治疗肝病症的方法

治疗肝病症的方法
【专利摘要】式(I)化合物或其代谢物、或者式(I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的盐用于抑制肝脂肪变性、小叶炎症、肝鼓胀和肝结疤，其中，m、n、X1和X2如本文所定义。
【专利说明】
治疗肝病症的方法
[0001] 相关专利申请的交叉引用
[0002] 本申请要求2014年1月10日提交的美国申请No. 14/152,924的权益，其继而为2012 年12月5日提交的美国申请No. 13/706,161的部分继续申请，其内容通过引用方式整体并入 本文。
技术领域
[0003] 本申请设及通过施用苯氧基烷基簇酸、诸如MN-001和MN-002治疗非酒精性脂肪性 肝病（NAFLD)和/或非酒精性脂肪性肝炎（NASH)、导致它们的一种或多种的疾患 (condition)或者由它们的一种或多种产生的疾患、和/或其各自的不利影响的方法。
【背景技术】
[0004] 非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是指与酒精消耗无关的脂肪累积在肝中。脂肪可由 于肥胖症、糖尿病或其它疾患而累积。在少量的人中，NAFLD发展为肝脏炎症、结瘤且最终肝 衰竭。所述疾病的运种严重形式有时被称为非酒精性脂肪性肝炎(NASH)dNAFLD和NASH及导 致它们的一种或多种的疾患或由它们的一种或多种产生的疾患是一种影响每个年龄段人 的全球日益严重的问题。NAFLD和NA甜是当前发展最快的肝移植的指示。

【发明内容】

[0005] 在一方面，本发明提供一种治疗患有非酒精性脂肪性肝病(NA化D)或非酒精性脂 肪性肝炎(NASH)的患者的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的式（I)化合物：
[0006]
[0007]或其代谢物、或者式（I)化合物或其代谢物的醋、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中m是2至5的整数且η是3至8的整数，χ?和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酷基 (-s(o)-)基团或横酷基(-s(o)2-)基团，条件是χ?和X2不同时为氧原子。
[000引在另一方面，本发明提供一种减轻患有NAFLD或ΝΑ甜的患者的肝脏炎症的方法，其 包括向有需要的患者施用有效量的式(I)化合物或其醋、或者其各自的药学上可接受的盐， 其中所述式(I)化合物如上所定义。
[0009]在另一方面，本发明提供一种抑制患有脂肪变性、小叶炎症、肝鼓胀和肝结瘤中的 一种或多种的患者的脂肪变性、小叶炎症、肝鼓胀和肝结瘤中的一种或多种的方法，其包括 向有需要的患者施用有效量的式(I)化合物或其醋、或者其各自的药学上可接受的盐，其中 所述式(I)化合物如上所定义。如本文所用，"脂肪变性"（也被称为脂肪变、脂肪变性(fatty degeneration,adipose degeneration))是描述在细胞、优选肝细胞内脂质异常滞留的过 程。在另一方面，本发明提供一种减少和/或抑制有需要的患者的肝中的径脯氨酸形成的方 法，其包括向有需要的患者施用有效量的式(I)化合物或其醋、或者其各自的药学上可接受 的盐，其中式（I)化合物如上所定义。在某些优选的实施方案中，所述脂肪变性、小叶炎症、 肝鼓胀、肝结瘤或肝-径脯氨酸累积与过度饮酒不相关;换句话说，它们本质上基本上是非 酒精性的。
[0010] 在一个优选的实施方案中，式(I)化合物是式(IA)化合物(或MN-001):
[0011]
[0012] 在另一个优选的实施方案中，式(I)和式(IA)化合物的代谢物是式(IB)化合物(或 MN-002)：
[0013]
[0014] 在一个实施方案中，所述患者患有NA化D。在另一个实施方案中，所述患者患有 NA甜。
【附图说明】
[0015] 图1图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的脂肪变性评分。
[0016] 图2图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的小叶炎症评分。
[0017] 图3图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的肝细胞鼓胀评分。
[0018] 图4图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的纤维化面积的百分比。
[0019] 图5图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的炎症面积。
[0020] 图6图形化地示出在治疗和未治疗的小鼠中的肝径脯氨酸含量。
【具体实施方式】
[0021] 定义
[0022] ^文和随附权利要求中所用，除非上下文清楚地指出，否则单数形式"一 "（a、 an)和"所述"包括复数的指代物。
[0023] 。施用"（administering)或"施用"（administration)药物给患者（和该短语的语 法等同物)包括直接施用(包括自施用)和间接施用(包括开出药物的行为)两者。例如，如本 文所用，指导患者自施用药物和/或向患者提供药物处方的医师是施用药物给患者。
[0024] "虹'当置于基团前时是指此基团中碳原子的数目为X。
[0025] "烷基"是指具有1-12个碳原子的一价非环状控基基团。烷基的非限制性实例包括 甲基、乙基、丙基、异丙基、下基、异下基、叔下基、戊基、己基等。
[0026] "芳基"是指具有多达10个碳原子的一价芳族控基基团。芳基的非限制性实例包括 苯基和糞基。
[0027] "杂芳基"是指在芳环内具有1至10个碳原子和1至4个选自由氧、氮、硫组成的组的 杂原子的芳族基团，其中所述杂芳基的氮和/或硫原子被任选地氧化(如N-氧化物、-S(0)- 或-s(o)2-)。此类杂芳基基团可具有单环（如化晚基或巧喃基）或多个稠环（如吗I噪嗦基或 苯并嚷吩基），其中所述稠环可为或可不为芳族的和/或可含有或可不含有杂原子，条件是 连接点通过芳族杂芳基基团的原子。杂芳基的非限制性实例包括化晚基、化咯基、吗I噪基、 苯硫基和巧喃基。
[0028] "环烷基"是指具有3-12个碳原子的一价非-芳族环状控基基团。环烷基的非限制 性实例包括环丙基、环下基、环戊基、环己基等。
[0029] "杂环基"是指在环内具有1至10个碳原子和1至4个选自由氧、氮、硫组成的组的杂 原子的一价非-芳族环状基团，其中所述杂芳基的氮和/或硫原子被任选地氧化(如N-氧化 物、-s(o)-或-S(0)2-)。此类杂芳基基团可具有单环(如赃晚基或四氨巧喃基)或多个稠环， 其中所述稠环可为或可不为芳族的和/或可含有或可不含有杂原子，条件是连接点通过非- 芳族杂环基基团的原子。杂环基的非限制性实例包括化咯烷基、赃晚基、赃嗦基等。
[0030] 。氨基"是指-N出。
[0031] "烷基氨基"是指-NH化，其中Rb是任选地用1-3个芳基、杂芳基、环烷基或杂环基基 团取代的C广C6烷基。
[00创"二烷基氨基"是指-N(Rb)2,其中化如上所定义。
