford，IL；Ahmed et al.，1975，J.Biol.Chem.2508477-8482；and Pennington et al.，1991 Peptides1990164-1.66，Giralt and Andreu，Bds.，BSCOM Leiden，TheNetherlands。另一个替代方案的描述见，Kamber et al.，1980，Helv.Chim.Acta 63899-915。一种在固相载体上实施的方法的描述见，Albericio，1985，Iht.J.Peptide Protein Res.2692-97。这些方法中的任一种都可以用于形成本发明肽中的二硫键。
5.2.2.重组合成如果肽完全是由，或其中的一部分是由基因-编码氨基酸组成，那么也可以用常规合成遗传工程技术来合成该肽或相关部分。
对于重组制备，则要把编码肽的聚核苷酸序列插入到合适的表达载体，即载体中含有被插入编码序列转录和翻译所需元件，或者当使用的是RNA病毒载体时复制和翻译所需元件。然后，把表达载体转染到表达肽的合适的靶细胞中。根据所用的表达系统，然后用本领域的成熟方法分离表达的肽。用于重组蛋白和肽生产的方法是本领域技术人员众所周知的(见，例如，Sambrook et al.，1989，MolecularCloning A Laboratory Manual，Cold Spring Harbor Laboratory，N.Y.；and Ausubel et al.，1989，Current Protocols in MolecularBiology，Greene Publishing Associates and Wiley Interscience，N.Y.这些文献在此整体引入作为参考)。
为了提高生产效率，可以将上述聚核苷酸设计成被酶切位点间隔开的多个肽单元--同聚体(重复肽单元)或异聚体(不同肽串在一起)都可以此方式构建。为了回收肽单元，可以对得到的聚肽进行切割(例如，用合适的酶处理)。这可以增加由单一启动子驱动的肽的产量。在一个优选实施方案中，可以设计一个多顺反子聚核苷酸从而转录出编码多个肽的单一mRNA(即，同聚体或异聚体)每个编码区域任选地连接到一个帽-不依赖的翻译控制序列；例如，一个内部的核糖体进入位点(IRES)。当用于合适的病毒表达系统时，翻译过程中该mRNA编码的每个肽的翻译都由，例如IRES内部指导。因此，多顺反子构建体指导单个、大多顺反子mRNA的转录，反过来，该mRNA指导多个、单一肽的翻译。这种方法可以消除聚蛋白的产生和酶处理，并且能够明显地增加单一启动子驱动的肽的产量。
多种宿主表达载体系统可以用于表达本发明所述的肽。这些包括，但不限于，用含一段合适编码序列的重组噬菌体DNA或质粒DNA表达载体转化的细菌等微生物；用含一段合适编码序列的重组酵母或真菌表达系统转化的酵母或丝状真菌；用重组病毒表达载体(例如，杆状病毒)转染的昆虫细胞系统；用重组病毒表达载体(例如，花椰菜花叶病毒或烟草花叶病毒)或用含一段合适编码序列的重组质粒表达载体(例如Ti质粒)转化的植物细胞；或者动物细胞系统。
表达系统的表达元件在其强度和特异性方面不同。根据使用的宿主/载体系统，可以将大量合适的转录和翻译元件中的任意一种，包括组成型和诱导型启动子，用于表达载体。例如，当在菌体系统中克隆时，可以使用诱导型启动子，例如λ噬菌体的pL、plac、ptrp、ptac(ptrp-lac杂合启动子)等；当克隆入昆虫细胞系统中时，可以使用杆状病毒多角体启动子等启动子；当克隆入植物细胞系统中时，可以使用来自植物细胞基因组(例如，热休克启动子、RUBISCO小亚基的启动子、叶绿素a/b结合蛋白的启动子)或者来自植物病毒(例如，CaMV的35S RNA启动子、TMV的衣壳蛋白启动子)；当克隆入哺乳动物细胞系统中时，可以使用来自哺乳动物细胞(例如，金属硫蛋白启动子)或者来自哺乳动物病毒(例如，腺病毒后期启动子、痘苗病毒7.5K启动子)的启动子；当克隆入含多拷贝表达产物的细胞系中时，可以使用带有适当可选择标记物的以SV40-，BPV-和EBV-为基础的载体。
当使用植物表达载体的情况下，可以用大量启动子中的任一种来驱动编码本发明肽的序列的表达。例如，可以使用病毒启动子，例如，CaMV的35S RNA和19S RNA启动子(Brisson et al.，1984，Nature310511-514)或TMV的衣壳蛋白启动子(Takamatsu et al.，1987，EMBO J.6307-311)；替代地，可以使用植物启动子，例如RUBISCO小亚基(Coruzzi et al.，1984，EMBO J.31671-1680；Broglie etal.，1984，Science 224838-843)或热休克启动子，例如大豆hsp17.5-E或hsp17.3-B(Gurley et al.，1986，Mol.Cell.Biol.6559-565)。可以使用Ti质粒、Ri质粒、植物病毒载体、直接DNA转化、微注射、电穿孔等，把这些构建体转化到植物细胞中。这类技术的综述见，例如Weissbach & Weissbach，1988，Methods for PlantMolecular Biology，Academic Press，NY，Section VIII，pp.421-463；和Grierson & Corey，苜蓿银纹夜蛾1988，PlantMolecular Biology，2d Ed.，.Blackie，London，Ch.7-9。
在一个可以用于制备本发明肽的昆虫表达系统中，可以用Autographa californica，核性多汁症病毒(AcNPV)作为载体表达外源基因。病毒生长在草地夜蛾细胞中。可以将编码序列克隆到病毒的非必需区域(例如多角基因)，并且置于AcNPV启动子的调控之下(例如，多角体启动子)。成功插入编码序列可以导致多角体基因的失活和非-封闭型重组病毒的产生(即，不含多角体基因编码的蛋白质衣壳)。然后，用这些重组病毒转染草地夜蛾细胞，插入基因在其中表达(例如，见Smith et al.，1983，J.Virol.46584；Smith，U.S.Patent No.4，215，051)这种表达系统的另一个实例可以见CurrentProtocols in Molecular Biology，Vol.2，Ausubel et al.，eds.，Greene Publish.Assoc.& Wiley Interscience。
在哺乳动物宿主细胞中，可以使用大量以病毒为基础的表达系统。当用腺病毒作为表达载体时，可以将编码序列连接到腺病毒转录/翻译调控复合物中，例如，晚期启动子和三分前导序列。通过体外或体内重组，可以把嵌合基因插入到腺病毒基因组中。插入病毒非必需区域(例如，区域E1和E3)导致可生存的并能在转染宿主中表达肽的病毒。(例如，见Logan & Shenk，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)813655-3659)。替代地，可以使用痘苗病毒7.5K启动子，(例如，Mackett et al.，1982，Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)797415-7419；Mackett et al.，1984，J.Virol.49857-864；Panicali et al.，1982，Proc.Natl.Acad.Sci.794927-4931)。
用于生产本发明肽的其他表达系统对于本领域技术人员是显而易见的。
5.2.3.肽的纯化可以用本领域已知技术来纯化本发明的肽，例如反向高效液相层析、离子交换层析、凝胶电泳、亲和层析等。用于纯化一种具体肽的真正条件部分上取决于合成策略以及净电电荷、疏水性、亲水性等因素，这些对于本领域技术人员来说都已清楚。可以利用，例如，离子交换或大小排阻层析。
对于亲和层析纯化而言，任一种能特异结合所述肽的抗体都可以使用。抗体的制备，可以用肽注射免疫各种宿主动物，包括但不限于，兔、小鼠、大鼠等。可以通过侧链官能团或连接到侧链官能团上的接头，把肽连接到BSA等合适的载体上。根据宿主种类的不同，可以使用各种佐剂，包括但不限于弗氏(完全和不完全)，氢氧化铝等矿物凝胶、溶血卵磷脂等表面活性物质、pluronic多元醇、聚阴离子、肽、油乳剂、钥孔血蓝蛋白、二硝基酚，以及潜在有效的人佐剂例如BCG(卡介菌)和小棒状杆菌。
使用任一种能够用培养物中连续细胞系生产抗体分子的技术，可以制备得到抗肽的单克隆抗体。这些技术包括但不限于杂交瘤技术，最初描述见Kohler and Milstein，1975，Nature 256495-497，或Kaprowski，U.S.Patent No.4,376,110在此引入作为参考；人B细胞杂交瘤技术(Kosbor et al.，1983，Immunology Today 472；Cote et al.，1983，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.802026-2030)；以及EBV-杂交瘤技术(Cole et al.，1985，MonoclonalAntibodies and Cancer Therapy，Alan R.Liss，Inc.，pp.77-96(1985)).此外，可以使用用于制备“嵌合抗体”的技术(Morrisonet al.，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.816851-6855；Neuberger et al.，1984，Nature 312604-608；Takeda et al.，1985，Nature 314452-454，Boss，U.S.Patent No.4,816,397；Cabilly，U.S.Patent No.4,816,567；在此引入作为参考)，该项技术是通过剪接来自具有合适抗原特异性的小鼠抗体分子的基因和来自具有合适生物活性的人抗体分子的基因实现的。或者可以制备“人源化”抗体(见，例如，Queen，U.S.Patent No.5,585,089在此插入作为参考)。替代地，可以将用于制备单链抗体的技术(U.S.Patent No.4,946,778)用于制备肽特异性单链抗体。
通常，用已知技术可以生产出含有特异性位点缺失的抗体片段，这类片段包括但不限于，用胃蛋白酶消化抗体分子得到的F(ab’)2片段和还原F(ab’)2片段的二硫键得到的Fab片段。替代地，可以构建Fab表达文库(Huse et al.，1989，Science 2461275-1281)，从而可以快速和容易地鉴定出具有针对目的肽的预期特异性的单克隆Fab片段。
可以将对目的肽具有特异性的抗体或抗体片段连接到，例如琼脂糖，然后把抗体-琼脂糖复合物用于免疫层析，纯化出本发明的肽。见，Scopes，1984，蛋白质纯化理论和实践，Springer-Verlag NewYork，Inc.，NY，Livingstone，1974，酶学方法蛋白质的免疫亲和层析34723-731。
5.3.药用制剂和治疗方法本发明的Apo-I激动剂可以用于治疗动物的任一种疾病，尤其是包括人在内的哺乳动物，对于增加血清HDL浓度、活化LCAT以及促进胆固醇排出和RCT是有益的。这类疾病包括，但不限于高脂质血症，并且尤其是高胆固醇血症，以及动脉粥样硬化等心血管病(包括动脉粥样硬化的治疗和预防)；再狭窄(例如，预防或治疗因球囊血管成形术等治疗方法引发的动脉粥样硬化病变)；以及往往导致脓毒性休克的内毒素性血症等其他疾病。
ApoA-I激动剂可以单独或与其他用于治疗上述病症的药物配合治疗。这类治疗包括，但不限于同时或顺序给药。
例如，对于治疗高胆固醇血症或动脉粥样硬化，ApoA-I激动剂制剂可以按照目前使用的任一种或更多种降胆固醇治疗方案给药，例如，胆汁酸树脂、烟酸和/或抑制素。由于每种药物均作用于胆固醇合成和运输中的不同目标，所以这种联合治疗方案可以产生特别有益的治疗效果；例如，胆汁酸树脂能够影响胆固醇再循环、乳糜微粒和LDL族群，烟酸主要影响VLDL和LDL族群；抑制素能够抑制胆固醇合成，减少LDL族群(以及可能增加LDL受体的表达)；同时ApoA-I激动剂能影响RCT、增加HDL，增强LCAT活性以及促进胆固醇的排出。
在另一个实施方案中，ApoA-I激动剂可以与纤维素结合用于治疗高脂质血症、高胆固醇血症，和/或动脉粥样硬化等心血管病。
还有另一个实施方案中，本发明的ApoA-I激动剂可以与目前使用的抗微生物和抗炎性药物联合用于治疗内毒素引发的脓毒性休克。本发明的ApoA-I激动剂可以配制成能以多种途径向患者给药的肽或肽-脂类复合物，从而将ApoA-I激动剂释放到循环系统中。下面描述了例举性的制剂和治疗方案。
5.3.1.ApoA-I激动剂和肽/脂类复合物作为活性成分用第5.2节及其小节中描述的任一种技术，可以合成或制备出ApoA-I激动剂肽。通过冻干肽可以制备出半衰期长的稳定制剂--制备成用于再配制的散装形式，或者制备成在施用给患者前能够与灭菌水或合适的灭菌缓冲液再水化的单个等分试样或剂量单元。
特定的实施方案中，可以优选以肽-脂类复合物的形式配制和施用。这种方法具有几种优点，这是由于该复合物具有增长的循环系统半衰期，特别是当该复合物的大小和密度与HDL近似时，特别是与前-β-1或前-β-2 HDL族群近似时。用下述大量方法中的任一种都可以方便地配制出所述的肽-脂类复合物。用冻干方法可以制备出贮藏期限长的稳定制剂-优选下述的共冻干方法。冻干的肽-脂类复合物可以用于制备成用于药物再配制的散装形式，或者制备成在施用给患者前能够与灭菌水或合适的灭菌缓冲液再水化的单个等分试样或剂量单元。
本领域技术人员熟知的多种方法都可以用于制备肽-脂类囊泡或复合物。所以，大量用于制备脂质体或前脂质体的现有技术都可以使用。例如，所述肽可以与合适的脂类混合(用池式或探针超声波仪)形成复合物。替代地，所述肽可以与预制的脂类囊泡配合形成肽-脂类复合物的自发制剂。另一个替代的实施方案中，可以用去污剂透析法制备肽-脂类复合物；例如，一种肽、脂类和去污剂混合物被透析除去去污剂并且重新组成或形成肽-脂类复合物(例如，见Jonas etal.，1986，Methods in Enzymol.128553-582)尽管上述方法切实可行，但是每种方法在成本、产量、重现性和安全性方面都出现其独有的问题。申请人发明了一种用于制备与HDL具有类似特性的肽或蛋白-磷脂复合物的简便方法。该方法可以用于制备ApoA-I肽-脂类复合物，具有下列优点(1)所包括成分中的大多数或全部都用于形成设定的复合物，因此避免了其他方法中通常出现的原料浪费的问题。(2)配制成保存过程中很稳定的冻干化合物。所得到的复合物可以在临用前再配制。(3)制备后和使用前，得到的复合物通常不需要进一步纯化。(4)能避免毒性化合物，包括胆酸盐等去污剂。此外，生产方法易于规模化，并且适用于GMP生产(即，不含内毒素的环境)。
按照优选方法，所述肽和脂类共溶于一种每种成分都能互溶的溶剂系统中，而且可以通过冻干完全去除。所以，溶剂对必须仔细选择，以确保两亲性肽和脂类二者之间能够互溶。一个实施方案中，引入到颗粒中的蛋白质或肽可以溶解于一种水或有机溶剂或溶剂混合物(溶剂1)中。(磷)脂成分溶解于一种能与溶剂1混溶的水或有机溶剂或溶剂混合物(溶剂2)中，混合这两种溶液。替代地，可以将肽和脂类引入到一种互溶系统中；例如，一种可混溶溶剂的混合物。首先根据经验确定肽与脂类之间的合适比例，以便使得到的混合物具有适当的理化性质；例如，通常(但并非必须)大小近似于将得到的混合物冷冻并冻干。有时还必须向混合物中另外加入一种溶剂加速冻干。冻干产物能长期保存并保持稳定。
在上述操作实施例中，将肽210(SEQ ID NO.210)和磷脂分别溶解于甲醇中，合并，然后在冻干前与二甲苯混合。可以把肽和脂类二者加入到上述两种溶剂的混合物中。替代地，可以将所述肽的甲醇溶液与肽的二甲苯溶液混合。必须小心除尽溶剂系统中的盐类以避免盐析出肽。将得到的含有共溶于甲醇/二甲苯中的肽和脂类的溶液冻干成粉末。
再配制冻干产物以得到肽-脂类混合物的溶液或悬浮液。所以，用水溶液再水化冻干粉末到合适体积(通常5mgs肽/ml的浓度便于静脉注射)。一个优选实施方案中，用磷酸盐缓冲盐或一种生理盐溶液再水化冻干粉末。可以搅拌或涡旋混合物以加速再水化，而且多数情况下，实施再配制步骤的温度应等于或高于混合物中脂类成分的相转化温度。数分钟内，得到再配制脂类-蛋白混合物的澄清溶液。
取一等份得到的再组成制剂进行定性以确证制剂中的混合物具有期望的大小分布；例如，HDL的大小分布。凝胶过滤层析可以用于此目的。上述的操作实施例中，使用了一种Pharmacia Superose 6 FPLC凝胶过滤层析系统。所用的缓冲液在50mM磷酸盐缓冲液中含150mMNaCl。一种典型的样品容积为20～200毫升的混合物，其中含5mg肽/ml。柱体流速为0.5ml/min。一系列已知分子量和Stokes’直径的蛋白质以及人HDL用作标准物测定柱体。用波长为254或280nm处的吸光度或光散射测定蛋白质和脂蛋白混合物。
本发明的ApoA-I激动剂可以与多种脂类混合，包括饱和、不饱和、天然或合成脂类和/或磷脂。合适的脂类包括，但不限于，短烷基链磷脂、卵磷脂酰胆碱、大豆磷脂酰胆碱、二棕榈酰磷脂酰胆碱、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、二硬脂酰磷脂酰胆碱、1-肉豆蔻酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-肉豆蔻酰磷脂酰胆碱、1-棕榈酰-2-硬脂酰磷脂酰胆碱、1-硬脂酰-2-棕榈酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰胆碱、二油酰磷脂酰乙醇胺、二月桂酰磷脂酰甘油、磷脂酰丝氨酸、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰肌醇、鞘磷脂、鞘脂类、磷脂酰甘油、二磷脂酰甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰甘油、二磷脂酰磷脂基甘油、二肉豆蔻酰磷脂酰基甘油、二油酰磷脂酰磷脂基甘油、二肉豆蔻酰磷脂酸、二棕榈酰磷脂酸、二肉豆蔻酰磷脂酰基乙醇胺、二棕榈酰磷脂酰基乙醇胺、二肉豆蔻酰磷脂酰基丝氨酸、二棕榈酰磷脂酰基丝氨酸、脑磷脂酰丝氨酸、脑鞘磷脂、二棕榈酰鞘磷脂、二肉豆蔻酰鞘磷脂、磷脂酸、半乳糖脑苷脂、神经节苷脂、脑苷脂类、二月桂酰磷脂酰胆碱，(1，3)-D-甘露糖基-(1，3)-甘油二酯、氨基苯配醣，3-胆甾烯基-6’(糖基硫代)己基醚糖脂、以及胆固醇及其衍生物。
申请人已发现当本发明的ApoA-I激动剂与鞘磷脂混合时，前-β-类颗粒的所有HDL被除去。因此，在本发明的一个优选实施方案中，所述ApoA-I激动剂与鞘磷脂作为混合物给药。
5.3.2治疗方法可以通过任一种合适途径施用本发明的ApoA-I肽激动剂或肽-脂类混合物以确保循环系统的生物利用率。胃肠外途径给药能够最大限度地实现这一点，包括静脉内(IV)、肌肉内(IM)、真皮内、皮下(SC)以及腹膜内(IP)注射。但是，其他给药途径也可以使用。例如，通过口服(包括但不限于摄取、口腔和舌下途径)实现胃肠道吸收，只要合适制剂(例如，肠溶衣)能避免或将活性成分的降解减至最小程度，例如在口腔黏膜、胃和/或小肠等恶劣环境中。替代地，通过黏膜组织给药，例如阴道和直肠给药模式可以用于避免或最小化胃肠道的降解。在另一个替代实施方案中，本发明的制剂可以经皮或吸入给药(例如，经皮)。应该理解的是优选途径可以随病情、年龄以及接受者顺应性不同而改变。
使用的ApoA-I激动剂或肽-脂类复合物的确切剂量随给药途径的不同而改变，而且应该调整实现循环血浆浓度为100mg/l～2g/l。本发明描述的动物模型系统中获得的数据表明本发明的ApoA-I激动剂与HDL成分结合，人体内预计半衰期为5天。因此，在一个实施方案中，ApoA-I激动剂可以0.5mg/kg～100mg/kg的剂量每周一次注射给药。另一个实施方案中，通过连续灌输或间歇灌输只要浓度约为0.5mg/kg/hr～100mg/kg/hr，可以保持期望的血清浓度。
用用于测定LD50(群体的半数致死量)和ED50(群体的半数有效治疗量)的细胞培养或实验动物的标准药物学方法，可以测定出各种ApoA-I激动剂的毒性和治疗效果。毒性和治疗效果之间的剂量比为疗效指数，它可以表达为LD50/ED50比值。优选表现出大疗效指数的ApoA-I肽。
5.3.3.药用制剂本发明的药用制剂在一种药物学上可接受的适于体内给药或释放的载体中含有作为有效成分的ApoA-I肽激动剂或肽-脂类复合物。由于肽可以含酸性和/或碱性末端和/或侧链，所以所述肽可以游离酸或碱的形式包括在制剂中，或者以药物学上可接受的盐形式。
可注射制剂包括活性成分在水或油性溶剂中的灭菌悬液、溶液或乳液。组合物还可以包括成剂的药剂，例如悬浮、稳定和/或分散剂。用于注射的制剂可以单位剂量的形式存在，例如，安瓿或多剂量包装，而且可以包括附加的防腐剂。
替代地，注射制剂可以使用前可用合适溶剂再配制的粉末形式提供，包括但不限于灭菌的无热源水、缓冲液、葡萄糖溶液等。所以，可以冻干制备ApoA-I激动剂，或者制备共冻干的肽-脂类复合物。保存制剂可以单位剂量形式提供，体内使用前再配制。
为了实现长期释放，活性成分可以配制成储存制剂，用于通过灌输给药，例如皮下、经皮或肌内注射。因此，例如，活性成分可以用合适的多聚体或疏水物质(例如，可接受油的乳液)或离子交换树脂配制，或者以防护性可溶性衍生物形式，例如，ApoA-I激动剂的防护性可溶性盐形式。
替代地，可以使用经皮释放系统，经皮释放系统制备成能缓慢释放用于经皮吸收的活性成分的吸附性圆盘或贴片(patch)。所以，为此目的，渗透增强剂可以用于促进活性成分的经皮渗透。通过将本发明的ApoA-I激动剂或肽-脂类复合物引入到一个用于缺血性心脏病和血胆脂醇过多患者的硝酸甘油贴片中，可以实现一种特别的优势。
