恒河猴肺纤维化模型的建立及其用图
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种恒河猴肺纤维化模型的制备方法及其用途。
【背景技术】
[0002]肺纤维化是影响人类健康的重大疾病，发病原因不明，至今没有有效的预防与治疗方法。常用的机械通气，激素治疗尽管可以在一定程度上缓解患者呼吸困难，低氧血症等情况，但长期使用激素治疗可能诱发其他疾病，机械通气成本较高，操作不易。以上治疗方法均不能从根本上治愈肺纤维化，对生存率也没有改善。如何阻止肺纤维化的蔓延，有效抑制肺中成纤维细胞的生长，从根本上阻断纤维化是目前研究的关键点
[0003]目前肺纤维化研究最常用的使用模型是啮齿类。由于啮齿类在进化上与人类相距甚远，以其为研究对象所获得的实验数据对临床指导意义不大。恒河猴的解剖特点、各系统生理功能及对疾病和治疗药物的反应性与人类几位相似，是进行纤维化治疗，纤维细胞靶向清除药物的临床前有效性和安全性评价的敏感动物。利用恒河猴肺纤维化模型评价新型肺纤维化治疗药物，研究开发受体靶向药物并药物效果进行评价，这对未来治疗方案和临床应用具有重要指导意义。由于目前肺纤维化治疗药物与方法并不能有效的控制纤维化的蔓延，因此建立非人类灵长类肺纤维化模型为新型药物与靶向治疗提供评价具有迫切需求。
[0004]目前，尚无建立恒河猴肺纤维化模型的报道。
【发明内容】
[0005]本发明的技术方案是提供了建立恒河猴肺纤维化模型的方法。
[0006]本发明首先提供了博莱霉素在制备用于筛选治疗肺纤维化药物的灵长类动物模型中的用途，其中，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，每周一次，共施用两次。
[0007]优选地，所述博莱霉素的施用方式是雾化注射。
[0008]发明还提供了一种制备肺纤维化模型动物模型的方法，它是将博莱霉素施用于灵长类动物，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，每周一次，共施用两次。
[0009]优选地，所述灵长类动物为恒河猴。
[0010]优选地，所述博莱霉素的施用方式是雾化注射。
[0011 ] 本发明还提供了前述方法制备得到的肺纤维化模型动物模型。
[0012]本发明还提供了前述肺纤维化模型动物模型在筛选肺纤维化药物中的应用。
[0013]本发明还提供了一种筛选治疗肺纤维化的药物的方法，包括如下步骤:
[0014]a、它是将博莱霉素施用于灵长类动物，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，，每周一次，共施用两次；
[0015]b、将候选物施用于a步骤所述的灵长类动物；
[0016]c、用a步骤所述的灵长类动物评价潜在的治疗肺纤维化的药物。
[0017]优选地，a步骤所述灵长类动物为恒河猴。
[0018]优选地，a步骤所述所述博莱霉素的施用方式是雾化注射
[0019]本发明方法成功地建立了恒河猴肺纤维化模型，操作过程简单，易重复，可以用于啮齿类动物模型无法完成的生物技术新药的评价，临床应用前景良好。
[0020]以下通过【具体实施方式】对本发明作进一步的详细描述，但并不限制本发明，本领域技术人员可以根据本发明作出各种改变和变形，只要不脱离本发明的精神，均应属于本发明所附权利要求的范围。
【附图说明】
[0021]图1造模前CT图片
[0022]图2造模猴CT图片
【具体实施方式】
[0023]实施例1本发明动物模型的制备
[0024]1.材料与方法
[0025]1.1实验材料
[0026]2 - 3岁雄性恒河猴6只，无B疱疹病毒、猴逆转录病毒、猴白血病病毒和免疫缺陷病毒感染:购自眉山动物繁育基地。
[0027]1.2主要试剂
[0028]博莱霉素(BLM)，购自北京百德康药房，日本化药株式会社生产。
[0029]其他药品及耗材购自爱德科技。
[0030]1.3主要溶液配置
[0031]博莱霉素生理盐水溶液的配置
[0032]取15mg效价每瓶博莱霉素，注入200微升生理盐水，溶解后形成75mg/ml博莱霉素效价
[0033]1.4主要仪器
[0034]I高压雾化注射器:PennCentury
[0035]2 麻醉机:Excel 210se
[0036]3CT 机:GE BRIVO CT325
[0037]4麻醉咽喉镜
[0038]1.5实验方法
[0039]1.5.1恒河猴肺部CT检测，在正式造模前，使用CT扫描实验猴肺部，排除实验猴自身肺部疾病的可能。
[0040]I).根据动物购买时的体重，按15mg/kg注射氯胺酮(50mg/ml)
[0041 ]2).待动物麻醉后，称重，记录体重
[0042]3).将恒河猴上下肢固定与手术台上，下肢小腿后侧备皮暴露大隐静脉，碘伏消毒。
