一种西兰花芽苗提取物胶囊的制备方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及医药领域，具体涉及一种西兰花芽苗提取物胶囊的制备方法。
【背景技术】
[0002]西兰花含有大量的硫代葡萄糖苷(Glucosinolates)，在有水分的情况下，细胞受到破坏后，芥子酶(Myrosinase)可以与硫代葡萄糖苷接触并发生水解反应，产生异硫氰酸盐(Isoth1cyanates，简称ITCs)。完整的硫代葡萄糖苷几乎没有抗癌活性，当西兰花采收、加工、咀嚼或植物水解时，植物细胞破碎，内源性芥子酶释放出来，将硫代葡萄糖苷水解为ITCs。ITCs的主要成分是莱菔硫烷(Sulforaphane，简称SFN)。SFN在西兰花中含量多，但是SFN在嫩芽中的含量最高。SFN可以抑制I相代谢酶的表达，减少致癌物前体被代谢激活，还可以通过上调II相代谢酶(GST、GSH、H0-1等)的表达，减少外来毒物、致癌物及一些活性物质(ROS等)对机体的侵害，从而保护细胞。
[0003]莱菔硫烷是一种不稳定的物质，如何有效地保存莱菔硫烷是现阶段需要解决的问题之一。目前，国内市场上西兰花芽苗提取物主要依赖进口，售价十分昂贵，因此研发国产的西兰花芽苗提取物制剂，满足我国日益增加的抗氧化、抗癌需求十分必要。
[0004]申请号为201310073393.4的中国发明专利一种富含萝卜硫素的西兰花芽菜粉及生产方法，公开日2013年12月4日，公开了一种采用芸薹属蔬菜为原材料制备莱菔硫烷的方法。该方法将种子、花、茎和叶等组织粉碎后，采用乙酸乙酯萃取除杂、硅胶吸附，异丙醇、乙醇、石油醚等混合溶液洗脱莱菔硫烷。申请号为200910037363.1的中国发明专利，公开日2009年8月26日，公开了一种从西兰花芽苗菜中提取多功能莱菔硫烷的方法，该方法取生长6?10天的西兰花芽苗，干燥粉碎后加入二氯甲烷、Vit.C、Na2S酶解，经洗涤过滤提纯后得到莱菔硫烷。但是上述两种方法都只是针对莱菔硫烷单体，而且上述两种提取方法均未考虑到莱菔硫烷单体常温下极容易降解，因此提取产率低。
【发明内容】
[0005]本发明提供了一种西兰花芽苗提取物胶囊的制备方法，制备方法简单，成本低，而且有效成分含量高。
[0006]本发明提供的一种西兰花芽苗提取物胶囊的制备方法，包括以下步骤:
[0007]将西兰花芽苗提取物粉末、淀粉、蔗糖、微晶纤维素按照质量比1:4:4:1混合，用30%酒精3mL为润湿剂制成颗粒，进行胶囊填充，即得西兰花芽苗提取物胶囊。
[0008]每10克西兰花芽苗提取物粉末、淀粉、蔗糖、微晶纤维素的总量用酒精3mL。
[0009]所述西兰花芽苗提取物粉末的制备方法，包括以下步骤:
[0010]A、取出芽3天的芽苗40°C烘干粉碎后过60目筛，得芽苗粉末；
[0011]B、取步骤A制备的芽苗粉末，混合维生素C，用去离子水调节料液质量比为1:2-4，加入Na2S，调节pH为5，超声，使芽苗的细胞壁能充分破碎释放更多的芥子酶；得到混合溶液；
[0012]C、在步骤B所得混合溶液中加丙酮，震荡使其酶解；
[0013]D、经超声波振荡提取、抽滤、40°C旋转蒸发浓缩后，冻干机中冻干即可得到西兰花芽苗提取物粉末。
[0014]步骤B中，每20g芽苗粉末加入维生素C 0.04mg，加入Na2S0.2g。
[0015]步骤B中，调节pH的溶液为是磷酸缓冲液，PH为5.8。
[0016]步骤B中，所述超声条件控制为:超声功率320W、超声频率70KHz、超声温度40°C，超声时间45min。
[0017]步骤C中酶解温度为20-30°C，在ISOrpm磁力搅拌下振荡4_8h ?’每20g芽苗粉末加入丙酮20ml ο
[0018]步骤D超声条件与步骤B相同。
[0019]步骤A中所述芽苗的培养方法为:
[0020](I)、将西兰花种子放置于浸种袋里，将种子和水以1:3质量比浸泡4-1? ;有利于种子发芽；
[0021](2)、在育苗盘的底部铺一层育苗纸，将浸泡好的种子均匀铺洒在育苗纸上，保持种子不重叠，遮盖苗床；以保护和促使西兰花芽苗生长；将洁净的纱布裁成比育苗盘大一些，用水润湿到不滴水，盖在铺满种子的育苗盘上，使种子避光正常发芽；
[0022](3)、将育苗盘放置于温度为25°C与相对湿度为60%的环境中，保持空气流通，每天喷水3次，3天即可收获芽苗；
[0023]步骤(2)中所述育苗盘在0.1 %的高锰酸钾溶液中浸泡I小时，冲洗干净后晾干，防止细菌、真菌等污染使芽苗生长过程中感染导致腐烂；
[0024]步骤(3)中每次喷水量为:使育苗纸湿润但是无积水，以防止积水过多使种子根部腐烂，待出芽后去掉纱布见光生长3天即可得到西兰花芽苗。
