X250mm，5ym);
[0038] 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液；
[0039] 梯度洗脱程序：0 ~5min，A10%-15%;5 ~lOmin，A15%-48%;10 ~25min， A48%- 78% ;25 ~30min，A78%- 10% ;
[0040] 流动相流速：1.OmL?minS检测波长：275nm;柱温：35°C;进样量：10yL。
[0041] 用制备的10批次的紫鸭跖草提取物进行分析，进行色谱峰匹配，结果1~7号峰 在10批样品色谱图中均出现。因此标定7个峰为共有色谱峰，据此建立该提取物的HPLC 质量控制图谱，结果见图1。该10批次的紫鸭跖草提取物药理活性相似。
[0042] 实施例7 :提取物药理试验
[0043]一、材料与方法
[0044] 1. 1药品与试剂：阳性药盐酸二甲双胍为江苏苏中制药厂生产；四氧嘧啶 (AllOXan)为英国BH0公司生产，批号42012 ;葡萄糖为广州新化工厂生产，批号021124 :葡 萄糖氧化酶法测定试剂盒为北京化工厂生产，批号030612 :优降糖为天津力生药厂生产， 批号 0306270。
[0045] 1. 2试验动物：昆明种小鼠，雌雄不拘，体重22_28g，购于中山大学实验动物中心。
[0046] 1. 3 方法
[0047] 1. 3. 1紫鸭跖草提取物的制备：按照实施例1~5分别制备紫鸭跖草提取物①~ ⑤。
[0048] 1. 3. 2用四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠：取正常小鼠，取正常小鼠尾静脉注射 四氧嘧啶（5%水溶液，60mg/kg)，注射72h后对小鼠进行眼眶静脉采血，测定血清葡萄糖水 平，采血前先禁食8h(不禁水），选择血糖值在9. 99mmol/L，以上的小鼠作为供试动物，将 供试小鼠随机分组，分组及给药剂量见表1.每天灌胃给药1次，空白对照组和四氧嘧啶组 (模型组）分别给予等体积的蒸馏水，连续l〇d于末次给药后lh，从小鼠眼眶静脉取血，用 试剂盒测定血糖值。
[0049] 1. 3. 3用葡萄糖引致的小鼠血糖升高模型：取正常小鼠随机分组，分组及给药剂 量见表2,每天灌胃给药1次，空白对照组和葡萄糖组分别给予等体积的蒸馏水，连续10d. 于末次给药后lh，空白对照组腹腔注射等体积生理盐水，其余各组腹腔注射葡萄糖2g/kg 溶液，分别在腹腔注射葡萄糖溶液后〇. 5,1. 0, 2.Oh时，从小鼠眼眶静脉取血，用试剂盒测 定血糖值。
[0050] 1.3. 4对正常小鼠血糖水平的影响的观察：取正常小鼠随机分组，分组及给药剂 量见表3.每天灌胃给药1次，空白对照组给予等体积的蒸馏水，连续10d于末次给药后lh， 从小鼠眼眶静脉取血，用试剂盒测定血糖水平。
[0051] 1.4数据处理：实验数据以（x土s)表示，用SPSS11.0软件处理，各组间比较用t检 验。
[0052] 二、结果
[0053] 2. 1对四氧嘧啶诱发的高血糖模型小鼠的血精水平的影响
[0054] 由表1可知，紫鸭跖草提取物①~③的3个剂量组均能显著降低四氧嘧啶诱发的 高血糖模型小鼠的血糖，大、中剂量组的降血糖效果更加明显，3个剂量组与四氧嘧啶组比 较，差异均有统计学意义（P〈〇. 05,P〈0. 01)，降糖效果与剂量正相关。与二甲双胍组比较， 中剂量组的降血糖作用与二甲双胍组差异无统计学意义（P>〇. 05);但大剂量组的降血糖 作用明显比二甲双胍组强（P〈〇. 05);紫鸭跖草提取物④~⑤各剂量组与四氧嘧啶组（模型 组）相比较则不具有显著性差异。结果见表1 (注：与空白对照组比较，AAP〈0. 01 ;与四 氧嘧啶组比较，#P〈0. 01 ;与二甲双胍组比较，*P〈0. 05)。
[0055] 表1紫鸭跖草提取物对四氧嘧啶诱发的高血糖小鼠血溏水平的影响（x土s)
[0056]
[0058] 2. 2对葡萄糖引致的小鼠血糖升高的影响
[0059] 由表2可知，紫鸭跖草提取物①~③的3个剂量组在给药后0. 5,1.Oh时，均能非 常显著地抑制葡萄糖引起小鼠血糖的升高（与葡萄糖组比较，P〈0. 01)。在2h时，大剂量组 仍对血糖的升高有极显著的抑制作用：与葡萄糖组比较，差异有统计学意义（P〈〇. 01).。但 中小剂量抑制血糖升高的作用明显减小，与葡萄糖组比较，其差异无统计学意义（P>〇. 05)。 与二甲双胍组比较，大剂量组抑制小鼠血糖升高的作用在给药后2.Oh内与二甲双胍组差 异无统计学意义（P>〇. 05)，中小剂量组抑制小鼠血糖升高的作用在给药后1.Oh内与二甲 双呱组差异无统计学意义（P>〇. 05)，但在2.Oh时抑制小鼠血糖升高的作用明显不如二甲 双胍组（P〈〇. 05)。紫鸭跖草提取物④~⑤各剂量组与四氧嘧啶组（模型组）相比较则均 不具有显著性差异。结果见表2(注：与空白对照组比较，AAP〈0. 01 ;与葡萄糖组比较 **P〈0. 01 ;与二甲双胍组比较，#P〈0. 01)。
