予药物干预。药物组合物给药组每只裸鼠每天 灌胃给药1次（50mg/kg)，对照组给予等量无菌生理盐水，连续给药21天。每周两次采用游 标卡尺测量裸鼠皮下肿瘤最大径（a)和最小径（b)，并计算肿瘤体积（V) =0.5236XaXb2。 实验结束时，颈椎脱白法处死裸鼠，将皮下肿瘤快速剥离，瘤块称重，将组织置液氮冻存。
[0033] 1.3. 4 Western blot检测蛋白表达不同浓度药物组合物（0、10、20、40μg/ml) 处理SK0V3细胞24h后，采用RIPA全蛋白裂解液提取细胞总蛋白。取裸鼠移植瘤组织经液 氮充分研磨，加RIPA全蛋白裂解液提取组织总蛋白。经Bradford法定量后，取30 y g蛋白 于10%~12% SDS-PAGE电泳2h并转移至NC膜。在含5%脱脂牛奶的TBST溶液中封闭lh， 加一抗并于4°C孵育过夜。第二日TBST洗涤后加相应二抗并于室温孵育lh，TBST洗涤3次 后ECL显影，采用Image Lab软件（Bio-Rad)收集图片。
[0034] 1. 4统计学处理采用SPSS15. 0软件。实验均重复3次，数据以x±s表示。多组 均数间比较采用方差分析。P < 0. 05为差异有统计学意义。
[0035] 2 结果 2. 1药物组合物对人卵巢癌SK0V3细胞增殖的影响 不同浓度药物组合物（5、10、20、40 y g/ml)处理SK0V3细胞24h后，细胞活性较对照组 减少具有统计学意义（P < 〇. 05)。药物组合物对SK0V3细胞增殖具有显著的抑制作用，且 呈浓度和时间依赖性。
[0036] 2. 2药物组合物对人卵巢癌SK0V3细胞凋亡的影响 药物组合物作用SK0V3细胞24h后，细胞凋亡发生率均高于对照组细胞凋亡率（P < 0. 05)。10 y g/ml和20 y g/ml药物组合物处理后，SK0V3细胞内可见明显的小片段活化 部分，分别为cleavedcaspase_3(19/18kd)和cleaved PARP(90kd)。表明药物组合物可激 活SK0V3细胞caspase级联反应，并诱导细胞发生凋亡。
[0037] 表1药物组合物对人卵巢癌细胞SK0V3增殖的抑制率（%)
*P < 0. 05VS对照组 2. 3药物组合物对人卵巢癌SKOV3裸鼠移植瘤生长的影响 本研究中10只裸鼠均全部成瘤，成瘤率达100%。药物组合物处理14天后，裸鼠皮下 移植瘤体积明显小于对照组（P < 0. 01);处理21天后，药物组合物给药组裸鼠皮下移植瘤 瘤重为较对照组减少48%(P < 0. 01)。与对照组移植瘤相比，给药组裸鼠移植瘤中cleaved caspase-3和cleaved PARP小片段活化部分显著增多。表明药物组合物抑制卵巢癌裸鼠 移植瘤生长的机制可能与其诱导细胞凋亡有关。
[0038]实验例2 :治疗卵巢癌临床试验研究 I. 1 一般材料 本发明以中医卵巢癌为例，经50例临床观察。选择中医诊断卵巢癌为标准：肢体乏力， 小腹胀痛，CT卵巢部位肿瘤。如上症状，即可确诊。年龄在30-58岁之间，确诊的对象无其 他严重疾病，其中试验组25例，对照组25例。
[0039] 1. 2诊断标准 显效：体质增强，肢体有力，腹部不适消失，卵巢肿瘤瘤体缩小，其他部位未见新生肿 瘤。
[0040] 有效：体质增强，卵巢肿瘤未见增大，其他部位未见新生肿瘤。
[0041] 无效：症状无变化，卵巢肿瘤瘤体增大，或者其他部位出现新生肿瘤。
[0042] 1.3治疗方法 实验组：服用本发明实施例1药物组合物，停服其他药物，每天3次，每次3g，20天为一 个疗程。
[0043] 对照组：服用常规西药，按照药物的说明使用。
[0044] 1.4 结果 本发明药物组合物治疗卵巢癌患者25例，显效17例，有效5例，无效3例，总有效率 88% 〇
【主权项】
1. 一种治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物的原料药的组成和重 量份为： 格蓬酯50-60重量份阿氏蒿IOO-IlO重量份中亚白及30-40重量份青金石 20-30重量份当药苦苷6-8重量份去乙酰蓟萝摩苷元3-5重量份。2. 根据权利要求1所述一种治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于制成该药物组合物 的原料药的组成和重量份为： 格蓬酯55重量份阿氏蒿105重量份中亚白及35重量份青金石25重量份当药 苦苷7重量份去乙酰蓟萝摩苷元4重量份。3. 