为了能够用于口服，所述药用制剂可以采用，例如，片剂或胶囊形式，通过常规方法用药物学上可接受赋形剂例如结合剂(例如，预先凝胶化的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟丙基甲基纤维素)；填充剂(例如，乳糖、微晶纤维素或磷酸氢钙)；润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石或二氧化硅)；崩解剂(例如马铃薯淀粉或淀粉羟基乙酸钠)；或润湿剂(例如，十二烷基硫酸钠)。可以用本领域技术人员熟知的方法包裹片剂。用于口服的液体制剂可以采用，例如，溶液、糖浆剂或悬液，或者它们可以被制备成使用前用水或其他合适溶剂再配制的干燥产物。用药物学上可接受的添加剂，例如悬浮剂(例如，山梨糖醇糖浆、纤维素衍生物或氢化的可食用脂肪)；乳化剂(例如，卵磷脂或阿拉伯胶)；非水溶剂(例如，杏仁油、油酯、乙醇或分馏菜子油)；以及防腐剂(例如，对羟基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸)。所述制剂还可以包括缓冲盐、调味、着色及甜味剂作为合适形式。口服制剂可以适当配制使活性化合物控制释放。
为了能用于口服给药，所述组合物采用常规方式配制成的片剂或胶质软糖。用于直肠或阴道途径给药时，活性成分可以配制成溶液(用于保持灌肠)栓剂或油膏。用于吸入给药时，活性成分可以采用从加压包或喷雾器释放出的气溶胶喷雾形式，使用一种合适的推进剂，例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷，二氧化碳或其他合适气体。加压气溶胶情况下，通过提供一个计量释放的阀门，可以测定出剂量单位。例如用于吸入器或吹药器中的白明胶的胶囊和药筒可以配制成含有化合物与一种合适粉末基质例如乳糖或淀粉的粉末状混合物。
如果需要，所述组合物可以存在于一种包装容器(pack)或分配器中，其中可以含有一个或多个含活性成分的单位剂量形式。上述包可以例如包括金属湖塑料箔，例如泡罩包装。上述包装容器或分配器可以配有用药说明书。
5.4.其他用途本发明的ApoA-I可以用于测量血清HDL的体外实验中，例如用于诊断目的。因为ApoA-I激动剂与血清中的HDL成分结合，所以该激动剂可以用作HDL族群的“标示物”。此外，该激动剂还可以用作在RCT中发挥功效的HDL亚群的标示物。所以，可以将该激动剂加入或与患者血清样品混合；一段合适的温育时间后，通过检测加入的ApoA-I激动剂，可以测定出HDL成分。用经过标记的激动剂(例如，放射性标记、荧光标记、酶标、染料等)，或者用特异于该激动剂的抗体进行免疫测定，可以实现这一点。
替代地，标记后的激动剂可以用于成象方法(例如，CAT扫描、MRI扫描)显象循环系统，或者监测RCT，或显象HDL在脂肪条纹、动脉粥样硬化病变等部位的聚积(此处HDL应该在胆固醇排出中发挥作用)。
6.实施例ApoA-I的肽激动剂的合成按照下面分部中描述的方法，合成和定性表X(第8.3节，下文)中描述的肽。
按照第7和8节，下文中的描述，从结构和功能上分析上述肽。
6.1.核心肽的合成按照Merrifield技术(Merrifield，1969，J.Am.Chem.Soc.852149-2154)，用0.25mmol对烷基苯甲醇树脂(HMP resin)(Wang，1973，J.Am.Chem.Soc.951328-1333)和Fmoc化学品固相合成肽。所有肽的合成均在Applied Biosystems ABI430A型自动肽合成仪(Perkin-Elmer，Foster City，CA)上完成。下面表V中显示出了用于每个偶联循环的溶解和活化时间
表V单个偶联活化剂循环
每个偶联步骤之间用NMP洗涤树脂。一个合成循环的操作见下表VI表VI一个合成循环的偶联操作
除Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸外，所有氨基酸均以这种方式偶联。Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸采取人工偶联。对于人工偶联而言，把1mmol Fmoc-β-(1-萘基)丙氨酸和1mmol 2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3四甲基脲四氟硼酸(TBTU)溶解于5ml NMP中并与肽-树脂混合。此后，加入2mmol N-乙基二异丙胺，混合物振荡2小时，用10ml NMP洗涤肽-树脂6次。用Kaiser实验(Kaiser，1970，Anal.Biochem.3459577)检测偶联效率，如有必要重复偶联。偶联萘基丙氨酸后，其余合成步骤均按照上述自动进行。
6.2.肽酰胺化物的合成如表X(第8.3节，下文)所示，用一种含Fmoc-Rink酰胺手柄4-(2’，4’-二甲苯)-Fmoc-苯氧甲基(Rink，1987，Tetrahedron Lett.283787-3790)和第6.1节，上述中描述的合成方法合成肽酰胺化物。
6.3.N-末端酰化肽的合成如表X(第8.3节，下文)所示，通过让按照第6.1或6.2节，下文描述制备的树脂-结合肽与合适的酰化试剂接触，制备出所述肽的N-末端酰化形式。
就N-末端酰化肽而言，每1g树脂-结合肽中加入15ml醋酸酣溶液(NMP中10％v/v比)，混合物振荡5min，过滤回收树脂。用NMP(15ml)洗涤回收后的树脂3次，并用乙醇(15ml)洗涤3次。
6.4.切割和去保护合成后，从树脂中切割出第6.1，6.2和6.3节，上述描述的肽，用含92.5％三氟乙酸(TFA)/3.75％苯甲醚/3.75％十二烷基硫醇(v/v/v)。为了实现切割，向0.25mmol肽树脂中加入10ml切割溶液，室温振荡1.5小时。过滤除去树脂，用二乙醚沉淀切割后/去保护后的肽，乙醚洗涤，真空干燥。
对于含Trp(W)肽以及对于肽酰胺的切割鸡尾酒由下述成分组成86.5％TFA、4.5％H2O，4.5％1，2-乙二硫醇、4.5％苯甲醚以及3％苯酚。
6.5.纯化用反相HPLC纯化第6.4节中的粗制、切割后的肽。用不同的分析技术(分析HPLC、毛细管电泳)验证每个肽的纯化。在长为70cm和内径为75μm的熔化二氧化硅毛细管(热分离产品)上进行毛细管电泳。25℃、15kV的条件下，在下述两种不同缓冲系统中进行分离35min.缓冲液1(20mM Na2B4O7，pH9.2)和缓冲液2(10mM Na2HPO4，pH2.5)。用250×21mm的Nucleosil 7C18或Nucleosil 7C4柱(Macherey and Nagel，Germany)进行HPLC分离，流速为8ml/min。用0.1％TFA水溶液(溶剂A)和0.1％TFA乙腈溶液(溶剂B)的混合物进行梯度洗脱。对所用梯度进行调整以满足每个肽的需要。
6.6.特征描述按照下述方法，用质谱和氨基酸分析对第6.5节中描述的纯化肽分别进行质谱和氨基酸分析。用Edman降解法进行测序。
6.6.1.LC-MS用一种标准商业化三级四重峰质谱仪(TSQ 700型；Finnigan MAT，San Jose CA，USA)进行质谱测定。用空气辅助电子喷雾(ESI)界面把样品导入到质谱仪的大气压电离源。4.5kV正电势下进行界面喷雾。钢毛细管温度采用200℃而多支管采用70℃。这种离子蒸发方法产生的阳离子进入质谱仪的分析器中。将增效器调至100V。质谱仪的分析器室为4E-6。所有探测均在小于1μ的分辨率下进行。
用由一个注射泵(140B型)、一个UV探头(785A型)和一个烘箱/注射器组成的ABI(Applied Biosystems)微孔系统，通过直接灌输对肽进行分析。溶剂系统由水(溶剂A)和乙腈(溶剂B)组成，每种溶剂中含0.1％TFA。用梯度或等度方法注入肽，并从AquaporeC18柱中洗脱出来。流速典型地为300μl/min。每种肽的浓度为约0.03mg/ml，每种各注入20μl(例如，30pmol)。
通过从500-1500m/z四重扫描4S，获得全扫描MS实验。用αDEC平台获得数据，并用Finnigan MAT(BIOWORKS)提供的软件包对数据进行处理。
6.6.2.氨基酸分析用ABI(Applied Biosystems)420氨基酸分析仪，进行氨基酸分析。该系统由3个组件组成一个水解和衍生(derivatisation)装置、一个反相HPLC和一个数据系统。将肽样品加样(一式三份共3次)到多孔玻璃载片上，然后在气相条件(155℃，90min.)进行水解。除去HCL后，用PITC(异硫氰酸苯酯)将得到的氨基酸转化为PTC-AA(硫羟氨基甲酸苯酯-氨基酸)。转移到HPC样品环管后，控温条件下用梯度模式(试剂A50mmol乙酸胺(NH4Ac)，pH5.4，溶于水；试剂B32mmol乙酸钠(NaOAc)溶于含水乙腈)在Aquapore Cl8柱上对得到的混合物进行分离。用应用生物系统(AppliedBiosystems)提供的软件包处理HPLC数据。依据应用生物系统供应的肽标准物进行定量。
6.7.分枝网状结构的合成按照Demoor et al.，1.996，Eur.J.Biochem.23974-84中描述的方法，合成四聚体-核心肽树脂和三聚体-核心肽树脂。然后，将仍连接在4-甲基二苯甲基胺树脂上的四聚体及三聚体基质作为初始的肽-树脂，用于上述核心肽的自动合成。
用本领域熟知的正交合成和保护策略，能够合成出含有氨基酸组成不同的螺旋节段的分枝网状结构。
7.实施例ApoA-I肽的结构和肽结合分析用圆二色法(CD)、荧光光谱以及核磁共振(NMR)，对按照第6节，上文中描述合成的纯化肽的结构和肽结合特性进行测定。
7.1.圆二色法该实施例描述了一种用于测定本发明核心肽在游离存在于缓冲液以及存在脂类两种情况下的螺旋程度。
7.1.1.实验方法用一个装有热电细胞控制仪及样品交换器的AVIV62DS分光计(AVIV Associates，Lakewood，NJ，USA)，记录190～260nm之间的远UV圆二色谱。该装置用(+)-10-樟脑酸校准。在1和3之间，收集每个样品的，分别用10cm、5cm、1cm和0.1cm的路径长度石英Suprasil池，肽浓度为10-7M～10-4M。带宽固定为1.5nm，扫描速度为每个波长步骤1S。报道的数据是至少2或3个独立装置的平均值。
消除背景后，将光谱转化为每个残基的克分子椭圆率(θ)deg.cm-2dmol-1。用氨基酸分析测定肽浓度，并且当肽含有一个发色团(色氨酸、丹酰、萘基丙氨酸)时再用Perkin Elmerλ17UV/可见光分光光度计通过吸收光谱测定法测定肽浓度。
用游离、未结合肽(以5μM存在于5mM磷酸盐缓冲液中，pH7.4)、用肽-SUV复合物(201 EPCChol.，Ri＝50)、用肽-胶束复合物(1-肉豆蔻酰-2-羟基-锡(sn)-丙三氧基-3-磷脂酰胆碱，Ri＝100)、以及用存在于2，2，2-三氟乙醇(TFE)(5μM肽，90％体积的TFE)中游离、未结合肽，获得CD谱。
N2鼓泡5min把脂类(10mM，20∶1 EPCChol.，Avanti PoiarLipids，AL)分散在磷酸盐缓冲液(5mM，pH7.4)中，然后水浴超声仪超声波处理(1.5小时)，得到SUVs。用FPLC检验制剂的均一性。
N2鼓泡5min把脂类(6mM 1-肉豆蔻酰-2-羟基-锡(sn)-丙三氧基-3-磷脂酰胆碱，Avanti极性脂类，AL)分散在磷酸盐缓冲液(5mM，pH7.4)中，然后旋涡振荡得到胶束。
为了得到肽-SUV复合物，以100的脂类-肽摩尔比(Ri)将SUVs加入到肽(以5μM存在于5mM磷酸盐缓冲液中，pH7.4)中。
为了得到肽-胶束复合物，以100的Ri将SUVs加入到肽(以5μM存在于5mM磷酸盐缓冲液中，pH7.4)中。
37℃下记录所有谱。通过在一系列不同温度下的记录谱，测定肽210(SEQ ID NO210)作为一个温度官能团的稳定性(游离存在于缓冲液和胶束中)。
另外还测定了肽210(SEQ ID NO210)作为一个浓度官能团的螺旋程度。
7.1.2.螺旋度的测定从222nm处平均残基椭圆率(Chen et al.，1974，Biochemistry133350-3359)，或用CONTIN曲线拟合算法，版本2DP，1CD包装(Aug.1982)(Provencher，1982，Comput.Phys.Commun.27213-227，229-242)将得到的CD谱与从数据库得到的标准谱(1.6螺旋标准谱出自Provencher & Glockner，1981，Biochemistry 203337；变性蛋白标准谱出自Venyaminov et al.，1993，Anal.Biochem.21417-24)进行对比，测定出各种条件下肽的螺旋程度。用CONTIN算法提供的统计学分析法测定出可接受的拟合。所有方法的误差为±5％螺旋度。
7.1.3.结果第8.3节，下文的表X报道了游离的未结合肽(游离)、肽-SUV复合物(SUVs)、肽-胶束复合物(mics)以及肽-TFE溶液(TFE)的螺旋程度(％)。
肽210(SEQ ID NO210)在胶束中含有明显的α-螺旋结构(63％螺旋度)。而且，该α-螺旋结构在5℃～45℃温度范围内时完全稳定的(数据未显示)。存在TFE时，肽210(SEQ ID NO210)的螺旋度也增加，由于TFE的介电常数(ε＝26.7)明显小于水(ε＝78.4)，所以TFE是一种浓度为5～90％(V/V)时能够稳定α螺旋和肽间氢键的溶剂。
从第8.3节，下文的表X中可以看出，脂类存在时，那些表现出较高LCAT活性度(≥38％)的肽通常具有明显的α螺旋结构(含22或更多个氨基酸的未封闭肽或含18或更少个氨基酸的封闭肽具有≥60％螺旋结构；含18或更少个氨基酸的未封闭肽具有≥40％螺旋结构)，而几乎或根本不表现LCAT活性的肽几乎不具有α螺旋结构。但是，一些情况下，脂类存在时含有明显α螺旋结构的肽不表现明显的LCAT活性。因此，由于在脂类存在时能够形成α螺旋结构的能力似乎是LCAT活化的先决条件，所以在脂类存在时本发明核心肽调整α螺旋结构的能力被认为本发明核心肽的关键特征。
7.2荧光光谱学含色氨酸(Trp或W)或萘基丙氨酸(Nal)的情况下，用标记后的肽通过荧光测量来测试第6节，下文中合成的肽的脂类结合特性。在装有一个150W氙灯、两个单色器(激发和发射)、一个用于检测850nm处(红光)敏感度的光电倍增管R928以及一个热电磁搅拌池控制器(thermoelectric magnetic stirred cell holder)的Fluoromaxfrom Spex(Jobin-Yvon)上记录荧光光谱。微摩尔浓度范围内用Quartz Suprasil比色杯进行测量。一种裂缝可变(0.4～5nm)的仪器使得能够根据所用肽的浓度调整入射和发射强度。报道数值通常是2～4谱的平均值。通过Philips PU 8800上的吸收光谱，用Trp(Tris缓冲液中ε280nm＝5,550M-1cm-1)或Nal(甲醇中ε224nm＝92,770M-1cm-1)的吸收谱带测定肽浓度。
含有和不含脂类载体的(20mM，pH＝7.5)的情况下，在Tris-HCl缓冲液中记录290nm～450nm之间的荧光光谱。用缓冲液再水合冻干磷脂、分散以及在N2气流下尖端超声处理后，形成小单层脂质体。使用的脂类为卵PC/Chol.(20∶1)or POPC/Chol.(20∶1)。在肽浓度为2μM和温度为37℃的条件下记录光谱。含Trp的荧光标准参照物为N-乙酰色氨酰胺(N-acetyltryptophanylamide)(NATA)。
通过向浓度为2μM的肽溶液中连续加入脂类载体(裂缝5nm激发以及1.5nm发射)。要将稀释效应考虑到荧光浓度测定中。脂类浓度在10～600μM的范围内变化，脂类与肽的摩尔比(Ri)在5～300之间变化。对于Trp和Nal两种情况下激发波长均设定在280nm。
7.2.1荧光光谱实验直接记录数据，并用来自Spex的DM3000F的软件通过连接到分光荧光计上的IBM-PC进行处理。通过扣除溶剂作用，并通过把构造器给定系数的应用考虑到与波长对应的光电倍增器效应中，校正光谱。用它们的荧光发射最大值和与NATA相比色氨酸标记肽的量子产量，对所述肽的荧光光谱进行定性。通过计算荧光发射最大值处波长的迁移(λmax)以及相对于脂类浓度的发射荧光相对值，分析结合脂类的过程。相对荧光强度定义为下述比值(I-Io)λmax/Ioλmax。在对应于肽初始游离态，即不含脂类的(λmax)处测定I和Io两个值。I是在特定的脂类与肽比值处的强度，Io是不含脂类时测定的同一参数。这些变化的缺乏同所述肽与脂类之间的相互作用的缺乏相关。
7.2.2结果和讨论肽199(SEQ ID NO199)的脂类结合特性见表VII，除在第10位上含有一个W(Trp)残基外，肽199的一级序列与肽210(SEQ ID NO210)相似。
表VII荧光测定的肽199(SEQ ID NO199)与脂类载体的结合特性
在浓度为2μM的缓冲液中，肽199(SEQ ID NO199)的色氨酸荧光发射最大值(λmax)为348nm。这一点与当同NATA相比时相对暴露于水环境的色氨酸一致。如同色氨酸的包埋(色氨酸的最大荧光发射的波长从348nm变化到325nm)以及高荧光强度的升高表明的那样(见Table VII)，肽199(SEQ ID NO199)能够非常有效地结合EPC/Chol(20∶1)小单层脂质体。当脂类与肽之间的摩尔比约100时，色氨酸的包埋程度最大。
用第7.1节，上文中描述的圆二色法测定时存在脂类条件下表现出高度螺旋(对于≥22个氨基酸的未封闭肽或≤18个氨基酸的封闭肽来说≥60％；对于≤18个氨基酸的未封闭肽来说≥40％)的其他肽也显示出良好的脂类结合特性。当然，在用圆二色法筛选选定的所有肽中，只对那些能随后发出荧光的肽才对其脂类结合特性进行测试。
7.3核磁共振(NMR)该实施例描述了用于测定本发明核心肽结构的NMR方法。
7.3.1NMR样品制备把5mg肽溶解于其中含有痕量2，2-二甲基-2-硅杂-5-戊烷磺酸(DSS)作为内源化学位移参照物的90％H2O/1.0％D2O中，制备成样品。上述样品中的一些含有三氟乙醇(TFE)(表示为体积百分比)。样品总体积为500μl，肽浓度约为5mM。
7.3.2核磁共振(NMR)谱学用装有一个B-VT2000温控单元的Bruker DRX500分光计，获得500MHz处的1H核磁共振谱。用标准脉冲序列记录一及二维实验。(Two Dimensional NMR Spectroscopy，Eds.W.R.Croasmun and RMKCarlson，1994，VCH Publishers，New York，USA)。低功率预磁饱和2秒钟完成水抑制。时间比例的相增加(TpPI)和两个方向均为600Hz的谱宽，按照相敏模式(phase sensitive mode)进行二维实验。典型地，把40扫描共加入到带有2048个数据点的400t1。用FELIX95软件(Molecular Simulations)在INDIGO2工作站(Silicon Graphics)上处理数据。数据归0以得到一个2K×2K数据矩阵，并用45°移位直角正弦-圆锥函数(45°shifted squaredsine-bell function)变迹(apodized)。
7.3.3NMR测定用文献(Wuthrich，NMR of Proteins and Nucleic Acids，1986，John Wiley & Sons，New York，USA)中描述的DQFCOSY、TOCSY和NOESY波谱，应用连续测定技术得到完全质子共振测定。通过从相应的实验数值中减去列表显示的无规卷曲化学位移(Wishart and Sykes，1994，Method.Enz.239363-392)，计算出HN和Hα质子的次级化学位移。
7.2.3结果与讨论常规考虑。由于在NMR波谱所需的高浓度下两亲性螺旋肽往往会在水溶液中聚集，所以这就使得难以得到高分辨率波谱。已知TFE能够溶解肽，此外还能稳定具有螺旋特性的肽的螺旋构象。从NMR波谱的发现的表明肽210(SEQ ID NO210)是一个代表性的实例。对Segrest的共有22聚体(SEQ ID NO75)进行了对照研究。
次级化学位移。氨基酸的质子化学位移取决于残基类型以及肽或蛋白中的局部二级结构(Szlagyi，1.995，Progress in NuclearMagnetic Resonance Spectroscopy 27325-443)。因此，通过比较实验位移和无规卷曲构象列表显示的数值，能够鉴定规则二级结构。
典型地，α螺旋的形成能导致Hα共振的高磁场(负)位移。通常，把观察到几个连续残基的高磁场(负)位移作为螺旋结构的证据。肽210(SEQ ID NO21.0)在25％TFE、295K条件下，的Hα次级位移表明4～15位残基出现明显的负位移。与肽21(SEQ ID NO21.0)相比，在共有22聚体的Hα化学位移中发现了细微的差别。相对于从无规卷曲观察到的化学位移，存在于α螺旋区域中的氨基酸残基酰胺氢(amide hydrogens)的化学位移也是高磁场位移。此外，还能观察到HN位移的周期性，这反映了螺旋翻转的周期。沿序列位移变化的幅度与螺旋肽的两亲性相关。较高的疏水矩能够导致更加显著的振动(Zhou et al.，1992，J.Am.Chem.Soc.11.44320-4326)。肽210(SEQ ID NO210)在25％TFE、295K条件下的HN次级位移表明了一种与螺旋的两亲性本质一致的摆动性(图7B)。
氨基酸的取代能够导致更加明显的沿全序列的周期性(图7B)。该模式清楚地反映了与Segrest的共有22聚体相比，肽210(SEQ IDNO21.0)较强的两亲性本质。可以识别出存在着4～5个螺圈。
