一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法
【技术领域】
[0001]本发明属于皱皮木瓜加工技术领域，涉及一种利用皱皮木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的制备方法。
【背景技术】
[0002]皱皮木瓜是蔷薇科木瓜属多年生落叶灌木，是我国南北各地广范分布的野生果树资源。皱皮木瓜果实气味芳香、营养丰富，富含多种活性成分，是一种药食兼用的保健水果。皱皮木瓜烘干果实，性温味酸，具有平肝舒筋，和胃化湿之功效，可治疗湿痹拘挛、关节酸疼、吐泻转筋、脚气水肿等症，临床使用具有保肝、解痉、抗炎镇痛、祛风湿、抗肿瘤、增强人体免疫力等多种药理作用。近年来国内外学者对皱皮木瓜果实化学研宄进步较大，结果表明:皱皮木瓜新鲜果实含有超氧化物歧化酶、维生素类、五环三萜类有机酸、黄酮类、皂甙类、多酚类、微量元素、挥发油类等多种人体必需的活性成分，是一种保健价值很高的加工型水果。
[0003]现有技术中，皱皮木瓜多用于生产超氧化物歧化酶(SOD)，而随着皱皮木瓜鲜果SOD加工业的发展，生产超氧化物歧化酶后的鲜果皮渣排放量也逐年增加，废弃皮渣造成了严重的原料浪费和环境污染，但目前我国对皱皮木瓜皮渣的开发缺少有效的手段，这严重影响了皱皮木瓜产业的健康发展。皱皮木瓜生产超氧化物歧化酶后的皮渣副产物中富含五环三萜类化合物齐墩果酸和熊果酸、总黄酮等，三者均为皱皮木瓜的主要活性成分，均具有极高的药用价值，而现有技术中对利用皱皮木瓜鲜果皮渣进行齐墩果酸、熊果酸和总黄酮联产的制备方法尚无文献报道。
【发明内容】
[0004]为解决以上技术问题，本发明的目的在于提供一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，能够充分利用皱皮木瓜鲜果SOD酶蛋白提取后的皮渣，实现齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的联产制备，提高皱皮木瓜产品附加值。
[0005]本发明目的具体通过以下技术方案实现:
[0006]一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，其特征在于按以下工艺步骤进行:
[0007]I)原料的预处理:将新鲜成熟皱皮木瓜果实提取SOD后的皮渣经40_50°C恒温鼓风干燥至恒重，粉碎后过80目筛得到一次皮渣干粉并备用；
[0008]2)提取分离:将步骤(I)制得的一次皮渣干粉经95%乙醇220-260W超声提取15-25min，重复3次，离心，分别收集上清液和皮渣沉淀物；
[0009]3)总齐墩果酸和熊果酸的提取:将步骤(2)中分离得到的上清液减压浓缩得到总三萜酸粗提取物浸膏，然后向总三萜酸粗提取物浸膏中加入沸点为60-90°C的石油醚，在沸腾条件下萃取3次进行脱脂，挥干萃取剂，220-260W超声辅助氯仿萃取3次，氯仿层减压浓缩得到二次浸膏，然后向二次浸膏中加入95 %乙醇并以超声辅助至全部溶解，调pH值至11-13，以4000-6000rpm离心8_12min，弃去沉淀留上清液，该上清液调pH值至3_5，直至结晶物质析出量不再增加，以4000-6000rpm离心弃上清液得沉淀；
[0010]4)齐墩果酸和熊果酸重结晶分离:将步骤(3)最后得到的沉淀依次用无水甲醇和无水乙醇重结晶处理三次分别得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体。
[0011]5)总黄酮的提取:将步骤(2)中分离得到的沉淀残渣经20_30h自然挥干，得到二次皮渣干粉，然后向二次皮渣干粉中加入60-70%乙醇浸泡1.5-2.5h，再用220-260W超声处理20-40min并离心，浸泡、超声处理和离心重复3次，弃去残渣，合并上清液，减压浓缩上清液，回收溶剂，得到总黄酮浸膏，再向总黄酮浸膏中加入正丁醇溶液萃取3次，合并上层液，将上清液减压浓缩回收溶剂，得到二次总黄酮浸膏，45-50°C恒温干燥二次总黄酮浸膏，然后粉碎得到皱皮木瓜总黄酮干粉；
[0012]上述步骤(2)中95%乙醇与提取粉末质量比为4:1-6:1。
[0013]上述步骤(3)中石油醚与总三萜酸粗提取物浸膏重量比为4:1-6:1。
[0014]上述步骤(5)中乙醇与二次皮渣干粉质量比为13:1-17:1。
[0015]上述步骤(5)中正丁醇与总黄酮浸膏质量比为1:3-1:5。
[0016]本发明的有益效果为有益效果:本发明一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，能够将生产SOD后废弃的皮渣再利用进行联合提取同时得到齐墩果酸、熊果酸和总黄酮，提高资源利用率的同时增加产品附加值，而且提取物纯度高，可用于皱皮木瓜鲜果皮渣的规模化深加工生产。
【附图说明】
[0017]图1为本发明的工艺流程图；
[0018]图2为无水甲醇重结晶单体纯度鉴定色谱图；
[0019]图3为无水乙醇重结晶单体纯度鉴定色谱图；
[0020]图4是芦丁标准曲线图。
【具体实施方式】
[0021]下面结合实施例和附图对本发明作进一步说明。
[0022]实施例1
[0023]一种利用木瓜皮渣联产齐墩果酸、熊果酸、总黄酮的方法，如图1所示，按以下工艺步骤进行:
[0024]I)原料的预处理:将新鲜成熟皱皮木瓜果实提取SOD后的皮渣副产物经45°C恒温鼓风干燥至恒重，粉碎后过80目筛得到一次皮渣干粉并备用；
[0025]2)提取分离:将步骤(I)制得的一次皮渣干粉经95%乙醇240W超声提取20min，95%乙醇与一次皮渣干粉重量比值为5，重复3次处理，然后离心，分别收集上清液和沉淀；
[0026]3)总齐墩果酸和熊果酸的提取:将步骤(2)中分离得到的上清液减压浓缩得到总三萜酸粗提取物浸膏，然后向总三萜酸粗提取物浸膏中加入石油醚，其中沸点为60-90°C的石油醚与总三萜酸粗提取物浸膏重量的比值为5，沸腾状态下萃取3次进行脱脂，挥干萃取剂，240W超声辅助氯仿萃取3次，氯仿层减压浓缩得到二次浸膏，然后向二次浸膏中加入95%乙醇并以超声辅助至全部溶解，加Imol.L—1的NaOH溶液调pH值至12，以5000rpm离心lOmin，弃去沉淀留上清液，向该上清液中加Imol吨―1的HCl溶液调pH值至4，以5000rpm离心弃上清液得沉淀；
[0027]4)齐墩果酸和熊果酸重结晶分离:将步骤(3)最后得到的沉淀依次用无水甲醇和无水乙醇重结晶处理三次分别得到无水甲醇重结晶单体和无水乙醇重结晶单体。
[0028]5)总黄酮的提取:将步骤(2)中分