和吗啉（1742mg，20mmol)，混合物加热回流 7h。 反应结束后将反应液倒入20mL冰水中，用等量二氯甲烷萃取2次，合并有机相。依次用水 和饱和食盐水洗涤合并之后的有机相，再用无水硫酸钠干燥，减压浓缩去除溶剂得到产物 粗品。产物粗品用硅胶柱层析纯化（流动相为：石油醚/丙酮=100:1. 5,v/v)，收集黄色 集中洗脱带即得到化合物IV的黄色胶状固体（252.lmg，72% )。
[0027]NMR(500MHz,DMS〇-d6)δ10. 53(s, 2Η), 8. 69 - 6. 34(m, 5Η), 4. 11 (dd,J =30. 6, 16. 3Hz, 5H), 3. 61 (t,J= 9. 4Hz, 8H),2. 74 (t,J= 14. 3Hz, 4H),2. 56 (t,J= 9. 3Hz, 8H), 2. 30 - 2. 13 (m, 1H), 2. 07 - 1. 62 (m, 5H),L57 - 1. 28 (m, 4H), 1. 06 (s, 3H),L〇2 ( s, 6H),0. 94 (d,J= 12. 9Hz, 3H),0. 61 (d,J= 1. 5Hz, 1H),0. 32 (dt,J= 21. 0, 17. 3Hz, 1H).
[0028]13CNMR(125MHz,DMS0-d6)δ188. 63 (s)，170. 36 (s)，165. 06 (s)，163. 25 (s)，142. 4 9 (s),129. 33 (s),127. 81 (s),126. 83 (s),117. 65 (s),116. 70 (s),114. 55 (s),69. 15 (s),66. 69 (s),54. 73 (s),52. 73 (s),39. 83 (s),34. 62 (s),34. 09 (s),30. 56 (s),27. 95 (s),26. 19 (s) ,24. 14(s), 23. 58(s), 20. 92 (s),20. 41 (s), 19. 87 (s),14. 11 (s).
[0029] HRMS(ESI) :m/z[M+H]+calcdforC42H57N207:701. 4166 ;found:701. 4163。
[0030]
[0031] 实施例5组合物抗胰腺纤维化活性
[0032] 1材料
[0033] 1. 1 动物Wistar大鼠，雄性，体重 180_200g。
[0034] 1. 2 组合物剂量：0· 9mg/kg。
[0035] 组合物的制备：将研磨之后过200目网的65mg化合物III的粉末和研磨之后过 200目网的35mg化合物IV的粉末装入带盖的小管中并用涡轮搅拌仪混合即得到100mg组 合物，使用时用水溶解这l〇〇mg的组合物即得到组合物的溶液。
[0036] 2实验方法
[0037] 2. 1造模方法：Wistar大鼠以腹腔注射dl-乙硫氨酸250mg/天，连续2个月，可出 现胰脏腺细胞减少，间质内脂肪及结缔组织的增生。
[0038] 2. 2分组及给药方法
[0039] 模型大鼠随机分为模型组，组合物0·9mg/kg组、化合物III0·9mg/kg组和化合物 IV0.9mg/kg组，另设空白对照组。给药组于造模开始后给药，口服连续30天；60天时解剖 动物。
[0040] 2. 3检测指标
[0041] 2. 3. 1实验结束时取胰脏称重。
[0042] 2. 3. 2胰脏羟脯氨酸含量测定取lOOmg样本在水中匀浆，110°CIONHC1中水解20 小时。HC1用氮气挥发，水解产物用双蒸水溶解后过滤。取0.5ml液体与3ml枸橼酸磷酸 缓冲液（〇. 15M枸橼酸加0. 6M磷酸氢二钠）和0. 5ml溶于9M磷酸的1M过碘酸混合。加 1. 75ml提取缓冲液（5份甲苯：5份2-甲基-1-丙醇：2份1-丙醇），震荡30min，离心。组 织相（〇. 6ml)与Ehrlich's试剂混合放置15min。在565nm测定吸收度，用4-轻-1-脯氨 酸制作标准曲线计算浓度，含量以Ug/g组织表示。