[0033] "包括/包含"应意指所述方法和组合物包括列举的要素，但不排除其它要素。"基 本上由……组成"当用于定义所述方法和组合物时，应意指为了说明目的排除对组合具有 任何重要意义的其它要素。因此，基本上由本文所定义的要素组成的组合物将不排除来自 分离和纯化方法的微量污染物及药学上可接受的载体、诸如憐酸盐缓冲盐水、防腐剂等。 "由……组成"应意指排除多于微量的其它成分要素及用于施用本发明的组合物的重要方 法步骤或者产生组合物或获得预期结果的方法步骤。由运些过渡术语和短语中的每一个定 义的实施方案在本发明的范围内。
[0034] 本文所用的化合物的"有效量"是当向NA化D或NASH患者施用时将具有预期疗效 (如在患者的医学病况的一种或多种表现的减轻、改善、缓解或消除）的量。完全疗效不一定 通过施用一剂(或剂量)发生，并且仅可在施用连续剂量后发生。因此，有效量可W-次或多 次施用被施用。
[0035] "非酒精性脂肪性肝炎"或NASH是一种常见的肝病，其类似于酒精性肝病，但是在 几乎不饮用或不饮用酒精的人中发生。NASH的主要特征是肝中的脂肪，连同炎症和损伤。 NA細可导致肝硬化，其中肝脏永久性受损且结瘤且不再能够正常工作。NA細影响了 2%至 5%的美国人口。当前，对NASH不存在特异性的疗法。另有10%至20%的美国人在其肝脏中 具有脂肪，但没有明显的炎症和损伤，一种被称为"非酒精性脂肪性肝病"（NA化D)的疾患。 尽管在肝中具有脂肪不常见，但其本身可能几乎不引起伤害或永久性损伤。如果基于血液 测试结果或肝扫描疑似具有脂肪，则该问题被称为NAFLD。如果肝活检在运种情况下进行， 则其将显示一些人具有NA甜而其它人具有NAFLD。
[0036] NASH通常首先疑似存在于在包含在常规血液测试板内的肝测试(诸如丙氨酸氨基 转移酶(ALT)或天冬氨酸氨基转移酶(AST))中发现具有升高的人中。当进一步评估显示没 有显著的肝病原因（诸如药物、病毒性肝炎或过度使用酒精)时且当肝的X射线或成像研究 显示脂肪时，疑似NA甜。NASH被诊断且通过肝活检与NAFLD分开。对于肝活检，将针插入经过 皮肤w去除一小片肝。当用显微镜检查组织显示脂肪连同炎症和对肝细胞的损伤时，诊断 出NA甜。如果组织显示出脂肪而无炎症和损伤，则诊断出NA化D。从活检得到的一则重要信 息是瘤痕组织是否已在肝中形成。
[0037] NASH可缓慢恶化，从而引起结瘤或纤维化出现和累积在肝中。因为纤维化恶化，形 成肝硬化;所述肝变得严重结瘤、硬化且不能正常起作用。一旦严重的结瘤或肝硬化存在， 几乎没有治疗可终止进展。具有肝硬化的人经历体液滞流、肌肉萎缩、肠道出血和肝衰竭。 肝移植是肝衰竭晚期肝硬化的唯一治疗，且移植在具有NASH的人中越来越多地进行。例如， NASH在美国是排在丙型肝炎和酒精性肝病后的肝硬化主要原因之一。
[0038] "药学上可接受的"是指无毒且适于施用给患者、包括人患者。
[0039] "药学上可接受的盐"是指无毒且适于施用给患者的盐。非限制性实例包括碱金属 盐、碱±金属盐和各种伯锭盐、仲锭盐和叔锭盐。当式(I)化合物的醋包括阳离子部分时，例 如当所述醋包括氨基酸醋时，其盐包括各种簇酸盐、横酸盐和矿物酸盐（miner acid salts)。盐的某些非限制性实例包括钢盐、钟盐和巧盐。
[0040] "保护基团"是指众所周知的官能团，当结合至官能团时其使得所得的受保护的官 能团对于待在化合物的其它部分上进行的反应W及相应的反应条件是惰性的，且该官能团 可在去保护条件下反应再生原始官能度。保护基团被选择成与分子的剩余部分相容。"簇酸 保护基团"在苯氧基烷基簇酸的合成期间保护苯氧基烷基簇酸的簇酸官能度。簇酸保护基 团的非限制性实例包括苄基、对甲氧基苄基、对硝基苄基、締丙基、二苯甲基和立苯甲基。簇 酸保护基团的另外实例见于标准参考著作中，诸如Greene和Wilts protective Groups in Organic Synthesis，第2版，1991 John Wiley&Sons和McOmie Protective Groups in (Organic Chemist巧，1975,Plenum Press。用于保护和去保护本文公开的簇酸的方法可见 于本领域中，且特别见于Greene和Wilts，同上及其引用的文献。
[0041] "治疗"医学疾患或患者是指采取步骤W获得有益的或所需的结果，包括临床结 果。为了本发明的各方面和实施方案的目的，有益或所需的临床结果包括但不限于减少、减 轻或改善NA化D和/或NASH的一种或多种表现或不利影响，改善一种或多种临床结果，减小 疾病程度，延缓或减缓疾病进展，改善、缓解或稳定疾病状态，及本文所述的其它有益结果。 [00创优选的实施方案
[0043] 在一方面，本发明提供一种治疗患有非酒精性脂肪性肝病(NA化D)或非酒精性脂 肪性肝炎(NASH)的患者的方法，其包括向有需要的患者施用有效量的式（I)化合物：
[0044]
[0045] 或其代谢物、或者式（I)化合物或其代谢物的醋、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中m是2至5的整数且η是3至8的整数，χ?和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酷基 基团或横酷基基团，条件是χ?和X2不同时为氧原子。
[0046] 在另一方面，本发明提供一种减轻患有ΝΑ化D或ΝΑ甜的患者的肝脏炎症的方法，其 包括向有需要的患者施用有效量的式(I)化合物或其代谢物、或者式(I)化合物或其代谢物 的醋、或者其各自的药学上可接受的盐，其中式(I)化合物如上所定义。
[0047] 如本文所用，"其代谢物"是指显示与式（I)化合物基本上类似的治疗活性的代谢 物。此类代谢物的非限制性实例包括化合物，其中式(I)化合物的附接至含有-0-(CH2)nC0抽 部分的苯基的-C0C出基团被代谢为1-径乙基(-CH(OH)Me)基团。
[0048] 含有此类1-径乙基基团的代谢物在1-径乙基基团的1-位上含有不对称中屯、。相应 的对映异构体及其混合物(包括外消旋混合物)包括在如本文使用的式(I)化合物的代谢物 的范围内。
[0049] 如本文所用，"其醋"是指酪径基基团的醋和/或式（I)化合物中显示的簇酸的醋， 及式（I)化合物的代谢物的1-径乙基(脂肪族径基基团)基团的醋。酪径基基团和/或脂肪族 径基基团的醋可包括但不限于作为相应的酸的簇酸Ra-CO抽，其中Ra是C1-C6烷基、芳基、杂芳 基、C3-C12环烷基或C2-C8杂环基，其中烷基、芳基、杂芳基、环烷基或杂环基任选地被1-4个 C1-C3烷基、芳基、0)2H、氨基、烷基氨基或二烷基氨基基团取代。也考虑了其它酸，诸如单憐 酸、二憐酸或Ξ憐酸。簇酸醋可包括但不限于作为相应的醇的式Ra-OH化合物，其中Ra如上所 定义。在一个实施方案中，仅式（I)中的簇酸被醋化。在另一个实施方案中，仅式（I)中的酪 径基基团被醋化。在另一个实施方案中，Ra是C1-C4烷基。如对于本领域技术人员将显而易见 的是，此类醋用作前药，其在体内被水解W释放式(I)化合物或其盐。
[0050] 在一个优选的实施方案中，式(I)化合物是式(IA)化合物：
[0化1 ]