酰胺质子的次级位移受从氢键到距离螺旋一个螺圈的羰基氧的长度影响。因此，观察到的化学位移值的周期性反映出不同的氢键长度。这种差异与螺旋骨架的整个弯曲螺旋的形状有关。疏水残基位于凹面上。肽210(SEQ ID NO210)的次级位移表明了一种弯曲的α螺旋构象。
8.实施例LCAT活化分析对按照上述第6节中描述合成的肽的活化LCAT的能力进行体外分析。在LCAT分析中，用等效质量的肽ApoA-I(分离自人血浆中)对由卵磷脂酰胆碱(EPC)或μM棕榈酰-2-油烯基-磷脂酰胆碱(POPC)和放射性标记的胆固醇组成的基质载体(小单层脂质体或″SUVs″)进行预温育。用作阳性对照的原始ApoA-I表现出100％的活化活性。肽的″特定活性″(即，活性单元(LCAT活化)/单位质量)可以计算为能最大程度活化LCAT的肽浓度。例如，可以对肽的一系列浓度(例如，有限稀释)进行分析，测定肽的“特定活性”--能在分析中特定时间点(例如，1小时)实现最大程度LCAT活化(即，胆固醇到胆固醇酯的转化百分比)的浓度。当测绘例如在1小时时间点胆固醇相对于所用肽浓度的转化百分比时，可以将“特定活性”定义为达到测绘曲线上平台的肽浓度。
8.1基质囊泡的制备LCAT分析中使用的囊泡是由卵磷脂酰胆碱(EPC)或1-棕榈酰-2-油烯基-磷脂酰胆碱(POPC)和胆固醇按20∶1的摩尔比组成的SUVs。为了制备足以进行40次分析的囊泡原液，将7.7mg EPC(或7.6mg POPC；10μmol)、78μg(0.2μmol)4-14C-胆固醇、116μg胆固醇(0.3μmol)溶解于5ml二甲苯中，并冻干。之后，将4ml分析缓冲液加入到干粉中，4℃下在氮保护气氛中超声波处理。超声处理的条件为Branson 250超声波仪、10mm头、6×5分钟；分析缓冲液10mM Tris、0.14M NaCl、1mM EDTA、pH7.4)。将超声波处理后的混合物在14000rpm(16,000×g)下离心6次，每次5分钟。将得到的上清液用于酶分析。
8.2 LCAT的纯化对于LCAT的纯化，用葡聚糖硫酸酯/Mg2+处理人血浆得到无脂蛋白血清(LPDS)，按照表IX中总结的代表性纯化过程，将LPDS在苯基琼脂糖凝胶(Phenylsepharose)、Affigelblue、伴刀豆球蛋白A(ConA)琼脂糖凝胶和抗-ApoA-I亲和层析柱顺序层析，具体如下表IXLCAT的纯化
8.2.1LPDS的制备为了制备LPDS，将500ml血浆加入到50ml葡聚糖硫酸酯(MW＝500000)溶液中。搅拌20分钟4℃下3000rpm(16,000×g)离心30分钟。将上清(大约500ml)用于进一步纯化。
8.2.2苯基琼脂糖凝胶层析下列物质和条件用于苯基琼脂糖凝胶层析。固相 苯基琼脂糖凝胶高速流，高物质等级(high subst.Grade)，Pharmacia柱体 XK26/40，凝胶床高度33cm，V＝约175ml流速 200ml/hr(样品)80ml/hr(蒸馏水)洗涤 200ml/hr(缓冲液)洗脱 80ml/hr(蒸馏水)缓冲液 10rnM Tris，140rnM NaCl，1rnM EDTA pH7.4，0.01％叠氮钠用Tris-缓冲液平衡柱体，向500ml LPDS中加入29g NaCl，并加到柱体上。用几倍体积的Tris-缓冲液洗涤直到280nm波长处的吸光度约在基线上为止，然后开始用蒸馏水洗脱。收集含蛋白的级分(池容量180ml)，并将其用于Affigelblue层析。
8.2.3.Affigelblue层析4℃下，用20rnM Tris-HCl，pH7.4，0.01％叠氮钠，过夜透析苯基琼脂糖凝胶的收集液。超滤(Amicon YM30)将收集液体积缩小到50～60ml，并将其上样到Affigelblue柱上。固相 Affigelblue，Biorad，153-7301柱，XK26/20，凝胶床高度 约13cm；柱体容积约70ml流速 上样15ml/h洗涤 50ml/h用Tris-缓冲液平衡柱体，将苯基琼脂糖凝胶收集液加到柱体上。平行地开始收集级分。用Tris-缓冲液洗涤。将收集到的级分用于ConA层析。
8.2.4 ConA层析用Amicon(YM30)将Affigelblue收集液体积缩小到50～60ml，4℃下，并用ConA初始缓冲液(1mM Tris HCl PH7.4；1mM MgCl2，1mMMnCl2，1mM CaCl2，0.01％叠氮钠)过夜透析苯基琼脂糖凝胶的收集液。固相 ConA琼脂糖凝胶(Pharmacia)柱体 XK26/20，凝胶床高度14cm(75ml)流速 上样40ml/h洗涤(用初始缓冲液)90ml/h洗脱50ml/h，0.2M甲基-α-D-甘露糖苷溶于lmM Tris，pH7.4。收集甘露糖苷洗脱液的蛋白级分(110ml)，超滤(YM30)将体积缩小到44ml。将ConA收集液分装为2ml的等分试样，-20℃保存。
8.2.5抗-ApoA-I亲和层析在Affigel-Hz基质(Biorad)上进行抗-ApoA-I亲和层析，该基质上已经共价偶联有抗-ApoA-I抗体。XK16/20，V＝16ml。用PBS pH7.4平衡柱体。在上样到柱体之前用PBS对2ml ConA收集液透析2小时。流速 上样15ml/小时洗涤(PBS)40ml/小时。将收集到的蛋白级分(V＝14ml)用于LCAT分析。
用0.1M柠檬酸盐缓冲液(pH4.5)洗脱结合的A-I(100ml)，使柱体再生，该操作后立即用PBS再平衡。
8.3结果LCAT活化分析的结果见表X，下文。
表X用例举的核心肽显示LCAT活化
1/Segrest′s的共有22聚体肽(Anantharamaiah et al.，1990，Arteriosclerosis 10(1)95-105)
2/[A13]共有22聚体肽(Anantharamaiah et a1.，1990，Arteriosclerosis 10(1)95-105).
3/[R13]共有22聚体肽(Anantharamaiah et al.，1990，Arteriosclerosis 10(1)95-105).
4/ID-3肽(Labeur et al.，1997，Arteriosclerosis，Thrombosis and Vascular Biology 17(3)580-588).5/Ac-18AMOD-C(O)NH2肽(Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.262(19)9389-9396).6/Ac-18AM4-C(O)NH2肽(Brasseur，1993，Biochim.Biophys.Acta 11701-7).
7/18L肽(Segrest et al.，1990，ProteinsStructure，Function and Genetics 8103-117).8/18A肽(Anantharamaiah et al.，1985，J.Biol.Chem.260(18)10248-10255).9/18AM4肽(Rosseneu et al.，WO93/25581；Corijn et al.，1993，Biochim.Biophys.Acta 11708-16).10/[G]u1，6；Leu5，11，17]18A 肽(Epand et al.，1987，J.Biol.Chem.262(19)9389-9396).11/Ac-18AM3-C(O)NH2(Rosseneu et al.，WO93/25581).12/Ac-18AM2-C(O)NH2(Rosseneu et al.，WO93/25581).
13/Ac-18AMl-C(O)NH2(Rosseneu et al.，WO93/25581).
表X中，*表示N-末端乙酰化且C-末端酰胺化的肽；1表示N-末端丹磺酰化的肽；sp表示在实验条件下溶解出现问题的肽；X为Aib；Z为Nal；O为Orn；He(％)代表螺旋百分度；mics代表胶束；以及～代表缺失的氨基酸。
9.实施例ApoA-I激动剂的药物动力学用下列实验能够表明，ApoA-I激动剂能稳定地存在于循环系统，并于血浆中的HDL成分结合。
9.1.放射性标记肽的合成偶联14C-标记氨基酸作为N-末端氨基酸，合成放射性标记肽。根据L.Lapatsanis，Synthesis，1983，671-173，进行合成。简而言之，将250μM未标记N-末端氨基酸溶解于225μl 9％Na2CO3溶液中，并加入到9.25MBq(250μM)14C-标记的N-末端氨基酸溶液(9％Na2CO3)中。将该液体冷却到0℃，与溶解于0.75ml DMF中的600μM(202mg)9-芴基甲基-N-琥珀酰碳酸(Fmoc-OSu)混合，室温振荡4小时。然后用二乙醚(2×5ml)和氯仿(1×5ml)抽提混合物，用30％HCl酸化剩余的水相(5×8ml)。Na2SO4干燥有机相，滤出，在氮流下将体积缩小到5ml。用TLC(CHCl)∶MeOH∶Hac，9∶1∶0.1v/v/v，稳定相RPTLC silicagel 60，Merck，Germany)测算纯度。
将含14C-标记Fmoc氨基酸的氯仿溶液直接用于肽的合成。按照第6节中的描述，自动合成一种含2～22氨基酸的肽树脂。用Edman降解法测定所述肽的序列。按照第6.1节中的描述进行偶联。
9.2.小鼠体内的药物动力学每个实验中，向用一般鼠料或特殊的Thomas-Harcroft改良食物(导致VLDL和IDL胆固醇剧烈升高)饲喂的小鼠腹膜内注射2.5mg/kg放射性标记后的肽。在多个时间间隙，取血样用于血浆放射性分析。
9.3.人血清中的稳定性下面的描述显示了本发明ApoA-I激动剂在人血清中的稳定性。
9.3.1.实验方法取100μg14C-标记肽(按照第9.1节，上文中的描述制备而成)，与2ml of新鲜的人血浆混合(37℃下)，然后立即(对照样品)或37℃下温育8天(测试样品)后分层。用等体积的2∶1(v/v)氯仿∶甲醇抽提，实现分层。将样品上样到一个反相C18 HPLC柱上，并用线性梯度(33min内25～58％)的乙腈(含0.1％TFA)洗脱。然后，测定洗脱分布图的吸光度(220nm)和放射活性。
9.4.前-β样颗粒的形成下面的描述显示了ApoA-I激动剂形成前-β样颗粒的能力。
9.4.1.实验方法在浓度为d＝1.21g/ml的条件下，通过KBr密度超速离心分离人HDL得到顶层级分，然后进行Superose 6凝胶过滤层析从其他脂蛋白中分离出HDL。根据用Bradford蛋白分析测定的蛋白成分，用生理盐水将分离到的HDL调整到终浓度为1.0mg/ml。从分离的HDL制剂中取出300μl的一等份试样，用100μl14C-标记肽37℃下温育2分钟。对5份单独温育实验样品进行分析，其中包括一份含100μl生理盐水的空白对照和4份14C-标记肽的稀释液(i)0.20μg肽∶HDL，比例为1∶15；(ii)0.30μg肽∶HDL，比例为1∶10；(iii)0.60μg肽∶HDL，比例为1∶5；以及(iv)1.00μg肽∶HDL，比例为1∶3。温育2小时后，将200μl等份试样(总体积＝400μl)上样到Superose 6凝胶层析柱上，进行脂蛋白分离和分析，取100μl用于测定上样到柱体上的总放射性。
9.5.ApoA-I激动剂与人脂蛋白的结合9.5.1.实验方法将14C-标记肽与每种脂蛋白(HDL，LDL和VLDL)以及不同脂蛋白混合物进行温育，测定本发明ApoA-I激动剂与人脂蛋白级分结合的能力。
在d＝1.21g/ml条件下，用KBr密度超速离心分离人HDL、LDL和VLDL，在Superose 6B大小排阻层析柱上通过FPLC纯化(进行层析的条件流速为0.7ml/min，载样缓冲液为10mM Tris(pH8)、115mM NaCl、2mM EDTA和0.01％NaN3)。按肽∶脂蛋白为1∶5(质量比)的比例，37℃下用HDL、LDL和VLDL温育脂蛋白2小时。将所需量的脂蛋白(根据生产100μg需要量确定的体积)与0.2ml肽原液(1mg/ml)混合，用0.9％的NaCl将溶液扩容到2.2ml。
37℃温育2小时后，取一等份试样(0.1ml)用于液体闪烁计数，测定总放射性，用KBr将剩余温育混合液的浓度调整到1.21g/ml，用Beckman台式离心机及TLA 100.3转头，样品在4℃、100,000rpm(300,000g)下离心样品24小时。从每个样品顶层各取0.3ml，对得到的上清液进行总共5级分的分级分离。每个级分取0.05ml用于液体闪烁计数。顶层的两个级分中含有浮选脂蛋白，其他级分(3～5)中对应于溶液中的蛋白质/肽。
9.6.人血浆中本发明ApoA-I激动剂选择性地结合HDL脂类9.6.1.实验方法为了说明在人血浆中本发明ApoA-I激动剂能选择性地结合HDL蛋白，将20、40、60、80和100μg14C-标记肽与2ml人血浆在37℃下温育2小时。把浓度调整至1.21g/ml分离脂蛋白，用TLA 100.3转头在4℃、100,000rpm(300,000g)下离心36小时。取顶层的900μl(从300μl级分中)用于分析。每300μl级分中取50μl用于放射性计数，每300μl级分中取200μl用FPLC(Superose 6/Superose12混成柱)进行分析。
10.实施例ApoA-I激动剂能促进胆固醇的排出为了说明本发明ApoA-I激动剂能促进胆固醇的排出，将肝癌细胞铺板在6-孔培养皿，生长至汇合。干燥胆固醇用3H-胆固醇标记细胞，然后向磷酸盐缓冲液(BSA)中加入1％牛血清白蛋白，超声处理该溶液，向细胞中加入0.2ml该标记溶液和1.8ml培养基，从而使每孔中含有2μCi放射活性。用标记培养基培养细胞24小时。
肽(或蛋白)制备肽(蛋白)∶DMPC之间的比例为1∶2的DMPC复合物。为了制备出该复合物，向DMPC的PBS溶液中加入肽或原始人ApoA-I蛋白，室温温育过夜，期间该溶液变得澄清。终溶液中肽或蛋白浓度约为1mg/ml。
除去细胞中的标记培养基，加入复合物前用PBS洗涤细胞。向每种细胞中加入1.6ml培养基，接着用肽(或蛋白)DMPC复合物和足量PBS将终体积调至每孔2ml。肽或ApoA-I终浓度约为1、2.5、5、7.5和25μg/ml培养基。37℃下温育24小时后，除去培养基，用2ml1％BSA/PBS洗涤细胞，接着用PBS洗涤2次，每次2ml。用液体闪烁计数测定排出到培养基中的3H-胆固醇的量。
11.实施例ApoA-I激动剂在动物模型系统中的应用用下列方法可以显示出本发明ApoA-I在兔体内的功效。
11.1.磷脂/肽复合物的制备用胆固醇透析法制备由磷脂(DPPC)和肽组成的小圆盘状颗粒。将磷脂溶解于氯仿中，氮气流下干燥。以1～2mg/ml的浓度将肽溶解于缓冲液(盐)。将脂类薄膜再溶解在含胆固醇的缓冲液中(43℃)，按3∶1的磷脂/肽比例加入肽溶液。43℃下过夜温育该混合物，然后43℃透析(24小时)，室温透析(24小时)，4℃透析(24小时)，在温度点更换3次缓冲液。过滤消毒该复合物用于注射，4℃保存。
1.1.2.11.2.肽/磷脂颗粒的分离和层析用凝胶过滤柱(Superose 6 HR)分离所述颗粒。通过测算各种级分中的磷脂浓度，鉴定出含该颗粒峰的位置。从洗脱体积中可以测定出Stokes粒径。通过16小时酸解后测定苯丙氨酸含量(用HPLC)，测定出复合物中的肽浓度。
11.3.注射兔按照单次快速浓注不超过10-15ml的剂量，用磷脂/肽复合物静脉注射(5-10mg/kg体重肽或10mg/kg体重ApoA-I(对照)，表示为肽或蛋白含量)雄性新西兰大白兔(2.5～3kg)。操作前轻微地镇静动物。在注射前和注射后5、15、30、60、240和1440分钟这几个时间点，取血样(用EDTA收集)。测定每种样品的血细胞比容(Hct)。分装样品，-20℃保存备用。
11.4.兔血清的分析血浆脂类，按照制造商的建议(Boehringer Mannheim，Mannheim，Germany and Biomerieux，69280，Marcy-l’etoile，France)，用商业化的分析手段酶学方法测定总血浆胆固醇、血浆甘油三酯和血浆磷脂。
脂蛋白谱 用蔗糖浓度梯度离心，测定出将血浆分离成为其脂蛋白级分后所得级分的血浆脂蛋白谱。收集级分，用酶学方法测量胆固醇含量。
12.实施例用共冻干方法制备肽-脂类复合物用下列方法制备肽-脂类复合物。
将1mg肽210(SEQ ID NO210)溶解于盛在一个1ml透明澈带盖细颈瓶(Waters #WAT025054)内的250μl HPLC级甲醇(PerkinElmer)中。室温下，不时地振荡10分钟加速肽的溶解。向该混合物中加入含3mg二棕榈酰-磷脂酰胆碱(DPPC；Avanti极性脂，99％纯度，产品号850355)的等份试样，该等份试样取自100mg/ml的甲醇原液。加入甲醇使混合物体积扩容到400μl，室温下，进一步间歇地振荡该混合物10分钟。向试管中加入200μl甲醇(Sigma-Aldrich 99％纯，HPLC-级)，振荡该试管10秒钟。用20号注射针头在试管顶部穿2个小孔，将该试管置于液氮中冷冻15秒，将该试管真空冻干过夜。向试管中加入200ml 0.9％NaCl溶液。振荡该试管20秒钟。此时，试管中的溶液呈乳状。然后，41℃水浴温育该试管30分钟。41℃温育几分钟后，溶液变得澄清(即，外观类似于水)。
12.1.用Superose 6凝胶层析特征描述复合物用上述共冻干方法制备含肽210的肽-磷脂复合物。按重量计算，该制剂中含1mg肽和3mg DPPC。用0.9％NaCl重配混合物后，取该化合物20μl(含100μg肽210)，用0.9％NaCl作为液相以0.5ml/minute的流速上样到Pharmacia Superose 6柱上。用280nm处的吸光率或光散射监测层析。收集1ml级分。用bioMerieuxPhospholipides Enzymatique PAP 150试剂盒(#61491)，按照厂商提供方法对含有20μl上述级分的试样进行磷脂含量的分析。既含磷脂又出现UV吸光率的大多数都回收在几个约15.1mls处出现峰的级分中。洗脱体积对应于106埃的Stokes粒径。
为了进行比较，取20μl人HDL2，在使用与肽210(SEQ ID NO210)复合物同样条件和同样柱体的情况下单独层析。按照下述方法制备HDL2融解300ml冰冻人血浆(Mannheim Blutspendzentrale#1185190)，用固体溴化钾将浓度调至1.25，在20℃、40,000RPM的条件下，用Ti45转头(Beckman)离心45小时。收集浮选层，用蒸馏水透析，用固体溴化钾将浓度调至1.07，按照上述条件离心70小时。收集底层(试管底之上1cm)，加入0.01％叠氮钠，层析前4℃保存4天。用波长为254nm处的吸光度或光散射监测柱体洗脱液。用一系列分子量及Stokes粒径已知的蛋白质作为标准物校准柱体，用来计算颗粒的Stokes粒径(Pharmacia Gel FiltrationCalibration Kit Instruction Manual，Pharmacia LaboratorySeparation，Piscataway，NJ，revised April，1985)。对应于108nm的Stokes直径，用14.8ml存留体积洗脱HDL2。
13.实施例抗体的制备为了制备抗本发明ApoA-I激动剂的抗体，将肽共轭偶联到匙孔蝛血蓝蛋白(KLH；1mg peptide对应10mg KLH)上。将KLH偶联物(LMG)悬浮在弗氏完全佐剂中，在零时间点注射兔，第4周时用0.25mg KLH偶联物加强免疫，并在第5周时再免疫一次。用ELISA测试取血前和6周取血后抗真实抗原的抗体滴度。
各自收集2个兔的制备血样。用下述方法分离出抗肽抗原的特异性抗体1.按照生产者提供的方法，将游离肽连接到溴化氰活化后的Sepharose 4B(Pharmacia)上。
2.用抗血清预吸附无关肽柱体以及无关的人和小鼠血清蛋白柱体。
3.让预吸附后的抗血清通过相应肽的柱体(见第1点)。
4.用0.1M硼酸盐缓冲液(pH8.2)洗涤柱体，用从pH4.0到pH3.0再到pH2.0(0.1M甘氨酸缓冲液)的低pH梯度，以及最后用0.1M HCl洗脱结合抗体。
5.用过量硼酸盐中和洗脱后的物质，超滤(Amicon，YM30)浓缩，并用硼酸盐透析。
6.用280nm处的吸光率测定蛋白浓度。
用纯化的人ApoA-I或纯化的小鼠ApoA-I，通过直接ELISA结合实验测试得到的抗体的种特异性。
本发明不仅限于本发明描述的特定实施方案的范围，这些实施方案的给出只是为了说明本发明的单个方面，功效等同的方法和成分都在本发明的范围之内。实际上，从上述的说明书及附图中，本领域技术人员能够容易地得到除本发明给出或描述的内容之外对本发明所做的各种改进。因此，这类改进应当落在所附权利要求的范围之内。
本发明中引用的所有文献，在此引入仅作参考。
