一种芦荟发酵原浆化妆品及其制备方法与应用
【技术领域】
[0001] 本发明属于生物技术领域，具体涉及一种芦荟发酵原浆化妆品及其制备方法与应 用。
【背景技术】
[0002] 芦荟（Aloe)系百合科，多年生常绿肉质多汁草本植物。芦荟是一种集药食、保 健、美容和观赏于一体的重要经济植物。芦荟的化学成分相当复杂，经长期研究发现芦荟 中含有以芦荟素为首的80多种有效成分。主要含有蒽醌及其甙类、苷、萘酮、树脂、有机 酸、糖类、蛋白质、草酸钙、纤维、微量元素等。芦荟在美容及化妆品方面起主要作用的是黏 液成分，其中的多糖物质与氨基酸构成了天然的保湿剂，可以补充皮肤中的水分，恢复胶 原蛋白的功能，防止面部皱纹，保持皮肤光滑，富有弹性。芦荟中的芦荟熊果苷、芦荟乌辛 (Aloeulcin)能治疗胃及十二指肠溃疡、黏膜溃烂。芦荟熊果苷还可以预防皮肤老化。我国 芦荟资源丰富，为开发应用芦荟提供有利条件。随着荟栽培业迅速发展及应用范围拓宽，对 芦荟营养成分及在医疗保健作用方面研究也逐步深入。对芦荟活性物质的提取工艺也不断 完善，但是提取方法主要以闪式提取法、水提法为主。
[0003] 现有的芦荟活性物提取最常采用的是水提法：芦荟干品粉碎后加去离子水，真空 抽滤后取滤液，将滤液在旋转蒸发仪上浓缩，最后冰箱冷藏并使用乙醇沉淀，离心后得到产 物。但是该方法在提取过程中引入有机物，不仅破坏环境，且在应用的过程中存在潜在的安 全隐患。因此，为了避免上述问题，需要提供一种利用发酵工程技术对芦荟活性物质进行提 取的方法。
【发明内容】
[0004] 本发明的目的是提供一种芦荟发酵原浆化妆品及其制备方法与应用，该方法利用 发酵工程技术从芦荟中提取活性物质，操作简单，且由于不添加任何外来物质，制备得到的 芦荟发酵物即芦荟发酵原浆对皮肤安全无伤害，具有更高的美白和抗衰老活性。
[0005] 本发明提供的芦荟发酵原浆的制备方法，包括如下步骤：将芦荟原浆、水和发酵菌 混合得到初始体系，并对初始体系进行发酵培养，得到所述芦荟发酵原浆。
[0006]上述的制备方法中，所述初始体系中，所述发酵菌、所述芦荟原浆和水的配比可为 (18~35)mL: (15~30)g: (250~400)mL，所述发酵菌的浓度可为（106~10 9)CFU/mL;具 体地，所述初始体系中，所述发酵菌、所述芦荟原浆和水的配比可（18~35)mL:(15~30) g:320mL;更具体地，所述初始体系中，所述发酵菌、所述芦荟原楽;和水的配比为20mL:18g: 320mL，所述芦荟原浆的浓度可为106~10 9CFU/mL。
[0007]上述的制备方法中，所述发酵培养的温度可为30~45°C，具体可为35°C;时间可 为24~38h，具体可为28h。
[0008]上述的制备方法中，所述发酵菌可为链球菌，具体可为嗜热链球菌Streptococcus thermophilus;所述芦荟原楽:来自芦荟的叶片，为勾楽;机粉碎后得到的楽;状物，具体可为在 1000~1200r/min转速下粉碎3~lOmin获得的浆状物质。
[0009] 上述的制备方法中，所述发酵菌以其培养液或悬浮液的形式存在；所述发酵菌培 养液或所述发酵菌悬浮液的pH值可为6. 5~7. 5,具体可为7. 0。
[0010] 上述的制备方法中，所述方法在所述发酵培养之后，还包括对发酵液依次进行灭 菌、离心和取上清液的步骤。
[0011] 上述的制备方法中，所述灭菌的条件如下：灭菌温度可为115~121°C，具体可为 115°C;灭菌时间可为15~25min，具体可为20min。
[0012] 上述的制备方法中，所述离心的条件如下：离心转速可为4000~6000r/min，具体 4700r/min;所述离心时间可为20~30min，具体可为25min;所述离心的半径可为9cm。
[0013] 本发明进一步提供了一种由上述的制备方法制备得到的芦荟发酵原浆。
[0014] 上述芦荟发酵原浆在制备具有下述1)_4)中至少一种功能的化妆品中的应用或 在直接作为具有下述1)_4)中至少一种功能的化妆品中的应用，也在本发明的保护范围 内：
[0015] 1)抑制酪氨酸酶活性；
[0016] 2)皮肤美白；
[0017] 3)清除DPPH自由基；
[0018] 4)抗衰老。
[0019] 上述的1)_4)的应用中，所述化妆品包括但不限于：面膜、精华液或爽肤水。
[0020] 本发明具有如下有益效果：
[0021] (1)本发明提供的芦荟发酵物（即芦荟发酵原浆）的制备方法采用发酵工程技术， 通过选择合适的菌种及发酵条件，从芦荟中提取得到活性物质。一方面，最大程度的保留了 植物中的活性成分，且相对与传统的水提法，避免了有机溶剂的引入，安全环保；另一方面， 不需要添加酶等外来物质，不仅节约生产成本，而且最大化的简化了生产步骤，使该发酵技 术能够实现大量生产、工业化生产，并能够充分保证产品质量的稳定性。
[0022] (2)本发明提供的芦荟发酵原浆中含有健康皮肤不可或缺的氨基酸、矿物质等自 然成分，且由于在制备过程中未引入外来物质，不含任何化学成分，可以直接作为面膜或精 华液或爽肤水的成品使用，比现有市面上的其他产品更加天然，不会给肌肤造成任何负作 用；且获得成分分子量小，易于让皮肤充分吸收。