[0052]在另一个优选的实施方案中，式(I)和式(IA)化合物的代谢物是式(IB)化合物： [0化3]
[0054] 在一个实施方案中，患者患有NAFLD。在另一个实施方案中，患者患有NA甜。在另一 个实施方案中，所述化合物经口施用。在另一个实施方案中，所述化合物作为片剂或胶囊施 用。在另一个实施方案中，式（IA)化合物W基本上不含其它多晶型的多晶型A存在。在另一 个实施方案中，所述化合物作为液体剂型施用。在另一个实施方案中，所述化合物W分成一 份、两份或Ξ份的lOOmg/天至4000mg/天的量施用。
[0055] 不受理论限制，本文所用的化合物部分由于其抗炎活性而可有效治疗NAFLD和/或 NA甜。据信各种受体位点可被本文所用的化合物阻断。几乎没有（如果有的话）已知的炎性 疾病的抑制剂在单个分子中体现出所有W下活性位点:抑制1)白Ξ締合成、2)白Ξ締 D-4受 体、3)白Ξ締 E-4受体、4)cAMP PDE III、5)cAMP PDE IV、6)合成血栓素 A-2、7)嗜酸性细胞 迁移和8)20淋己细胞迁移。在所谓的"炎性级联反应"中相互作用的各种各样的细胞中，W 上机制W不同程度且W不同特异性地参与并协作W产生裂变样结果。通过阻断各种各样的 作用位点，考虑本文所用的化合物可有效治疗NAFLD和/或NASH。
[0056] 本文所用的化合物的功效可通过本领域技术人员众所周知的方法，如在如下文描 述的STAM小鼠模型中的方法或通过调整"Protection from liver fibrosis by a peroxisome proliferator-activated receptor5agonist"Keiko Iwaisako等，PNAS2012， 109(21化1369-E1376所述的程序测试。
[0057] 鱼垂
[005引 ??)化合物的合成和某些生物活性描述于美国专利No.4,985,585中，其通过引 用整体并入本文。例如，式(IA)化合物通过使式(II)的苯酪与式(III)化合物反应W提供式 (1C)化合物来制备：
[0062] 酸性保护基团或R基团的非限制性实例包括C1-C6烷基、苄基、二苯甲基和Ξ苯甲 基，其中苄基、二苯甲基或Ξ苯甲基基团任选地被1-6个C广C6烷基、面素基团和/或打-C6烧 氧基基团取代。对于本领域技术人员显而易见的是可使用不同于式（III)中的漠基团的离 去基团。此类其它离去基团的非限制性实例包括氯或甲苯横酸根。
[0063] 式(1C)的受保护的簇酸的去保护提供了式(IA)化合物。如基于该公开内容明显的 是，式（1C)化合物在一些实施方案中可用于根据本发明。去保护方法的非限制性实例包括 在出和催化剂(诸如Pd/C或Pt/C)下碱性水解和氨解。
[0064] 所述反应在惰性有机溶剂中进行，例如且不限于丙酬、甲基乙基酬、二乙基酬或二 甲基甲酯胺。亲核置换反应可在低于室溫的溫度（高达溶剂回流溫度）下在无机基质（诸如 碳酸钟或碳酸钢）的存在下和任选地在舰化钟的存在下进行。反应进行一段足W提供如通 过众所周知的方法(诸如薄层色谱法和iH-NMR)确定的大量产物的时间。本文所用的其它化 合物通过本文所述的W下程序和适当地取代原料、和/或通过W下技术人员众所周知的方 法后制备。还参见美国专利齡.5,290,812(通过引用^其整体并入本文）。
[0065] 将式（IA)化合物在控制的条件下再结晶W提供基本上纯的斜方晶系多晶型物，被 称为A型晶体(如90%或更多、优选至少95%的A型）。多晶型A和用于产生其的方法描述于美 国专利No. 7，060，854和No. 7，064，146中；其通过引用整体并入本文。式（I)化合物的所有多 晶型是活性的，但多晶型A是优选的。在某些条件下，该多晶型物的溶解度和生物利用率优 于其它多晶型物，并因此A型可提供改善的固体制剂。
[0066] A型晶体可通过例如在25°C至40°C下将式（ΙΑ)化合物溶解于5重量份至10重量份 的乙醇中W得到黄色至橘色溶液而获得。向乙醇溶液装入1份至10份水，并在20°C至25°C下 揽动约15分钟至60分钟，然后在5°C至10°C下再揽动1小时至4小时、优选2.0小时至3.0小时 的时间段，从而产生灰白色混悬液。向该混悬液添加5份至15份水，并将混合物在5°C至10°C 下再揽动1小时至4小时、优选1.5小时至2.0小时。将固态的白色至灰白色的产物通过真空 过滤分离，将滤饼用水洗涂并在25°C至40°C下真空干燥12小时至24小时。
[0067] 对于W对映异构体形式存在的本文所用的化合物、诸如式（I)化合物的某些代谢 物(例如式IB化合物），所述两种对映异构体可经光学解析。此类解析例如且不限于通过与 相应的簇酸化合物形成碱(诸如(s)-(-)-i-(i-糞基）乙胺）的非对映异构体盐或者通过使 用手性柱色谱法分离对映异构体进行。此类化合物的中间体(所述中间体也W对映异构体 形式存在)可类似地解析。
[006引施用和配制
[0069] 本文所用的化合物可经口或通过静脉内、肌内和皮下注射或透皮方法施用。有效 的剂量水平可广泛变化，如约lOOmg/天至4000mg/天。在一个实施方案中，每日剂量范围是 W-份、两份或Ξ份给予的250mg至2000mg。在一个实施方案中，每日剂量范围是W-份、两 份或Ξ份给予的lOOmg至500mg，如1 OOmg、200mg、300mg、400mg或500mg。在一个实施方案中， 每日剂量范围是W-份、两份或Ξ份给予的250mg至2000mg，如250mg、500mg、750mg、 1000mg、1250mg、1500mg、1750mg或2000mg。在一个实施方案中，每日剂量范围是W-份、两 份或Ξ份给予的lOOOmg至4000mg，诸如1000mg、2000mg、3000mg或4000mg。在另一个实施方 案中，所述剂量是lOOOmg，每天两次。在另外的实施方案中，适合的剂量包括lOOOmg qd、 lOOOmg bid和750mg tid。
[0070] 实际量将取决于正治疗的患者的情形。如本领域技术人员认识到的，改变活性物 质作用的许多因素将由治疗医师考虑，诸如患者的年龄、体重、性别、饮食和情况、施用时 间、施用速率和途径。对于给定的一组条件的最佳剂量可由本领域技术人员使用常见剂量 测定测试确定。
[0071] 本文所用的化合物可配制为任何药学上可接受的形式，包括液体、粉剂、霜剂、乳 剂、丸剂、含片、栓剂、混悬剂、溶液等。含有本文所用的化合物的治疗性组合物通常将与一 种或多种药学上可接受的成分一起根据已知的且确定的实践配制。通常，片剂单独地使用 诸如改性淀粉的载体或与10重量％的簇甲基纤维素(Avicel)组合的改性淀粉形成。在片剂 形成过程中，将制剂在1000磅至3000磅压力下压制。所述片剂优选展现出约1.化p/cm2至 8. Okp/cm2、优选5. Okp/cm2至7.化p/cm2的平均硬度。崩解时间从约30秒到约15分钟或20分 钟变化。
[0072] 用于经口使用的制剂可提供为硬明胶胶囊，其中将本文所用的治疗活性化合物与 惰性稀释剂(诸如碳酸巧、憐酸巧或高岭±)混合，或者提供为软明胶胶囊，其中所述化合物 与油性介质、如液体石蜡或橄揽油混合。适合的载体包括碳酸儀、硬脂酸儀、滑石、糖、乳糖、 果胶、糊精、淀粉、明胶、黄著胶、甲基纤维素、簇甲基纤维素钢、低烙点蜡、可可脂等。
