专利名称：可吸收的微颗粒的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种持续释放配合物，该配合物包括固定在可选择地具有可吸收聚合物包被的可吸收聚合物微颗粒上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质、或者其组合物。本发明的微颗粒配合物包括肽(类)和/或蛋白质(类)，其每个分子具有至少一个氨基和/或一个羧基；且可吸收的聚酯固体微颗粒具有足量的、结合到肽(类)和/或蛋白质(类)的表面和次表面的羧基或氨基，以使固定化肽(类)或蛋白质(类)占微颗粒配合物总量的0.1％-30％。这种具有固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的微颗粒配合物还可以进一步用可吸收聚合物选择地进行单个包裹或按组包裹，以便进一步控制固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的释放。为了进一步控制固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的释放，该包裹微颗加入到具有可吸收胶凝液体的组合物中，在生物环境中与水接触后能转化成柔性凝胶或半固体物。
用于在体内控制药物组合物释放的许多药物传送系统已经被发现、试验和利用。例如，已经将聚(DL-乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(ε-己内酯)之类的聚酯和其它各种共聚物用于释放生物活性分子，如孕酮；已将它们制成微胶囊、片或棒的形式(M.Chasin和R.Langer，编辑，《作为药物传送系统的生物降解聚合物》，Dekker，纽约，1990)。通过植入聚合物/治疗剂组合物，例如皮下或肌内植入，这种治疗剂可在一段特殊时期内释放。将这种生物相容性生物降解聚合系统设计成允许被截留的治疗剂从聚合物基质中扩散。通过治疗剂的释放，截去的治疗剂在体内降解，避免了植入的外科去除。虽然对截去剂降解起作用的因素不是很清楚，但-般认为这种聚酯的降解可以通过酯键易受聚合成分的非酶自动催化水解的影响这一特性来进行调节。
一些EPO公开出版物和美国专利已论述了有关聚合物基质设计及其在调节治疗剂的体内释放速度和程度的问题。
例如，Deluca(EPO出版物0467389A2)描述了疏水生物降解聚合物与蛋白质或肽之间的物理相互作用。所形成的组合物是治疗剂与疏水聚合物的混合物，将这种组合物给患者使用后，可以持续从该基质中分散释放。
Hutchinson(美国专利号4,767,628)通过聚合装置中的均匀分散来控制治疗剂的释放。其中公开了这种制剂通过以下两个阶段的叠加达到控制持续释放首先，是药物从制剂表面的分散依赖性滤除；其次，是通过由聚合物的降解产生的含水途径释放。
在Dunn等的美国专利号5,278,201(‘201专利)和5,077,049(‘049专利)中描述了其它就地形成的生物降解植入法和其形成方法。Dunn等的专利公开了有助于恢复牙周囊中的牙周组织的方法，和防止牙的根表面周围的上皮细胞移动的方法。该‘049专利公开了在与牙表面相邻处放置一种就地形成的生物降解屏障的方法。这种屏障呈微孔状，包括各种确定大小的微孔，也可包括生物活性剂。这种屏障是通过以下方法形成的即将一种生物降解聚合物如聚(dl-丙交酯-共-乙交酯)的液体溶液放在牙周囊中，这种生物降解聚合物在可与水混合的无毒有机溶剂如N-甲基吡咯烷酮(即聚合物的浓度达约50％)中具有可在水中凝固和热塑的特性。这种有机溶剂分散在牙周液和生物降解的、可在水中凝固的聚合物中形成一种就地形成的固体生物降解植入。在这种固体生物降解植入中，溶剂的这种分散产生微孔，从而促进细胞生长。该‘859专利也公开了从生物降解的可治愈的热固预聚物、治愈剂和水溶性物质如盐、糖、以及水溶性聚合物的液体混合物形成生物降解屏障的方法。这种可治愈热固预聚物被称作末端为丙烯酸酯的可吸收聚合物。
另外，文献中公开了许多控制生物活性化合物在不同部位的传送的系统。例如，Fujioka等的美国专利号5,011,692公开了一种持续脉冲样释放药物制剂，它包括含药物的聚合物质层。这种聚合物质层仅仅含有微量药物、或者不含药物。整个表面沿垂直于平面层的方向延伸，并且被不溶于水的聚合物质涂覆。这些类型的脉冲样释放药剂适用于皮肤下包埋。
Chesterfield等的美国专利号5,366,756描述了制备多孔、可生物吸收的外科植入的物质的方法。这种方法包括提供一定量的可生物吸收的植入物质的颗粒和具有至少一种生长因子的可生物吸收的植入物质的包被颗粒。该植入物也可含有抗菌剂。
Yamhira等的美国专利号5,385,738公开了一种持续释放注射系统，其包括一种用于注射的粉末悬浮液，这种悬浮液含有存在于粘性溶剂(如植物油、聚乙二醇、丙二醇、硅油和中链脂肪酸甘油三酯)中的活性成分和药物上可接受的生物降解屏障(如蛋白质、多糖和合成的高分子化合物，优选胶原蛋白、不全胶原蛋白、明胶、及其混合物)。药物制剂中的这种活性成分是以下列状态式加入到在生物降解屏障中的(ⅰ)活性成分与屏障基质化学结合；(ⅱ)活性成分通过分子间作用与屏障结合；(ⅲ)活性成分被物理包围在屏障基质中。
而且，前面文献例如Dunn等(美国专利号4,938,763)所述的这些系统，指导了通过聚合物溶液在有机溶剂如N-甲基-吡咯烷酮中的凝固、从而在生物体内就地形成可生物降解的微孔固体植入物。然而，使用包括那些低分子有机溶剂在内的溶剂可促进溶液从应用部位的移动，从而导致对活体组织的破坏，包括细胞脱水和坏死。溶剂的大量丢失可引起凝固物萎缩和与周围组织分离。
美国专利号5,612,052描述了使由带羧基的聚酯链形成的阳离子交换微颗粒固定，该聚酯链上含有基本活性剂，以提供一种含有可吸收的胶凝液体聚酯的控制释放系统。美国专利号5,612,052的内容在此引作参考。在美国专利号5,672,659和美国专利号5,665,702等现有技术中记载了羧酸体与碱性多肽的离子共轭作用。但是，这些配合物是可溶性化学体，它是通过各自溶液中的单个碱性成分和羧酸成分的分子反应形成的，生成一种确定的离子共轭体，其作为一种具有理化特性的新化学体。与本发明的区别之处在于，本发明的配合物是在包括初级表面配合物形成的多相系统中形成的。
本发明涉及一种结合微颗粒，它包括一种可吸收杂链聚合物核心及其固定在所述的可吸收杂链聚合物核心上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质或其混合物。
其中每一种肽分别选自由以下所组成的组生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、抑生长素、铃蟾肽、胃泌素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生长激素释放因子(GRF)、糊精、速激肽、胰泌素、甲状旁腺素(PTH)、脑啡呔、内皮素、降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺素相关蛋白质(PTHrP)、胰高血糖素、神经降压肽、促肾上腺皮质激素(ACTH)、YY肽(PYY)、胰高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸酯环化酶活性肽(PACAP)、促胃动素、P物质、神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素以及其类似物和片段或其药物上可接受的盐；和其中每一种蛋白质分别选自由以下所组成的组生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和干扰素。
刚才前面所述的一种优选的结合微颗粒称作B组，其中所述的肽、蛋白质或其混合物或其药物上可接受的盐占该结合微颗粒总量的0.1％-30％。
刚才前面所述的一种优选的结合微颗粒称作C组，其中所述的可吸收杂链聚合物核心包括甘醇酸酯单元。
刚才前面所述的一种优选的结合微颗粒称作D组，其中所述的可吸收杂链聚合物核心进一步包括柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物。
刚才前面所述的一种优选的结合微颗粒称作E组，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1。
C组另一种优选的结合微颗粒是其中所述的甘醇酸酯单元的末端具有羧基部分的微颗粒。
C组另一种优选的结合微颗粒是其中所述的甘醇酸酯单元的末端为胺部分的微颗粒。
另一方面，本发明提供了一种包裹微颗粒，它包括一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒。