[0023] (3)本发明提供的芦荟发酵原浆，具有较强的抗氧化能力可清除自由基，促进细胞 代谢，增强细胞活力，改善机体的结构和功能，提高机体生命力，从而延缓细胞老化，具有抗 衰老的功效。
[0024] (4)本发明提供的芦荟发酵原浆，可抑制酪氨酸酶的活性，其美白效果相当于 0.44%的熊果苷的效果，具有一定的美白功效。
【附图说明】
[0025] 图1为芦荟发酵原浆的活性多肽分子量分布HPLC图谱。
[0026]图2为不同浓度的芦荟发酵原浆与DPPH自由基清除率的关系曲线。
[0027]图3为10%的芦荟发酵原浆和1%的熊果苷对酪氨酸酶的抑制率的对比图。
【具体实施方式】
[0028] 下述实施例中所使用的实验方法如无特殊说明，均为常规方法。
[0029] 下述实施例中所用的材料、试剂等，如无特殊说明，均可从商业途径得到。
[0030] 下述实施例中的液体培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：葡萄糖20g/L，蛋白胨20g/L，酵母膏10g/L，pH值为7. 0。
[0031] 下述实施例中的YTO培养基由溶质和溶剂组成，溶剂为水，溶质及其在液体培养 基中的浓度为：酵母提取物1% (质量分数），胰蛋白胨2% (质量分数），葡萄糖2% (质 量分数），pH值为7.0。
[0032] 下述实施例中的芦荟原浆为芦荟叶片在转速为1000~1200r/min的匀浆机中粉 碎3~lOmin得到的浆状物质，所用芦荟叶片来自市面销售。
[0033] 下述实施例中的嗜热链球菌Streptococcusthermophilus的ATCC编号为19258， 公众可从ATCC购买得到。
[0034] 下述实施例中的嗜热链球菌菌液通过如下步骤制备得到：
[0035] 1、菌种的活化
[0036] 挑取嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus)菌落一环于液体培养基中，放入 摇床中将菌种活化，得到活化后嗜热链球菌菌液。
[0037] 2、菌种的纯化
[0038] 将步骤1得到的活化后的菌液梯度稀释铺板，以便获取单菌落，得到纯化后嗜热 链球菌。
[0039] 3、菌种的扩大培养
[0040] 将步骤2得到的纯化后的菌种接种到YH)培养基（pH值为7. 0)中，在25°C的摇床 中培养，当0D值=0. 6~1. 2时，得到发酵菌菌液（菌种处在对数期，浓度为106~10 9CFU/ mL)〇
[0041] 实施例1、制备芦荟发酵原浆
[0042] 按照如下步骤制备芦荟发酵原浆
[0043] (1)将20mL上述步骤3得到的嗜热链球菌发酵菌菌液接种到18g的芦荟原浆和 320mL的水中，得到发酵体系；
[0044](2)将发酵体系在35°C摇床中发酵28小时，得到发酵产物；
[0045] (3)将发酵产物在115°C下灭菌20min，使菌失活，得到灭菌后的发酵产物；
[0046] (4)将灭菌后的发酵产物在4700r/min、离心半径为9cm的条件下离心25min，弃沉 淀，收集上清液，即为芦荟发酵原浆。
[0047] 实施例2、芦荟发酵原浆在作为化妆品中的应用
[0048] 一、芦荟发酵原浆的性质
[0049] 将实施例1所制备所得的发酵原浆采用活性炭脱色、去味。其外观为粘稠液体、颜 色为淡黄色至棕黄色。pH值5. 2-6. 3,粘度200-500cP，可溶性固含物含量1. 5-5. 0%，菌落 总数小于50CFU/mL，无致病菌检出。根据化妆品卫生标准GB7916-87,化妆品细菌总数不高 于1000CFU/mL，所以此发酵原浆符合化妆品质量要求。
[0050]对该芦荟发酵原浆进行成分分析，蛋白质检测方法参照GB5009. 5-2010 ;粗多糖 检测方法参照GB/T5009. 8-2008 ;黄酮检测方法参照GB/T5009. 124-2003 ;总酚检测方法 参照GB/T8313-2008,所得结果如下：
[0051] 本发明制得的芦荟发酵原浆含蛋白质4. 35g/kg、粗多糖15. 36g/kg、总黄酮 0· 086g/kg(以芦丁计）、总酸 0· 14g/kg。
[0052] 二、芦荟发酵原浆的安全性检测
[0053] 人体斑贴试验主要是用于检测化妆品终产品或原料的刺激性。本发明对实施例1 获得的芦荟发酵原浆进行人体封闭式斑贴试验，旨在对其潜在皮肤刺激性进行评估。
[0054] 1、试验对象
[0055] 选择合适的志愿者30人，年龄范围在18-60岁随机选择。
[0056] 2、试验方法
[0057] 称取0. 020g_0. 025g固体样品或半固体的样品放入斑试器中备用。将液体样品 0. 2mL到0. 025mL滴加在滤纸片上，再将滤纸片置于斑试器内。每个样品均设置空白对照， 在对照斑试器孔内加入与样品等量的样品溶剂，如蒸馏水或橄榄油（本实施例采用蒸馏 水）。
[0058] 试验部位选为人体背部，利用无刺激性的胶带将斑试器固定贴敷于受试者背