控制蜜蜂体表寄生螨的方法及驱螨剂的制作方法
【技术领域】
[0001] 本发明涉及生物学技术领域，具体而言，本发明涉及一种驱螨剂和控制蜜蜂体表 寄生螨的方法。
【背景技术】
[0002] 蜜蜂的健康受到各种各样病原体的威胁，例如：病毒，细菌，微孢子虫和原生生物。 由这些病原体所导致的蜜蜂种群减少已经对蜂农和需要蜜蜂授粉的人造成了严重的经济 损失。然而，蜜蜂体外寄生的螨虫对蜜蜂健康的影响更加严重。在拥有养蜂业的大洲中，除 澳大利亚外，狄斯瓦螨是威胁蜜蜂健康的主要害虫。在亚洲的大多数国家，梅氏热厉螨也有 着同样程度的危害。它们不仅可以通过吸噬淋巴液致使蜜蜂幼虫和蜂蛹死亡，而且还可以 间接的传播病毒及其它蜜蜂病原体。
[0003]目前常用来控制这两种蜂螨的杀螨药(如福化利和虫螨脒）和其他一些化合物中， 大多数是通过扰乱螨虫的神经系统来达到除螨目的的。然而，这些控制方法都存在缺陷：如 (1)可能是由于螨虫的快速繁殖，蜂螨已经对这些常用杀螨剂产生了抗药性；（2)这些物质 的交叉反应可能增强对蜜蜂的不利影响；(3)这些化合物残存在蜂蜜产品中，人类食用后 会导致过敏和中毒反应。
[0004] 因此，人们迫切需要一种杀螨剂，既可以控制蜂螨，又对蜜蜂，环境和人类都很安 全。现在研究，人们已经知道TRP通道家族包括七个亚族，而且已经在很多哺乳动物的组 织、器官中发现了TRP通道。TRPAl亚族是2003年，Story及其同事发现，在小鼠的背根神 经节DRG发现的一种蛋白，发现在DRG中，TRPAl和PRPV共表达，提示这种通道可能介导了 伤害性冷刺激。现在研究认为温度低于18度可激活基因TRPAl通道。
【发明内容】
[0005] 本发明所要解决的第一问题在于克服现有杀螨剂导致过敏和中毒反应的问题，提 供一种控制蜜蜂体表寄生螨的方法，该方法简便、灵敏、特异性强。
[0006] 本发明所要解决的第二技术问题在于提供一种驱螨剂用于本发明第一个方面的 方法。
[0007] 本发明所要解决的第三技术问题在于提供一种驱螨剂用于控制蜜蜂体表寄生螨 的方法的应用。
[0008] 为了解决现有技术中的这些问题，在第一个方面，本发明提供的技术方案是：本发 明提供了一种控制蜜蜂体表寄生螨的方法，以TRP蛋白通道为靶位点，将植物精油成分作 用于TRP蛋白通道的靶位点来控制蜜蜂体表寄生螨。
[0009] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述植物精油为能够激活寄生螨TRP蛋白 通道的所有天然化合物或该植物精油包含有能激活寄生螨TRP蛋白通道的天然化合物。
[0010] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述植物精油为丁香酚、1，8-桉叶素、香芹 酚、杂酚油、茉莉酸甲酯、2-甲基壬基甲酮、橙花叔醇、侧柏酮、2-十二烷酮、香叶基丙酮、桃 金娘烯醛、4-松油醇、P-香茅醇、a-松油醇、橙花醇、二烯丙基二硫、3, 7-二甲基-6-辛烯 醇、2-乙基-1，3-己二醇、P-环柠檬醛、薄荷醇中的一种或两种以上的混合。
[0011] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述植物精油优选为a-松油醇。
[0012] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述a-松油醇彡〇. 3M。