其中所述的结合微颗粒包括可吸收杂链聚合物核心及其固定在所述的吸收杂链聚合物核心上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质或其混合物。
其中每一种肽分别选自由以下所组成的组生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、抑生长素、铃蟾肽、胃泌素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生长激素释放因子(GRF)、糊精、速激肽、胰泌素、甲状旁腺素(PTH)、脑啡呔、内皮素、降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺素相关蛋白质(PTHrP)、胰高血糖素、神经降压肽、促肾上腺皮质激素(ACTH)、YY肽(PYY)、胰高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸酯环化酶活性肽(PACAP)、促胃动素、P物质、神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素及其类似物和片段或其药物上可接受的盐；每一种蛋白质分别选自由以下所组成的组生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和干扰素；和其中上述的可吸收杂链聚合物核心包括甘醇酸酯单元。
一种刚才所述优选的包裹微颗粒是，其中所述的肽、蛋白质或其混合物或其药物上可接受的盐占该结合微颗粒总量的0.1％-30％，且其中所述的可吸收的杂链聚合物核心进一步包括柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物。
一种刚才所述优选的包裹微颗粒称作F组，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且所述的甘醇酸酯单元的末端为羧基部分或胺部分。
一种刚才所述优选的包裹微颗粒是，其中所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
一种刚才所述优选的包裹微颗粒是，其中l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20，且d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10。
F组的一种优选的包裹微颗粒是，其中所述的可吸收包裹聚合物占该包裹微颗粒总量的5％-70％。
刚才前面所述一种优选的包裹微颗粒是，其中所述可吸收包裹聚合物占该包裹微颗粒总量的20-60％。
刚才前面所述一种优选的包裹微颗粒是，其中所述的可吸收包裹聚合物占该包裹微颗粒总量的30-50％。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，它包括上述结合微颗粒和药物上可接受的载体。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，它包括上述结合微颗粒、一种非水可吸收胶凝液体聚酯和任一药物上可接受的载体。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，它包括上述包裹微颗粒和药物上可接受的载体。
另一方面，本发明提供了一种药物组合物，它包括上述包裹微颗粒、一种非水可吸收胶凝液体聚酯和任一药物上可接受的载体。
D组另一种优选的结合微颗粒称作G组，其中可吸收杂链聚合物核心包括柠檬酸酯残余物，且肽是LHRH类似物。
刚才前面所述的一种优选的结合微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与可吸收杂链聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，其中LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
D组另一种优选的结合微颗粒称作H组，其中可吸收杂链聚合物核心包括酒石酸酯残余物，且肽是LHRH类似物。
刚才前面所述一种优选的结合微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
D组另一种优选的结合微颗粒称作I组，其中可吸收杂链聚合物核心包括柠檬酸酯残余物，且肽是抑生长素类似物。
刚才前面所述一种优选的结合微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接。
D组另一种优选的结合微颗粒称作J组，其中可吸收杂链聚合物核心包括酒石酸酯残余物，且肽是抑生长素类似物。
刚才前面所述一种优选的结合微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接。
一种优选的本发明包裹微颗粒是包括G组的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，其中所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
刚才前面所述一种优选的包裹微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1,LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,
(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，和(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
另一种优选的包裹微颗粒包括H组的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，其中所这的可吸收的包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
刚才前面所述一种优选的包裹微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1,LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
另一种优选的包裹微颗粒包括I组的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，其中所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
刚才前面所述另一种优选的包裹微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
另一种优选的包裹微颗粒包括J组的一种或多种结合微颗粒和可吸收包裹聚合物，所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
刚才前面所述一种优选的包裹微颗粒是，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys通过二硫键连接，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10,(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
另一方面，本发明提供了一种用于制备上述的包裹微颗粒的方法，其包括用可吸收包裹聚合物包裹结合微颗粒的步骤。
前面所述的一种优选方法是，其中所述结合微颗粒在溶液中的分散包括将所述的可吸收包裹聚合物和溶剂滴在预冷却的介质上，其中所说的介质不是所述的可吸收包裹聚合物的溶剂。
前面所述的一种优选方法是，其中可吸收包裹聚合物溶液包裹约5％-30％可吸收包裹聚合物，预冷却介质是具有两个或多个碳原子的醇，且介质的温度为室温至约-80℃。
前面所述的一种优选方法是，其中预冷却介质的温度为约-60℃--80℃，且介质为异丙醇。
此外，另一方面，本发明提供了一种用于制备上述的包裹微颗粒的方法，它包括采用乳化技术、用可吸收包裹聚合物包裹结合微颗粒的步骤。
本文所用的术语“可吸收的”意指不溶于水的物质如聚合物，其经过生物环境中的链离解作用变成可溶于水的副产物。
本文所用的术语“微颗粒”意指可吸收的聚酯颗粒，其中优选实际上为球形者。
本文所用的术语“结合微颗粒”意指具有以离子形式固定在微颗粒上的一种或多种肽和/或一种或多种蛋白质的微颗粒。
本文所用的术语“包裹微颗粒”意指具有聚合物包被的结合微颗粒，这种聚合物包被不是必须完全闭合。
本文所用的术语“聚合物核心”，是表示微颗粒的另一种方式。
