C2和PLAU的构 建体的角化细胞中miR-198靶标的相对转录本丰度的直方图。d-g)示出共转染有miR-198 模拟物以及单独过表达PLAU、LAMC2或DIAPHl的载体的角化细胞中的相对伤口闭合，或共 转染有miR-198模拟物以及以等比例组合（PLD)的过表达PLAU、LAMC2和DIAPHl的载体的 角化细胞中的相对伤口闭合（η = 3)，*P〈0. 05，**P〈0. 001。误差棒表示s. d.。因此，图16 示出靶标的过表达，组合起来可显著解救伤口愈合中miR-198的作用。
[0032] 图17a)示出表示在用TGF-β 1处理的角化细胞中PLAU、LAMC2和DIAPHl的相对 转录本丰度的直方图。b)示出表示在放线菌素 D的存在下在用TGF-β 1处理的角化细胞中 PLAU、LAMC2和DIAPHl的相对转录本丰度的直方图。c)示出在转染有非靶向siRNA或针对 DROSHA的siRNA的角化细胞中DROSHA以及PLAU、LAMC2和DIAPHl的相对转录本丰度的直 方图，*P〈0. 05，#P〈0. 001。学生t检验用于计算P值，且误差棒表示平均值土s. e.m.。d) 示出在转染有对照抑制剂或针对成熟miR198的LNA抑制剂的角化细胞上PLAU、LAMC2和 DIAPHl的免疫细胞化学，显示在miR-198抑制后miR-198靶标的特异性上调（η = 3)。因 此，图17示出在用TGF-β 1处理时miR-198靶标的转录本稳定性的增加。
[0033] 图17a)示出表示在用TGF-β 1处理的角化细胞中PLAU、LAMC2和DIAPHl的相对转 录本丰度的直方图。b)示出表示在放线菌素 D的存在下在用TGF-β 1处理的PLAU、LAMC2和 DIAPHl的相对转录本丰度的直方图。c)示出在转染有非靶向siRNA或针对DROSHA的siRNA 的角化细胞中DROSHA以及PLAU、LAMC2和DIAPHl的相对转录本丰度的直方图。*P〈0. 05， **P〈0.001。学生t检验用于计算P值，且误差棒表示平均值土s.e.m.。d)示出在转染有 针对miR198的对照抑制剂或LNA抑制剂的角化细胞上PLAU、LAMC2和DIAPHl的免疫细胞 化学，显示在miR-198抑制后miR-198祀标的特异性上调（η = 3)。因此，图17示出在用 TGF-β 1处理时miR-198靶标的转录本稳定性的增加。
[0034] 图18a)的直方图表示通过引物特异性扩增TGF-β 1处理的角化细胞中的固有区 域来检测pre-FSTLl转录本的相对定量（N. S =不显著）（η = 3)。b)的直方图表示在放线 菌素 D的存在下用TGF-β 1处理的角化细胞中FSTLl的相对转录本丰度。c)的直方图显示 转染有对照siRNA或对人DROSHA特异的siRNA的角化细胞中成熟miR-198的相对水平（η =3)，#P〈0. 001。d)的直方图显示转染有对照siRNA或对人DROSHA特异的siRNA的角化 细胞中FSTLlmRNA的相对水平，*P〈0. 05, #P〈0. 001。学生t检验用于计算P值，且误差棒 表示平均值土s. e.m.。e)转染有对照抑制剂或抗miR-198的角化细胞中FSTLl蛋白的免 疫细胞化学显示蛋白水平没有显著差异（η = 3)。因此，图18示出TGF-β 1促进FSTLl表 达。
[0035] 发明详述
[0036] 糖尿病患者的慢性皮肤伤口是主要的全球性健康负担和最常见的下肢截肢的原 因。理解伤口愈合的机理能够改善用于促进伤口闭合的治疗策略。本公开的目的为提供用 于促进伤口愈合或伤口闭合的方法和组合物。
[0037] 如本文所使用的，术语"伤口"是指针对身体的损伤，包括但不限于来自创伤、暴 力、事故或手术的损伤。伤口可由于膜（如皮肤）的撕裂或破裂而发生，且通常损害下面的 组织。伤口可发生在局部位置或在内部。慢性伤口可由疾病引起，包括但不限于糖尿病；内 部器官的疾病，包括但不限于，肝脏、肾脏或肺的疾病；癌症；病毒或任何其它减缓愈合过 程的病症。
[0038] 自然愈合发生在明确确定的阶段。急性性质的皮肤伤口可在恢复皮肤和下面的 组织的完整性和功能的生物学过程中在1-3周内愈合。此类伤口可由对皮肤的刮伤、磨损 (abrasion)、割伤（cut)、擦伤（graze)、切割（incision)、撕伤（tear)或挫伤引起。如果伤 口没有在4-12周内愈合，其可被认为是慢性的。在慢性伤口的情况下，伤口可在愈合的一 个阶段中衰减或无法通过正常愈合阶段来获得进展。慢性伤口可能已经存在短暂的一段时 间，例如一个月，或者其可能已经存在数年。