[0073] 本文所用的化合物可配制为与药学上可接受的赋形剂渗混的水性混悬液，所述赋 形剂诸如助悬剂，如簇甲基纤维素钢、甲基纤维素、径丙基甲基纤维素、藻酸钢、聚乙締化咯 烧酬、黄著胶和阿拉伯树胶;分散剂或湿润剂，诸如天然存在的憐脂(如卵憐脂）、或碱性氧 化物与脂肪酸的缩合产物(如聚氧乙締硬脂酸醋)或氧化乙締与长链脂族醇的缩合产物(如 十屯亚乙基氧基嫁蜡醇）或氧化乙締与衍生自脂肪酸和己糖醇的偏醋的缩合产物（如聚氧 乙締山梨糖醇单油酸醋)或氧化乙締与衍生自脂肪酸和己糖醇酢的偏醋的缩合产物(如聚 氧乙締脱水山梨糖醇单油酸醋）。此类水性混悬液还可含有一种或多种防腐剂，如苯甲酸乙 醋或苯甲酸正丙基对径基醋、一种或多种着色剂、一种或多种调味剂及一种或多种甜味剂 (诸如甘油、山梨糖醇、薦糖、糖精或环壞酸钢或环壞酸巧）。
[0074] 适合的制剂还包括持续释放的剂型，诸如美国专利No. 4，788，055; No. 4，816，264; 齡.4,828,836;齡.4,834,965;齡.4,8：34,985;齡.4,996,047;齡.5,071，646;和齡.5，133， 974中描述的那些，其内容通过引用整体并入本文。
[0075] 其它适用于经口施用的形式包括液体形式制剂(包括乳剂、糖浆剂、馳剂、水溶液） 或意在使用之前不久转化为液体形式制剂的固体形式制剂。乳剂可制备为溶液(例如水性 丙二醇溶液），或可含有乳化剂(例如诸如卵憐脂、失水山梨糖醇单油酸醋或阿拉伯树胶）。 水溶液可通过将活性组分溶解于水中并添加适合的着色剂、调味剂、稳定剂和增稠剂来制 备。除了活性组分之外，固体形式制剂可含有着色剂、调味剂、稳定剂、缓冲剂、人工甜味剂 和天然甜味剂、分散剂、增稠剂、增溶剂等。
[0076] 本文所用的化合物可配制用于肠胃外施用（如通过注射，例如推注注射或连续输 注），并且可W单位剂量形式存在于添加了防腐剂的安飯、预装注射器、小体积输注或多剂 量容器中。所述组合物可采取运样的形式，如于油性或水性媒介物中的混悬剂、溶液或乳 剂，例如为于水性聚乙二醇中的溶液。油性或非水性载体、稀释剂、溶剂或媒介物的实例包 括丙二醇、聚乙二醇、植物油（如橄揽油）和可注射的有机醋（如油酸乙醋），且可含有配制 剂，诸如防腐剂、润湿剂、乳化剂或助悬剂、稳定剂和/或分散剂。替选地，活性成分可呈粉末 形式，通过无菌固体的无菌分离或通过从在使用前用适合的媒介物(如无菌无热原水)复溶 的溶液冷冻干燥获得。
[0077] 本文所用的化合物可配制用于作为软膏剂、霜剂或洗剂或者作为经皮贴剂局部施 用至表皮。软膏剂和霜剂可例如用水性或油性基质在添加适合的增稠剂和/或胶凝剂的情 况下配制。洗剂可用水性基质或油性基质配制，且通常还将含有一种或多种乳化剂、稳定 剂、分散剂、助悬剂、增稠剂或着色剂。适用于在口腔中局部施用的制剂包括包含调味基质 (通常是薦糖和阿拉伯树胶或黄著胶）中的活性剂的锭剂;包含惰性基质(诸如明胶和甘油 或者薦糖和阿拉伯树胶）中的活性成分的软锭剂;及包含适合的液体载体中的活性成分的 嗽口水。
[0078] 本文所用的化合物可配制作为栓剂施用。在此类制剂中，低烙点蜡(诸如脂肪酸甘 油醋或可可脂的混合物)首先烙化，并且活性组分例如通过揽拌匀质地分散。然后将烙融匀 质混合物倾倒至常规尺寸的模具中、使其冷却且固化。
[0079] 本文所用的化合物可配制用于经阴道施用。除了活性成分之外含有此类载体的阴 道栓、棉塞、霜剂、凝胶剂、糊剂、泡沫剂或喷雾剂是本领域已知适当的。
[0080] 本文所用的化合物可配制用于经鼻施用。将溶液或混悬液通过常见方法例如用滴 管、移液管或喷雾直接施加至鼻腔。所述制剂可W单一或多剂量形式提供。所述患者可经由 滴管或移液管施用适当的预定体积的溶液或混悬液。喷雾可例如通过计量雾化喷雾累的方 式施用。
[0081] 本文所用的化合物可配制用于气溶胶施用，特别是至呼吸道且包括鼻内施用。所 述化合物将通常具有例如大约5微米或更小的小粒径。此类粒径可通过本领域已知的方法 例如通过微粉化获得。活性成分W具有适合的推进剂、诸如氯氣控(CFC)(例如二氯二氣甲 烧、Ξ氯氣甲烧或二氯四氣甲烧）、二氧化碳或其它适合的气体的加压包提供。所述气溶胶 通常还可含有诸如卵憐脂的表面活性剂。药物剂量可通过量阀控制。替选地，所述活性成分 可W干粉形式，例如于适合的粉末基质(诸如乳糖、淀粉、淀粉衍生物(诸如径丙基甲基纤维 素和聚乙締基化咯烧））中所述化合物的粉末混合物提供。粉末载体将在鼻腔中形成凝胶。 所述粉末组合物可W单位剂量形式存在于例如明胶或泡罩包装的胶囊或药筒中，所述粉末 可从所述明胶或泡罩包装的胶囊或药筒通过吸入器的方式施用。
[0082] 当需要时，制剂可用适用于活性成分持续释放或控制释放施用的肠溶包衣制备。 可用于本发明目的的常见类型的控制释放制剂包含惰性忍部(诸如糖球）、用内部含有药物 的第二层包衣的第一层及控制药物从内层释放的外膜或第Ξ层。
[0083] 所述忍部优选具有水溶性或水溶胀性材料，并且可为通常用作忍部的此类材料或 制备为珠粒或小球的任何其它药学上可接受的水溶性或水溶胀性材料。所述忍部可为材料 (诸如薦糖/淀粉)的球(Suger S地eres NF)、薦糖晶体或通常由赋形剂(诸如微晶纤维素和 乳糖)组成的挤出和干燥的球。
[0084] 第一层中基本上水不溶性材料通常是％I不溶性"或％I部分不溶性"成膜聚合物 (分散或溶解于溶剂中）。作为例子可提及乙基纤维素、醋酸纤维素、醋酸下酸纤维素、聚甲 基丙締酸醋，诸如丙締酸乙醋/甲基丙締酸甲醋共聚物化iKlragit肥-30-D)和锭基甲基丙 締酸醋共聚物A型和B型化iKlragit RL30D和RS30D)、及弹性聚娃酬类。通常，增塑剂与所述 聚合物一起使用。示例性增塑剂包括:二下基癸二酸醋、丙二醇、Ξ乙基巧樣酸醋、Ξ下基巧 樣酸醋、藍麻油、乙酷化单甘油醋、Ξ乙基巧樣酸乙酷醋、Ξ下基巧樣酸乙酷醋、邻苯二甲酸 二乙醋、邻苯二甲酸二下醋、Ξ醋精、分馈的挪子油（中链甘油Ξ醋）。
[0085] 含有活性成分的第二层可由有聚合物或没有聚合物作为粘合剂的活性成分（药 物)组成。所述粘合剂当使用时通常是亲水的但可是水溶性或水不溶性的。待用于含有活性 药物的第二层中的示例性聚合物是亲水聚合物，诸如聚乙締化咯烧酬、聚烧撑二醇，诸如聚 乙二醇、明胶、聚乙締醇、淀粉及其衍生物、纤维素衍生物(诸如径丙基甲基纤维素化PMC)、 径丙基纤维素、簇甲基纤维素、甲基纤维素、乙基纤维素、径乙基纤维素、簇乙基纤维素、簇 甲基径乙基纤维素）、丙締酸聚合物、聚甲基丙締酸醋或任何其它药学上可接受的聚合物。 第二层中药物与亲水聚合物的比率通常在1:100至100:1 (w/w)的范围内。
[0086] 适用于第Ξ层或膜中用于控制药物释放的聚合物可选自任选地与增塑剂(诸如上 文提及的那些)组合的水不溶性聚合物或具有抑-依赖性溶解度的聚合物，诸如，例如乙基 纤维素、径丙基甲基纤维素邻苯二甲酸醋、醋酸纤维素邻苯二甲酸醋、醋酸纤维素偏苯Ξ酸 醋、聚甲基丙締酸醋或其混合物。
[0087] 任选地，控制释放层包含除了 W上的聚合物之外的具有不同溶解度特性的另一种 或多种物质，W调节控制释放层的渗透性并从而调节其释放速率。可连同例如乙基纤维素 用作改性剂的示例性聚合物包括:HPMC、径乙基纤维素、径丙基纤维素、甲基纤维素、簇甲基 纤维素、聚乙二醇、聚乙締化咯烧酬(PVP)、聚乙締醇、具有抑-依赖性溶解度的聚合物(诸如 醋酸纤维素邻苯二甲酸醋或锭基甲基丙締酸醋共聚物和甲基丙締酸共聚物)或其混合物。 如果需要，则诸如薦糖、乳糖和医药级表面活性剂的添加剂也可包含在控制释放层中。