根据权利要求1所述一种治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物可以采 用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。4. 根据权利要求1所述一种治疗卵巢癌的药物组合物，其特征在于药物组合物与化学 药或中药组成的治疗卵巢癌药物。5. -种治疗卵巢癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下步骤制备： 原料药的组成和重量份为：格蓬酯50-60重量份阿氏蒿100-110重量份中亚白及 30-40重量份青金石20-30重量份当药苦苷6-8重量份去乙酰蓟萝摩苷元3-5重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取阿氏蒿、中亚白及，混勾，先用重量百分比浓度90%乙醇作为溶剂， 在55°C温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为阿氏蒿、中亚白 及药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物 A； (2) 按原料药配比取格蓬酯，并与步骤（1)得到药渣A混匀，用重量百分比浓度55%乙 醇为溶剂，在70°C温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述 药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度1. 06,滤过，药液通过HPD600 大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱HPD600大孔吸附 树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B ; (3) 按原料药配比取青金石，超微粉碎至90微米，即得超微粉C ; (4) 按原料药配比取当药苦苷、去乙酰蓟萝摩苷元，混匀，依次加入提取物A、提取物B、 超微粉C，混匀，即得药物组合物。6. 根据权利要求5所述一种治疗卵巢癌的药物组合物的制备方法，其特征在于按如下 步骤制备： 原料药的组成和重量份为：格蓬酯55重量份阿氏蒿105重量份中亚白及35重量 份青金石25重量份当药苦苷7重量份去乙酰蓟萝摩苷元4重量份； 制备方法： (1) 按原料药配比取阿氏蒿、中亚白及，混勾，先用重量百分比浓度90%乙醇作为溶剂， 在55°C温浸提取，提取次数为4次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为阿氏蒿、中亚白 及药材总重量的20倍，滤过，得药渣A和提取液，提取液回收乙醇，浓缩，干燥，即得提取物 A； (2) 按原料药配比取格蓬酯，并与步骤（1)得到药渣A混匀，用重量百分比浓度55%乙 醇为溶剂，在70°C温浸提取，提取次数为3次，每次提取时间为3小时，每次溶剂用量为上述 药材总重量的15倍，滤过，提取液回收乙醇，浓缩至相对密度I. 06,滤过，药液通过HPD600 大孔吸附树脂柱，先用水洗脱，再用重量百分比浓度75%的乙醇溶液洗脱HPD600大孔吸附 树脂柱，收集重量百分比浓度75%乙醇洗脱液，回收乙醇，浓缩干燥，即得提取物B ; (3) 按原料药配比取青金石，超微粉碎至90微米，即得超微粉C ; (4) 按原料药配比取当药苦苷、去乙酰蓟萝摩苷元，混匀，依次加入提取物A、提取物B、 超微粉C，混匀，即得药物组合物。7. 根据权利要求5所述一种治疗卵巢癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组 合物可以采用制剂学的常规方法制备成片剂、胶囊剂、滴丸。8. 根据权利要求5所述一种治疗卵巢癌的药物组合物的制备方法，其特征在于药物组 合物与化学药或中药组成的治疗卵巢癌药物。
【专利摘要】本发明公开了一种治疗卵巢癌的药物组合物，本发明药物组合物是以格蓬酯、阿氏蒿、中亚白及、青金石、当药苦苷、去乙酰蓟萝摩苷元为原料药，配比而成，可按常规制剂工艺制成各种剂型，治疗卵巢癌疗效显著。
【IPC分类】A61K33/06, A61K31/57, A61K31/7048, A61P35/00, A61K36/898
【公开号】CN105031285
【申请号】CN201510568606
【发明人】张秀华
【申请人】济南星懿医药技术有限公司
【公开日】2015年11月11日
【申请日】2015年9月9日