[0039] 如本文所使用的，术语"伤口愈合"是指精确时空愈合程序诱导的再生过程包括伤 口闭合，和在伤口闭合中涉及的过程。术语"伤口愈合"涵盖但不限于颗粒化，新生血管化， 成纤维细胞、内皮细胞和上皮细胞迀移，细胞外基质沉积，上皮再形成，和重塑的过程。
[0040] 术语"伤口闭合"是指伤口的愈合，其中伤口的侧面再结合以形成连续的屏障（如 完整的皮肤）。
[0041] 还公开了一种治疗慢性皮肤伤口的方法。如本文所述，短语"慢性皮肤伤口"是 指不愈合的伤口，包括但不限于，皮肤溃疡、褥疮、压疮、糖尿病性溃疡和疮，以及其它皮肤 病。短语"慢性皮肤伤口（chronic cutaneous wound)"可与慢性皮肤伤口（chronic skin wound)或不愈合伤口（non-healing wound)交换使用，可为任何大小、形状或深度，并可与 正常、健康的皮肤色素相比出现脱色。慢性皮肤伤口可出血、肿胀、渗脓或排脓或其它液体， 引起疼痛或引起受累区域的运动困难或疼痛。慢性皮肤伤口可变得感染，产生升高的体温， 以及排出乳状的颜色为黄色、绿色或褐色，无色或有刺激气味的脓。如果感染，慢性皮肤伤 口可为红色、脆弱或摸起来温热。
[0042] 慢性皮肤伤口可由糖尿病、供血不良、低血氧引起，由其中由于低血压而血流减少 的病症引起，或由特征为闭塞、阻塞或变窄的血管的病症引起。低供氧可由某些血液病、心 脏病和肺病引起，和/或由吸烟引起。慢性皮肤伤口还可为皮肤重复创伤的结果，例如组织 肿胀或压力升高，或在伤口区域上的恒定压力。慢性皮肤伤口可由削弱的或缺乏抵抗力的 免疫系统引起。削弱的或缺乏抵抗力的免疫系统可由年龄增长、辐射、营养不良和/或药物 如抗癌药或留醇类引起。慢性皮肤伤口还可由细菌、病毒或真菌感染，或者异物的存在而引 起。
[0043] 本公开的发明人发现，在正常皮肤中，来自FSTLlmRNA的3'-非翻译区的外显子微 RNA-198(miR-198)的表达在受伤时转向连接FSLTl的开放阅读框。此外，发现对有效迀移 必要的FSTLl与为角化细胞迀移抑制剂的miR-198的表达模式之间负相关。因此，表明转 录后开关控制其特定情况下的表达并协调伤口的上皮再形成。
[0044] 另外发现FSTLl和miR-198在伤口的上皮再形成中起作用，在不希望受理论束缚 下，认为并阐明了控制FSLTl和miR-198的特定情况下的表达的转录后开关为TGF- β信号 转导。阐明了 TGF-β信号转导通过下调对miR-198加工必要的KH型剪接调控蛋白来调控 所述开关。因此，如本文所述的促进伤口愈合和/或伤口闭合的方法或者治疗慢性皮肤伤 口的方法包括施用miR-198抑制剂和/或卵泡抑素样-I (FSTLl)多肽。在一个实例中，如 本文所述的方法可包括施用miR-198抑制剂。在一个实例中，如本文所述的方法可包括施 用卵泡抑素样-I (FSTLl)多肽。在一个实例中，如本文所述的方法可包括施用miR-198抑 制剂和卵泡抑素样-I (FSTLl)多肽。在一个实例中，miR-198和/或FSTLl多肽可作为组 合物来提供。在一个实例中，miR-198和/或FSTLl多肽可作为药物组合物来提供。
[0045] 在一个实例中，miR-198抑制剂和/或FSTLl多肽可为分离的miR-198抑制剂和 /或分离的FSTLl多肽。"分离的"是指多肽实质上或基本上没有在其天然环境中通常与其 相伴的组分。"分离的"肽、DNA、RNA或miRNA抑制剂不涵盖人和/或动物体内存在的肽、 DNA、RNA或miRNA抑制剂，且不涵盖以其天然状态的天然材料或已分离成组分但未作为纯 物质或作为溶液（例如在丙烯酰胺凝胶中）获得的天然材料。
[0046] 如本文所使用的术语"miRNA"，理解为能够与mRNA的3' -非翻译区相互作用由此 防止其翻译的单链非编码RNA序列。可在本文中交换使用的术语"微RNA〃或"miRNA〃为 内源RNA，其中某些已知在转录后水平上调控蛋白-编码基因的表达。如本文所述，术语〃 微RNA"是指任何类型的微-干扰RNA，包括但不限于，内源微RNA和人工微RNA。典型地， 内源微RNA为基因组中编码的