br>[0113] 注：与模型组比，冲<0.05，*冲<0.01。
[0114] 模型组家兔血TNFa、IL-1、化-6及^-48的浓度明显提高、化-10浓度明显降低， FSN，FTZ、FN、FS、SN、F、S、N可明显降低炎症因子TNFa、比-1、比-6及NF-kB的浓度，提高抗炎 因子比-10的浓度，抑制动脉NF-邸过量表达。作用WFSN最优。
[0115] 对大白兔血液流变学指标的影响:FTZ和防治动脉硬化的中药组合物能降低全血 和血浆粘度，抑制血小板聚集，实验结果见表7，表中A表示防治动脉硬化的植物提取物组合 物。
[0116] 表7防治动脉硬化的中药组合物对实验性高血脂大白兔血液流变学的影响(n = 9)
[0117]
[011引注:与对照组比较，^φ<0.01。
[0119] 表8防治动脉硬化的中药组合物对动脉硬化模型大白兔腹主动脉中膜厚度与内腔 半径比值的影响(η = 8)
[0120]
[0121] 注:与高脂模型组比，冲<0.05，*冲<0.01。
[0122] 病理形态学观察结果表明，正常组家兔血管结构清晰，内弹力膜完整，中膜平滑肌 细胞排列规整，与内弹力膜平行。模型组家兔主动脉出现动脉粥样硬化斑块，血管内弹力 膜损伤断裂，中膜明显不规则增厚，中膜厚度与血管内腔半径之比值明显增大，平滑肌细胞 排列素乱，有向内膜迁移倾向，平滑肌纤维显著素乱；屯、肌组织脂质沉积严重，病变区屯、肌 细胞胞质内出现大量红染颗粒;肝脏切片油红0染色呈强阳性。各治疗组大鼠血管内弹力膜 断裂较模型组有所减少，部分拉伸变平，中膜平滑肌纤维排列稍素乱，FSN，FTZ、FN、FS、SN、 F、S、N可明显降低都有不同程度降低中膜厚度/血管内腔半径比值的作用(P<0.01)，作用W FSN最优，结果见表8,图5。各治疗组大白兔屯、肌组织和肝组织脂质沉积也显著减轻。
[0123] 实施例3防治动脉硬化的中药组合物对氧化低密度脂蛋白诱导血管平滑肌细胞 增生的影响
[0124] 方法：参考王道生贴块法(王道生，动脉平滑肌细胞培养方法，见徐叔云主编的药 理实验方法学，北京:人民卫生出版社，2013:573)，选用6周龄雄性SD大鼠断头处死，取胸主 动脉中膜，W贴块法培养于含10 %胎牛血清的DMEM培养基中，置于37°C、5 % C〇2解箱中培 养，进行大鼠血管平滑肌细胞的原代培养。用第3~5代传代血管平滑肌细胞，进行氧化低密 度脂蛋白（Ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞增生实验，并观察不同浓度中药复方提取物FTZ及 防治动脉硬化的植物提取物组合物对氧化低密度脂蛋白（Ox-LDL)诱导血管平滑肌细胞增 生的影响。
[01巧]细胞增殖评价参考Selzman CH等建立的方法（Selzman CH，et a.ClassE cytokine receptor ligands inhibit human vascular smooth muscle proliferation. Surgery，1998，124:318)，SD大鼠血管平滑肌细胞用0.25%膜酶消化，然后 在96孔板中W5000个细胞/孔的密度铺板。她后，换成无血清、含谷氨酸的DMEM培养基，无血 清条件维持48hW获得同步的细胞生长停止，然后换成含5%FBS的DMEM培养基及相应的实 验药剂，Ox-LDL终浓度l(K)yg/mL，与血管平滑肌细胞共同解育2地，每组实验重复6次，每一 组每次为6孔，对照组为含5%FBS的DMEM培养基，2地后细胞的增殖率通过应用CellTiter 96Assay MTS/阳S试剂盒确定。
[0126] 具体方法是MTS/PES 20化加入相应的孔中，96孔板在5%C02、37°C解箱中解育 90min，然后在BCXrLD型Multiplate readerW490皿测量吸光度，每孔重复3次，细胞的增殖 率用吸光度来表示。结果如下表，表中防治动脉硬化的植物提取物组合物用A表示。
[0127] 表9防治动脉硬化的植物提取物组合物对0x-U)L刺激下的大鼠血管平滑肌细胞 (VSMCs)增殖的影响(n = 6)
[012 引
[0130] 注：与Ox-LDL组相比，冲<0.05;*冲<0.01。
[0131] 结果表明，lOOyg/mL的化-U)L能明显刺激大鼠血管平滑肌细胞的增殖(P<0.05，见 表9)。防治动脉硬化的中药组合物FSN单独作用对血管平滑肌细胞细胞增殖率无影响。与对 照组相比，防治动脉硬化的中药组合物FSN对化-U)L诱导大鼠血管平滑肌细胞的增殖有明 显抑制。