[0043] 2. 3. 3组织学检查胰脏组织用10%福尔马林固定，石蜡包埋，染色后镜检。对纤维 化情况评分（0-3分）。
[0044] 3结果
[0045] 3. 1组合物对大鼠胰脏脏器系数的影响
[0046] 实验结束时，将大鼠处死、解剖，称量体重和胰脏重并计算其与体重的比值（胰脏 脏器系数），结果见表1。组合物对胰脏脏器系数的影响，与模型组比较有显著性差异。化 合物III和化合物IV对胰脏脏器系数的影响，与模型组比较无显著性差异。
[0047]表1
[0050] *表示p〈0. 05,与模型组比较
[0051] 3. 2胰脏羟脯氨酸含量测定
[0052] 实验结束时，对各组大鼠进行肺部羟脯氨酸含量测定，结果如表2。组合物对羟脯 氨酸含量的影响，与模型组比较有显著性差异。化合物III和化合物IV对羟脯氨酸含量的 影响，与模型组比较无显著性差异。
[0053]表2
[0054]
[0055] *表示p〈0. 05,与模型组比较
[0056] 3. 3组织学检查
[0057] 实验结束时，将大鼠处死、解剖；标本常规包埋、固定、HE染色，镜检。
[0058] 结果：模型组第60天可见胰导管周围严重炎症反应；嗜中粒细胞核淋巴细胞浸 润，间质水肿，出血以及偶见胰泡细胞坏死；胰泡细胞消失位置及胰泡间出现纤维化。
[0059] 组合物可减少炎症反应和纤维化。评分结果见表3。组合物对评分的影响，与模型 组比较有显著性差异。
[0060]表 3
[0061]
[0063] *表示p〈0. 05,与模型组比较；空白对照组的炎症细胞浸润和纤维化评分都为0.
[0064] 结论：本发明通过组合物对大鼠胰腺纤维化的影响，证实了组合物具有抗胰腺纤 维化的作用。因此，组合物可作为活性成分用于制备抗胰腺纤维化的药物。而化合物III 和化合物IV无此活性，不能用于制备抗胰腺纤维化的药物。
[0065] 实施例6本发明所涉及组合物片剂的制备
[0066] 取2克组合物，加入制备片剂的常规辅料18克，混匀，常规压片机制成100片。
[0067] 实施例7本发明所涉及组合物胶囊的制备
[0068] 取2克组合物，加入制备胶囊剂的常规辅料如淀粉18克，混匀，装胶囊制成100 粒。
【主权项】
1. 一种组合物，其特征为该组合物由化合物III和化合物IV组成，该组合物中化合物 III和化合物IV的质量百分数分别为65%和35%，2. 如权利要求1所述的组合物的制备方法，其特征为：将化合物III的粉末和化合物 IV的粉末按照质量百分数分别为65 %和35 %充分混合。3. -种如权利要求1所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用。4. 如权利要求3所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用，其特征为：所述组合 物逆转胰腺纤维化所引起的胰脏脏器系数下降。5. 如权利要求3所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用，其特征为：所述组合 物逆转胰腺纤维化所引起的羟脯氨酸含量升高。6. 如权利要求3所述的组合物在治疗胰腺纤维化药物中的应用，其特征为：所述组合 物逆转胰腺纤维化所引起的炎症细胞浸润升高。
【专利摘要】本发明涉及有机合成和药物化学领域，具体涉及组合物、制备方法及其在制备预防或治疗胰腺纤维化药物上的用途。本发明公开了一种组合物及其制备方法。药理学实验表明，本发明的组合物具有预防或治疗胰腺纤维化的作用，具有开发预防或治疗胰腺纤维化药物的价值。
【IPC分类】A61K31/4025, A61K31/5377, A61P1/18
【公开号】CN105250312
【申请号】CN201510751978
【发明人】朱磊磊
【申请人】苏州贺澳德生物医药科技有限公司
【公开日】2016年1月20日
【申请日】2015年11月6日