一种益生菌芦荟面膜的制备方法
【专利摘要】一种益生菌芦荟面膜的制备方法,是利用库拉索芦荟原汁、葡萄糖、水按照一定配比制备发酵备用液，添加益生菌进行共发酵。通过设定不同的温度梯度和PH梯度，经活菌计数后，确定其最佳发酵条件；并采用芦荟益生菌发酵液进行抑菌实验以便确定其抗菌效果，如痤疮丙酸杆菌；同时通过对其抗氧化性指标的测定，确定该芦荟益生菌发酵液的抗氧化能力，如DPPH自由基清除能力的测定、铁离子螯合能力的测定和总还原力的测定等。本产品采用芦荟益生菌发酵液与化妆品辅助原料按比例混合，加工制作成膏状面膜，经感官指标测试、理化指标测试、皮肤刺激性测试和试用效果测试后，确定本产品的安全性和功能性，实现护肤保健的目的。
【专利说明】
一种益生菌芦荟面膜的制备方法
技术领域
[0001]本发明涉及一种益生菌芦荟面膜的制备方法及效果评价，属于化妆品制备技术领域。
【背景技术】
[0002]库拉索芦荟属于天然的护肤品，含丰富的天然维生素E、C、A及B族维生素、矿物元素、氨基酸、芦荟多糖、酚类化合物等，这些基本营养素在保持机体活力和美容护肤的过程中起着重要的作用。其中，芦荟多糖能够调节机体的细胞免疫和体液免疫水平，激活皮肤基底层的朗罕细胞，增强其在皮肤局部的免疫功能和修复功能，促进其清除皮肤色素，降低抗氧化性损害(包括紫外线)，抗衰老增加皮肤的弹性等功效，尤其针对粉刺的发生具有良好的治疗效果。
[0003]益生菌是指对人和动物机体有益的菌。经过一个多世纪的实验已证明益生菌具有重要的生理功能，目前多应用于保健食品中。实验证明，益生菌能利用皮肤汗腺排泄的无机盐、尿酸和尿素等物质作为生长因子和营养氮源，从而达到清洁皮肤的功效；同时益生菌代谢产生乳酸等有机酸可使皮肤的PH呈弱酸性，即皮肤正常的pH范围，从而达到平衡肌肤表面PH的功效;而且益生菌产生的有机酸、双乙酰和小分子抗菌物质等能有效抑制皮肤表面有害菌如痤疮杆菌的生长繁殖，从而达到很好的抗痘功效。综上，将益生菌直接或间接涂抹在面部皮肤上，确实可以起到护肤、洁肤的作用。
[0004]现今，面膜已成为众多护肤品中的必选，在市场上占有较大比重，但是种类的增多、高昂的价格和单一的功效并不能满足市场需求，而且部分面膜不同程度上采用了各种化学添加剂，存在安全隐患。所以专利中描述了一种更安全、更具功能性的面膜的制备方法，不仅具有芦荟本身的美白、保湿和抗炎作用，并兼具益生菌洁肤、护肤、抗菌的益生作用，而且因为用材的安全性决定该产品几乎不存在使用风险。结合上述，本产品将更具有应用价值和市场竞争力。
【发明内容】
[0005]为克服上述产品的缺陷与不足，本发明提出一种益生菌芦荟面膜的制备方法。
[0006]—种益生菌芦荟面膜，该芦荟益生菌面膜中活性益生菌含量达到I X 108CFU/g，所述的活性益生菌为长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、鼠李唐乳杆菌、植物乳酸杆菌、德式乳杆菌I:1:1:1:1: I混合，制备复合益生菌悬液。
[0007]本发明所述芦荟益生菌面膜的制备方法，包括如下步骤:
A、芦荟原汁制备:挑选新鲜、饱满、肉质肥厚的库拉索芦荟叶，剔除带有病斑、软腐的叶片，叶片均重约300?400 g;用酒精擦拭叶片表面，去除表皮，采用榨汁机将叶肉榨成芦荟原汁，分装，6000 rpm/min离心10 min，取上清。采用巴氏消毒法将芦荟原汁灭菌，55°C水浴30min，待冷却于4 °C冰箱保存，以备用。