本文所用的术语“包裹聚合物”意指用于包裹结合微颗粒的聚合物。
本文所用的术语“胶凝液体聚酯”意指吸收水之类的溶剂、进行相转化和维持能产生可逆形变的三维网络的物质。
本发明用本领域已知的标准的三个缩写字母来表示氨基酸，例如，Ala=丙氨酸。
本发明的微颗粒是结晶微颗粒，由可吸收的聚酯形成，例如在单链上具有一个或多个羧基的聚乙交酯，其可在微颗粒的表面和微颗粒的瞬间次表面上形成足够浓度的羧基，以对具有一个或多个碱性基团的肽(类)和/或蛋白质(类)进行络合和离子固定。或者，例如可通过二胺、优选伯胺或仲胺或其混合物，使聚乙交酯的羧基酰胺化，其中所述的胺形成一种对具有一个或多个酸性基团的肽(类)和/或蛋白质(类)进行离子固定的配合物。由于这种微颗粒的表面不必均匀，因此术语“次表面”是指在微颗粒表面发现的裂隙，等等。这种结合微颗粒提供了一种控制肽(类)和/或蛋白质(类)在病人身上的释放的方法。为了进一步控制固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的释放，可用可吸收聚合物包被对结合微颗粒进行单个包裹或按组包裹。这种结合微颗粒可使肽(类)和/或蛋白质(类)在病人身上释放约两天至三个月的时间，优选约一周至三个月。这种包裹微颗粒可使肽(类)和/或蛋白质(类)在病人身上释放约三天至六个月，优选约两周至五个月的时间。
可固定在微颗粒上的肽的典型例子包括但不限于生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、抑生长素、铃蟾肽、胃泌素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生长激素释放因子(GRF)、糊精、速激肽、胰泌素、甲状旁腺素(PTH)、脑啡呔、内皮素、降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺素相关蛋白质(PTHrP)、胰高血糖素、神经降压肽、促肾上腺皮质激素(ACTH)、YY肽(PYY)、胰高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸酯环化酶活性肽(PACAP)、促胃动素、P物质、神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素、及其类似物和片段。可固定在微颗粒上的蛋白质的例子有生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和干扰素。
微颗粒可以由基于丙交酯的聚合物或固体半结晶聚内酯如聚乙交酯制成，这种固体半结晶聚内酯可通过带有酸的羟基的引发剂如乙醇酸、乳酸、苹果酸酯、酒石酸酯和柠檬酸酯的开环聚合作用而形成。本发明的微颗粒可通过下列方法合成。将基于单体和/或内酯如乙交酯和酸引发剂如酒石酸、苹果酸或柠檬酸置于反应容器中混合。将反应容器加热至约35-45℃，优选40℃，在真空中放置约20-60分钟，优选30分钟。将反应容器温度升至约105-115℃，优选110℃。一旦达到这一温度，则将该容器放在无氧氮气中，并搅拌混合物。一旦混合物熔化后，立即加入催化量的适用于开环聚合作用的有机金属催化剂，例如非质子溶剂如加入甲苯的2-乙基-己酸亚锡酯溶液。再使用约30-90秒真空，以去除甲苯，但不会明显去除单体。经约5-10分钟使该混合物的温度升至约115-125℃，优选120℃。然后将该混合物的温度进一步升至145-150℃，在不断的机械搅拌下，使这一温度保持约3-5小时，优选4小时。
使用Knife通过研磨机初步研磨使得到的聚合物成为微小颗粒。然后，用加压干氮气流、在Aljet Micronizer中将该聚合物微粒化。使用体积分布模型和用200/5 cS硅油作为分散剂，在Malvern Mastersizer/E中对平均颗粒直径大小进行分析。
纯化该聚合物，并通过将微粒化聚合物分散在丙酮中，再在超声发生器中放置，优选约30分钟，这样得到该聚合物钠盐。在此期间，也可用均化器在约8,000-24,000rpm，优选9,500rpm的速度下使分散体均化。经超声处理/均化步骤后，优选经约30分钟将分散体在离心机中以约3,000-7,000rpm的速度离心，优选5,000rpm。去掉上清液，将离心饼再次悬浮于新鲜丙酮中，重复超声处理/均化步骤。一旦第二次离心结束，去掉上清液，将该离心饼再次悬浮于去离子水中。然后进行最后一次超声处理/均化步骤，以去除任何残留的丙酮，将分散体再以约5,000rpm的速度离心约30分钟。
将离心饼再次悬浮于新鲜的去离子水中，监测分散体的pH。加入足够体积的弱碱如0.2M碳酸钠溶液，同时搅拌，以使pH升至约pH8-pH9之间。在通过滤纸过滤之前，将分散体搅拌约30分钟。进一步用去离子水冲洗滤饼，然后将其冻结和冻干。
用差示扫描量热法(DSC)，以约5℃/分钟-15℃/分钟的加热速度，优选10℃/分钟，监测纯化过程。
通过将阳离子交换微颗粒在二胺的热稀释溶液(约80℃)中温育可得到阴离子交换微颗粒，所述的胺优选可以是两种伯胺或两种仲胺或伯胺与仲胺的混合物的这种胺，此胺在惰性气体如氩中、在二恶烷或THF中的浓度是已知的。通过酸量滴定法测定二噁烷或THF中的二胺的浓度。当反应实际停止时，通过过滤分离酰胺化的微颗粒、用二恶烷或THF冲洗，并在减压下干燥。
根据下列方法可将肽(类)和/或蛋白质(类)固定在微颗粒上。将微颗粒的钠盐分散在含有无碱、溶于水的肽(类)和/或蛋白质(类)的溶液中。在滤出结合微颗粒之前，将分散液在室温下温育、并同时搅拌2小时。进一步用去离子水冲洗滤饼、然后将其冻结和冻干。然后通过元素分析来分析样本中的氮、以测定被固定的肽(类)和/或蛋白质(类)的数量。
微颗粒的大小可影响肽和/或蛋白质的数量，这种肽和/或蛋白质可被微颗粒固定。微颗粒的尺寸越小，微颗粒群则具有更大的表面积，因而每个微颗粒群可固定更多的肽和/或蛋白质。按照上述方法可使微颗粒的直径大小减至微米或亚微米。微颗粒的直径范围可以是约0.5μm至100μm，优选1μm至15μm，更优选3μm至10μm。
可吸收包裹微颗粒可以是结晶或非结晶的丙交酯/乙交酯共聚物、非晶l-丙交酯/d,l-丙交酯共聚物、己内酯/乙交酯共聚物或碳酸亚丙基酯/乙交酯共聚物，它们在下列习用的有机溶剂中是可溶的，例如氯仿、二氯甲烷、丙酮、乙腈、乙酸乙酯和甲酸乙酯。这些可吸收包裹聚合物的非溶剂包括水、低沸点醇和烃。这些可吸收包裹聚合物可通过催化内酯的开环聚合作用合成；或在链引发剂如羟聚羧酸存在下，通过环状单体的聚合作用合成，这些单体例如有ε-己内酯、对二恶烷酮、碳酸亚丙基酯、1,5-二氧环杂庚烷-2-酮，或1,4-二氧环杂庚烷-2-酮。还有另一种方法，即将有机聚羧酸与预先形成的聚酯反应，这种方法在美国专利号5,612,052中已公开，其内容在此引作参考。
可通过乳状液的相分离可实现结合微颗粒的包裹。一种可替代的包裹方法必须使用超声喷雾器，在此可吸收包裹聚合物溶液中的结合微颗粒的分散体以微液滴的形式滴在冷却的非溶剂介质中。采用传统的固体颗粒的微囊化或包被技术如乳液蒸发方法，用丙交酯和乙交酯的可吸收包裹共聚物包裹结合微颗粒，这种乳剂蒸发方法是H.Demian和S.W.Shalaby在美国专利申请USSN:08/467,361中所公开的用于使硫酸钡微颗粒微囊化的方法，其内容在此引作参考；或者通过以下方法包裹结合微颗粒，即凝固包裹在聚合物溶液中的固体微颗粒、并将它通过超声喷雾器(雾化器)传送至液体介质中，这种液体介质是包裹聚合物的非溶剂，但这种非溶剂液体介质能萃取关于包裹固体微颗粒的包裹聚合物溶液中的溶剂。根据用于包裹微颗粒的聚合物溶液的浓度的不同，在包裹微颗粒中的初始结合微颗粒数量是可以从1至数百不等，其中包裹微颗粒的平均直径为0.5μm-100μm。
下面的方法是有关通过雾化作用来制备载肽和/或载蛋白质(以下称载肽)的包裹阳离子交换剂。将该包裹共聚物按10-30％(W/W)之间的浓度溶解在溶剂中，例如这种溶剂可以是乙腈、乙酸乙酯或甲酸乙酯。将足够量的这种溶液用于载肽CE的分散，以使载肽CE与包裹共聚物的重量比范围为约30∶70-约80∶20。通过高速均化达到分散。以1ml/分钟至10ml/分钟的流速将分散体送入频率可变的超声雾化喷嘴中，该频率可在12kHz至35kHz的范围内变化，较高的频率可允许较快的流速，同时可保持颗粒的特性。因此将分散体置于收集池中雾化，该收集池由含足量干冰球(通常每升IPA含干冰0.5-1kg)的1-10倍过量的异丙醇或乙醇(与所用的包裹聚合物溶剂的体积相比)组成，以便整个雾化过程中使浆液的温度保持在-70℃--80℃之间。根据浆液的体积的不同，以300-700rpm的速度将其搅拌。在乙腈作溶剂的情况下，雾化液滴与浆液接触时立即将液滴冻结。雾化结束后，在真空过滤之前，立即将整个分散体在规定的10℃至室温的温度下使其自身熔化。用去离子水冲洗滤饼，以去除过剩的非溶剂。在主要为d,l-丙交酯包裹共聚物的情况下，所得到的颗粒呈平滑的微球体；当这种包裹共聚物主要是基于l-丙交酯时，该包裹共聚物会出现轻微皱褶。