[0013] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述植物精油能激活狄斯瓦螨的VdTRPAl 通道蛋白或梅氏热厉螨的TmTRPAl通道蛋白。
[0014] 优选地，本发明第一个方面的方法中，所述狄斯瓦螨的VdTRPAl通道蛋白的cDNA 具有如SeqNo.IVdTRPAl-USeqNo. 2VdTRPAl_S两种序列；所述梅氏热厉螨的TmTRPAl通 道蛋白的cDNA具有如SeqNo. 3TmTRPAl_S、SeqNo. 4TmTRPAl_Ll、SeqNo. 5TmTRPAl_L2 的 三种序列。
[0015] 在第二个方面，本发明提供了一种驱螨剂，其包括一种或两种以上的植物精油，其 作用靶点为螨虫的TRP蛋白通道。
[0016]优选地，本发明第二个方面的驱螨剂中，所述植物精油为能够激活寄生螨TRP蛋 白通道的所有天然化合物。或该植物精油包含有能激活寄生螨TRP蛋白通道的天然化合 物。
[0017]优选地，本发明第二个方面的驱螨剂中，所述植物精油为丁香酚、1，8-桉叶素、香 芹酚、杂酚油、茉莉酸甲酯、2-甲基壬基甲酮、橙花叔醇、侧柏酮、2-十二烷酮、香叶基丙酮、 桃金娘烯醛、4-松油醇、P-香茅醇、a-松油醇、橙花醇、二烯丙基二硫、3, 7-二甲基-6-辛 烯醇、2-乙基-1，3-己二醇、P-环柠檬醛、薄荷醇中的一种或两种以上的混合。
[0018] 优选地，本发明第二个方面的驱螨剂中，所述植物精油为a-松油醇。
[0019] 优选地，本发明第二个方面的驱螨剂中，所述a-松油醇彡〇. 3M。
[0020] 优选地，本发明第二个方面的驱螨剂中，还包括可接受的辅料。
[0021] 在第三个方面，本发明提供了一种驱螨剂用于控制蜜蜂体表寄生螨。
[0022] 在本文中，术语"狄斯瓦螨"或简称"瓦氏螨"Varroadestructor，蜱螨目，瓦螨 科，瓦螨属。狄斯瓦螨是蜜蜂的体外寄生虫，寄生于工蜂（幼虫和成虫）体表，影响工蜂 的哺育采集防卫等行为；狄斯瓦螨进入巢房底部产卵，进而影响蜂群幼虫的发育；最终影 响蜂群的繁殖与生产。
[0023] 在本文中，术语"梅氏热厉螨"或简称"梅氏螨"Tropilaelapsmercedesae,蝶螨 目，厉螨科，热厉螨属，蜂螨多寄生在蜜蜂幼虫体外，其生长繁殖过程均在封盖的巢房内完 成。新生成螨随蜂羽化出房，或从死亡幼蜂巢房盖的穿孔处爬出，再潜入其他蜂幼房内寄生 繁殖。
[0024] 在本文中，术语"蜜蜂"指蜜蜂科、属膜翅目，包括西方蜜蜂Apismellifera。
[0025] 在本文中，术语"a-松油醇"，一般工业品为三种异构体的混合物，a-松油醇有 左旋、右旋、消旋三种光学异构体，本发明a_松油醇包括三种异构体。
[0026] 在本文中，术语"植物精油"，是指从植物的根、茎、花、叶、果实、树皮等部位，提取 出来的具有高度芳香及挥发性的脂溶性液体。植物精油包括单萜烯、单萜醇、单萜酮、香豆 素、酚类、醚类、醛类、倍半萜烯、倍半萜酮、倍半萜醇和氧化物，其种类广泛，本文列举出来 的只是其中的一小部分。通常植物精油微溶于水，溶于乙醇或DMS0。且本发明中，在本文中， 使用的植物精油可以直接采用其天然的液体形式，还可以添加适量的添加剂、辅料等；使用 的植物精油还可以采用固体吸附剂吸附精油的方式施加，来控制蜜蜂体表寄生螨。
