专利名称：抗疲劳组合物的制作方法
技术领域：
本发明涉及保健、医药领域，具体涉及复方银杏叶制剂。
银杏(Ginkgo biloba L)为最古老的中生年代的遗植物，仅存一科一属一种，具有裸子植物“活化石”之称。虽然远古的地球经过一系列巨变，但始终未能使银杏象恐龙一样灭绝，科学家们把银杏的这种生存奇迹归功于它自身顽强的生命力。我们的祖先很早就将其用于防病治病和保健方面，据《神农本草经》记载，银杏具有润肺、平喘、醒脑等功效。真正对其进行医药保健方面的研究始于70年代，国际上利用银杏制成各种制剂，防治心脑血管疾病和周围血管功能不良，取得良好的疗效。目前认为银杏叶除了含有生物碱、微量元素、氨基酸等成份外，其主要活性成份是银杏叶提取物(GBE)，即黄酮和萜内酯类化合物。
茶多酚是从天然植物茶叶中分离提纯的多酚类化合物的复合体，该类化合物的生物活性、保健功能也受到国内外医学界的极大关注。它的活性成分也是贡酮类物质。
然而，虽然有大量文献报道银杏和茶多酚的药理作用，却未有人将它们和蜂皇浆干冻粉制成复方制剂，更未有人想到该复方制剂药效会大大增强。
本发明者经潜心研究，发现了银杏叶、茶多酚和蜂皇浆干冻粉的协同增强效应，从而，本发明的一个目的是提供主要由银杏叶提取物、茶多酚和蜂皇浆干冻粉组成的抗疲劳组合物。
本发明的另一个目的是提供抗疲劳组合物的制备方法。
本发明的抗疲劳组合物包含银杏叶提取物30-50重量％茶多酚 20-40重量％蜂皇浆干冻粉1-10重量％玉米淀粉余量本发明的抗疲劳组合物的制备方法包括提取银杏叶提取物；及将银杏叶提取物、茶多酚、蜂皇浆干冻粉和玉米淀粉按所述比例均匀混合。
本发明的一个优选实施方案是提供具有如下比例的抗疲劳组合物银杏叶提取物40-45重量％茶多酚 30-35重量％蜂皇浆干冻粉5-10重量％玉米淀粉余量本发明的另一个优选实施方案是提供如下制备银杏叶提取物的方法，包括如下步骤(1)银杏叶用65％乙醇回流，取滤液，制浸膏；(2)浸膏加ZTC澄清剂，沉淀，过滤；(3)上述(2)所得滤液经大孔树脂床吸附，乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥，得总黄酮；(4)上述(2)所得沉淀用乙酸乙酯提取，过滤，经柱层析得到总内酯；(5)合并上述(3)所得总黄酮和(4)所得总内酯，得到银杏叶提取物。
图1是银杏叶提取物制备工艺流程图。
本发明的抗疲劳组合物可制成各种剂型，如胃溶或肠溶胶囊剂、片剂、丸剂、粉剂、颗粒冲剂、口服液等剂型。根据需要，在制剂中可加入各种药用载体，如赋形剂、润滑剂、崩解剂、抗氧化剂等。
本发明提供的抗疲劳组合物与以往单用银杏叶提取物或茶多酚的效果相比，具有明显的增强效应。并且，本发明的抗疲劳组合物无任何毒副反应，动物长期服用未见致突变和致畸作用。因此，本发明的抗疲劳组合物是安全有效的，适合于工作节奏快、用脑过度和易疲劳人群长期服用。
本发明提供的制备方法中，银杏叶提取物的制备工艺采用了ZTC澄清剂进行沉降、pH3-4洗涤液进行吸附和喷雾干燥技术，达到质量合格、稳定的银杏叶提取物，其黄铜和内酯含量分别达到26％和6％以上，高于采用水沉降、中性洗涤液吸附和减压干燥的常规工艺。
以下用实施例和实验例对本发明进行举例说明，它们旨在阐述本发明的最佳实施方案。本领域技术人员根据本发明的启示，结合本领域的常识所做的各种变更，均落在本申请权利要求的范围内。
通过这些实施例和实验例的阐述，本发明的上述目的和效果也将变得更为明了。
实施例1银杏叶提取物的制备(1)将5.0公斤银杏叶用65％乙醇回流4.5小时，过滤，滤液减压(4.0kPa)浓缩，得到的浸膏加水和ZTC澄清剂(2％体积)，放置8.0小时后过滤。
(2)将步骤(1)中所得的滤液上大孔树脂床进行吸附，用水和25％乙醇依次洗涤后用70％乙醇洗脱，洗涤液和洗脱剂均调节为pH3。洗脱液减压浓缩，所得的浓缩液进行喷雾干燥(进口温度200℃、出口温度80℃)，得到总黄酮1300g。
(3)将步骤(1)中所得的残渣用乙酸乙酯提取、过滤、进行柱层析，得到总内酯300g。
(4)将总内酯和总黄酮合并，即银杏叶提取物。
实施例2-3除了步骤(3)中喷雾干燥的温度分别为进口370℃、出口90℃和进口180℃、出口80℃以外，与实施例1同样操作，得到银杏叶提取物。
比较例1除了步骤(1)中不加澄清剂外，与实施例1同样操作，得到银杏叶提取物。
比较例2、3除了步骤(2)中pH分别调节为7和5-7以外，与实施例1同样操作，得到银杏叶提取物。
比较例4、5除了步骤(3)中采用常压烘干(分别为80℃、4小时；70℃、7小时)以外，与实施例1同样操作，得到银杏叶提取物。
比较例6除了步骤(3)中采用真空烘干(60℃、2小时)以外，与实施例1同样操作，得到银杏叶提取物。
实验例1不同条件下提取银杏叶提取物的效果比较(1)水沉降中加ZTC对产品中黄酮含量的影响表1