微颗粒离子交换剂的结合容量可按下述方法测定。例如，对于阳离子交换剂微颗粒，用已知当量浓度的碳酸钠的稀释冷水溶液，在预定的微颗粒体中来中和可获得的羧基。通过过滤来分离这种中和的微颗粒，并用冷的去离子水彻底冲洗，再空气干燥。然后将固体微颗粒在已知浓度的毛果芸香碱盐酸盐的稀释溶液中培养，以便得到从结合容量数据预测的稍过量的碱性药物。对剩余的毛果芸香碱盐酸盐在含水介质中的浓度进行一段时间监测，直至记录到在微颗粒所吸附的碱中不出现显著变化。从得出的数据测定微颗粒上的固定碱的百数，然后通过元素分析来检验氮。
通过以下方法测定阴离子交换剂(酰胺化颗粒)的结合容量(1)氮的元素分析和(2)通过用HPLC测定稀释溶液中萘普生的去除程度而决定的与萘普生结合的程度。后者可通过用已知浓度的氢氧化钠稀释溶液的固定萘普生的释放来证实。
本发明的结合微颗粒或包裹微颗粒可以通过本领域普通技术人员公知的给药途径对患者给药，例如通过肠胃外给药、口服给药或局部给药。优选以粉剂或经鼻内途径的悬浮液或通过呼吸系统吸入的方式给药。当肠胃外给药时，优选以等渗含水介质的形式、或以描述在美国专利号5,612,052中的可吸收的胶凝非水液体聚酯中的分散体的形式给药，其内容在此引作参考。本发明含结合微颗粒和/或包裹微颗粒的制剂还可包括各种可选择的成分。这些成分包括(但不限于此，)表面活性剂、粘度调节剂、药用试剂、细胞生长调节剂、染料、配位剂、抗氧化剂、其它聚合物如羧甲基纤维素、树胶如瓜耳树胶、蜡/油如蓖麻油、甘油、邻苯二甲酸二丁酯和邻苯二甲酸二(2-7基己基)酯，等等。使用时，这类可选择性成分占总制剂的约0.1％-约20％，优选约0.5％-约5％。
结合微颗粒或包裹微颗粒用于患者的有效剂量可以由主治医师或兽医来确定，它也有赖于肽(类)和/或蛋白质(类)的合适剂量和固定在微颗粒上的肽(类)和/或蛋白质(类)的数量来决定。这些剂量可以是已知的，或也可以由本领域普通技术人员来决定。
在美国专利号5,612,052中公开了胶凝剂的制备，其内容在此引作参考。胶凝剂的具体例子如下所述。
60/40亚丙基碳酸酯/乙交酯和聚乙二醇-400(GF-1)的80/20(重量比)嵌段共聚物的制备将聚乙二醇-400(0.299mole,119.5g)、辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，4,700ml,0.946mmole)、乙交酯(1.78mole,206.5g)和碳酸亚丙基酯(2.65mole,270g)加入装有机械搅拌器和氮气入口的火焰干树脂锅中。用氩冲洗反应器数次，然后加热熔化，再加热，在150℃下搅拌约12小时。反应结束时，降低温度，同时保持流动，并在减压下去除过量的单体。用红外线和NMR分析所得到的聚合物中的组合物，并通过凝胶渗透色谱分析其分子量。
按上述GF-1的方法合成60/40亚丙基碳酸酯/乙交酯和聚乙二醇-400(GF-2)的15/85(重量比)嵌段共聚物，但使用的是聚乙二醇-400(1.063mole,425g)、辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，1,760ml,0.35mmole)、乙交酯(0.279mole,32.4g)和碳酸亚丙基酯(0.418mole,42.6g)，搅拌约9小时。
按上述GF-1的方法合成90/10碳酸亚丙基酯/乙交酯和聚乙二醇-1500(GF-3)的80/20(重量比)嵌段共聚物，但使用的是聚乙二醇-1500(0.267mole,400g)、辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，1,200ml,0.247mmole)、乙交酯(0.097mole,11.2g)和碳酸亚丙基酯(0.87mole,88.7g)，搅拌约13小时。
实施例Ⅰ用作阳离子交换剂(CE)的、以柠檬酸酯起始的聚(乙醇酸)共聚物(PGCA)的制备、微粒化和纯化实施例Ⅰ(a):7/1 PGCA-将242.63g乙交酯(Purac生化，Arkelsedijk，荷兰)和57.37g柠檬酸酯(Aldrich,Gillingham,Dorset,联合国)加入500ml玻璃反应器中。将柠檬酸酯通过Abderhalden装置(Aldrich,St.Louis,Missouri，美国)中的硅胶(Fisher Scientific,Loughborough,Leics.，联合国)进一步干燥。将反应器浸在约40℃的油浴器中，并置于真空(0.04mbar)约30分钟。然后降低浴器，将其温度升至约110℃。一旦达到此温度，则将反应器置于无氧氮气中，再浸渍。用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约100rpm的速度搅拌反应器中的内容物。反应器中的内容物熔化后，立即加入(化学计量比50ppm)1.09ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡(Sigma,St.Louis Missouri，美国)的甲苯(Riedel de-Haen,Seelze，德国)溶液。通过一种液氮阱再使用真空约30秒，以去除甲苯，但不会明显去除单体。在将油浴温度升至150℃之前，将该油洛温度升至约120℃，保持5分钟，然后将该油浴温度升至150℃，接着在约100rpm的恒定机械搅拌下保持该温度约4小时。得到标题聚合物。
实施例Ⅰ(b):10/1 PGCA-按实施例Ⅰa所述的方法得到标题聚合物，但使用的是257.40g乙交酯、42.60g柠檬酸酯和1.10ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡的甲苯溶液(化学计量比50ppm)。
实施例Ⅰ(c):15/1 PGCA-15/1 PGCA-将乙交酯(2.586mole,300g)、无水柠檬酸酯(0.172mole,33g)和辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，862ml,0.172mmole)加入装有机械搅拌器和氩气入口的火焰干树脂锅中。用干氩冲洗聚合反应器及其内容物数次。聚合原料熔化后，将反应物加热、并在约160℃下搅拌直至聚合物开始从熔化物沉淀出来。部分沉淀后不久，停止搅拌，在约160℃继续反应约2小时。聚合反应结束时，将温度降至低于120℃，并在减压下去除过量的单体。用红外线和NMR光谱检验被分离的聚合物中的组合物。
微粒化作用-用Knife研磨机(IKA,Staufen，德国)将实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)的每个聚合物初步研碎。然后使用加压干氮气流在Aljet粉碎机(Fluid Engery Aljet,Plumsteadsville,Pennsylvania，美国)中将它们粉碎。采用体积分布模型和200/5 cS硅油(Dow Corning,Seneffe，比利时)作为分散剂、通过Malvern Mastersizer/E(Mavern,Worcs.，联合国)中的分析，实施例Ⅰ(a)的平均颗粒直径大小为24.84μm。粉碎后，实施例Ⅰ(b)和Ⅰ(c)的平均颗粒直径大小分别为4.69μm和6.31μm。
纯化/钠盐形成-将每批容量为50g的实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)分散在2L的丙酮(Riedel de-Haen,Seelze，德国)中，并置于近程声电定位器(Branson Ultrasonics BV,Soest，荷兰)中约30分钟。在此期间，用Ultra-turrax T25均化器(IKA,Staufen，德国)以9,500rpm的速度均化该分散体。经此超声处理/均化步骤后，将分散体在Sorvall离心机(Sorvall,Wilmington,Delaware，美国)中以5,000rpm的速度离心约30分钟。去掉上清液，将离心饼再悬浮于新鲜丙酮中，重复超声处理/均化步骤。一旦第二次离心结束，去掉上清液，将离心饼再悬浮于去离子水中。然后进行最后一次超声处理/均化步骤，以去除任何剩余的丙酮，并再将分散体以5,000rpm的速度离心约30分钟。
将离心饼再悬浮于新鲜去离子水中，监测分散体的pH。在每一反应箱(带有搅拌)中加入足够体积的0.2M碳酸钠溶液，以使pH升至约pH8致约pH9之间。在经Whatman 1号(直径24cm)滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)真空过滤之前，将分散体搅拌约30分钟。用去离子水进一步冲洗滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex，联合国)冻干。