[0008]B、发酵:选用二次活化后的6种益生菌按照1:1比例混合制备复合益生菌悬液，按5%接种量添加到芦荟原汁中，并辅以葡萄糖，进行共发酵。
[0009]C、发酵条件设定:分别以25 °C、30 °C、37 °C、42 °C设置温度梯度，并设置PH梯度为3、4、5、6、7、8、9;通过活菌计数法，确定复合益生菌的最佳发酵条件。
[0010]D、发酵后处理:发酵完毕，分装发酵液，4°C保存以备用。
[0011]E、抗氧化指标测定及评价:配制相关试剂，测定DPPH自由基清除能力、超氧自由基清除能力、铁离子螯合能力和总还原力，并进行发酵液的后期评价。
[0012]F、抑菌试验:取活化的致病菌稀释至18 CFU/mL左右，分别取100 yL菌液涂布于LB平板，菌液吹干后在平板中小心放入无菌的牛津杯，再向牛津杯中加入六种益生菌的发酵液上清，将平板于37°C培养，测量其抑菌圈直径，并照相。
[0013]G、面膜基质制作:
所使用材料:A汉生胶1.5% ,B甘油7.5%，C吐温(20)1.8%，D椰子油2.3%+凡士林1.8% + 二甲基硅油1.6% +羟乙基尿素11% ,E芦荟益生菌发酵液32.5%，F去离子水40%，G香精+防腐剂适量；
(I)A+B倒入烧杯内调和(其中甘油加5%)，分散至均匀。
[0014](2)将C和F加入上述烧杯内，搅拌均匀，放入水浴锅加热至75°C，保温30min。
[0015](3)取另一烧杯，将D项所有物物料倒入，放入水浴锅加热至75°C，保温30min。
[0016](4)在不停搅拌的同时，将步骤(3)所得的油相混合物料逐渐加入到步骤(2)的烧杯中，全部倒入后加大搅拌转速，将其搅拌分散均匀，静置乳化8min。
[0017](5)将步骤(4)所得的乳化体搅拌降温至45°C，然后将E(与剩余2.5%甘油一同加入)搅拌均匀后加入到其中。
[0018](6)搅拌降温至40°C，加入G，搅拌均匀。
[0019]H、对成品面膜进行感官指标测试(外观、气味、使用感受)，理化指标测试(粘度，PH值，耐热性耐寒性)，皮肤刺激性测试及使用效果评估。
本发明的有益效果:本产品采用芦荟益生菌发酵液与化妆品辅助原料按比例混合，加工制作成膏状面膜，经感官指标测试、理化指标测试、皮肤刺激性测试和试用效果测试后，确定本产品的安全性和功能性，实现护肤保健的目的。
【附图说明】
[0020]图1益生菌发酵液抗氧化参数测定；
图2芦荟益生菌发酵液抑菌结果。
【具体实施方式】
[0021]
下面结合实施例对本发明作进一步详细的描述，但本发明的实施方式包括但不限于此。
[0022]实施例1:芦荟益生菌发酵液发酵条件确定:
一、芦荟原汁制备:挑选新鲜、饱满、肉质肥厚的库拉索芦荟叶，剔除带有病斑、软腐的叶片，叶片均重约300?400 g。用酒精擦拭叶片表面，去除表皮，采用榨汁机将叶肉榨成芦荟原汁，分装，6000 rpm/min离心10 min，取上清。采用巴氏消毒法将芦荟原汁灭菌，55°C水浴30min，待冷却于4 °C冰箱保存，以备用。
[0023]二、发酵:选用二次活化后的6种益生菌按照1:1比例混合制备复合益生菌悬液，按5%接种量添加到芦荟原汁中，并辅以葡萄糖，进行共发酵。
[0024]三、发酵条件设定:分别以25 °C、30 °C、37 °C、42 °C设置温度梯度，并设置PH梯度为3、4、5、6、7、8、9;通过活菌计数法，确定复合益生菌的最佳发酵条件。
