一种马齿苋发酵原浆化妆品及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体设及一种马齿宽发酵原浆化妆品及其制备方法与 应用。
【背景技术】
[0002] 马齿宽（PortulacaoleraceaL.)又名妈昨菜、长命菜、马舌菜等，为马齿宽科植 物全草，多W其干燥地上部分入药，生于山区潮湿肥沃的地方，盛产于四川，遍布全国。性味 酸寒，具有清热解毒、凉血止血之功效。马齿宽中富含丰富的有机酸、黄酬类、祗类、生物碱 类等物质，近年的药理研究表明，马齿宽具有降血脂、降血糖、抗动脉粥样硬化等功效。我国 马齿宽资源丰富，为开发应用马齿宽提供有利条件。随着马齿宽栽培业迅速发展及应用范 围拓宽，对马齿宽营养成分及在医疗保健作用方面研究也逐步深入。对马齿宽活性物质的 提取工艺也不断完善，但是提取方法主要W超声提取法、水提法为主。
[0003] 现有的马齿宽活性物提取最常采用的是水提法：马齿宽干品粉碎后加去离子水， 在一定溫度下回流若干次，冷却后过滤，合并上清液，将上清液减压浓缩，最后使用乙醇沉 淀，干燥后粉碎得到产物。但是该方法在提取过程中引入有机物，不仅破坏环境，且在应用 的过程中存在潜在的安全隐患。因此，为了避免上述问题，需要提供一种利用发酵工程技术 对马齿宽活性物质进行提取的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种马齿宽发酵原浆化妆品及其制备方法与应用，该方法利 用发酵工程技术从马齿宽中提取活性物质，操作简单，且由于不添加任何外来物质，制备得 到的马齿宽发酵物即马齿宽发酵原浆对皮肤安全无伤害，具有更高的美白和抗衰老活性。
[0005] 本发明提供的一种马齿宽发酵原浆的制备方法，包括如下步骤：将马齿宽干粉、水 和发酵菌混合得到初始体系，并对初始体系进行发酵培养，得到马齿宽发酵原浆。
[0006] 上述的制备方法中，所述初始体系中，所述发酵菌、所述马齿宽干粉和水的配比可 为巧~15血）：（20~30)g: (250~300)血；所述发酵菌的浓度可为（1〇5~10s)CFU/mL。 具体地，所述初始体系中，所述发酵菌、所述马齿宽干粉和水的配比可为巧~15mL) : (20~ 30)g:300血；所述发酵菌的浓度可为（105~10S)CFU/mL;更具体地，所述初始体系中，所述 发酵菌、所述马齿宽干粉和水的配比可为12mL:25g:30〇111以所述发酵菌的浓度可为（105~ 10")CFU/mLo
[0007] 上述的制备方法中，所述发酵培养的溫度可为35~45°C，具体可为38°C;时间可 为24~32h，具体可为28h。
[0008] 上述的制备方法中，所述发酵菌可为乳杆菌，具体可为德氏乳杆菌，更具体可为德 氏乳杆菌保加利亚亚种Lactobacillusde化rueckiibulgari州S;
[0009] 所述马齿宽干粉可来自马齿宽的地上部分，可由粉碎机粉碎后过筛得到，粒径可 为20~50目，具体可为20目。
[0010] 上述的制备方法中，所述发酵菌可W其培养液或悬浮液的形式存在，所述发酵菌 的培养液或悬浮液的抑值可为6. 5~7. 5,具体可为7. 0。
[0011] 上述的制备方法中，所述方法在所述发酵培养之后，还包括对发酵液依次进行灭 菌、离屯、和取上清液的步骤。
[0012] 上述的制备方法中，所述灭菌的条件如下：灭菌溫度可为115~12rc，具体可为 115°C;灭菌时间可为15~25min，具体可为20min;
[0013] 所述离屯、的条件如下：离屯、转速可为3800~4200;r/min，具体可为4000;r/min;离 屯、时间可为15~30min，具体可为20min;离屯、半径可为9畑1。
[0014] 本发明进一步提供了一种由上述的制备方法制备得到的马齿宽发酵原浆。
[0015] 上述的马齿宽发酵原浆在制备具有下述1)-4)中至少一种功能的化妆品中的应 用或在直接作为具有下述1)-4)中至少一种功能的化妆品中的应用，也在本发明的保护范 围内：
[0016] 1)抑制酪氨酸酶活性；
[0017]。皮肤美白； 阳0化]扣清除DPPH自由基；
[0019] 4)抗衰老。
[0020] 上述的1)-4)应用中，所述化妆品包括但不限于：面膜、精华液或爽肤水。
[0021] 本发明具有如下有益效果：
[0022] (1)本发明提供的马齿宽发酵物（即马齿宽原浆）的制备方法采用发酵工程技术， 通过选择合适的菌种及发酵条件，从马齿宽中提取得到活性物质。一方面，可最大程度保留 植物中的活性成分，且相对与传统的水提法，避免了有机溶剂的引入，安全环保；另一方面， 不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技 术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。
[0023] (2)本发明提供的马齿宽发酵原浆含有健康皮肤不可或缺的氨基酸、矿物质等自 然成分，且由于在制备过程中未引入外来物质，不含任何化学成分，可W直接作为面膜或精 华液或爽肤水的成品使用，比现有市面上的其他产品更加天然，不会给肌肤造成任何负作 用。
[0024] (3)本发明提供的马齿宽发酵原浆的分子量为282. 41Da，且占总量的99%W上， 易于让皮肤充分吸收。