用加热速率为10℃/分钟的TA DSC912S(TA仪器，New Castle,Delaware，美国)、通过差示扫描量热法(DSC)监测纯化过程。每个箱中所得到的DSC的温谱差热图没有出现任何单体乙交酯的吸热峰，但实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)和Ⅰ(c)分别在176℃、178℃和180℃出现吸热。
实施例Ⅱ乙交酯/苹果酸酯共聚物PAMA的微颗粒阳离子交换剂的制备按实施例Ⅰ(c)所述的方法合成标题微颗粒，但使用的是乙交酯(2.586mole,300g)、无水苹果酸酯(0.172mole,23g)和辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，862ml,0.172mmole)。差示扫描量热法用于测定聚合物的熔化温度(Tm=206℃)。
用Wiley碾磨机将固体聚合物粉碎得到平均颗粒直径约125μm。用具有加压干氮的喷射式碾磨机进一步将颗粒大小减至直径约5-10μm。用丙酮冲洗得到的微颗粒以去除微量单体和低分子量低聚物。然后将产品在减压下于40℃干燥、直至使用。用粒度分析仪测定干微颗粒的平均直径。
实施例Ⅲ用作阳离子交换剂(CE)的、以酒石酸酯起始的聚(乙醇酸)共聚物(PGTA)的制备、微粒化和纯化实施例Ⅲ(a):10/1 PGTA-将264.63g乙交酯(Purac生化，Arkelsedijk，荷兰)和34.22g L-酒石酸酯(Riedel de-Haen,Seelze,德国)加入到500ml玻璃反应器中。将酒石酸酯通过Abderhalden装置(Aldrich,St.Louis,MO)中的硅胶(Fisher Scientific,Loughborough,Leics.，联合国)进一步干燥。将反应器浸在约40℃的油浴器中，并置于真空(0.04mbar)约30分钟。然后降低浴器，将其温度升至约110℃。一旦达到此温度，则将反应器置于无氧氮气中，再浸渍。用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约100rpm的速度搅拌反应器中的内容物。反应器中的内容物熔化后，立即加入(化学计量比50 ppm)1.14ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡(Sigma,St.Louis Missouri，美国)的甲苯(Ruedel de-Haen,Seelze，德国)溶液。通过一种液氮阱再使用真空约30秒，以去除甲苯、但不会明显去除单体。在将油浴温度升至至约120℃、保持5分钟。然后进一步将该油浴温度升至约150℃，然后在约100rpm的恒定机械搅拌下保持该温度约4小时。得到标题聚合物。
微粒化作用-用Knife研磨机(IKA,Staufen，德国)将实施例Ⅲ(a)的聚合物初步研碎。然后使用加压干氮气流在Aljet粉碎机(FluidEngery Aljet,Plumsteadsville,Pennsyivania，美国)中将它们粉碎。采用体积分布模型和200/5 cS硅油(Dow Corning,Seneffe，比利时)作为分散剂，通过Malvern Mastersizer/E(Mavern,Worcs.，联合国)中的分析，得到平均颗粒直径大小为12.42μm。
纯化/钠盐形成-将一批50g的实施例Ⅲ(a)分散在2L的丙酮(Riedel de-Haen)中，并置于近程声电定位器(Branson UltrasonicsBV,Soest，荷兰)中约30分钟。在此期间，用Ultra-turrax T25均化器(IKA,Staufen，德国)以9,500rpm的速度均化该分散体。经此超声处理/均化步骤后，将该分散体在Sorvall离心机(Sorvall，Wilmington,Delaware，美国)中以约5,000rpm的速度离心约30分钟。去掉上清液，将离心饼再悬浮于新鲜丙酮中，重复超声处理/均化步骤。一旦第二次离心结束，去掉上清液，将离心饼再悬浮于去离子水中。然后进行最后一次超声处理/均化步骤，以去除任何剩余的丙酮，并再将分散体以约5,000rpm的速度离心约30分钟。
将离心饼再悬浮于新鲜去离子水中，监测分散体的pH。加入足够体积的0.2M碳酸钠溶液以使pH升至约pH8-pH9之间。在经Whatman1号(直径24cm)滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)真空过滤之前，将分散体搅拌约30分钟。用去离子水进一步冲洗滤饼、冻结、并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,WestSussex，联合国)中冻干。
用加热速度为约10℃/分钟的TA DSC912S(TA仪器，New Castle,Delaware，美国)、通过差示扫描量热法(DSC)监测纯化过程。所得到的DSC温谱差热图没有出现单体乙交酯的任何吸热峰、但在181℃出现吸热。
实施例Ⅲ(b):15/1 PGTA-按实施例Ⅰ(c)所述的方法合成标题聚合物，但使用的是乙交酯(2.586mole,300g)、无水酒石酸酯(0.172mole,26.8g)和辛酸亚锡(0.2M的甲苯溶液，862ml,0.172mmole)。差示扫描量热法用于测定聚合物的熔化温度(Tm=204℃)。
用Wiley碾磨机将固体聚合物粉碎得到平均颗粒直径约125μm。用具有加压干氮气的喷射式碾磨机进一步将颗粒大小减至直径约为5-10μm。用丙酮冲洗所得到的微颗粒以去除微量单体和低分子量低聚物。然后将产品在减压下于约40℃干燥、直至使用。用粒度分析仪测定干微颗粒的平均直径。
实施例Ⅳ基于聚乙交酯的微颗粒阴离子交换剂(AE-1)的制备分两步完成阴离子交换剂的制备。首先，按实施例Ⅰ(c)所述的类似方法制备低分子量聚乙交酯，但使用的是下列聚合原料乙交酯(1mole,116g)、作为引发剂的l,3-丙二醇(30mole,2.22g)和辛酸亚锡(0.03mmole)。然后还按实施例Ⅰ(c)所述的方法降低聚合物的大小和纯化聚合物。第二步，在氩气存在下、将非离子微颗粒置于已知浓度的二胺如己二胺的二恶烷热稀释溶液(约80℃)中培养。通过酸量滴定法测定二恶烷中的二胺浓度。当反应实际上停止时，通过过滤来分离酰胺化微颗粒，并用二恶烷冲洗，并在减压下干燥。通过以下测定阴离子交换剂(酰胺化颗粒)的结合容量(1)氮的元素分析和(2)通过用HPLC测定从稀释溶液中去除药物的程度而决定的与萘普生结合的程度。后者可通过具有已知浓度的氢氧化钠稀释溶液的固定萘普生的释放来证实。
实施例Ⅴ用作包裹材料的以丙二醇起始的聚(丙交酯共乙交酯)共聚物(PLGPD)的制备实施例Ⅴ(a):75/25 P(1)LGPD-将235.01g 1-丙交酯(Purac生化，Arkelsedijk，荷兰)、63.09g乙交酯(Purac生化，Arkelsedijk,荷兰)和1.90g丙二醇(Riedel de-haen,Seelze，德国)加入到500ml玻璃反应器中，然后加入(化学计量比200ppm)3.96ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡(Sigma,St.Louis Missouri，美国)的甲苯(Riedel de-Haen,Seelze，德国)溶液。在真空中干燥约1小时以去除甲苯之后，将反应器置于无氧的氮气中并浸在约160℃的预热油浴器中。用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约100rpm的速度搅拌反应器的内容物。一旦反应器中的内容物熔化后，将温度升至约180℃，并保持该温度约3小时。得到一种非晶态共聚物。采用Wyatt Minidawn光散射检测器(Wyatt技术公司，Santa Barbara，加利福尼亚，美国)上的光散射检测，通过Waters510泵、Waters410差示折光计(Waters,Milford,Massachusetts，美国)上的凝胶渗透色谱(GPC)，发现该共聚物的分子量(MW)为约12,5000g/mol。
实施例Ⅴ(b):90/10 P(l)LGPD-按实施例Ⅴ(a)所述的方法合成标题产品，但使用的是274.31g 1-丙交酯、24.55g乙交酯、1.14g丙二醇和3.89ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡的甲苯溶液(化学计量比200ppm)。得到结晶共聚物。通过GPC发现该共聚物的分子量为约20,780g/mol。
