水柏枝有效部位、其制备方法及其用图
【专利摘要】本发明涉及到水柏枝有效部位、其制备方法及其在治疗风湿、类风湿性关节炎的用途。经动物实验证实，该有效部位能够抑制巴豆油致小鼠耳肿胀和大鼠佐剂性或胶原性关节炎，可用于预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎的用途。
【专利说明】
水柏枝有效部位、其制备方法及其用途
技术领域
[0001] 本发明涉及从传统藏药水柏枝提取的有效部位，包括该有效部位的制备方法，含 有这种有效部位的药物组合物，以及含有这种有效部位和其药物组合物在治疗风湿、类风 湿性关节炎的药物中的用途，本发明属于医药技术领域。
【背景技术】
[0002] 类风湿关节炎(Rheumatoid Arthri ti s，RA)是一种以关节滑膜炎为特征的慢性自 身免疫疾病，常伴有炎症细胞(T细胞、中性粒细胞、巨噬细胞等)侵袭、浸润、微血管增生、关 节滑膜细胞增生、滑膜下层滑膜增厚形成绒毛状突起以及骨与软骨损伤等病理变化。这种 炎症会造成关节变形直至残废，并会因关节痛楚及磨损而失去部分的活动能力。RA的特征 是手、足小关节的多关节、对称性、侵袭性关节炎症，经常伴有关节外器官受累及血清类风 湿因子阳性，可以导致关节疼痛、僵硬、疲劳、骨伤，最终出现畸形及功能丧失 [1]ΑΑ在世界 范围内普遍存在，据统计全世界患病率约为1~2%，我国患病率约为0.5%，该病若未及时 治疗，由于软骨和骨组织的破坏，70 %的RA患者2年后可致残，严重影响健康和生活质 量[2,3]。
[0003] 目前临床上治疗RA的药物主要有三类，即留体类抗炎药、非留体类抗炎药和改善 病情抗风湿药。但留体类抗炎药长期使用可引起类肾上腺皮质功能亢进综合症、消化系统 并发症、心血管系统疾病以及骨质疏松、大关节无菌性坏死、感染等不良反应等;非留体类 抗炎药能控制RA患者的症状，但对疾病本身影响小，不影响RA的病程，不能阻止关节破坏和 器官损害进展，长期使用会带来胃肠道、肾毒性等副反应，对关节软骨也有损伤;改善病情 抗风湿药只能改善病情，缓解症状，达不到治疗的效果 [3,4]。尽管上述这些药物可抑制炎症 的发生，缓解RA的症状，但长期使用这些药物都可出现严重的不良反应。因此发现、研制和 开发更安全、更有效的治疗RA药物具有重要应用价值。
[0004] 水柏枝为常用藏药，其来源为柽柳科水柏枝属植物水柏枝M y r i c a r i a germanicaL.Desv及同属多种植物的嫩枝，广泛分布于我国西藏、青海、甘肃、内蒙古等西部 地区。藏药名"温布"，其性平，味甘咸、辛甘温，具有疏风解表、祛风通络、透疹、止咳、清热解 毒之功效 [5,6]。水柏枝作为传统藏药主要用于治疗风湿痹痛，麻疹不透，瘟病时疫，脏腑毒 热，咽喉肿痛，中毒症，黄水病，血热病等症 [7]，目前水柏枝在临床上主要用于治疗风湿，主 治风湿性关节炎、类风湿性关节炎、急慢性风湿性关节炎等[8]。同时，水柏枝也是多种复方 藏药的主要药物，如五味甘露药浴散、奇正消痛贴等。五味甘露药浴散是藏医独具特色的洗 浴制剂 [9]，现已收载于国家药品标准，该复方由水柏枝、圆柏叶、烈香杜鹃、大籽蒿、麻黄等 药味组成，具有祛风通络，发汗止痒，增强自身免疫等功效，对风湿性、类风湿性关节炎等疾 病有特殊疗效 [1(W2]。奇正消痛贴膏由独一味、水柏枝等六味藏药组成，具有活血化淤、消肿 止痛功效，其方中具有抗炎功效的主要药物为水柏枝 [13]。经系统查阅文献发现，国内外对 水柏枝化学成分研究主要集中在黄酮、没食子酸和三萜类化合物，此外还有留醇、长链脂肪 醇等类。对水柏枝属植物药理活性研究表明其提取物具有抗菌作用 [14]，抗炎作用[15，16]，镇 痛作用[17]，免疫调节[18]和细胞免疫作用[19]，抗疲劳 [2°]和抗氧化[21]等多种药理活性。尽管 有研究报道水柏枝(翁布)水提取物和醇提物对SD大鼠 FCA诱导性关节炎具有抑制活性[16]， 其总黄酮对佐剂性关节炎大鼠具有免疫调节作用[18]。以上研究报道虽然证实了水柏枝在 治疗关节炎方面的活性，但所确定的活性部位仅是粗提物，有效成分并不明确，本专利在前 期研究工作基础上，进一步确证了水柏枝在治疗关节炎方面的有效部位和有效成分，迄今 为止，未见到该方面的研究报道和专利。
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【发明内容】
[0027] 本发明要解决技术问题是，提供一类水柏枝有效部位、其制备方法、药物组合物以 及其在制备预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎药物中的应用。
[0028] 为解决上述技术问题，本发明提供了如下技术方案：
[0029] 本发明技术方案的第一方面是提供一种水柏枝有效部位的制备方法。