[0132]实验研究表明，防治动脉硬化的中药组合物FSN可W更有效降低血清总胆固醇，低 密度脂蛋白胆固醇含量，降低胆固醇在组织里（如肝脏和屯、脏）的含量，降低血清甘油Ξ酸 脂水平，同时也抑制血小板凝集结。另外，本发明产品还能抑制平滑肌的增殖，防止内膜变 厚及内皮炎症损害，防止血栓形成，抑制并扭转动脉硬化的损害，进而提高人体的总体健康 水平。
【主权项】
1. 一种中药组合物在制备防治动脉硬化疾病药物或保健品中的应用，其特征在于，所 述中药组合物包括佛手总酚类提取物、三七总皂苷提取物与女贞子总有机酸提取物。2. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述中药组合物中，佛手总酚类提取物、三 七总皂苷提取物与女贞子总有机酸提取物的重量比为1~5:1~9:1~3。3. 根据权利要求1或2所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法，步骤如 下： (1) 佛手总酚类提取物的制备:将原料药物佛手经过Ch醇提后，合并总提取液，浓缩总 提取液后得到浓缩液，除去浓缩液中非酚类成分，得到佛手总酚类提取物； (2) 三七总皂苷提取物的制备:将原料药物三七经过&-3醇提后，合并总提取液，浓缩总 提取液后得到浓缩液，除去浓缩液中非皂苷类成分，得到三七总皂苷提取物； (3) 女贞子总有机酸提取物的制备:将原料药物女贞子加Ch醇回流提取，回收Ch醇， 浓缩得浓缩液，再以碱溶解酸沉淀重结晶析出女贞子总有机酸提取物； (4) 将佛手总酚类提取物、三七总皂苷提取物与女贞子总有机酸提取物混合，得到防治 动脉硬化疾病的中药组合物。4. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法中，步骤（1)-(3)的&-3醇提是用30~95体积%的&- 3醇提取1~5次，每次提取的&-3醇体积为药材质量的1 ~15倍，每次提取时间为5分钟以上;所述醇为甲醇、乙醇或丙醇。5. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法中，步骤（1)除 去浓缩液中非酚类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是lkg大孔树脂加浓缩 液1~5L。6. 根据权利要求5所述的应用，其特征在于，除去浓缩液中非酚类成分的具体操作为： 大孔树脂柱吸附后洗脱用50~95体积％乙醇，用量为每lkg大孔树脂用5~20L乙醇，以1~ 20mL/min流速洗脱，洗脱至无色;所述大孔树脂为聚酰胺型树脂或聚苯乙烯弱碱性阴离子 交换树脂。7. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法中，步骤(2)除 去浓缩液中非皂苷类成分采用大孔树脂，大孔树脂与浓缩液的用量比是lkg大孔树脂加浓 缩液1~5L。8. 根据权利要求7所述的应用，其特征在于，除去浓缩液中非皂苷类成分的具体操作 为:大孔树脂柱吸附后洗脱用50~95体积％乙醇，用量为每lkg大孔树脂用5~20L乙醇，以1 ~20mL/min流速洗脱，洗脱至无色;所述大孔树脂为聚苯乙烯弱碱性阴离子交换树脂。9. 根据权利要求3所述的应用，其特征在于，所述中药组合物的制备方法中，步骤(3)所 述碱溶解是用氢氧化钠溶解，用1~30质量%NaOH调pH为9~13;步骤(3 )所述酸沉淀是用1~ 30%质量HC1溶液，pH为0.1~5，重结晶体积为女贞子重量的1~5倍。10. 根据权利要求1所述的应用，其特征在于，所述动脉硬化疾病为冠状动脉，脑动脉， 肾动脉，肠系膜动脉和四肢等动脉粥样硬化所造成的管腔狭窄所致的各种疾病，包括脑动 脉硬化症、冠状动脉硬化病、冠心病。
【专利摘要】本发明公开了一种防治动脉硬化的疾病的中药组合物，包括佛手提取物、三七总皂苷提取物、女贞子总有机酸提取物。本发明还公开了上述组合物的制备方法，本发明还公开了上述组合物的制备方法，分别将佛手、三七、女贞子经过C1-3醇提后，除杂提纯，分别得到佛手总酚类提取物、三七总皂苷提取物和总三萜酸生物碱提取物，三者混合后得到防治脂代谢紊乱的疾病的植物提取物组合物。本发明去除了原复方中药中大量无效的化学成分，有效成分含量大大提高，减少了无效成分对产品加工和制剂质量及安全性的影响，使有效成分明确，制备工艺稳定，产品质量可控，有利于工业化生产，并显著提高防治动脉硬化的疾病药效，防治动脉硬化的疾病疗效更稳定更好。
【IPC分类】A61K36/752, A61K36/258, A61P9/10, A61K36/638, A61P3/06, A61P7/02
【公开号】CN105456442
【申请号】CN201510852549
【发明人】郭姣, 贝伟剑, 荣向路, 何伟
【申请人】广东药学院
【公开日】2016年4月6日
【申请日】2015年11月27日