实施例Ⅴ(c):90/10 P(d.I)LGPD-按实施例Ⅴ(a)所述的方法合成标题产品，但使用的是274.31g d,l-丙交酯、24.55g乙交酯、1.14g丙二醇和3.86ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡的甲苯溶液(化学计量比200ppm)。得到非晶态共聚物。通过GPC发现该共聚物的分子量为约20,650g/mol。
实施例Ⅴ(d)用作包裹材料r以丙二醇起始的聚(l-丙交酯共d,l-乙交酯)共聚物(PLGPD),80/20 P(l)L(d,l)LPD按实施例Ⅴ(a)所述的方法合成标题产品，但加入(化学计量比200ppm)的是239.09g l-丙交酯、59.77g d,l-丙交酯(Purac生化，Arkelsedijk，荷兰)、1.14g丙二醇和3.96ml的0.1M 2-乙基己酸亚锡的甲苯溶液。得到非晶态共聚物。通过GPC发现该共聚物的分子量(Mw)为22,320g/mol。通过DSC在48℃出现玻璃态转变。
纯化-在与循环浴器相连的6L套层反应器中，通过30％(W/W)的乙腈(Labscan,Dublin，爱尔兰)溶液以8ml/分钟的速度在冷却至约2℃的去离子水中雾化，来分别冲洗实施例Ⅴ(a)、Ⅴ(b)和Ⅴ(c)的共聚物，并用用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约350rpm的速度搅拌。用Masterflex泵(Cole Parmer仪器公司，Niles,Illionois，美国)将该溶液注入Vibra-Cell VC50雾化喷嘴(Bioblock,Illkirch，法国)中，并使用12kHz的超声频率实现雾化。通过Whatman 1号(直径24cm)滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)过滤该分散体，再用去离子水冲洗滤饼，将其冻结并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex，联合国)中冻干。
用加热速度为10℃/分钟的TA DSC912s(TA仪器，New Castle,Delaware，美国)，通过DSC测定纯度，结果显示了实施例Ⅴ(a)、Ⅴ(b)、Ⅴ(c)和Ⅴ(d)分别在44℃、49℃、45℃和48℃的玻璃化转变(Tg)。
实施例Ⅵ载肽阳离子交换剂的制备实施例Ⅵ(a)载有A肽(p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，一种LHRH类似物)-将实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)、Ⅰ(c)和Ⅱ(a)的每一种钠盐4g分别分散在含1.33g溶解在70ml去离子水中的无碱A肽(Kinerton有限公司，Dublin，爱尔兰)的溶液中。在经直径9cm的Whatman1号滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)过滤之前，将分散体在室温培养并同时搅拌约2小时。用去离子水进-步冲洗滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,WestSussex，联合国)中冻干。然后通过元素分析来分析样本中的氮，从而测定被结合的A肽的数量。得到以下结果
实施例Ⅵ(b)载有B肽(H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，两个Cys通过二硫键连接，一种抑生长素类似物)-按实施例Ⅵ(b)所述的方法，使用实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)、Ⅰ(c)和Ⅱ(a)的每一种钠盐4g、以及1.33 g无碱B肽(Kinerton有限公司，Dublin，爱尔兰)。得到实施例Ⅰ(a)、Ⅰ(b)、Ⅰ(c)和Ⅱ(a)的固定有B肽的结合微颗粒。通过元素分析来分析样本中的氮含量，从而测定被结合的B肽的数量。所得结果如下所示
实施例Ⅶ通过雾化作用制备载多肽的包裹阳离子交换剂将载多肽阳离子交换剂分散于包裹共聚物的乙腈(Labscan,Dublin，爱尔兰)溶液中，如下所述。通过用U1tra-turrax T25均化器(IKA,Staufen，德国)以约9,500rpm的速度均化约5分钟来完成分散。包裹共聚物/乙腈溶液的浓度范围为12.5％-25％(W/W)，包裹共聚物与载多肽阳离子交换剂的重量比为1∶1至1.3∶1。
分散后，用陶瓷活塞泵(FMI,Oyster Bay，纽约，美国)将该分散体注入超声频率为16kHz、流速为2ml/分钟的Vibra-Cell VC50雾化喷嘴(Bioblock,Illkirch，法国)中。当达到该喷嘴时，通过加入干冰球(A.I.G.,Dublin，爱尔兰)使分散体在冷却至约-80℃的异丙醇(IPA)(Labscan,Dublin，爱尔兰)中雾化。IPA用作收集非溶剂，用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约300rpm的速度搅拌。一旦雾化结束，将全部分散体熔化，直至温度为约10℃至约室温。然后通过Whatman 1号滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)真空过滤来收集包裹的微颗粒。用去离子水冲洗滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex,联合国)中冻干。用吐温20的1％水溶液作为分散剂、使用MalvernMastersizer/E(Mavern,Worcs.，联合国)分析所得到的包裹微颗粒的大小。通过元素分析法分析包裹微颗粒中的氮含量，从而测定肽含量。
下表表示所进行的各种包裹实验
在进行体内和/体外试验前将所有样品经180μm筛子(Bioblock,Illkirch，法国)筛分。
可以通过下列方法在体外对结合微颗粒或包裹微颗粒进行试验，以评价结合肽或结合蛋白质的释放速率。将重约50mg的等分结合微颗粒或包裹微颗粒置于连续的流动池系统中，于pH约7.2和约37℃下的缓冲磷酸盐溶液以约45ml/小时的速度流经整个结合微颗粒或包裹微颗粒。在约4℃收集含被释放药物的缓冲掖样品，间隔一天或两天时分析肽或蛋白质的浓度。过两周后，测定每个微颗粒的释放分布图。可以通过下列方法在体内系统对结合微颗粒或包裹微颗粒进行试验，以评价结合肽或结合蛋白质的释放速率。将样品通过肌内注射到Wistar雄性大鼠(Bioresources,Trinity大学，Dublin，爱尔兰)的大腿，以对其给药。悬浮液介质含3％羧甲基纤维素和吐温20的1％盐水溶液。对于载A肽样品，有效的当量剂量为40μg/kg/天。对于载B肽样品的该剂量为1mg/kg/天。通过心脏穿刺取出样品，并通过对A肽和B肽有特异性的放射免疫测定法(RIA)来监测血浆肽水平。在载A肽样品(A肽为一种LHRH类似物)中，睾酮RIA也可用于监测睾酮抑制。作为悬浮介质的替代，某些情况下可使用胶凝剂。结果如下表A和表B所示。
表A
表B
实施例Ⅷ实施例Ⅷ(a)用乙腈作为溶剂和室温IPA作为非溶剂时的雾化作用将约1.06g实施例Ⅰ(c)的阳离子交换剂(未与多肽结合)分散于实施例Ⅴ(a)的包裹共聚物的25.24％(W/W)乙腈(Labscan,Dublin，爱尔兰)溶液中，以使阳离子交换剂与包裹共聚物的重量比为约1.03∶1。通过用Ultra-turrax T25(IKA,Staufen，德国)以约9,500rpm的速度均化约5分钟而完成此分散。
分散后，用陶瓷活塞泵(FMI,Oyster Bay，纽约，美国)将该分散体注入超声频率为16kHz、流速为2ml/分钟的Vibra-Cell V.C50雾化喷嘴(Bioblock,Illkirch，法国)中。当达到该喷嘴时，使分散体于室温(17-22℃)的异丙醇(IPA)(Labscan,Dublin，爱尔兰)中雾化。该IPA用作收集非溶剂，用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以约300rpm的速度搅拌。一旦雾化结束，将分散体于室温再搅拌约60分钟，然后通过Whatman 1号滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)真空过滤来回收被包裹的颗粒。用去离子水冲洗滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex，联合国)中冻干。用吐温20的1％水溶液作为分散剂、使用Malvern Mastersizer/E(Mavern,Worcs.，联合国)分析所得到的颗粒的大小。所得到的颗粒的平均颗粒大小(d(0.5))为84.75μm。