序列表(1)一般资料(i)申请人Dasseux，Jean-LouisSekul，RenateButtner，KlausCornut，IsabelleMetz，Gunther(ii)发明题目载脂蛋白A-I激动剂及其治疗脂血异常症的用途(iii)序列数254(iv)通信地址(A)收信人Pennie & Edmonds LLP(B)街道美国大道1155(C)城市纽约(D)州纽约(E)国家美国(F)邮政编码10036-2811(V)计算机可读形式(A)介质类型软盘(B)计算机IBM兼容机(C)操作系统DOS(D)软件FastSEQ Version 2.0(vi)目前的申请资料(A)申请号PCT/US98/20328(B)申请日1998.9.28(C)分类号(vii)在先申请资料(A)申请号08/940，093(B)申请日1997.9.29(viii)律师/代理人信息(A)姓名Coruzzi，Laura A(B)注册号30，742(C)资料/文档号9196-006-228(ix)通讯信息(A)电话650-493-4935(B)传真650-493-5556(C)电报66141 PENNIE(2)SEQ ID NO1的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置16(xi)序列描述Xaa＝萘基丙氨酸Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Xaa1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO2的资料(i)序列特征(A)长度23个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO2Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys20(2)SEQ ID NO3的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO3Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Trp1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO4的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO4Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Ash Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO5的资料(i)序列特征(A)长度23个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝D-Pro(xi)序列描述SEQ ID NO5Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys Lys20(2)SEQ ID NO6的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO6Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO7的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO7Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO8的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO8Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO9的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO9Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Gly Asn Glu Leu Leu Glu Ala15 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO10的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置17(D)其他信息Xaa＝萘基丙氨酸(xi)序列描述SEQ ID NO10Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Xaa Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO11的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO11Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO12的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO12Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Gly Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO13的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO13Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO14的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置18(D)其他信息Xaa＝Orn
(A)名称/关键词其他(B)位置20(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置22(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO14Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa20(2)SEQ ID NO15的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO15Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO16的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO16Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO17的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO17Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO18的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO18Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO19的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝D-Pro(xi)序列描述SEQ ID NO19Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO20的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO20Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO21的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝D-Pro(xi)序列描述SEQ ID NO21Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO22的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO22Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Gly1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO23的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO23Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO24的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO24Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO25的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO25Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO26的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO26Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO27的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置14(D)其他信息Xaa＝萘基丙氨酸(xi)序列描述SEQ ID NO27Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO28的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO28Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO29的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO29Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO30的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1…22(D)其他信息N-末端丹酰化肽(xi)序列描述SEQ ID NO30Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO31的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO31Pro Val Leu Asp Leu Phe Leu Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO32的资料(i)序列特征
(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO32Xaa Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO33的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO33Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO34的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置5(D)其他信息Xaa＝萘基丙氨酸(xi)序列描述SEQ ID NO34Pro Val Leu Asp Xaa Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO35的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO35Pro Val Leu Asp Trp Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO36的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO36Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO37的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO37Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO38的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO38Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Trp Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO39的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO39Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala1 5 10 15Leu Lys Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO40的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO40Pro Val Leu Asp Leu Phe Asn Glu Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO41的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO41Pro Val Leu Asp Leu Trp Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO42的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO42Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Trp Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO43的资料(i)序列特征
(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO43Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO44的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1…22(D)其他信息所有遗传编码氨基酸都为D-构象(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO44Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Ash Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO45的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO45Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO46的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO46Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO47的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO47Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala Lau1 5 10 15Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO48的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝D-Pro(A)名称/关键词其他(B)位置2(D)其他信息Xaa＝D-Val(xi)序列描述SEQ ID NO48Xaa Xaa Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO49的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO49Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Glu Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO50的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO50Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Trp Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO51的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO51Pro Val Leu Asp Leu Phe Trp Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO52的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO52Pro Val Trp Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO53的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO53Val Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO54的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO54Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Trp Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO55的资料(i)序列特征
(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO55Pro Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln1 5 10 15Lys Leu Lys(2)SEQ ID NO56的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO56Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Lys Lys20(2)SEQ ID NO57的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO57Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Lys Ala1 5 10 15Leu Glu Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO58的资料(i)序列特征(A)长度21个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO58Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu20(2)SEQ ID NO59的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO59Leu Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO60的资料(i)序列特征(A)长度19个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO60Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln(2)SEQ ID NO61的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO61Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Trp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO62的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO62Pro Val Leu Asp Glu Trp Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO63的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO63Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO64的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO64Pro Trp Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO65的资料(i)序列特征(A)长度21个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置12