[0088] 本文还提供了制剂的单位剂型。在此类形式中，所述制剂被细分为含有适当量的 活性组分(例如且不限于式(I)化合物或其醋、或者其各自的盐)的单位剂量。所述单位剂型 可为包装制剂，所述包装含有分散量的制剂，诸如于小瓶或安飯中的包装的片剂、胶囊和粉 剂。此外，单位剂型可为胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂本身，或者其可为呈包装形式的适当数量 的任何胶囊、片剂、扁囊剂或锭剂。
[0089] 其它适合的药物载体及其制剂描述于Remington:The Science and Practice of Pharma巧 1995，E.W.Ma;rtin编辑，Mack 化Wishing Company,第19版，Easton,化中。
[0090] 实施例
[0091] 实施例1:非酒精性脂肪性肝炎(NASH)的治疗
[0092] 250名患有非酒精性脂肪性肝炎的成人被随机分配W接受MN-001或MN-002(其各 自的每日剂量为500mg)或者安慰剂持续长达6个月。主要结果是按照利用脂肪变性、小叶炎 症、肝细胞鼓胀和/或纤维化的标准化评分的组合(composite)评估的非酒精性脂肪性肝炎 的组织学特性改善。根据本领技术人员众所周知的方法分析该结果。
[00W] 实施例2:非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)的治疗
[0094]对通过超声化S)诊断且通过肝活检(40名患者)确认的50名NAFLD患者进行随机双 盲安慰剂-控制的研究。将所述患者随机化W接受丽-001或MN-002(其各自的每日剂量为 500mg持续长达6个月）或者安慰剂。所有患者参与相同的行为体重减轻程序。所有患者每月 经历通过腹US进行的评估。还监测了肝酶水平、脂质特性、膜岛素水平和人体测量参数，并 且所有患者经历营养随访评估。患者还在研究结束时经历第二肝活检检查。血清丙氨酸转 氨酶水平和脂肪变性通过US测量为非限制性终点。根据本领域技术人员众所周知的方法分 析该结果。
[00巧]实施例3:MN-001在非酒精性脂肪性肝炎的STAM模型中的治疗有益效果
[0096] STAM?是通过在巧7BL/6小鼠中的化学和膳食干预组合创建的非酒精性脂肪性肝 炎(NA甜）、其症状及相关的肝病症模型。替米沙坦(telmisadan)已显示在STM小鼠中具有 抗NASH、抗纤维化和抗炎性作用，并因此在本研究中用作阳性对照。根据本研究且如下文所 述，用替米沙坦进行的治疗与媒介物组相比同报道数据一致显著减少肝重量、NAS、纤维化 面积和炎症面积，从而提供了如本文采用的STAM小鼠模型用于说明本发明所用的化合物有 用性的有用性的证据。
[0097] 使用MN-001进行的治疗与媒介物相比W剂量依赖性方式显著减少了纤维化面积， 运表明了 MN-001在本研究中的抗纤维化作用。高剂量MN-001倾向于减少肝径脯氨酸含量， 运支持了其抗纤维化性质。用高剂量MN-001进行的治疗显著降低NA化S活性评分(NAS) dNAS 的改善可归因于如小叶炎症和肝细胞鼓胀的减轻。值得注意的是，高剂量的MN-001显著降 低了鼓胀评分。因为肝细胞鼓胀来源于氧化应激-诱导的肝细胞损伤且与NASH疾病进展相 关（Fujii Η等J.Atheroscler.Thromb.2009;16:893，Rangwala F等J.化thol.2011;224: 401)，所W在不受理论限制的情况下预想到MN-001可通过抑制肝细胞损伤和鼓胀来改善 NA甜病状。
[0098] 使用低剂量的MN-001进行的治疗与媒介物相比显著减小了炎症面积，运表明了 MN-001的抗炎性作用。
[0099] 总而言之，在本研究中W各种剂量施用的MN-001显示了抗ΝΑ細、抗纤维化和抗炎 性作用中的一种或多种。运些结果和其它结果在下文讨论。
[0100] 材料和方法
[0101] 受试物
[0102] ΜΝ-001由MediciNove Inc.提供。为了制备给药溶液，将ΜΝ-001称重并溶解于 0.2%甲基纤维素（媒介物）中。替米沙坦（Micardis? )购自Boehringer Ingelheim GmbH (德国）并且溶解于纯水中。
[0103] NA甜的诱导
[0104] 在出生后2天且用高脂肪膳食化FD，57kcal%脂肪，cat#:H抑32，CLEA化pan,日 本)饲喂4周龄后通过单次皮下注射2(K)yg链脈霉素(STZ，Sigma-Al化ich，美国）溶液在50只 雄性小鼠中诱导NASH。用正常膳食饲喂且不经STZ治疗的十只雄性同窝仔畜用于正常组。
[01化]药物施用途径
[0106] 媒介物、ΜΝ-001和替米沙坦W lOmL/kg的量通过经口途径施用。
[0107] 治疗剂量
[010 引 MN-001W lOmg/kg、30mg/kg 和 lOOmg/kg 的剂量每日施用一次。替米沙坦 W lOmg/kg 的剂量每日施用一次。
[0109] 动物
[0110] C57E5L/6小鼠（怀孕 15天的雌性）从Char 1 es River Laboratories Japan (Kanagawa，日本）获得。将用于研究中的所有动物根据日本药理学会动物使用指南 (Japanese Pharmacological Society Guidelines for Animal Use)饲养并护理。
[0111] 环境
[0112] 在控制的溫度(23°C ±2°C )、湿度(45% ± 10% )、光照（12小时人造光和黑暗循环； 8:00至20:00光照)和换气条件下在SPF设施中维持动物。在实验室内维持高压(20化± 4Pa) W预防设施污染。
[011引动物管理
[0114] 将动物饲养在聚碳酸醋笼KN-600(化tsume Seisakusho,日本）中，其中每笼最多4 只小鼠。灭菌PULMAai(Material Research Center,日本）用作垫草并每周替换一次。 [011引饮食
[0116] 灭菌的固体WD自由提供，置于笼顶部上的金属盖内。从水瓶任意地提供纯水，该 水瓶配备有有橡皮塞和吸管。将水瓶每周替换一次、清洗并在高压蓋内灭菌和再使用。
[0117] 动物和笼识别
[0118] 小鼠由雕刻在耳饰上的数字来识别。将每个笼用专用识别码标记。
[0119] 全血和血浆生物化学的测量
[0120] 非空腹血糖使用LIFE C皿CK化IDIA，日本)对全血测量。对于血浆生物化学，将血 液收集于具有抗凝剂(Nov〇-Hepa;rin，Mochida陆armaceutical，日本）的聚丙締管中，并在 4°C下WlOOOXg离屯、15分钟。将上清液收集并胆藏在-80°C下直至使用。血浆ALT和AST水平 通过FUJI DRI-C肥Μ 7000(Rijifilm，日本)测量。
[0121] 肝生物化学的测量
[0122] 肝径脯氨酸含量