[0043]4).静脉输液针穿刺大隐静脉，5ml注射器抽血5ml，抽出静脉输液针，消毒棉签止血，同时将注射器中血液转移到5ml真空采血管中(黄头促凝管)，标记，用作后期生化检测。
[0044]5).将麻醉状态下的实验猴猴转移到CT机扫描床上，平躺，固定四肢。
[0045]6).启动CT机扫描实验猴，扫描部位为肺部，并记录存档。
[0046]7).检测完毕后，将麻醉中的实验猴转移到饲养笼中，观察直至苏醒。
[0047]1.5.2博莱霉素气道注射诱导肺纤维化模型，给药方案为每周I次，共施用2次。
[0048]I).根据上次测量的体重，按15mg/kg注射氯胺酮(50mg/ml)
[0049]2).待实验猴麻醉后，称重，记录体重
[0050]3).以称量的实验猴体重为标准，博莱霉素注射量为7mg/kg。如实验猴体重为nkg，则需要注射的博莱霉素剂量为7nmg，那么取用的博莱霉素生理盐水溶液为(7n/75ml)。
[0051]4).使用PennCentury注射器吸取配置好的博莱霉素生理盐水溶液。
[0052]5).将恒河猴平躺于手术台，上下肢固定于手术台上，将猴肩部垫高，用光源照射眼睛，观察眼球有无运动，判断其麻醉状态。
[0053]6).手持PennCentury雾化注射器，注射头对准声门裂，插入2cm，插入后推注注射器中博莱霉素生理盐水溶液，直至完毕，抽出注射器。
[0054]7).静脉输液针穿刺大隐静脉，5ml注射器抽血5ml，抽出静脉输液针，消毒棉签止血，同时将注射器中血液转移到5ml真空采血管中(黄头促凝管)，标记，用作后期生化检测。
[0055]8).观察猴直至将要苏醒，将其转移至饲养笼。
[0056]9).每周两次观察动物活动能力，并记录。
[0057]1.5.3造模后CT检测，确定纤维化病变程度，评估模型是否成功。实验操作方法同1.5.1。CT检测于博莱霉素注射完毕后每个月一次。
[0058]2实验结果
[0059]造模半年过后，恒河猴血清SP-D水平明显升高，猴活动能力下降。CT检测，6只恒河猴造模前CT图片正常(图1A，1B)，造模后猴肺部CT均呈现双侧弥漫分布网格状阴影，蜂窝状改变(图2A，2B, 2C)，判断为肺纤维化病变，肺纤维化模型造模成功。
[0060]6只恒河猴按本发明方法建立肺纤维化模型，全部成功，说明本发明方法可以有效建立恒河猴肺纤维化模型，可重复性高。
[0061]综上，本发明方法可成功建立河猴肺纤维化模型，操作过程简单，易重复，可以用于啮齿类动物模型无法完成的生物技术新药的评价和。
【主权项】
1.博莱霉素在制备用于筛选治疗肺纤维化药物的灵长类动物模型中的用途，其中，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，每周一次，共施用两次。2.根据权利要求1所述的用途，其特征在于:所述博莱霉素的施用方式是雾化注射。3.一种制备肺纤维化模型动物模型的方法，其特征在于:它是将博莱霉素施用于灵长类动物，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，，每周一次，共施用两次。4.根据权利要求3所述的制备方法，其特征在于:所述灵长类动物为恒河猴。5.根据权利要求3或4所述的制备方法，其特征在于:所述博莱霉素的施用方式是雾化注射。6.权利要求3-5任一一项所述的方法制备得到的肺纤维化模型动物模型。7.权利要求6所述的肺纤维化模型动物模型在筛选肺纤维化药物中的应用。8.一种筛选治疗肺纤维化的药物的方法，包括如下步骤: a、它是将博莱霉素施用于灵长类动物，博莱霉素的施用剂量为:7mg/Kg/次，每周一次，共施用两次。 b、将候选物施用于a步骤所述的灵长类动物； C、用a步骤所述的灵长类动物评价潜在的治疗肺纤维化的药物。9.根据权利要求8所述的筛选药物的方法，其特征在于:a步骤所述灵长类动物为恒河猴。10.根据权利要求8或9所述的筛选药物的方法，其特征在于:a步骤所述所述博莱霉素的施用方式是雾化注射。
【专利摘要】本发明公开了一种制备肺纤维化模型动物模型的方法，它是将博莱霉素施用于灵长类动物，博莱霉素的施用剂量为：7mg/Kg/次，每周一次，共施用两次。本发明还提供了该方法制备的恒河猴肺纤维化模型及其用途。本发明方法成功地建立了恒河猴肺纤维化模型，操作过程简单，易重复，可以用于啮齿类动物模型无法完成的生物技术新药的评价，临床应用前景良好。
【IPC分类】A61P11/00, A61K38/14
【公开号】CN105126075
【申请号】CN201510608667
【发明人】刘潋, 文富强, 陈磊, 钟治晖, 汪涛, 王浩, 袁智城, 陈梅
【申请人】四川大学华西医院, 四川康城生物科技有限公司
【公开日】2015年12月9日
【申请日】2015年9月22日