(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO65Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu1 5 10 15Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO66的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO66Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Asn Leu Leu Glu Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO67的资料(i)序列特征(A)长度21个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO67Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu1 5 10 15Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO68的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO68Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Lys Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO69的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO69Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Lys Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO70的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO70Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Tyr Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO71的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置14(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO71Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Xaa Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO72的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO72Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO73的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO73Pro Val Leu Asp Glu Phe Trp Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO74的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO74Pro Val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO75的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO46Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO76的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO76Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Phe Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO77的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO77Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Lys Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO78的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO78Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Asp Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO79的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO79Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO80的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO80Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO81的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO81Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO82的资料(i)序列特征(A)长度20个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置11(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO46Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys1 5 10 15Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO83的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13
(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO83Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Trp Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO84的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO84Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO85的资料(i)序列特征(A)长度21个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO85Pro Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu1 5 10 15Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO86的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO86Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Asp Glu Leu Leu Asn Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO87的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...22(D)其他信息所有氨基酸都为D-构象(xi)序列描述SEQ ID NO87Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Gln Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO88的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO88Pro Val Leu Asp Lys Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO89的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO89Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Trp Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO90的资料(i)序列特征(A)长度19个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置10(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO90Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala Leu Lys Gln1 5 10 15Lys Leu Lys(2)SEQ ID NO91的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO91Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO92的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO92Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Tyr Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO93的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO93Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Lys Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO94的资料(i)序列特征
(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO94Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Ala Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO95的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO95Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO96的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...22(D)其他信息所有遗传编码氨基酸都为D-构象(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO96Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO97的资料(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO97Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu1 5 10 15(2)SEQ ID NO98的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO98Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO99的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO99Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg1 5 10 15Phe Leu Asp Leu Val Pro20(2)SEQ ID NO100的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...22(D)其他信息所有氨基酸均为D-构象(xi)序列描述SEQ ID NO100Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO101的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO101Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Trp Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO102的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO102Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Leu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Glu Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO103的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO103Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO104的资料(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO104Pro Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys Leu Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO105的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO105Pro Ala Ala Asp Ala Phe Arg Glu Ala Ala Asn Glu Ala Ala Glu Ala1 5 10 15Ala Lys Gln Lys Ala Lys20(2)SEQ ID NO106的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO106Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO107的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...22
(D)其他信息所有氨基酸均为D-构象(xi)序列描述SEQ ID NO93Lys Leu Lys Gln Lys Leu Ala Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Arg1 5 10 15Phe Leu Asp Leu Val Pro20(2)SEQ ID NO108的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO108Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Trp Leu Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO109的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO109Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Arg Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO11O的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(A)名称/关键词其他(B)位置14(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO110Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Xaa Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO111的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO111Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Trp Glu Xaa Trp Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO112的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO112Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Ser Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO113的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO113Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Pro Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO114的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO114Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Met Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO115的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征
(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO115Pro Lys Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO116的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO116Pro His Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO117的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO117Pro Glu Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO118的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置13(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO118Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Xaa Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Glu Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO119的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置17(D)其他信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO119Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Xaa Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO120的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词(B)位置16(C)其它信息Xaa＝Aib(xi)序列描述SEQ ID NO120Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Xaa1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO121的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链