[0123] 为了定量肝径脯氨酸含量，将冷冻肝样品（32mg-40mg)通过碱-酸水解方法如下处 理。将肝样品用100%丙酬脱脂、在空气中干燥、在65°c下溶解于2N化0H中并在12rc下高 压灭菌20分钟。将裂解的样品（400化)在121°C下用4(Κ)化的6N HC1酸水解20分钟，并用含有 lOmg/mL活性炭的400化的4Ν化0Η中和。将AC缓冲液（2.2Μ乙酸/0.48Μ巧樣酸，400化)添加 至样品，然后离屯、W收集上清液。用从16yg/mL开始的反式-4-径基-^脯氨酸（Sigma- A1化ich)的连续稀释液建立径脯氨酸的标准曲线。将制备的样品和标准品（各为4(Κ)μυ与 400化氯胺Τ溶液(Wako Pure化emical Industries)混合并在室溫下解育25分钟。然后将 所述样品与欧立希氏溶液巧虹lich' S solution) (40化L)混合并在65°C下加热20分钟W出 现颜色。在冰上冷却样品并离屯、W去除沉淀后，在560nm下测量每个上清液的光学密度。根 据径脯氨酸标准曲线计算径脯氨酸浓度。肝样品的蛋白质浓度使用BCA蛋白质测定试剂盒 (Thermo Fisher Scientific,美国）测定并用于标准化经计算的径脯氨酸值。肝径脯氨酸 水平被表达为yg/mg蛋白质。
[0124] 组织病理学分析
[01巧]对于皿染色，从于布安氏溶液(Boilin'S solution)中预固定的左侧肝组织的石蜡 块上进行切片，并用Lillie-Mayer苏木精(Muto化re化emicals，日本）和曙红溶液(Wako 化re Qiemical Indushies)染色。NAS根据克莱纳标准计算化leiner DE.等Η邱atology, 2005:41:1313)。为了使胶原沉积可视化，布安氏固定的左侧肝切片使用天狼星红(picro- Sirius red)溶液(Waldeck，德国）染色。
[01%] 对于免疫组织化学，从包埋在组织-Tek O.C.T.化合物中并在丙酬中固定的冷冻 左侧肝组织进行切片。内源性过氧化酶活性使用0.03%出化阻断5分钟，然后用Block Ace (Dainippon Sumitomo Pharma,日本）解育10分钟。将切片在室溫下用抗-α-SMA 化pitomics，美国）或抗-F4/80抗体(BMA Biomedicals，瑞±)的200倍稀释液解育1小时。在 用二抗化RP-山羊抗-大鼠抗体，Inv i trogen，美国）解育后，使用3，3 ' -二氨基联苯胺/出化溶 液(Nichirei，日本)进行酶-底物反应。
[0127] 对于纤维化面积、炎症面积和a-SMA半定量的定量分析，在中央静脉周围使用数码 相机(DFC280;Leica，德国）W200倍放大捕获天狼星红染色的F4/80和a-SMA-免疫染色切片 的明场图像，并且5个视野/切片中的阳性面积使用Image J软件(美国国立卫生研究院）测 量。
[0128] 定量 RT-PCR
[0129] 总RNA从肝样品使用RNAiso(化kara Bio,日本)根据制造商的说明提取。lyg的RNA 使用于20化最终体积中含有4.4mM MgCl2(Roche，瑞±)、40U RNA酶抑制剂(Toyobo,日本）、 0.5mM dNTP(Promega，美国）、6.2祉Μ随机六聚体（Promega)、5 X 第一链缓冲液（Promega)、 lOmM二硫苏糖醇（Invitrogen)和200U MMLV-RTdnvitrogen)的反应混合物进行逆转录。反 应在37°C下进行1小时，然后在99°C下进行5分钟。使用实时PCR DICE和SYBR预混合液Taq (Takara Bi0)进行实时PCR。为了计算相对mRNA表达水平，将每个基因的表达标准化为参照 基因36B4(基因符号:化IpO)的表达。PCR-引物对和板布局的信息描述于表1中。
[0130] 统计检验
[0131 ]统计分析使用Gra地Pad Prism 4(Gra地化d Software,美国）上的Bonferroni多 重比较检验进行。P值<0.05被认为是统计学显著的。当单尾t-检验回到P值<0.10时，假定趋 势或倾向。结果被表达为平均值±50。
[0132] 实验设计和治疗
[0133] 研究组
[0134] 组1:正常
[0135] 向十只正常小鼠自由饲喂正常膳食而不经任何治疗直至9周龄。
[0136] 组2:媒介物
[0137] 向十只NA甜小鼠从6周龄至9周龄WlOmL/kg的量每日一次经口施用媒介物。
[013引组3:MN-001-低剂量
[0139] 向十只NA細小鼠从6周龄至9周龄WlOmg/kg的剂量每日一次经口施用补充有丽- 001的媒介物。
[0140] 组 4:MN-001-中剂量
[0141] 向十只NA細小鼠从6周龄至9周龄W30mg/kg的剂量每日一次经口施用补充有丽- 001的媒介物。
[0142] 组 5:MN-001-高剂量
[0143] 向十只NA甜小鼠从6周龄至9周龄WlOOmg/kg的剂量每日一次经口施用补充有MN- 001的媒介物。
[0144] 组6:替米沙坦
[0145] 向六只NA甜小鼠从6周龄至9周龄W1 Omg/kg的剂量每日一次经口施用补充有替米 沙坦的纯水。下表汇总了治疗方案。
[0146]
[0147] 动物监测和处死
[0148] 每日监测存活力、临床体征和行为。在治疗前记录体重。在每次施用后大约60分钟 观察小鼠的毒性、溯死和死亡的显著临床体征。将动物经由通过在酸麻醉（W a k 0 P U r e Qiemical Industries)下直接屯、脏穿刺的驱血法处死。
[0149] 结果
[01加]组织学分析
[0151] 肥染色和NAFLD活性评分
[0152] 来自媒介物组的肝切片展现出严重的微观和宏观囊泡脂肪沉积、肝细胞鼓胀和炎 性细胞浸润。与运些观察一致，与正常组相比，在媒介物组中NAS显著升高。与媒介物组相 比，替米沙坦组显示肝细胞鼓胀和炎性细胞浸润的显著改善，其中NAS显著降低。MN-001-高 剂量组显示肝细胞鼓胀的显著改善和炎性细胞浸润的适度改善。与媒介物组相比，NAS在 MN-001-高剂量组中显著降低。与媒介物组相比，MN-001-低剂量组和MN-001-中剂量组显示 肝细胞鼓胀适度减小。媒介物组与任何其它组之间的NAS不存在显著差异（正常:0.0±00、 媒介物：5.3±0.5、丽-001-低:4.7±0.5、丽-001-中：4.7±0.5、丽-001-高：3.3±0.8、替米 沙坦:2.6±0.7)。参见图1-3和下表。
[0153] NAFLD 活性评分(NAS)表
[0154]
[0巧日]NAS成分的定义
[0156]
[0157] 天狼星红染色
[0158] 与正常组相比，来自媒介物组的肝切片显示肝小叶的中屯、周围区域内的胶原沉积 增加。与正常组相比，在媒介物组中的纤维化面积（天狼星红-阳性面积）的百分比显著增 加。与媒介物组相比，在替米沙坦组和MN-001治疗组两者中纤维化面积显著减小（正常： 0.29±0.08%、媒介物：0.97±0.19%、]\〇^-001-低：0.76±0.19%、]\〇^-001-中：0.76± 0.16%、]^-001-高:0.69±0.18%、替米沙坦:0.62±0.09%)。参见图4。
[0159] F4/80免疫染色
