量10倍水70°C浸提2小时，第二次加药材重量8倍水70°C浸提1小时，合并提 取液，过滤，得猫爪草提取液;猫爪草提取液加热浓缩至每L浓缩液含药材300g，加浓缩液重 量0.5倍的体积百分比为65%的乙醇揽拌均匀，静置化，所得沉淀再用沉淀物重量5倍的 65%乙醇洗涂2次，干燥，得猫爪草多糖。
[0044] 实施例5:
[004引取化g猫爪草药材，粉碎，加水浸提3次，第一次加药材重量12倍水70°C浸提2小时， 第二次加药材重量10倍水70°C浸提2小时，第二次加药材重量8倍水70°C浸提1小时，合并提 取液，过滤，得猫爪草提取液;猫爪草提取液加热浓缩至每L浓缩液含药材SOOg，加浓缩液重 量3倍的体积百分比为30%的乙醇揽拌均匀，静置化，所得沉淀再用沉淀物重量5倍的30% 乙醇洗涂2次，干燥，得猫爪草多糖。
[0046]药效实验：
[0047 ] -、对溃瘍性结肠炎小鼠的影响
[004引 1.实验材料
[0049] 1.1动物:健康SPF级昆明小鼠，22-25g，购买自广西医科大学实验动物中屯、（生产 许可证号：SCXK桂2009-0002)。
[0050] 1.2药品与仪器
[0051] 本发明实施例1、实施例2、美沙拉嗦肠溶片(佳木斯鹿灵制药有限责任公司）、葡聚 糖硫酸钢(DSS ,MPbio )、小鼠IL-沈1 isa试剂盒(北京博凌科为生物科技有限公司）、小鼠IL-10 Elisa试剂盒(北京博凌科为生物科技有限公司）、CT15RT台式高速冷冻离屯、机(上海天 美科学仪器有限公司）。
[0052] 2.实验分组
[005引取小鼠随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即空白组、模型组，阳性对照组，实施例 1组、实施例3组。
[0054] 3.实验方法
[005引 3.1动物造模
[0056] 除空白组外各组灌胃0.8ml 50g/L的DSS，每天一次，同时自由饮用20g/L的DSS水， 连续7天。空白组灌胃等体积生理盐水，喂饮用水。
[0057] 3.2给药方法
[0058] 各组动物造模后每天灌胃给药1次，连续10天，给药方法如下：
[0059] 空白对照组:灌胃lOml/kg蒸馈水；
[0060] 模型组:灌胃lOml/kg蒸馈水；
[0061] 阳性对照组:灌胃美沙拉嗦药液45mg/ml，给药体积为lOml/kg;
[0062] 实施例1组:给予实施例1猫爪草提取物，按生药量计lOOmg/kg，给药体积为IOml/ kg O
[0063] 实施例3组:给予实施例3猫爪草多糖，按生药量计lOOmg/kg，给药体积为lOml/kg。
[0064] 3.3指标检测
[006引末次给药2地后将小鼠摘眼球取血，50(K)rpm/min离屯、lOmin，取血清检测化-2、比-10水平。
[0066] 4、实验结果
[0067] 表1各组小鼠血清IL-2及IL-IO水平
[0069] 注:与空白对照组比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，々P<0.05，々々P< 0.01;与阳性对照组比较，AP<0.05，AAP<0.01。
[0070] 表1结果显示：与空白对照组相比，模型组IL-2、比-10差异显著(P<0.01)，说明造 模成功。与模型组IL-2比，实施例组及阳性对照组小鼠的IL-2水平均明显升高，其中，实施 例1、阳性对照组效果显著(P<〇.05)，实施例3效果极为显著(P<0.01)。与空白对照组IL-10相比，实施例组及阳性对照组小鼠的IL-IO水平均明显降低，其中，实施例1、阳性对照组 效果显著(P<〇.05)，实施例3效果极为显著(P<0.01)。
[0071] 实验结果表明：本发明提供的猫爪草提取物，特别是猫爪草多糖可有效提高UC小 鼠血清IL-2水平，降低血清IL-IO水平，效果优于现有技术。
[0072] 二、对溃瘍性结肠炎大鼠的影响
[0073] I.实验材料
[0074] 1.1动物:健康SD大鼠，180-220g，购买自广西医科大学实验动物中屯、(生产许可证 号：SCXK 桂 2009-0002)。
[00巧]1.2药品与仪器
[0076] 本发明实施例1、实施例2、美沙拉嗦肠溶片(佳木斯鹿灵制药有限责任公司）、5% 2，4，6-S硝基苯横酸(TNBS)水溶液(Sigma)、IL-I Elisa试剂盒(北京博凌科为生物科技有 限公司）、IL-4Elisa试剂盒(北京博凌科为生物科技有限公司）、S0D试剂盒(南京建成科技 有限公司）、MDA试剂盒(南京建成科技有限公司、CT15RT台式高速冷冻离屯、机(上海天美科 学仪器有限公司）。
[0077] 2.实验分组
[007引大鼠适应性饲养一周后随机分为5组，每组10只，雌雄各半，即空白对照组，模型 组，阳性对照组，实施例1组、实施例3组。
[0079] 3.实验方法
[0080] 3.1动物造模
[0081] 将分组后的大鼠饲养5d后，24h禁食不禁水，称重，腹腔注射10%水合氯醒麻醉 (3.8ml/kg)，将一橡胶管(直径2mm，长12cm)轻缓地插入大鼠肛口 8-10畑1，推入TNBS溶液(含 2.5 % TBNS及含50 %乙醇），剂量为2ml/kg，将造模大鼠倒置Imin后放回笼内。
[00对 3.2给药方法
[0083] 各组动物造模后第3天开始灌胃给药，连续10天，一次/天，给药方法如下：
[0084] 空白对照组:灌胃lOml/kg蒸馈水；