(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO121Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Trp Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO122的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO122Pro Val Leu Asp Glu Phe Arg Glu Lys Leu Asn Glu Glu Leu Glu Trp1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO123的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO123Gln Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO124的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置18(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置20(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置22(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO124Pro Val Leu Asp Leu Phe Xaa Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa20(2)SEQ ID NO125的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO125Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO126的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO126Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Gly Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO127的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO127Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Leu1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO128的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO128Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Glu Phe1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO129的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO129Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO130的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO130Pro Val Leu Glu Leu Phe Asn Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO131的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO131Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Arg Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO132的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO132Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Asn Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO133的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
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(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置18(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置20(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置22(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO140Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Xaa Gln Xaa Leu Xaa20(2)SEQ ID NO141的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO141Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO142的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO142Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO143的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...22(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化的肽(xi)序列描述SEQ ID NO143Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Gly Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Lys Gln Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO144的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1(D)其他信息Xaa＝Pro(xi)序列描述SEQ ID NO144Xaa Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO145的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO145Gly Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO146的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO146Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO147的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO147Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Phe Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO148的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO148Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO149的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO149Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO150的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO150Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO151的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO151Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Gly Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO152的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO152Pro Val Phe Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO153的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO153Ala Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO154的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO154Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Gly Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO155的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO155Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Trp Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO156的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO156Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO157的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO157Pro Val Leu Glu Phe Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO158的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO158Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO159的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO159Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO160的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO160Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Trp1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO161的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO161Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO162的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO162Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Trp Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO163的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO163Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Trp Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO164的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO164Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Trp Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO165的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO165Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Leu1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO166的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO166Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO167的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO167Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Gly Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO168的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO168Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO169的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO169Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO170的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置12(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置19(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置20(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置22(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO170Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Xaa Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa202)SEQ ID NO171的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO171Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Leu1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO172的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO172Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Gly Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO173的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO173Pro Val Leu Asp Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Leu1 5 10 15Leu Asn Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO174的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征
(A)名称/关键词其他(B)位置1...22(D)其他信息所有氨基酸均为D-构象(xi)序列描述SEQ ID NO174Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO175的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO175Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Glu Leu1 5 10 15Leu Asn Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO176的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO176Pro Val Leu Glu Leu Trp Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO177的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO177Gly Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO178的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO178Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Glu Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Arg202)SEQ ID NO179的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO179Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO180的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO180Pro Val Leu Glu Leu Phe Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Arg202)SEQ ID NO181的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO181Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Trp Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO182的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO182Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu G1u Lys Leu Leu Glu Ala1 5 10 l5Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO183的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO183Pro Leu Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO184的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO184Pro Val Leu Glu Leu Phe Leu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Trp