(2)酸性吸附和中性吸附对产品中黄酮含量的影响表2
(3)干燥方法对产品中黄酮含量的影响表3从以上结果可见，本发明方法的改进提高了银杏叶提取物中有效成分黄酮的含量。
实施例4按如下比例将各成分充分混合，制成本发明的组合物银杏叶提取物 30-50重量％茶多酚 20-40重量％蜂皇浆干冻粉 1-10重量％玉米淀粉 余量实施例5胶囊的制备将实施例4所得的组合物真空干燥灭菌(温度80℃，时间6-8小时，压力6kPa)后充填胶囊，每粒充填量300毫克。
实施例6按如下重量百分比配制成组合物表4
实验例2抗疲劳试验将各配方组合物用2％羧甲基纤维素溶液配制成悬浮液。
选用体重为150±7.5g的雄性Wistar大鼠70只，分成7组，每组10只，自由摄食和饮水，试验组分别经胃管灌服各配方组合物(每日一次，清晨时灌服)，剂量为1g/kg体重，对照组灌服等体积羧甲基纤维素溶液。连续灌胃和饲养3周。在最后一次灌胃后半小时按常规方法进行游泳试验和爬杆试验。结果见表5。
表5各配方抗疲劳效应比较
注*表示与空白对照组相比，差别有显著意义(P＜0.05)。
△表示与配方5组相比，差别有显著意义(P＜0.05)。
☆表示与配方6组相比，差别有显著意义(P＜0.05)。
#表示与配方7组相比，差别有显著意义(P＜0.05)。
从以上结果可以看出，本发明的配方均具有抗疲劳作用，以配方2和3的效果为最佳。同时也可以看出，服用本发明的抗疲劳组合物比单用银杏叶提取物和单用茶多酚的效果好，即具有明显的增效作用。
实验例3急性毒性试验昆明种小鼠100只(体重18-22克)，SD大鼠20只(体重180-220克)，雌性各半，分组，分别以如下剂量灌服本发明组合物小鼠剂量组为2g/kg、4g/kg、6g/kg、8g/kg和10g/kg；大鼠剂量组为1g/kg、2.15g/kg、4.64g/kg和10g/kg。灌胃后观察2周，大鼠和小鼠均未见异常反应，活动自如，无一死亡。
以上结果表明，大鼠和小鼠的LD50值均大于10k/kg。
实验例4慢性毒性试验用SD大鼠80只，分成4组，每组20只，雌雄各半，试验组剂量分别为0.10g/kg、0.75g/kg和1.5g/kg，掺入饲料，对照组为基础饲料组。观察30天后处死，作尸检。
结果动物活动自如，毛发光泽、进食、大小便正常。各组间在体重增长、血液指标、生化测定指标等方面均无显著差异。尸检结果未见有显著差异的病理变化。
实验例5致突变和致畸试验昆明种小鼠(25-28克)，致突变试验中试验组剂量分别为1.25g/kg、2.5g/kg和5.0g/kg，致畸试验中试验组剂量分别为2.5g/kg、5.0g/kg和7.5g/kg。均以蒸馏水为阴性对照组，环磷酰胺40mg/kg为阳性对照组。按《食品安全性毒锂学评价程序和方法》分别作骨髓核试验和睾丸染色体畸变试验。
结果各试验组微核率与阴性对照组无显著差异(p＞0.05)，而阳性对照组微核率显著高于各试验组和阴性对照组(p＜0.01)。
各试验组染色体畸变率与阴性对照组无显著差异(p＞0.05)，而阳性对照组显著高于各试验组和阴性对照组(p＜0.01)。
权利要求
1．抗疲劳组合物，包含银杏叶提取物 30-50重量％茶多酚20-40重量％蜂皇浆干冻粉 1-10重量％玉米淀粉 余量
2．如权利要求1所述的抗疲劳组合物，其中包含银杏叶提取物 40-45重量％茶多酚30-35重量％蜂皇浆干冻粉 5-10重量％玉米淀粉 余量
3．如权利要求1所述的抗疲劳组合物，所述组合物的剂型为胶囊。
4．如权利要求1或2所述抗疲劳组合物的制备方法，包括提取银杏叶提取物；及将银杏叶提取物、茶多酚、蜂皇浆干冻粉和玉米淀粉按所述比例混合。
5．如权利要求4所述的制备方法，其中银杏叶提取物的制备包括如下步骤(1)银杏叶用65％乙醇回流，取滤液，制浸膏；(2)浸膏加ZTC澄清剂，沉淀，过滤；(3)上述(2)所得滤液经大孔树脂床吸附，乙醇洗脱，洗脱液浓缩，干燥，得总黄酮；(4)上述(2)所得沉淀用乙酸乙酯提取，过滤，经柱层析得到总内酯；(5)合并上述(3)所得总黄酮和(4)所得总内酯，得到银杏叶提取物。
全文摘要
本发明提供主要由银杏叶提取物和茶多酚组成的抗疲劳组合物,包含:银杏叶提取物30—50重量%、茶多酚20—40重量%、蜂皇浆干冻粉1—10重量%,余量为玉米淀粉。本发明还提供所述组合物的制备方法,主要是银杏叶提取物的制备方法。本发明提供的抗疲劳组合物与以往单用银杏叶提取物或茶多酚的效果相比,具有明显的增强效应。本发明的制备方法提高了银杏叶提取物中有效成分黄酮的含量。
文档编号A61P43/00GK1297760SQ9912411
公开日2001年6月6日 申请日期1999年11月25日 优先权日1999年11月25日
发明者邵玉芬, 胡涌, 黄秋芳, 徐章华 申请人:上海白领绿色保健品有限公司