[00对 （4)本发明提供的马齿宽发酵原浆，具有较强的抗氧化能力可清除自由基，促进细 胞代谢，增强细胞活力，改善机体的结构和功能，提高机体生命力，从而延缓细胞老化，具有 抗衰老的功效。
[00%] (5)本发明提供的马齿宽发酵原浆，可抑制酪氨酸酶的活性，其美白效果相当于 0.610%的熊果巧的效果，具有一定的美白功效。
【附图说明】
[0027] 图1为马齿宽发酵原浆的活性多肤分子量分布HPLC图谱。
[0028]图2为不同体积百分浓度的马齿宽发酵原浆与DPPH自由基清除率的关系曲线。
[0029] 图3为10%的马齿宽发酵原浆和1%的熊果巧对酪氨酸酶的抑制率对比图。
【具体实施方式】
[0030] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0031] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0032] 下述实施例中的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白腺20g/L，酵母膏lOg/L，抑值为7. 0。
[0033] 下述实施例中的YTO培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：酵母提取物1% (质量分数），膜蛋白腺2% (质量分数），葡萄糖2% (质 量分数），抑值为7.0。
[0034] 下述实施例中的马齿宽干粉（来自马齿宽地上部分）来自市面销售，20目。
[0035] 下述实施例中的德氏乳杆菌保加利亚亚种化actobacillusde化rueckii bulgari州s)的ATCC编号为11842,可从ATCC购买得到。
[0036] 下述实施例中的马齿宽菌液按照如下步骤制得： 阳037] 1、菌种的活化
[0038] 挑取德氏乳杆菌保加利亚亚种（Xactobacillusde化rueckiibulgari州S)菌落 一环于液体培养基中，放入摇床中将菌种活化，得到活化后德氏乳杆菌保加利亚亚种菌液。
[0039] 2、菌种的纯化
[0040] 将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，W便获取单菌落，得到纯化后德氏 乳杆菌。
[0041] 3、菌种的扩大培养
[0042] 将步骤2得到的纯化后的菌种接种到YTO培养基（抑值为7. 0)中，在25°C的摇床 中培养，当0D值=0. 5-1. 0时，得到发酵菌菌液（菌种处在对数期，浓度为105~108CFU/ mL)。
[0043] 实施例1、制备马齿宽发酵原浆
[0044] 按照如下步骤制备马齿宽发酵原浆： W45] (1)将20血步骤3得到的12血浓度为105~10化即/血的发酵菌菌液接种到25g 的马齿宽干粉和300mL的水中，得到发酵体系；
[0046](2)将上述发酵体系在38°C摇床中发酵28小时，得到发酵产物；
[0047] (3)将上述发酵产物115°C下灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物；将灭 菌后的发酵产物在4000r/min，离屯、半径为9cm的条件下离屯、20min，弃沉淀，收集上清液， 即为马齿宽发酵原浆。
[0048] 实施例2、马齿宽发酵原浆在作为化妆品中的应用
[0049]一、马齿宽发酵原浆化妆的性质
[0050] 将实施例1所制备所得的发酵原浆经活性炭脱色、去味。其外观为粘稠液体、颜色 为淡黄色至栋黄色。pH值5. 2-6. 3,粘度200-500CP，可溶性固含物含量2. 0-6. 0%，菌落总 数小于50CRJ/mU无致病菌检出。根据化妆品卫生标准GB7916-87,化妆品细菌总数不高于 lOOOCFU/ml，所W此发酵原浆符合化妆品质量要求。
[0051] 对该马齿宽发酵原浆进行成分分析，蛋白质检测方法参照GB5009. 5-2010;粗多 糖检测方法参照GB/T5009. 8-2008;黄酬检测方法参照GB/T5009. 124-2003;总酪检测方 法参照GB/T8313-2008所得结果如下：
[0052] 本发明制得的马齿宽发酵原浆含蛋白质5.61g/kg、粗多糖20.35g/kg、总黄酬 0. 105g/kg(W芦下计）、总酪 0. 158g/kg。
[0053] 二、马齿宽发酵原浆的安全性检测
[0054] 人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1 中获得的马齿宽发酵原浆进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。 阳化5] 1、试验对象
[0056] 选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。
[0057] 2、试验方法
[0058] 称取0. 020g-0. 025g固体样品或半固体的样品放入斑试器中备用。将液体样品 0. 2血到0. 025血滴加在滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照， 在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馈水或橄揽油（本实施例采用蒸馈 水）。
[0059] 试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试