Gln Lys Lys Leu Lys20(2)SEQ ID NO185的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置19(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置20(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置22(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO185Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Xaa Xaa Leu Xaa202)SEQ ID NO186的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO186Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Gln Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO187的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO187Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Asn Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO188的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO188Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Asp Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO189的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO189Asp Val Leu Glu Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Lys202)SEQ ID NO190的资料(i)序列特征(A)长度22个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO190Pro Val Leu Glu Phe Trp Asp Asn Leu Leu Asp Lys Leu Leu Asp Ala1 5 10 15Leu Gln Lys Lys Leu Arg20(2)SEQ ID NO191的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO191Pro Val Leu Asp Leu Leu Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO191的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO192Pro Val Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO193的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO193Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO194的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO194Pro Val Leu Glu Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO195的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO195Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO196的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO196Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Asn Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO197的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO197Pro Leu Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO198的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO198Gly Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO199的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO199Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO200的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO200Asn Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO201的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO201Pro Leu Leu Asp Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO202的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO202Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Leu Arg Gln Lys1 5 10 15Leu Arg(2)SEQ ID NO203的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO203Ala Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO204的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO204Pro Val Leu Asp Phe Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO205的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO205Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Trp Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO206的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO206Pro Leu Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO207的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO207Pro Val Leu Glu Leu Leu Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO208的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO208Pro Ala Leu Glu Leu Phe Lys Asp Leu Leu Glu Glu Leu Arg Gln Arg1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO209的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO209Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO210的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO210Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO211的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(A)名称/关键词其他(B)位置14(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置16(D)其他信息Xaa＝Orn(A)名称/关键词其他(B)位置18(D)其他信息Xaa＝Orn(xi)序列描述SEQ ID NO211Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Xaa Gln Xaa1 5 10 15Leu Xaa(2)SEQ ID NO212的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征
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(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO215Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Trp Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO216的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO216Pro Val Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO217的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO217Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Leu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO218的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO218Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Leu Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO219的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO219Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Trp Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO220的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO220Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Gln Lys Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO221的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO221Asp Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO222的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO222Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Lys Lys(2)SEQ ID NO223的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO223Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Ala Gln Leu1 5 10 15Lys Lys(2)SEQ ID NO224的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO224Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Trp Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO225的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO225Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Ala Glu Ala Leu Ala Gln Leu1 5 10 15Lys Lys(2)SEQ ID NO226的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO226Pro Val Leu Asp Ala Phe Arg Glu Leu Gly Glu Ala Leu Leu Gln Leu1 5 10 15Lys Lys(2)SEQ ID NO227的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO227Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Gly Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO229的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO228Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Gly Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO229的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO229Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Gly Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO230的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO230Pro Val Leu Glu Leu Phe Glu Arg Leu Leu Glu Asp Leu Gln Lys Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO231的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO231Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Glu Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO232的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸
(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO232Pro Leu Leu Glu Leu Phe Lys Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15Leu Lys(2)SEQ ID NO233的资料(i)序列特征(A)长度(B)类型(C)链型(D)拓扑结构(ii)分子类型(xi)序列描述SEQ ID NO233该序列被有意省略(2)SEQ ID NO234的资料(i)序列特征(A)长度(B)类型(C)链型(D)拓扑结构(ii)分子类型(xi)序列描述SEQ ID NO234该序列被有意省略(2)SEQ ID NO235的资料(i)序列特征(A)长度(B)类型(C)链型(D)拓扑结构(ii)分子类型(xi)序列描述SEQ ID NO235该序列被有意省略(2)SEQ ID NO236的资料(i)序列特征(A)长度(B)类型(C)链型(D)拓扑结构(ii)分子类型(xi)序列描述SEQ ID NO236该序列被有意省略(2)SEQ ID NO237的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO237Leu Asp Asp Leu Leu Gln Lys Trp Ala Glu Ala Phe Asn Gln Leu Leu1 5 10 15Lys Lys(2)SEQ ID NO238的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO238Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO239的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO239Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO240的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO240Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Ala Phe(2)SEQ ID NO241的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO241Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu1 5 10 15Phe Phe(2)SEQ ID NO242的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO242Gly Ile Lys Lys Phe Leu Gly ser Ile Trp Lys Phe Ile Lys Ala Phe1 5 10 15Val Gly(2)SEQ ID NO243的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO243Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Phe Lys Glu1 5 10 15Ala Phe(2)SEQ ID NO244的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO244Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Ala Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Ala Phe(2)SEQ ID NO245的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO245Asp Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Val Phe Glu Lys Phe Lys Glu1 5 10 15Phe Phe(2)SEQ ID NO246的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO246Glu Trp Leu Glu Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO247的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸
(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO247Asp Trp Phe Lys Ala Phe Tyr Asp Lys Phe Phe Glu Lys Phe Lys Glu1 5 10 15Phe Phe(2)SEQ ID NO248的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(xi)序列描述SEQ ID NO248Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO249的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO249Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Glu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO250的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO250Glu Trp Leu Lys Ala Glu Tyr Glu Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO251的资料(i)序列特征(A)长度18个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...18(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO251Glu Trp Leu Lys Ala Phe Tyr Lys Lys Val Leu Glu Lys Leu Lys Glu1 5 10 15Leu Phe(2)SEQ ID NO252的资料(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...15(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO252Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Gln Lys Leu Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO253的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...16(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO253Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO254的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...16(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO254Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Lys Gln Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO255的资料(i)序列特征(A)长度15个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...15(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO255Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Lys Leu Gln Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO256的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...16(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO256Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Glu Ala Leu Lys Gln Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO257的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...16(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO257Pro Val Leu Asp Leu Phe Glu Asn Leu Leu Glu Arg Leu Lys Gln Lys1 5 10 15(2)SEQ ID NO258的资料(i)序列特征(A)长度16个氨基酸(B)类型氨基酸(C)链型单链(D)拓扑结构线性(ii)分子类型不确定(ix)特征(A)名称/关键词其他(B)位置1...16(D)其他信息N-末端乙酰化且C-末端酰胺化(xi)序列描述SEQ ID NO258Pro Val Leu Asp Leu Phe Arg Glu Leu Leu Asn Glu Leu Lys Gln Lys1 5 10 1权利要求
1.一种ApoA-I激动剂，包括(i)一种14～22个残基的肽或肽类似物，它能在脂类存在时形成两亲性α螺旋并包括下列结构通式(I)Z1-X1-X2-X3-X4-X5-X6-X7-X8-X9-X10-X11-X12-X13-X14-X15-X16-X17-X18X1为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)、Gln(Q)或D-Pro(P)；X2为脂族氨基酸；X3为Leu(L)；X4为酸性氨基酸；X5为Leu(L)或Phe(F)；X6为Leu(L)或Phe(F)；X7为一个碱性氨基酸；X8为一个酸性氨基酸；X9为Leu(L)或Trp(W)；X10为Leu(L)或Trp(W)；X11为一个酸性氨基酸或Asn(N)；X12为一个酸性氨基酸；X13为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；X14为一个碱性氨基酸或Leu(L)；X15为Gln(Q)或Asn(N)；X16为一个碱性氨基酸；X17为Leu(L)；X18为一个碱性氨基酸；Z1为H2N-或RC(O)NH-；Z2为-C(O)NRR、-C(O)OR或-C(O)OH或其盐；每个R都单独为-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基或1～4个残基的肽或肽类似物；残基Xn之间的每个“-”都单独代表一个酰胺键、一个取代后的酰胺键、一个酰胺同电子排列体或一个酰胺模拟物；或者(ii)结构通式(I)的缺失形式，残基X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15、X16、X17、和X18中至少1～8个残基被缺失；或(iii)结构通式(I)的缺失形式，残基X1、X2、X3、X4、X5、X6、X7、X8、X9、X10、X11、X12、X13、X14、X15-、X16、X17、和X18中至少有1个被另外的一个残基保守性取代。
2.权利要求1中的ApoA-I激动剂，与人ApoA-I相比该激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性。
3.权利要求1中的ApoA-I激动剂，该激动剂为结构通式(I)的变化形式。
4.权利要求3中的ApoA-I激动剂，其中按照通式(I)固定疏水氨基酸并且至少一个非固定残基被另外一个残基保守性地取代。
5.权利要求4中的ApoA-I激动剂，其中X1为Pro(P)、D-Pro(P)、Gly(G)、Asn(N)或Ala(A)；X2为Leu(L)、Ala(A)或Val(V)；X3为Leu(L)；X5为Leu(L)或Phe(F)；X6为Leu(L)或Phe(F)；X9为Leu(L)或Trp(W)；X10为Leu(L)或Trp(W)；X13为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；X17为Leu(L)；以及X4、X7、X8、X11、X12、X14、X15、X16和X18中至少一个被另外一个残基保守性地取代。
6.权利要求3中的ApoA-I激动剂，其中按照通式(I)固定疏水氨基酸并且至少一个非固定残基被另外一个残基保守性地取代。
7.权利要求6中的ApoA-I激动剂，其中X4为Asp(D)或Glu(E)；X7为Arg(R)、Lys(K)或Orn；X8为Asp(D)或Glu(E)；X11为Asn(N)或Glu(E)；X12为Glu(E)；X14为Lys(K)、Arg(R)或Orn；X15为Gln(Q)或Asn(N)；X16为Lys(K)、Arg(R)或Orn；X18为Asn(N)或Gln(O)；X1、X2、X3、X5、X6、X9、X10、X13和X17中至少一个被另外一个残基保守性取代。
8.权利要求6中的ApoA-I激动剂，其中X3为Leu(L)，X6为Phe(F)，X9为Leu(L)或Trp(W)，X10为Leu(L)或Trp(W)，并且X1、X2、X5、X13和X17中至少一个被另外一个残基保守性取代。
9.权利要求5或7中的ApoA-I激动剂，其中所述的取代残基和被取代残基属于同一亚类。
10.权利要求1中的ApoA-I激动剂，该激动剂是结构通式(I)的缺失形式。
11.权利要求10中的ApoA-I激动剂，其中所述肽或肽类似物缺失了1个螺圈。
12.权利要求1中的ApoA-I激动剂，该激动剂是结构通式(I)所示的18个残基的肽或肽类似物。
13.权利要求12中的ApoA-I激动剂，其中所述的残基间“-”代表-C(O)NH-；Z1为H2N-；且Z2为-C(O)OH或其盐。
14.权利要求13中的ApoA-I激动剂，其中X1为Pro(P)、Ala(A)、Gly(G)、Asn(N)或D-Pro(P)；X2为Ala(A)、Val(V)或Leu(L)；X3为Leu(L)；X4为Asp(D)或Glu(E)；X5为Leu(L)或Phe(F)；X6为Leu(L)或Phe(F)；X7为Arg(R)、Lys(K)或Orn；X8为Asp(D)或Glu(E)；X9为Leu(L)或Trp(W)；X10为Leu(L)或Trp(W)；X11为Asn(N)或Glu(E)；X12为Glu(E)；X13为Leu(L)、Trp(W)或Phe(F)；X14为Arg(R)、Lys(K)或Orn；X15为Gln(Q)或Asn(N)；X16为Lys(K)、Arg(R)或Orn；X17为Leu(L)；以及X18为Lys(K)、Arg(R)或Orn。
15.权利要求1中的ApoA-I激动剂，该激动剂选自下列肽肽 191 PVLDLLRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO191)；肽 192 PVLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO192)；肽 193 PVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO193)；肽 194 PVLELFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO194)；肽 195 PVLELFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO195)；肽 196 PVLDLFRELLEELKNKLK*(SEQ ID NO196)；肽 197 PLLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO197)；肽 198 GVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO198)；肽 199 PVLDLFRELWEELKQKLK*(SEQ ID NO199)；肽 200 NVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO200)；肽 201 PLLDLFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO201)；肽 202 PALELFKDLLEELRQKLR*(SEQ ID NO202)；肽 203 AVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO203)；肽 204 PVLDFFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO204)；肽 205 PVLDLFREWLEELKQKLK*(SEQ ID NO205)；肽 206 PLLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO206)；肽 207 PVLELLKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO207)；肽 208 PALELFKDLLEELRQRLK*(SEQ ID NO208)；肽 209 PVLDLFRELLNELLQKLK(SEQ ID NO209)；肽 210 PVLDLFRELLEELKQKLK(SEQ ID NO210)；肽 211 PVLDLFRELLEELOQOLO*(SEQ ID NO211)；肽 212 PVLDLFOELLEELOQOLK*(SEQ ID NO212)；肽 213 PALELFKDLLEEFRQRLK*(SEQ ID NO213)；肽 214 pVLDLFRELLEELKQKLK*(SEQ ID NO214)；肽 215 PVLDLFRELLEEWKQKLK*(SEQ ID NO215)；肽 229 PVLELFERLLEDLQKKLK(SEQ ID NO229)；肽 230 PVLDLFRELLEKLEQKLK(SEQ ID NO230)；肽 231 PLLELFKELLEELKQKLK*(SEQ ID NO231)；以N-末端或C-末端封闭或未封闭的形式存在。
16.一种多聚体ApoA-I激动剂或其药物学上可接受的盐，与人ApoA-I相比该激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性，并且具有下述结构通式(II) 其中每个m都单独为0～1的整数，优选为1；n是0～10的整数；每个“HH”都是权利要求1所述肽或肽类似物；每个“LL”都单独代表1个双功能接头；以及每个“-”都单独定义为1个共价连接。
17.一种多聚体ApoA-I激动剂或其药物学上可接受的盐，与人ApoA-I相比该激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性，并且具有下述结构通式(III) 其中每个X都单独为； ；每个HH都单独代表一个结构(I)核心肽或者其类似物或本发明所述这些肽的突变、截短、内部缺失或扩展形式；每个LL都单独代表1个双功能接头；以及每个m都单独为一个0～1的整数；每个n都单独为一个0～8的整数；Nya和Nyb都各自代表一个多功能连接部分，其中ya和yb分别为Nya和Nyb上的官能团数目；每个ya或yb都单独是一个3～8的整数；p是一个0～7的整数；以及每个“-”都单独代表一个共价键。
18.一种多聚体ApoA-I激动剂或其药物学上可接受的盐，与人ApoA-I相比该激动剂表现出至少38％的LCAT活化活性，并且具有下述结构通式(IV)或(V) 或 其中每个X都单独为； 每个HH都单独代表一个权利要求1所述的肽或肽类似物；每个LL都单独代表1个双功能接头；每个n都单独为一个0～1的整数；每个m都单独为一个0～8的整数；R1为-OR或-NRR；以及每个R都单独为-H、(C1-C6)烷基、(C1-C6)烯基、(C1-C6)炔基、(C5-C20)芳基、(C6-C26)烷芳基、5～20元杂芳基或6～26元烷杂芳基。
19.权利要求16、17或18中的多聚ApoA-I激动剂，其中所述的双功能接头是可切割的。
20.权利要求16、17或18中的多聚ApoA-I激动剂，其中n是0。
21.权利要求20中的多聚ApoA-I激动剂，其中m是0。
22.权利要求16、17或18中的多聚ApoA-I激动剂，其中每个HH都单独代表一个权利要求13所述的肽。
23.权利要求16、17或18中的多聚ApoA-I激动剂，其中每个HH都单独代表一个权利要求14所述的肽。
24.权利要求16、17或18中的多聚ApoA-I激动剂，其中每个HH都单独代表一个权利要求15所述的肽。
25.一种ApoA-I激动剂-脂类复合物，该复合物包括一种ApoA-I激动剂和一种脂类，其中所述的ApoA-I激动剂为一种权利要求1所述的肽或肽类似物、权利要求16所述的多聚ApoA-I激动剂、权利要求17所述的多聚ApoA-I激动剂、或权利要求18所述的多聚ApoA-I激动剂。
26.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，其中所述的ApoA-I激动剂为权利要求12所述的肽。
27.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，其中所述的ApoA-I激动剂为权利要求13所述的肽。
28.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，其中所述的ApoA-I激动剂为权利要求14所述的肽。
29.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，其中所述的ApoA-I激动剂为权利要求15所述的肽。
30.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，其中所述的脂类是鞘磷脂。
31.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，该复合物以冻干粉末的形式存在。
32.权利要求25中的ApoA-I激动剂-脂类复合物，该复合物以溶液的形式存在。
33.一种药用组合物，该组合物包括一种ApoA-I激动剂和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释液，其中所述的ApoA-I激动剂为一种权利要求1所述的肽或肽类似物、权利要求16所述的多聚ApoA-I激动剂、权利要求17所述的多聚ApoA-I激动剂、或权利要求18所述的多聚ApoA-I激动剂。
34.权利要求33中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂是一种权利要求12所述的肽。
35.权利要求33中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂是一种权利要求13所述的肽。
36.权利要求33中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂是一种权利要求14所述的肽。
37.权利要求33中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂是一种权利要求15所述的肽。
38.权利要求33、34、35、36或37中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂以ApoA-I激动剂-脂类复合物的形式存在，所述的复合物包括该ApoA-I激动剂和一种脂类。
39.权利要求38中的药用组合物，其中所述的ApoA-I激动剂-脂类复合物以冻干粉末的形式存在。
40.一种用于治疗患有脂血异常症相关疾病的患者的方法，该方法包括向患者施用有效量的权利要求1所述肽激动剂的步骤。
41.权利要求40中的方法，其中所述的ApoA-I激动剂以药用组合物形式存在，该组合物中包括所述的ApoA-I激动剂和一种药物学上可接受的载体、赋形剂或稀释剂。
42.权利要求40中的方法，其中所述的ApoA-I激动剂以ApoA-I激动剂-脂类复合物的形式存在，该复合物中包括所述的ApoA-I激动剂和一种脂类。
43.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是血胆脂醇过多。
44.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是心血管病。
45.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是动脉粥样硬化。
46.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是再狭窄。
47.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是HDL或ApoA-I缺乏。
48.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是高甘油三酯血症。
49.权利要求40中的方法，其中所述的脂血异常症相关疾病是代谢综合征。
50.一种用于治疗患有脓毒性休克患者的方法，该方法包括向患者施用有效量的权利要求1所述ApoA-I激动剂的步骤。
51.权利要求40或50中的方法，其中所述的患者是人。
52.权利要求40或50中的方法，其中包括向所述患者施用约0.5mg/kg～100mg/kg的ApoA-I激动剂。
全文摘要
本发明提供了模拟人Apo－I结构和药物活性的多肽及多肽类似物。该多肽及多肽类似物用于治疗多种与脂血异常症有关的病症。
文档编号A61P31/04GK1345245SQ98811672
公开日2002年4月17日 申请日期1998年9月28日 优先权日1997年9月29日
发明者琼·路易斯·达索克斯, 雷纳特·塞库尔, 克劳斯·巴特纳, 伊莎贝尔·康纳特, 冈瑟·梅茨 申请人:琼-路易斯·达索克斯, 雷纳特·塞库尔, 克劳斯·巴特纳, 伊莎贝尔·康纳特, 冈瑟·梅茨