黄芪多糖、黄芪甲苷、丹参素、红花苷组，每组10只。各给药组灌 胃给于相应药物0. 5ml/10g，羧甲基纤维钠对照组给予等体积的羧甲基纤维钠，每天一次， 连续给药2周。每天记录小鼠死亡数，并称量不同给药组小鼠体重。
[0141] 抗肿瘤活性评价给药期间每天称量动物体重，末次给药48h后处死动物，剥离肿 瘤，称重，置于10 %福尔马林溶液固定后，进行病理切片。
[0142] 按以下公式计算药物对肿瘤生长的抑制率。肿瘤生长抑制率=(对照组平均瘤 重一给药组平均瘤重）/对照组平均瘤重X 100%。
[0143] 4.实验结果
[0144] 本发明药物体内抗肿瘤活性结果如下表。
[0145] 表7体内抗肿瘤活性实验结果
[0146]
[0147] 注：各组与对照组比较*P〈0. 05, **P〈0. 01
[0148] 实验结果表明：不同给药组与对照组相比可明显抑制肿瘤活性，均有显著性差异 (P〈0. 05)，表明本发明药物具有抗肿瘤的作用。
[0149] 5.结论本发明药物对肿瘤有抑制作用，可用于肿瘤疾病的治疗。
[0150] 实验五、本发明药物对血管内皮细胞的保护作用
[0151] 1.实验材料人脐静脉血管内皮细胞株（内皮细胞ECV-304)购自上海拜力生物科 技有限公司；DMEM高糖培养基、胎牛血清均购自Gibco公司。MDA、SOD试剂盒购自南京建 成生物有限公司；H 2O2购于天津科密欧化学试剂有限公司；胰酶、四氮唑兰（MTT)购自美国 SIGMA公司。
[0152] 2.实验药物本发明25组组合物药物成分均有由大连美仑生物技术有限公司提 供，实验前用二甲基亚砜配制成5mg/ml溶液（黄芪多糖、黄芪甲苷、丹参素、红花苷组浓度 和组合物十五相同），备用。
[0153] 3.实验方法
[0154] 细胞培养将人脐静脉血管内皮细胞置于混有2mmol/L L -谷氨酰胺、100μ g/ml 肝素、100U/ml青霉素、30 μ g/ml内皮细胞生长因子和10 %胎牛血清的1640培养液中，于 37°C、5% C02饱和湿度的细胞培养箱中培养。当细胞生长融合至80%时，倒出旧的培养基， 用PBS液轻洗细胞2~3次，再加入1ml左右0. 125 %胰酶，至37°C、5 % CO2培养箱孵育 2min，镜下见细胞皱缩变圆、细胞间隙增大时，吸弃胰酶，加入含10%胎牛血清的完全培养 液以终止胰酶的作用，用吸管反复轻轻吹打细胞，使之从瓶壁脱落成细胞悬液。细胞计数， 调整细胞密度为IX IO5个/ml，接种于96孔板每孔100 μ 1，置于37°C、5 % CO2条件下培养。 约24h后，用于实验。
[0155] 建立H2O2诱导人脐静脉血管内皮细胞损伤模型血管内皮细胞以IO 4个/孔接种 于96孔培养板。用无血清培养基将H2O2配成0、75、150、300、600 μ mol/L剂量组，分别加 入96孔板中，每孔100 μ 1，分别作用12、24、48h后，将上清液弃掉，每孔加入100 μ 1培养 基和20 μ IMTT(5g/L)作用4h，将上清弃掉，每孔加150 μ 1二甲基亚砜，微孔振荡器上振荡 15min，570nm酶标仪下测定细胞吸光度值（Α)。细胞抑制率％=(空白组吸光度值一各组 吸光度值）（A) /空白组吸光度值（A) X 100 %。
[0156] 给药方法将细胞以2X IO5个/孔接种于6孔板，实验分为27组，正常对照组：每 孔给予2ml无血清培养基；模型组：每孔给予2ml终浓度为300 μ mol/LH202，作用24h ;本发 明组方一至二十五组：给予2ml终浓度为50mg/ml相应药物，孵育4h后，给予2ml终浓度为 300 μ mol/L H2O2作用24h ;黄芪多糖、黄芪甲苷、丹参素、红花苷组操作同本发明组。检测细 胞中S0D、MDA的含量：消化收集各组细胞，每组加 Iml PBS，采取反复冻融的方法（一 80° 冰箱15min，室温20min，如此重复5次），至细胞破碎，内容物流出，3000r/min离心15min， 吸取上清，进行BCA蛋白定量，然后按试剂盒说明书进行MDA、SOD的含量测定。
[0157] 4.实验结果
[0158] 本发明药物对人静脉血管损伤的保护作用，见表8
[0159] 表8本发明药物对人静脉血管SOD、MDA的影响（无 :t .V )
[0160]
[0162] 注：各组与模型组比较*Ρ〈0· 05, **Ρ〈0· 01[0163] 实验结果表明：各给药组较模型组SOD活性升高，MDA含量下降，且有统计学意义
[0161] (Ρ〈0· 05 或 Ρ〈0· 01)。
[0164] 5.结论实验证明本发明组方可以改善受损的静脉血管内皮细胞，提示可以用于治 疗心脑血管疾病。 具体实施例
[0165] 实施例1
[0166] 取黄芪多糖2. 6g，丹参总酚酸2. 6g，加 PEG-20050ml，再加注射用水稀释至500ml， 滤过，补充注射用水至800ml，调节pH值至6. 5-7. 0,加注射用水稀释至1000ml，用0. 22 μ m 微孔滤膜滤过，分装，灭菌，得注射剂。
[0167] 实施例2
[0168] 取黄芪多糖2. 5g，红花苷0. 25g，加 PEG-20050ml，再加注射用水稀释至500ml，滤 过，补充注射用水至800ml，调节pH值至6. 5-7. 0,加注射用水稀释至1000ml，用0. 22 μ m微 孔滤膜滤过，分装，灭菌，得注射剂。