[0025]实施例2:抗氧化指标的测定及评价
一、相关试剂:0.2 mmol /T, DPPH 乙醇；150 mmol /T, pH 8.0 Tris-Hcl ； 1.2 mmol/L邻苯三酚；0.4% FeS04: FeS047H20；l%抗坏血酸；0.2 mol/L氢氧化钠；10%三氯乙酸；
0.1%邻二氮菲;P H为6.6磷酸缓冲液;0.1%三氯化铁。
[0026]二、确定最佳芦荟发酵液条件后以最佳条件进行发酵，发酵好后于4 V冰箱保存。
[0027]三、抗氧化指标的测定
1.DPPH自由基清除能力的测定
取2ml芦荟发酵液，加入0.2mol/LDPPH乙醇溶液2ml，黑暗下室温反应30min，然后用等体积的三氯甲烷抽提，取上清517nm测OD，对照为去离子水加DPPH溶液。
[0028]2.羟基自由基清除能力的测定
取2 mmol/L的硫酸亚铁溶液I mL, 6 mmol/L过氧化氢I mL, 6 mmol/L水杨酸I mL,并加入芦荟饮料I mL，静置30 min，以蒸馏水为参比，在510 nm处测定吸光度，计算羟自由基的清除率。
[0029]3.3，5_二硝基水杨酸法测定还原糖
A.标准曲线的制作:取8支15 mmX 180 mm试管，分别编号为O至7，向其中依次加入0、
0.2、0.4、0.6、0.8、1.4、1.6、2.0 mL的I mg/mL的葡萄糖标准溶液，然后用蒸馈水定容到2mL再依次加入1.5 mL水杨酸，水浴5 min，取出立即冷却到室温，加21.5 mL蒸馏水，摇匀，在540 nm处测定吸光度。
[°03°] B.样品中还原糖含量的测定:以标准曲线制作中O号为对照，向15 mmX 180 mm试管中加入I mL样品溶液，I mL蒸馏水和1.5 mL水杨酸，水浴5 min，取出立即冷却到室温，加21.5 mL蒸馏水，摇匀，在540 nm处测定吸光度。
[0031]4.对Fe2+的螯合能力的测定
取0.5 mL芦荟发酵液中加入0.4%的FeS04溶液0.1 mL混合均匀后，再加入0.1 mL 1%的抗坏血酸溶液和0.2 mol/L氢氧化钠溶液I mL，37°C下反应20 min，然后用10%的三氯乙酸去除蛋白，取0.4 mL上清并加入4 mL 0.1%邻二氮菲，室温反应10 min，测定536 nm处吸光度。
[0032]5.总还原力的测定
取I mL的样品，加入P H为6.6的磷酸缓冲液I mL和1%铁氰化钾溶液I mL，混匀，在50°C下保温20 min,加入10 %的三氯乙酸溶液I mL，振荡混匀后取I mL的混合液，加入4 mL去离子水和0.1 %的三氯化铁溶液0.4 mL，静置10 min，用去离子水为空白，在700nm下进行比色，吸光度的值越大，说明还原力越强。
[0033]实施例3:抑菌试验
实验材料:益生菌、鼠伤寒、肠炎沙门、福氏志贺、大肠0157、单增ATCC、志贺301、金黄色葡萄球菌ccwanl、库拉索芦荟、LB培养基、牛津杯。
[0034]实验步骤:
A活化益生菌、致病菌，过夜培养。
[0035]B将致病菌菌体浓度调至18 CFU/mL左右，分别取100 yL菌液涂布于LB平板。
[0036]C待菌液吹干后，在平板中小心放入无菌的牛津杯；向牛津杯中加入芦荟益生菌发酵液。
[0037]D 37Γ培养6-8 h，每隔2?3 h观察。
[0038]E测量平板中的抑菌圈直径，并照相。