[0085] 模型组:灌胃lOml/kg蒸馈水；
[0086] 阳性对照组:灌胃美沙拉嗦药液45mg/ml，给药体积为lOml/kg;
[0087] 实施例1组:给予实施例1猫爪草提取物，按生药量计lOOmg/kg，给药体积为IOml/ kg O
[0088] 实施例3组:给予实施例3猫爪草多糖，按生药量计lOOmg/kg，给药体积为lOml/kg。
[0089] 3.3指标检测
[0090] 给药末次给药24后将大鼠腹腔注射10%水合氯醒（3.8ml/kg)麻醉，腹主动脉取 血，30(K)rpm/min离屯、lOmin，按试剂盒说明书检测血清化-1、比-4水平。大鼠取血后取离肛 口约8cm处结肠1 cm，按试剂盒说明书制备匀浆，并检测SOD、MDA值。
[0091] 4、实验结果
[0092] 表2各组大鼠血清中IL-I及IL-4含量
[0094] 注:与空白对照组比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，々P<0.05，々々P< 0.01;与阳性对照组比较，AP<0.05，AAP<0.01。
[0095] 表2结果显示，与空白组相比，模型组IL-I、化-4含量差异极为显著(P<0.0 l )，说 明造模成功；与模型组相比，阳性对照组、实施例1及实施例3组IL-1、化-4含量差异均极为 显著(P<0.01);与阳性对照组相比，实施例3的IL-I及IL-4含量差异显著(P<0.05)。
[0096 ] 表3各组大鼠结肠组织中SOD和MDA的含量
[009引注:与空白对照组比较，冲<0.05，*冲<0.01;与模型组比较，々P<0.05，々々P< 0.01;与阳性对照组比较，AP<0.05，AAP<0.01。
[0099] 表3结果显示，与空白组相比，模型组S0D、MDA含量差异极为显著(P<0.01)，说明 造模成功;与模型组相比，阳性对照组、实施例1及实施例3组S0D、MDA含量差异均极为显著（ P<0.01);与阳性对照组相比，实施例3的SOD及MDA含量差异显著(P<0.05)。
[0100] 总体实验效果显示，本发明可有效治疗溃瘍性结肠炎，治疗效果最优为猫爪草多 糖，猫爪草提取物次之，但两者均显示出显著的治疗效果。
[0101] 虽然，上文中已经用一般性说明、【具体实施方式】及试验，对本发明作了详尽的描 述，但在本发明基础上，可W对之作一些修改或改进，运对本领域技术人员而言是显而易见 的。因此，在不偏离本发明精神的基础上所做的运些修改或改进，均属于本发明要求保护的 范围。
【主权项】
1. 猫爪草在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途。2. 猫爪草提取物在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途。3. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述猫爪草提取物通过以下步骤制备而得： 取猫爪草药材，粉碎，加入药材总重量6-12倍的水，70-100°C进行浸提2-3次，每次l-3h，过 滤，滤液合并，得猫爪草提取液。4. 根据权利要求2所述的用途，其特征在于所述猫爪草提取物通过以下步骤制备而得： 取猫爪草药材，粉碎，加水浸提2次，第一次加药材重量12倍水100°C浸提3小时，第二次加药 材重量10倍水l〇〇°C浸提2小时，合并提取液，过滤，得猫爪草提取液。5. 猫爪草多糖在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途。6. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述猫爪草多糖通过以下步骤制备而得:猫 爪草提取液加热浓缩至每L浓缩液含药材300-800g，加浓缩液重量0.5-3倍的体积百分比 为30%-95%的乙醇搅拌均匀，静置5h，所得沉淀再用沉淀物重量5倍的30%-95%乙醇洗涤2次， 干燥，得猫爪草多糖。7. 根据权利要求5所述的用途，其特征在于所述猫爪草多糖通过以下步骤制备而得:猫 爪草提取液加热浓缩至每L浓缩液含药材700g，加浓缩液重量1倍的体积百分比为95%的乙 醇搅拌均匀，静置5h，所得沉淀再用沉淀物重量5倍的95%乙醇洗涤2次，干燥，得猫爪草多 糖。8. 猫爪草提取物与医药学上可接受的载体配合成在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎 药物方面的新用途。9. 猫爪草多糖与医药学上可接受的载体配合成在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药 物方面的新用途。
【专利摘要】本发明涉及猫爪草的新用途，即猫爪草在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎制剂方面的新用途，特别是猫爪草多糖在制备治疗和/或预防溃疡性结肠炎药物方面的新用途。
【IPC分类】A61K36/71, A61P1/00, A61K31/715, C08B37/00
【公开号】CN105497167
【申请号】CN201511022020
【发明人】刘冠萍, 吴赛春, 陈红, 严灿梅
【申请人】广西梧州制药（集团）股份有限公司
【公开日】2016年4月20日
【申请日】2015年12月31日