[0160] 与正常组相比，来自媒介物组的肝切片显示肝小叶中F4/80-阳性细胞的数目和尺 寸增加。与正常组相比，在媒介物组中炎症面积(F4/80-阳性面积)的百分比显著增加。与媒 介物组相比，在替米沙坦组和MN-001-低组两者中炎症面积显著减小。媒介物组与任何其它 组之间的炎症面积没有显著差异(正常:3.26 ± 0.66 %、媒介物:6.56 ± 1.19 %、MN-001-低： 5.18±0.85%、丽-001-中：6.33±0.84%、丽-001-高：6.31±0.76%、替米沙坦：4.46± 0.88%)。参见图5。
[0161] a-SMA免疫染色
[0162] 与正常组相比，来自媒介物组的肝切片显示肝小叶中a-SMA-阳性细胞增加。与正 常组相比，在媒介物组中a-SMA-阳性面积的百分比显著增加。与媒介物组相比，在MN-001- 低和MN-001 -高组中a-SMA-阳性面积倾向于减小。媒介物组与任何其它组之间的a-SMA-阳 性面积没有显著差异（正常：0.07 ± 0.03 %、媒介物：0.15 ± 0.08 %、MN-001-低：0.10 ± 0.05%、]^-001-中：0.11±0.04%、]^-001-高:0.11±0.04%、替米沙坦:0.12±0.05%)。
[0163] 体重变化和一般情况
[0164] 在治疗期间在除了替米沙坦组之外的所有组中体重逐渐增加。在整个治疗期间， 媒介物组的平均体重低于正常组的平均体重。从第11天至第22天，替米沙坦组的平均体重 显著低于媒介物组的平均体重。在治疗期间，媒介物组与任何其它组之间的平均体重没有 显著差异。在本研究中，没有动物显示一般情况恶化。
[0165] 处死当天的体重
[0166] 与正常组相比，处死时的平均体重在媒介物组中显著较低。与媒介物组相比，替米 沙坦组显示平均体重显著减少。媒介物组与任何其它组之间的平均体重没有显著差异（正 常：25.0±0.4g、媒介物：20.5±1.9g、MN-001-低：21.1±1.3g、MN-001-中：20.3±1.0g、MN- 001-高:20.6±1.5g、替米沙坦:18.0±1.9g)。
[0167] 肝重量和肝与身体重量比率
[0168] 与正常组相比，平均肝重量在媒介物组中显著增加。与媒介物组相比，替米沙坦组 显示平均肝重量显著减少。与媒介物组相比，在MN-001-中组中肝重量倾向于减少。媒介物 组与任何其它组之间的平均肝重量没有显著差异（正常：1083±83111肖、媒介物：1555± 112mg、MN-001-低：1567±165111邑、]^-001-中：1439±118111邑、]^-001-高：1480±145111邑、替米 沙坦：1172 ±90mg)。
[0169] 与正常组相比，在媒介物组中肝与身体重量比率显著增加。与媒介物组相比，替米 沙坦组显示平均肝与身体重量比率显著降低。与媒介物组相比，在MN-001-中组和MN-001- 高组中肝与身体重量比率倾向于降低。媒介物组与MN-001-低组之间的肝与身体重量比率 没有显著差异（正常：4.3±0.3%、媒介物：7.6±0.6%、MN-001-低：7.4±0.8%、MN-001- 中：7.1±0.5%、MN-001-高:7.2±0.6%、替米沙坦:6.5±0.4%)。
[0170] 全血和生物化学
[0171] 全血葡萄糖（图3.1和表3)与正常组相比，在媒介物组中血糖水平显著升高。与媒 介物组相比，替米沙坦组显示血糖水平显著升高。媒介物组与任何其它组之间的血糖水平 没有显著差异（正常：192 ± 40mg/化、媒介物：632 ± 95mg/化、MN-001-低：614 ± 98mgAlL、MN- 001-中：609 ± 78mgAlL、MN-001-高：671 ± 124mgAlL、替米沙坦:876 ± 29mgAlL)。
[0172] 血浆 ALT
[0173] 与正常组相比，在媒介物组中血浆ALT水平倾向于升高。与媒介物组相比，在替米 沙坦组中血浆ALT水平倾向于降低。在媒介物组与任何其它组之间血浆ALT水平没有显著差 异（正常：31±10U/L、媒介物：51±2211/1、丽-001-低：71±601]/1、丽-001-中：48±231]/1、 MN-001-高：54 ± 11U/L、替米沙坦:37 ± 抓/L)。
[0174] 血浆 AST
[0175] 与正常组相比，在媒介物组中血浆AST水平倾向于降低。与媒介物组相比，在MN- 001-中组和MN-001-高组中血浆AST水平倾向于升高。媒介物组和MN-001-低组之间的血浆 AST 水平没有显著差异(正常:300± 77U/L、媒介物：193±95U/L、MN-001-低：214± 210U/L、 MN-001-中：270±11411/1、丽-001-高：385±1831]/1、替米沙坦：190±281]/1)。
[0176] 肝径脯氨酸含量
[0177] 正常组和媒介物组之间的肝径脯氨酸含量没有显著差异。与媒介物组相比，在替 米沙坦组中肝径脯氨酸含量倾向于增加。与媒介物组相比，在MN-001-高组中肝径脯氨酸含 量倾向于减少。媒介物组与任何其它组之间的肝径脯氨酸含量没有显著差异(正常:0.61± 0.12yg/mg蛋白质、媒介物:0.67 ± 0.16yg/mg蛋白质、MN-001 -低:0.78 ± 0.34yg/mg蛋白质、 MN-001-中：0.63 ± 0.12yg/mg蛋白质、MN-001-高:0.55 ± 0.14yg/mg蛋白质、替米沙坦:0.87 ±0.23yg/mg蛋白质）。参见图6。
[0178] 基因表达分析
[0179] a-SMA
[0180] 与正常组相比，在媒介物组中a-SMA mRNA表达水平倾向于上调。与媒介物组相比， 在替米沙坦组中α-SMA mRNA表达水平倾向于上调。媒介物组与任何其它组之间的α-SMA mRNA表达水平没有显著差异（正常：1.00 ± 0.44、媒介物:4.08 ± 2.56、ΜΝ-001-低：36.8 ± 111、丽-001-中：3.13±2.52、丽-001-高：5.78±3.45、替米沙坦:5.21±1.43)。
[0181] TNF-a
[0182] 与正常组相比，在媒介物组中TNF-amRNA表达水平倾向于上调。媒介物组与任何其 它组之间的TNF-amRNA表达水平没有显著差异(正常：1.00 ± 0.48、媒介物:9.88 ± 19.3、MN- 001-低：3.42±2.53、]^-001-中：7.97±9.30、]^-001-高：9.74±3.34、替米沙坦：8.35± 2.84)。
[018引 CCR2
[0184] 与正常组相比，在媒介物组中CCR2mRNA表达水平显著地上调。与媒介物组相比，在 MN-001-低组和MN-001-中组中CCR2mRNA表达水平显著下调。媒介物组与任何其它组之间的 CCR2mRNA表达水平没有显著差异(正常：1.00 ± 0.27、媒介物:6.83 ± 9.89、MN-001-低:0.13 ±0.09、丽-001-中：0.22±0.35、丽-001-高：3.86±1.43、替米沙坦:3.21±0.85)。
[0185] MCP-1
[01化]与正常组相比，在媒介物组中MCP-lmRNA表达水平显著地上调。与媒介物组相比， 在MN-001-低组中MCP-lmRNA表达水平显著下调。与媒介物组相比，在MN-001-高组和替米沙 坦组中MCP-lmRNA表达水平倾向于下调。