实施例Ⅷ(b)用乙酸乙酯作为溶剂和室温下的IPA作为非溶剂时的雾化作用基本上根据实施例Ⅷ(a)所述的方法进行雾化，但用约0.99g实施例Ⅰ(c)的阳离子交换剂(未与多肽结合)分散于实施例Ⅴ(a)的包裹共聚物的24.88％(W/W)乙酸乙酯(Riedel-de Haen,Seelze，德国)溶液中，以使阳离子交换剂与包裹共聚物的重量比为约0.96∶1。所得到的颗粒的平均颗粒大小(d(0.5))为100.56μm。
实施例Ⅷ(c)使用乙酸乙酯作为溶剂和高频率探测剂的雾化作用用约1.02g实施例Ⅰ(c)的阳离子交换剂(未与多肽结合)分散于实施例Ⅴ(a)的包裹共聚物的15.14％(W/W)乙酸乙酯(Riedel-de Haen)溶液中，以使阳离子交换剂与包裹共聚物的重量比为约1.05∶1。通过用Ultra-turrax T25(IKA,Staufen，德国)以约9,500rpm的速度均化约5分钟来完成此分散。
分散后，用陶瓷活塞泵(FMI,Oyster Bay，纽约，美国)将该分散体注入超声频率为约34.6kHz、流速为5ml/分钟的Martin Walter 400GSIP雾化器(Sodeva,Le Bouget du Lac，法国)中。当达到喷嘴时，通过加入干冰球(A.I.G.,Dublin，爱尔兰)使分散体在冷却至约-77℃的异丙醇(IPA)(Labscan,Dublin，爱尔兰)中雾化。该IPA用作收集非溶剂，用Heidolph搅拌器(Heidolph Elektro GmbH,kelheim，德国)以300rpm的速度搅拌。一旦雾化结束，通过Whatman 1号滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)真空过滤来回收被包裹的颗粒。用去离子水冲洗该滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex，联合国)中冻干。用吐温20的1％水溶液作为分散剂，通过Malvern Mastersizer/E(Mavern,Worcs.，联合国)分析所得到的颗粒的大小。所得到的颗粒的平均颗粒大小(d(0.5))为95.69μm。
实施例Ⅸ与阳离子交换剂的结合和抑生长素类似物C肽和D肽的随后的包裹实施例Ⅸ(a)载有C肽将约1.01g分散于含0.25g无碱C肽的溶液中的实施例Ⅰ(c)的钠盐溶解在40ml去离子水中，上述C肽的结构为N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接(Kinerton有限公司，Dublin，爱尔兰)。将该分散体温育，再搅拌约2小时，然后通过直径为9cm的Whatman 1号滤纸(Whatman国际有限公司，Maidstone,Kent，联合国)过滤。用去离子水进一步冲洗该滤饼，将其冻结，并在Edwards SuperModulyo冻干器(Edwards,Crawley,West Sussex，联合国)中冻干。然后对样品进行氮的分析以，测定肽的结合量，其为20.21％。
实施例Ⅸ(b)载有D肽采用实施例Ⅸ(a)的方法，但将分散于含0.51g无碱D肽的溶液中的实施例Ⅰ(c)的约2.04g钠盐溶解在80ml去离子水中，上述D肽的结构为N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接(Kinerton有限公司，Dublin，爱尔兰)。然后对样品进行氮的分析以测定肽的结合量，其为19.53％。
实施例Ⅹ按实施例Ⅶ所述的方法包裹实施例Ⅸ(a)和Ⅸ(b)的结合微颗粒，得到下列结果
实施例Ⅺ胶凝剂制剂的制备使用微型机械混合器，将实施例Ⅶ(a)的被包裹微颗粒(0.3g)与液体胶凝剂(2.0mL实施例Ⅰ的成分“A”和实施例Ⅲ的成分C的50/50混合物，这两种成分在美国专利号5,612,052中公开)在5mL注射器筒内，以约20rpm的速度混合约10分钟。通过干燥加热将胶凝剂预消毒，并用已消毒的搅拌器在层流通风橱中进行混合。制剂从5mL注射器(插入柱塞后)流入较小的注射器中，这就是用于给药的制剂。用光学显微镜检测制剂的均匀度。将小注射器收集储存在干的口袋中、并保持4℃，直至使用。
权利要求
1．一种结合微颗粒，它包括一种可吸收杂链聚合物核心以及将其固定在所述的可吸收杂链聚合物核心上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质或其混合物，其中每一种肽分别选自由以下所组成的组生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRH)、抑生长素、铃蟾肽、胃泌素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生长激素释放因子(GRF)、糊精、速激肽、胰泌素、甲状旁腺素(PTH)、脑啡呔、内皮素、降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺素相关蛋白质(PTHrP)、胰高血糖素、神经降压肽、促肾上腺皮质激素(ACTH)、YY肽(PYY)、胰高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸酯环化酶活性肽(PACAP)、促胃动素、P物质、神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素及其类似物和片段或其药物上可接受的盐；和其中每一种蛋白质分别选自由以下所组成的组生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和干扰素。
2．根据权利要求1所述的结合微颗粒，其中所述的肽、蛋白质、或其混合物、或其药物上可接受的盐占所述的结合微颗粒总量的0.1％-30％。
3．根据权利要求2所述的结合微颗粒，其中所述的可吸收杂链聚合物核心包括甘醇酸酯单元。
4．根据权利要求3所述的结合微颗粒，其中所述的可吸收杂链聚合物核心进一步包括柠檬酸酯残余物。
5．根据权利要求4所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物的比例约为7-1∶约20-1。
6．根据权利要求3所述的结合微颗粒，其中可吸收的聚合物核心进一步包括酒石酸酯残余物。
7．根据权利要求6所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与酒石酸酯残余物的比例约为7-1∶约20-1。
8．根据权利要求3所述的结合微颗粒，其中可吸收的杂链聚合物核心进一步包括苹果酸酯残余物。
9．根据权利要求8所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与苹果酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1。
10．根据权利要求3所述的结合微颗粒，其中所述的甘醇酸酯单元的末端为羧基部分。
11．根据权利要求3所述的结合微颗粒，其中所述的甘醇酸酯单元的末端为胺部分。
12．一种包裹微颗粒，它包括一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，其中所述的结合微颗粒包括一种可吸收杂链聚合物核心以及将其固定在所述的吸收杂链聚合物核心上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质或其混合物，其中每一种肽分别选自由以下所组成的组生长激素释放肽(GHRP)、促黄体素释放激素(LHRP)、抑生长素、铃蟾肽、胃泌素释放肽(GRP)、降钙素、缓激肽、galanin、促黑激素(MSH)、生长激素释放因子(GRF)、糊精、速激肽、胰泌素、甲状旁腺素(PTH)、脑啡呔、内皮素、降钙素基因释放肽(CGRP)、神经调节肽、甲状旁腺素相关蛋白质(PTHrP)、胰高血糖素、神经降压肽、促肾上腺皮质激素(ACTH)、YY肽(PYY)、胰高血糖素释放肽(GLP)、血管活性肠肽(VIP)、垂体腺苷酸酯环化酶环化活性肽(PACAP)、促胃动素、P物质、神经肽Y(NPY)、促甲状腺激素及其类似物和片段或其药物上可接受的盐；和其中每一种蛋白质分别选自由以下所组成的组生长激素、促红细胞生成素、粒细胞集落刺激因子、粒细胞巨噬细胞集落刺激因子和干扰素；且所述的可吸收杂链聚全物核心包括甘醇酸酯单元。
13．根据权利要求12所述的包裹微颗粒，其中所述的肽、蛋白质、或其混合物、或其药物上可接受的盐占所述的结合微颗粒总量的0.1％-30％，且所述的可吸收杂链聚全物核心进一步包括柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物。