[0027] 术语"辅料"，包括液体溶剂辅料，包括不限于如乙醇、DMSO;固体辅料，如固体吸 附剂、缓释剂，如包括但不限于纤维素离子交换剂、离子交换树脂、硅胶、活性炭、活性碳纤 维等所属技术领域人员常用的技术手段。
[0028] 现有技术中的大部分驱虫剂和驱螨剂是作为配体通过刺激味觉或嗅觉感受体以 达到驱虫驱螨目的，这些受体是通过G蛋白偶联受体起到效果的。而TRPAl瞬时受体电位 (TRP)Al通道为一种阳离子通道，拥有伤害性刺激感受器的功能，在遇到有害刺激时能够 引起动物的伤害回避行为。我们通过检测存在于植物精油中的天然化合物是否能够激活 TRPAl通道以寻找潜在的趋螨剂。TRPAl离子通道还从未做为一个靶标用来研发驱螨剂或 者杀螨剂和现有的驱螨剂机理完全不同。这些天然化合物植物精油能特异的、有效的驱赶 螨虫，但不会伤害蜜蜂，也不会污染食用蜂产品。另外，类似的方法也可以被用于控制人类 和其它哺乳动物的寄生螨虫。
[0029] 相比于现有技术中的解决方案，本发明的驱螨剂及驱螨方法的有益效果是：
[0030] 1.特异性强：本发明由于作用于TRPAl瞬时受体电位（TRP)Al通道，控制蜜蜂体 表寄生螨，具有很强的特异性。
[0031] 2.本发明的方法对于蜜蜂和食用蜂蜜产品的人类都无毒副作用，不会伤害蜜蜂， 也不会污染食用蜂产品，也不会产生抗药性。
[0032] 3.本发明由于采用天然植物成分作为驱除剂，相对于化学合成物，对于环境更加 友好，更加环保。
【附图说明】
[0033] 下面结合附图及实施例对本发明作进一步描述：
[0034] 图1为a-松油醇在瓦氏螨感染蜂群中的浓度测试。
[0035] 图2A为橙花醇、a_松油醇、丁香酚、香芹酚、薄荷醇、橙花叔醇、侦彳柏酮、香叶基丙 酮的钙离子成像法图谱；横坐标为时间，纵坐标为细胞内钙离子荧光指示剂fura-2的荧光 强度在化合物流入腔膛期间与未流入时的比值。化合物名称下面的横线表示化合物流入腔 膛所跨越的时间。
[0036] 图2B为2-十二烷酮、2-乙基-1,3-己二醇、杂酚油、二烯丙基二硫、3, 7-二甲 基-6-辛烯醇、茉莉酸甲酯、4-松油醇、P-香茅醇、1，8-桉叶素、桃金娘烯醛的钙离子成像 法图谱。横坐标为时间，纵坐标为细胞内钙离子荧光指示剂fura-2的荧光强度在化合物 流入腔膛期间与未流入时的比值。化合物名称下面的横线表示化合物流入腔膛所跨越的时 间。
【具体实施方式】
[0037] 为了便于理解，以下将通过具体的实施例对本发明进行详细地描述。需要特别指 出的是，这些描述仅仅是示例性的描述，并不构成对本发明范围的限制。依据本说明书的论 述，本发明的许多变化、改变对所属领域技术人员来说都是显而易见的。
[0038] 以下将以举例形式进行说明，如有未详尽之处，可以参见常用的实验手册。螨虫 购自苏州丁氏养蜂场。精油材料来源见下表1。巢式RT-PCR(聚合酶，日本T0Y0B0公司）， (Trizol(Invitrogen公司），5'-FullRACE试剂盒（日本TOYOBO公司），3'RACE试剂 盒（SMARTerRACE,Clontech公司），HEK293 细胞（Invitrogen公司），Dsred转染指不剂 (Clonetech公司），Ac5.l/V5_HisB载体（Invitrogen公司），fura-2(Invitrogen公司）。
[0039] 一、分离狄斯瓦螨的TRPAl(简VdTRPAl)cDNA
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