[0060] 表2紫鸭跖草提取物对葡萄糖引致的高血糖模型小鼠血糖水平的影响（X土S)
[0061]
[0063] 2. 3对正常小鼠血糖水平的影响
[0064] 由表3可知，紫鸭跖草提取物①~⑤的3个剂量组对正常小鼠血糖均无明显影响。 结果见表3(注：与空白对照组比较，AAp〈0. 01)。
[0065] 表3紫鸭跖草提取物对正常小鼠血糖水平的影响（x土s)
[0066]
[0067] 结果表明，紫鸭跖草提取物在实验剂量下，能显著降低四氧嘧啶诱发的高血糖模 型小鼠的血糖水平，且大剂量组明显优于小剂量组。结果表明，紫鸭跖草提取物对正常小鼠 的血糖水平无明显影响，安全性高。实验还表明，紫鸭跖草提取物的3个实验剂量组在1小 时内对外源性葡萄糖引起小鼠血糖的升高有明显的抑制作用，大剂量组尤为明显。党参含 量对本发明紫鸭跖草提取物的活性至关重要。
[0068] 实施例8 :片剂的制备
[0069] 按实施例1方法制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:10的比例加入赋形剂，制 粒压片。
[0070] 实施例9 : 口服液的制备
[0071] 按实施例1方法先制得提取物，按常规口服液制法制成口服液。
[0072] 实施例10 :胶囊剂或颗粒剂的制备
[0073] 按实施例1方法先制得提取物，按其与赋形剂重量比为1:9的比例加入赋形剂，制 成胶囊或颗粒剂。
[0074] 实施例11 :注射液的制备
[0075] 按实施例1方法制得提取物，加注射用水，精滤，灌封灭菌制成注射液。
[0076] 实施例12 :无菌粉针的制备
[0077] 按实施例1方法先制得提取物，溶于无菌注射用水中，搅拌使溶，用无菌抽滤漏斗 过滤，再无菌精滤，分装于安瓿，低温冷冻干燥后无菌熔封得粉针剂。
【主权项】
1. 一种紫鸭跖草提取物，其特征在于所述提取物由以下方法制备：（a)以重量计，每 100份药材包含干燥的紫鸭跖草80~90份和干燥的党参10~20份，混合粉碎，用75%乙 醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；（b)将步骤（a)所得 乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分 别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；（c)正丁醇萃取物用水溶解，过 滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8%乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用75% 乙醇洗脱10个柱体积，收集75%洗脱液，减压浓缩即得。2. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：步骤（c)中所述大孔树脂为AB-8型 大孔树脂。3. 根据权利要求1所述的提取物，其特征在于：所述提取物的液相分析方法为： 色谱柱：Agilent Zorbax Extent_C18 柱（4.6mmX250mm，5iim); 流动相：A为乙腈，B为0. 5%磷酸溶液； 梯度洗脱程序：〇~5min，A10% - 15% ;5~10min，A15% - 48% ;10~25min，A48% - 78% ; 25~30min，A78% - 10% ; 流动相流速：1. OmL ? min -I ; 检测波长：265nm ; 柱温：35°C ; 进样量：10 yL。4. 药物制剂，其特征在于：含有治疗有效量的权利要求1所述的提取物和药学上可 接受的载体。5. 权利要求1所述的提取物在制备降血糖药物中的应用。6. 权利要求4所述的药物制剂在制备降血糖药物中的应用。
【专利摘要】本发明公开了一种紫鸭跖草提取物，该提取物的制备方法及医药用途，提取物制备方法包括：(a)以重量计，每100份药材包含干燥的紫鸭跖草80～90份和干燥的党参10～20份，混合粉碎，用55％乙醇溶液热回流提取，合并提取液，浓缩至无醇味得到乙醇提取浓缩液；(b)将步骤(a)所得乙醇提取浓缩液用水稀释，依次用石油醚、乙酸乙酯和水饱和的正丁醇萃取，减压浓缩，分别得到石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物；(c)正丁醇萃取物用水溶解，过滤，用大孔树脂富集活性成分，先用8％乙醇冲洗8个柱体积除去大极性成分，再用75％乙醇洗脱10个柱体积，收集75％洗脱液，减压浓缩即得。该提取物可以应用于制备降血糖药物。
【IPC分类】A61K36/185, A61P3/10, G01N30/02, A61K36/344
【公开号】CN105106276
【申请号】CN201510608303
【发明人】刘高志
【申请人】刘高志
【公开日】2015年12月2日
【申请日】2015年9月23日