[0169] 实施例3
[0170] 取黄芪多糖250g、丹参总酚酸260g、红花苷2. 6g，葡甲氨和精氨酸适量，加入注射 用水稀释至5L，搅拌直至溶解，滤过，滤液调pH值至5. 0-7. 0,用0. 22 μ m微孔滤膜进行精 滤；取甘露醇适量加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，加 注射用水稀释至10L，按单位制剂IOml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干粉。
[0171] 实施例4
[0172] 取黄芪甲苷0.25g、丹参总酚酸260g、葡甲氨和精氨酸适量，加入注射用水稀释至 5L，搅拌直至溶解，滤过，滤液调pH值至5. 0-7. 0,用0. 22 μ m微孔滤膜进行精滤；取甘露醇 适量加注射用水配制成溶液，与上述滤液混匀，用〇. 22 μ m微孔滤膜滤过，加注射用水稀释 至10L，按单位制剂IOml的剂量分装，冷冻干燥，得冻干粉。
[0173] 实施例5
[0174] 取黄芪多糖78g，丹参总酚酸80g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑石粉适量， 分别过80目筛后，与药粉混合均匀，加适量的黏合剂制成软材，制粒，颗粒于60°C干燥。加 微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉后混合均匀，压制成1000片。
[0175] 实施例6
[0176] 取黄芪多糖78g，丹参总酚酸80g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑石粉适量， 分别过80目筛后，均匀混合，加适量的黏合剂制成软材，制粒；颗粒在60°C干燥。加入羧甲 淀粉钠、微粉硅胶、硬脂酸镁和滑石粉混合均匀，装胶囊，制成1000粒。
[0177] 实施例7
[0178] 取黄芪多糖1320g，丹参总酚酸1584g，预交化淀粉，微粉硅胶，硬脂酸镁，滑石粉 适量，再加阿斯巴甜适量，制成软材，制粒，在60°C干燥后，检测合格后，分装于药用聚乙烯 塑料袋中，每袋5g，共制1000袋。
【主权项】
1. 一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：按重量份计，含有黄芪多糖5-50份 或黄芪甲苷〇. 1-10份、丹参总酚酸1-30份和/或红花苷1-30份。2. 根据权利要求1所述的一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：丹参总酚酸 可以用丹参酚酸B1-30份和/或丹参素1-30份代替。3. 根据权利要求1或2所述的一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：红花苷 可以用羟基红花黄色素A1-30份代替。4. 根据权利要求1-3所述任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：药 物组合物还含有毛蕊异黄酮1-10份，毛蕊异黄酮苷1-10份。5. 根据权利要求1-4所述任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：药 物组合物还含有丹参酚酸A0. 5-5份。6. 权利要求1-5任一所述药物组合物在制备用于治疗肾脏疾病的药物中的应用。7. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的肾脏疾病为肾病综合征。8. 根据权利要求6所述的应用，其特征在于：所述的肾脏疾病为高血压肾病。9. 权利要求1-5任一所述药物组合物在制备用于治疗肿瘤、心脑血管疾病的药物中的 应用。10. 根据权利要求1-5任一所述一种治疗肾脏疾病的药物组合物，其特征在于：该药物 组合物为固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂。
【专利摘要】本发明涉及一种含有黄芪多糖的药物组合物及其制药用途，该组合物含有黄芪多糖或黄芪甲苷、丹参总酚酸和/或红花苷，其中丹参总酚酸可以用丹参酚酸B和/或丹参素代替；红花苷可以用羟基红花黄色素A代替，还含有毛蕊异黄酮，毛蕊异黄酮苷，还可以含有丹参酚酸A。该组合物可以制成固体形式、液体形式、气体形式或半固体形式的制剂，经大量实验证实，它可用于治疗肾脏疾病、糖尿病肾病、心脑血管疾病或肿瘤疾病等。
【IPC分类】A61K31/352, A61K31/351, A61P9/00, A61K31/192, A61K31/343, A61K31/216, A61K36/537, A61P35/00, A61P9/12, A61K31/7034, A61K31/7048, A61P13/12
【公开号】CN105012386
【申请号】CN201410171290
【发明人】吴芳, 吕延英, 王光建, 赵兴, 詹芳, 王俊平, 贾诚, 曾艳龙
【申请人】西安世纪盛康药业有限公司
【公开日】2015年11月4日
【申请日】2014年4月25日