[0039]实施例1的结果表明，在37 °C，PH=7的条件下发酵48 h，10000 rpm/min 10离心后，发酵液澄清透亮。
[0040]实施例2的结果表明，DPPH自由基清除能力实验中，清除率达到29.92%，说明芦荟益生菌发酵液对自由基清除能力较弱;羟基自由基清除能力的测定实验，清除率为50.60%，说明芦荟益生菌发酵液对羟基自由基清除能力较强;对Fe2+的螯合能力的测定中，螯合率为81.48%，说明芦荟益生菌发酵液对铁离子的螯合能力较强;总还原力的测定实验，数值为
0.164，说明芦荟益生菌发酵液具有一定还原力，但还原力较弱;在还原糖测定实验中，根据标准曲线计算得出还原糖含量为28.35 mg/mL ο
[0041 ]实施例3的结果表明，芦荟益生菌发酵液对痤疮杆菌的抑制效果良好。
【主权项】
1.一种益生菌芦荟面膜的制备方法，其特征在于:包括如下步骤: A、芦荟原汁制备:挑选新鲜、饱满、肉质肥厚的库拉索芦荟叶，剔除带有病斑、软腐的叶片，叶片均重约300?400 g;用酒精擦拭叶片表面，去除表皮，采用榨汁机将叶肉榨成芦荟原汁，分装，6000 rpm/min离心10 min，取上清；采用巴氏消毒法将芦荟原汁灭菌，55 °C水浴30min，待冷却于4°C冰箱保存，以备用； B、发酵:选用二次活化后的6种益生菌混合制备复合益生菌悬液，按5%接种量添加到芦荟原汁中，并辅以葡萄糖，进行共发酵； C、发酵条件设定:分别以25°C、30 °C、37 °C、42 °C设置温度梯度，并设置PH梯度为3、4、5、6、7、8、9;通过活菌计数法，确定复合益生菌的最佳发酵条件； D、发酵后处理:发酵完毕，分装发酵液，4°C保存以备用； E、抗氧化指标测定及评价:配制相关试剂，测定DPPH自由基清除能力、超氧自由基清除能力、铁离子螯合能力和总还原力，并进行发酵液的后期评价； F、抑菌试验:取活化的致病菌稀释至18CFU/mL左右，分别取100 yL菌液涂布于LB平板，菌液吹干后在平板中小心放入无菌的牛津杯，再向牛津杯中加入六种益生菌的发酵液上清，将平板于37 °C培养，测量其抑菌圈直径，并照相； G、面膜基质制作:所使用材料:A汉生胶1.5%,B甘油7.5%，C吐温201.8%，D椰子油2.3%+凡士林1.8% + 二甲基硅油1.6% +羟乙基尿素11% ,E芦荟益生菌发酵液32.5%，F去离子水40%，G香精+防腐剂适量； (1)A+B倒入烧杯内调和，其中甘油加5%，分散至均匀； (2)将C和F加入上述烧杯内，搅拌均匀，放入水浴锅加热至75°C，保温30min; (3)取另一烧杯，将D项所有物物料倒入，放入水浴锅加热至75°C，保温30min; (4)在不停搅拌的同时，将步骤(3)所得的油相混合物料逐渐加入到步骤(2)的烧杯中，全部倒入后加大搅拌转速，将其搅拌分散均匀，静置乳化8min; (5)将步骤(4)所得的乳化体搅拌降温至45°C，然后将E与剩余2.5%甘油一同加入搅拌均匀后加入到其中； (6)搅拌降温至40°C，加入G，搅拌均匀。2.根据权利要求1所述的一种益生菌芦荟面膜的制备方法，其特征在于:所述6种活性益生菌为长双歧杆菌、短双歧杆菌、青春双歧杆菌、鼠李唐乳杆菌、植物乳酸杆菌、德式乳杆菌，其比例为1:1:1:1:1:1。
【文档编号】A61Q19/00GK105853303SQ201610367765
【公开日】2016年8月17日
【申请日】2016年5月30日
【发明人】陈廷涛, 辛洪波, 王鑫, 周海婷
【申请人】南昌大学