[0187] 媒介物组与任何其它组之间的MCP-lmRNA表达水平没有显著差异（正常：1.00 ± 0.35、媒介物：2.17±42.2、]^-001-低：1.97±2.06、]^-001-中：4.00±7.78、]^-001-高： 3.64±1.52、替米沙坦:2.69±0.95)。
[018引1型胶原
[0189] 与正常组相比，在媒介物组中1型胶原mRNA表达水平倾向于上调。1型胶原mRNA表 达水平显著。
[0190] TIMP-1
[0191] 与正常组相比，在媒介物组中TIMP-lmRNA表达水平显著上调。与媒介物组相比，在 MN-001-低组和MN-001-中组中TIMP-lmRNA表达水平显著下调。媒介物组与任何其它组之间 的TIMP-lmRNA表达水平没有显著差异(正常：1.00 ± 0.37、媒介物:9.78 ± 7.28、MN-001-低： 2.20±1.52、]^-001-中：3.64±1.66、]^-001-高：10.6±5.83、替米沙坦:7.82±2.62)。
[0192] 总之，W各种剂量施用的MN-001在本研究中显示出抗NA甜、抗纤维化和抗炎性作 用中的一种或多种作用。
【主权项】
1. 一种抑制患有脂肪变性的患者的脂肪变性的方法，包括向有需要的所述患者施用有 效量的式(I)化合物：或其代谢物、或者所述式（I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中，m是2至5的整数且η是3至8的整数，X1和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酰 基基团或磺酰基基团，条件是X 1和X2不同时为氧原子。2. 如权利要求1所述的方法，其中，所述式(I)化合物具有式(IA):3. 如权利要求1所述的方法，其中，所述式(I)化合物的代谢物是式(IB)化合物：4. 如权利要求1所述的方法，其中，所述化合物经口施用。5. 如权利要求4所述的方法，其中，所述化合物作为片剂或胶囊剂施用。6. 如权利要求2所述的方法，其中，所述化合物以基本上不含其它多晶型的斜方晶系多 晶型A存在。7. 如权利要求1所述的方法，其中，所述化合物作为液体剂型施用。8. 如权利要求1所述的方法，其中，所述化合物以IOOmg/天至4000mg/天的量分成一份、 两份或三份施用。9. 一种抑制患有小叶炎症的患者的小叶炎症的方法，包括向有需要的所述患者施用有 效量的式(I)化合物：或其代谢物、或者所述式（I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中，m是2至5的整数且η是3至8的整数，X1和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酰 基基团或磺酰基基团，条件是X 1和X2不同时为氧原子。10. 如权利要求9所述的方法，其中，所述式(I)化合物具有式(IA):11. 如权利要求9所述的方法，其中，所述式(I)化合物的代谢物是式(IB)化合物：12. 如权利要求9所述的方法，其中，所述化合物经口施用。13. 如权利要求12所述的方法，其中，所述化合物作为片剂或胶囊剂施用。14. 如权利要求10所述的方法，其中，所述化合物以基本上不含其它多晶型的斜方晶系 多晶型A存在。15. 如权利要求9所述的方法，其中，所述化合物作为液体剂型施用。16. 如权利要求9所述的方法，其中，所述化合物以IOOmg/天至4000mg/天的量分成一 份、两份或三份施用。17. -种抑制患有肝鼓胀的患者的肝鼓胀的方法，包括向有需要的所述患者施用有效 量的式(I)化合物：或其代谢物、或者所述式（I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中，m是2至5的整数且η是3至8的整数，X1和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酰 基基团或磺酰基基团，条件是X 1和X2不同时为氧原子。18. 如权利要求17所述的方法，其中，所述式(I)化合物具有式(IA):19. 如权利要求17所述的方法，其中，所述式(I)化合物的代谢物是式(IB)化合物：20. 如权利要求17所述的方法，其中，所述化合物经口施用。21. 如权利要求20所述的方法，其中，所述化合物作为片剂或胶囊剂施用。22. 如权利要求18所述的方法，其中，所述化合物以基本上不含其它多晶型的斜方晶系 多晶型A存在。23. 如权利要求17所述的方法，其中，所述化合物作为液体剂型施用。24. 如权利要求17所述的方法，其中，所述化合物以IOOmg/天至4000mg/天的量分成一 份、两份或三份施用。25. -种抑制患有肝结疤的患者的肝结疤的方法，包括向有需要的所述患者施用有效 量的式(I)化合物：或其代谢物、或者所述式（I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中，m是2至5的整数且η是3至8的整数，X1和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酰 基基团或磺酰基基团，条件是X 1和X2不同时为氧原子。26. 如权利要求25所述的方法，其中，所述式(I)化合物具有式(IA):27. 如权利要求25所述的方法，其中，所述式(I)化合物的代谢物是式(IB)化合物：28. 如权利要求25所述的方法，其中，所述化合物经口施用。29. 如权利要求28所述的方法，其中，所述化合物作为片剂或胶囊剂施用。30. 如权利要求26所述的方法，其中，所述化合物以基本上不含其它多晶型的斜方晶系 多晶型A存在。31. 如权利要求25所述的方法，其中，所述化合物作为液体剂型施用。32. 如权利要求25所述的方法，其中，所述化合物以IOOmg/天至4000mg/天的量分成一 份、两份或三份施用。33. -种降低和/或抑制患有升高的肝羟脯氨酸水平的患者的升高的肝羟脯氨酸水平 的方法，包括向有需要的所述患者施用有效量的式(I)化合物：或其代谢物、或者所述式（I)化合物或其代谢物的酯、或者其各自的药学上可接受的 盐，其中，m是2至5的整数且η是3至8的整数，X1和X2各自独立地表示硫原子、氧原子、亚硫酰 基基团或磺酰基基团，条件是X 1和X2不同时为氧原子。34. 如权利要求33所述的方法，其中，所述式(I)化合物具有式(IA):35. 如权利要求33所述的方法，其中，所述式(I)化合物的代谢物是式(IB)化合物：36. 如权利要求33所述的方法，其中，所述化合物经口施用。37. 如权利要求36所述的方法，其中，所述化合物作为片剂或胶囊剂施用。38. 如权利要求34所述的方法，其中，所述化合物以基本上不含其它多晶型的斜方晶系 多晶型A存在。39. 如权利要求33所述的方法，其中，所述化合物作为液体剂型施用。40. 如权利要求33所述的方法，其中，所述化合物以IOOmg/天至4000mg/天的量分成一 份、两份或三份施用。
【文档编号】A61K31/192GK105934243SQ201580004269
【公开日】2016年9月7日
【申请日】2015年1月7日
【发明人】松田和子
【申请人】美迪诺亚公司