14．根据权利要求13所述的包裹微颗粒，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物、酒石酸酯残余物或苹果酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且所述的甘醇酸酯单元的末端为羧基部分或胺部分。
15．根据权利要求14所述的包裹微颗粒，其中所述的可吸收的包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
16．根据权利要求15所述的包裹微颗粒，其中l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10。
17．根据权利要求15所述的包裹微颗粒，其中l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
18．根据权利要求15所述的包裹微颗粒，其中d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10。
19．根据权利要求14所述的包裹微颗粒，其中所述的可吸收包裹聚合物占所述的包裹微颗粒总量的5％-70％。
20．根据权利要求19所述的包裹微颗粒，其中所述的可吸收包裹聚合物占所述的包裹微颗粒总量的20-60％。
21．根据权利要求20所述的包裹微颗粒，其中所述可吸收包裹聚合物占该包裹微颗粒总量的30-50％。
22．一种药物组合物，它包括权利要求1所述的结合微颗粒和药物上可接受的载体。
23．一种药物组合物，它包括权利要求1所述的结合微颗粒、一种非水可吸收胶凝液体聚酯和任一药物上可接受的载体。
24．一种药物组合物，它包括权利要求12所述的包裹微颗粒和药物上可接受的载体。
25．一种药物组合物，它包括权利要求12所述的包裹微颗粒、一种非水可吸收胶凝液体聚酯和任一药物上可接受的载体。
26．根据权利要求4所述的结合微颗粒，其中肽是一种LHRH类似物。
27．根据权利要求26所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与可吸收杂链聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，其中LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
28．根据权利要求6所述的结合微颗粒，其中肽是一种LHRH类似物。
29．根据权利要求28所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2。
30．根据权利要求4所述的结合微颗粒，其中肽是一种抑生长素类似物。
31．根据权利要求30所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接。
32．根据权利要求6所述的结合微颗粒，其中肽是一种抑生长素类似物。
33．根据权利要求32所述的结合微颗粒，其中甘醇酸酯单元与酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，且抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接。
34．一种包裹微颗粒，它包括权利要求26所述的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
35．根据权利要求34所述的包裹微颗粒，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1,LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
36．一种包裹微颗粒，它包括权利要求28所述的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
37．根据权利要求36所述的包裹微颗粒，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1,LHRH类似物为p-Glu-His-Trp-Ser-Tyr-D-Trp-Leu-Arg-Pro-Gly-NH2，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，和，(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
38．一种包裹微颗粒，它包括权利要求30所述的一种或多种包裹在可吸收包裹聚合物中的结合微颗粒，所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
39．根据权利要求38所述的包裹微颗粒，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的柠檬酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，和(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
40．一种包裹微颗粒，它包括权利要求32所述的一种或多种结合微颗粒和可吸收包裹聚合物，所述的可吸收包裹聚合物包括(a)l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(b)d,l-丙交酯基本单元和乙交酯基本单元，(c)d,l-丙交酯基本单元，或(d)l-丙交酯基本单元和d,l-丙交酯基本单元。
41．根据权利要求40所述的包裹微颗粒，其中甘醇酸酯单元与可吸收聚合物核心的酒石酸酯残余物的比例为约7-1∶约20-1，抑生长素类似物为H-β-D-Nal-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Val-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；N-羟乙基哌嗪基-乙酰基-D-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接；或N-羟乙基哌嗪基-乙磺酰基-Phe-Cys-Tyr-D-Trp-Lys-Abu-Cys-Thr-NH2，其中两个Cys残余物通过二硫键连接，且其中(a)l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，(b)d,l-丙交酯基本单元与乙交酯基本单元的比例为约75-25∶约90-10，和(c)l-丙交酯基本单元与d,l-丙交酯基本单元的比例为约80-20。
42．一种用于制备权利要求12所述的包裹微颗粒的方法，其包括用可吸收包裹聚合物包裹结合微颗粒的步骤。
43．根据权利要求42所述的方法，其中所述的结合微颗粒在溶液中的分散包括将所述的可吸收包裹聚合物和一种溶剂滴在预冷却的介质上，所说的介质不是所述可吸收包裹聚合物的溶剂。
44．根据权利要求43所述的方法，其中可吸收包裹聚合物的溶液包含约5％至30％可吸收包裹聚合物，预冷却介质是具有两个或更多碳原子的醇，且介质的温度为室温至约-80℃。
45．根据权利要求44所述的方法，其中预冷却介质的温度为约-60℃--80℃，且介质为异丙醇。
46．一种制备权利要求12所述的包裹微颗粒的方法，它包括采用乳化技术、用可吸收包裹聚合物包裹结合微颗粒的步骤。
全文摘要
本发明涉及一种持续释放配合物,该配合物含有固定在一种可选择地具有可吸收聚合物包被的可吸收聚合物微颗粒上的一种或多种肽、一种或多种蛋白质或其组合物。本发明的微颗粒配合物包括:肽(类)和/或蛋白质(类),其每个分子至少具有一个氨基和/或至少一个羧基;一种可吸收的聚酯固体微颗粒,其具有足量的、可结合肽(类)和/或蛋白质(类)的表面和次表面的羧基或氨基,以使固定化肽(类)或蛋白质(类)占微颗粒配合物总量的0.1%—30%。这种具有固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的微颗粒配合物还可以进一步用可吸收聚合物进行单个包裹或按组包裹,以便进一步控制固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的释放。为了进一步控制固定化肽(类)和/或蛋白质(类)的释放,将所述的包裹微颗粒加入到具有可吸收胶凝液体的组合物中,所述的可吸收胶凝液体在生物环境中与水接触后能转化成柔性凝胶或半固体物。
文档编号A61K47/36GK1289256SQ99802517
公开日2001年3月28日 申请日期1999年1月20日 优先权日1998年1月29日
发明者薛勒比·沃赫拜·薛勒比 申请人:波利曼德有限公司