[0025]本发明中西兰花芽苗的育苗方法采用无土栽培，没有污染、操作简单，节约成本。用Vit.C水溶液，超声波辅助丙酮进行提取，无需添加外源芥子酶也可使细胞内莱菔硫烷充分被水解出来，提高生产效率。而且利用西兰花芽苗提取物作为莱菔硫烷的依附体制成胶囊，经30d大鼠毒性试验验证，该胶囊无明显毒副作用。且胶囊常温方便贮藏，解决了莱菔硫烷容易降解的问题。与现有技术相比，本发明通过制备西兰花芽苗提取物胶囊，有效解决了现阶段市场上西兰花芽苗提取物产品供应稀少、价格高昂等的问题。
【附图说明】
[0026]图1为制备的西兰花芽苗提取物HPLC图谱；
[0027]图2为莱菔硫烷标准品HPLC图谱；
[0028]图3为西兰花芽苗提取物制剂对大鼠肝脏组织学影响；(A)空白对照组；(B)90mg/kg 组；(C) 30mg/kg 组；(D) 10mg/kg 组；(E)溶媒对照组。
【具体实施方式】
[0029]实施例1
[0030]一种西兰花芽苗提取物胶囊的制备方法，包括以下步骤:
[0031]⑴将育苗盘表面杂质洗净，在0.1 %的高锰酸钾溶液中浸泡一个小时，然后冲洗干净，晾干备用；
[0032]⑵将西兰花种子放置于浸种袋里，将种子和水以1:3质量比例浸泡12h，在此期间更换两次水以保持种子的洁净，种子浸泡好后用纯水冲洗捞出沥干水备用；
[0033]⑶在消毒晒干后的育苗盘底平铺一层育苗纸，用喷壶打湿育苗纸，将西兰花种子均匀铺洒在育苗纸上，保持种子不重叠，铺好后再次用喷壶将种子和育苗纸喷湿；
[0034]⑷将洁净的纱布裁成比育苗盘大一些，用水润湿到不滴水后盖在铺满种子的育苗盘上，用夹子固定；
[0035](5)放置于温度为25°C与相对湿度为60%的地方，保持空气流通，每天喷水3次，每次均为育苗纸湿润但是无积水，待出芽后去掉纱布见光生长3天；
[0036](6)取生长3天新鲜的西兰花芽苗，经鼓风低温烘干后粉碎过60目筛。
[0037](7)精密称取20g提取物粉末于500mL烧杯中，加入0.04mg的Vit.C水溶液，使得料液质量比分别为1: 3，加入0.2g Na2S，用盐酸溶液调节PH为5，放入超声波清清洗仪中超声，设定超声功率320W、超声频率70KHz、超声温度40°C，超声时间45min ；
[0038]⑶加入20ml丙酮，设定酶解温度为26°C，在180rpm磁力搅拌下振荡6.45h ；
[0039](9)按上述超声条件再次超声，用滤纸抽虑收集滤液，滤渣再用丙酮浸提两次，合并3次滤液后用旋转蒸发仪浓缩，温度为40°C，将浓缩液放入冻干机中冻干即可得到西兰花芽苗提取物粉末，提取物中有效成分莱菔硫烷的HPLC图谱见图1，莱菔硫烷标准品HPLC图谱见图2 ；
[0040](1Φ将西兰花芽苗提取物粉末与辅料按I (粉末):4(淀粉):4(蔗糖):1 (微晶纤维素)比例，用30%酒精3mL为润湿剂制成颗粒，进行胶囊填充，即得西兰花芽苗提取物胶费ο
[0041]试验实施例1:单因素方法分析不同育苗条件对西兰花芽苗发芽过程的影响
[0042]具体试验步骤如下:
[0043]⑴将育苗盘表面杂质洗净，在0.1 %的高锰酸钾溶液中浸泡一个小时，然后冲洗干净，晾干备用；
[0044]⑵将西兰花种子放置于浸种袋里，将种子和水以1:3比例分别浸泡4、8、12h，在此期间更换两次水以保持种子的洁净，种子浸泡好后用纯水冲洗捞出沥干水备用；
[0045]⑶在消毒晒干后的育苗盘底平铺一层育苗纸，用喷壶打湿育苗纸，将西兰花种子均匀铺洒在育苗纸上，保持种子不重叠，铺好后再次用喷壶将种子和育苗纸喷湿；
[0046]⑷将洁净的纱布裁成比育苗盘大一些，用水润湿到不滴水后盖在铺满种子的育苗盘上，用夹子固定；
[0047](5)放置于温度分别为20、25、30°C，相对湿度分别为30、50、70 %的地方，保持空气流通，每天喷水1、3、5次，每次均为育苗纸湿润但是无积水，待出芽后去掉纱布见光生长3天;
[0048](6)取生长3天新鲜的西兰花芽苗，经鼓风低温烘干后粉碎过60目筛。
[0049](7)西兰花芽苗的提取过程条件和胶囊处方的制作同实施例1。
[0050]通过单因素实验证实西兰花芽苗菜最佳生长条件为:浸种时间为12h，环境温度为25°C、相对湿度为60%，每天喷水3次。
[0051]实施例2:响应面优化法分析不同提取条件对西兰花芽苗提取率的影响
[0052]选用Design-Expert 8.050b响应面分析软件，根据Box-behnken的中心组合为实验设计原理，通过单因素实验，最优取值点为中心，上下区域各取一个水平值作为响应面实验设计水平，选取西兰花芽苗提取物的提取率为响应值，选择对提取率有显著影响的三个因素:料液比(Xl)为1:2、1:3、1:4 ;酶解温度(X2)为20、25、30°C ;酶解时间(X3)为4、6、8h作三因素三水平的响应面分析试验。
[0053]具体试验步骤如下:
[0054]⑴西兰花芽苗的育苗过程条件同实施例1。
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