[0030] 本发明中的水柏枝，植物来源为柽柳科水柏枝属植物的干燥嫩枝。其有效部位的 制备方法如下：
[0031] 步骤1).提取方法:将原料药材(水柏枝)经干燥后，适当粉碎，然后用溶剂提取，提 取的溶剂包括水、醇类、丙酮或水与醇类或丙酮的混合溶剂。其中醇类溶剂优选：甲醇、乙 醇、丙醇或丁醇中的一种或几种的混合溶剂。水与醇的混合物，为40-95% (体积比）的醇溶 液;提取方法包括:渗漉、浸提或加热回流提取;提取时溶剂用量为药材重量的5-20倍，提取 可以在动态或静态下进行，为提高提取效率还可选用超声波提取;提取的温度可以从室温 到溶剂回流的温度范围内；提取可以连续进行或间歇进行，提取次数1-4次。提取液可以选 用常压或减压浓缩得浸膏或无醇的浓缩液。
[0032]步骤2).分离方法：
[0033] (1)将上述浓缩液加适量水使浸膏分散溶解，用石油醚(沸点为60-90°C )和醋酸乙 酯依次进行萃取，分别得到石油醚部位、醋酸乙酯部位和水部位。
[0034] (2)将上述水部位经大孔吸附树脂层析，分别用水，30 %乙醇，50%乙醇和95%乙 醇洗脱，各洗脱部位经冷冻干燥得到水柏枝有效部位，优选30 %乙醇洗脱得到的水柏枝有 效部位;其中，大孔吸附树脂包括D101，HPD-100，HP-20等。
[0035] 本发明技术方案的第二方面是是提供一种水柏枝有效部位，所述的有效部位按照 本发明第一方面所述的制备方法制备得到。
[0036] 进一步的，上述的水柏枝有效部位的有效成分是可水解鞣质类化合物。其中，可水 解鞣质类化合物包括如下所述的12个化合物：
[0041] 本发明技术方案的第三个方面是提供一种药物组合物，所述的药物组合物包括有 效剂量的第二方面所述的水柏枝有效部位和药学上可接受的载体。
[0042] 该药物组合物可以根据本领域公知的方法制备。可通过将水柏枝有效部位与一种 或多种药学上可以接受的固体或液体赋形剂和/或辅料结合，制成适用于人使用的任何剂 型。水柏枝有效部位在其药物组合物中的含量通常为1_95%(重量比）。
[0043] 此外，如果需要，也可以向药物制剂中添加着色剂、抗氧化剂、防腐剂、香料、矫味 剂、甜味剂或其他材料。
[0044] 为达到用药目的，增强治疗效果，本发明的药物或药物组合物可用任何公知的给 药方法给药。
[0045] 本发明化合物、药物组合物的给药剂量取决于许多因素，例如所要预防或治疗疾 病的性质和严重程度，患者或动物的年龄、性别、体重、性格及个体反应，给药途径、给药次 数、治疗目的，因此本发明的治疗剂量可以有大范围的变化。一般来讲，本发明中药学成分 的使用剂量是本领域技术人员所公知的。可根据本发明化合物组合物中最后的制剂中所含 有的实际药物数量，加以适当的调整，以达到其治疗有效量的要求，完成本发明的预防或治 疗目的。
[0046] 本发明的水柏枝有效部位或组合物可以单独使用，或与其它治疗药物或对症药物 合并使用。
[0047] 本发明技术方案的第四个方面是提供了水柏枝有效部位在制备预防和/或治疗风 湿、类风湿性关节炎的药物中的用途。
[0048]有益技术效果：
[0049]经动物实验证实，本发明的水柏枝有效部位能明显抑制巴豆油致小鼠耳肿胀和大 鼠佐剂性或胶原性关节炎引起的足肿胀。该有效部位具有预防和/或治疗风湿、类风湿性关 节炎的用途。
【附图说明】
[0050]图1宽苞水柏枝有效部位的制备流程图。
[0051 ]图2宽苞水柏枝有效部位中水解鞣质类化合物的UV光谱。
[0052]图3宽苞水柏枝有效部位中水解鞣质类化合物的高效液相色谱检视图。
[0053]图4宽苞水柏枝有效部位对佐剂关节炎大鼠足肿胀的作用(注:与模型组相比**p〈 0·01)〇
[0054] 图5胶原性关节炎大鼠体重变化情况。
【具体实施方式】
[0055] 下面的实例用来进一步说明本发明，但是这并不意味着本发明的任何限制。
[0056]水柏枝有效部位
[0057]实施例1:宽苞水柏枝有效部位的制备
[0058] 选用宽荀水柏枝(Myricaria bracteata)的干燥嫩枝15kg，用6倍量乙醇加热回流 提取3次，每次2小时，提取液减压回收乙醇并浓缩得到浸膏。加适量水使浸膏分散溶解，用 石油醚和醋酸乙酯依次进行萃取，分别得到石油醚部位、醋酸乙酯部位和水部位。水部位过 滤，滤液经处理的大孔吸附树脂HP-20分离，分别用8倍量的水，30%乙醇，50%乙醇和95% 乙醇洗脱，减压回收30%乙醇洗脱部位，经冷冻干燥即得有效部位141. lg。（见图1)
[0059] 实施例2:宽苞水柏枝有效部位的成分分析
[0060] 水柏枝有效部位中的有效成分是可水解鞣质类化合物，该类化合物由葡萄糖和没 食子酸以酯键或苷键连接而成。
[0061 ] 可水解鞣质类化合物的紫外(UV)光谱一般在205-224和260-283nm范围内显示2个 UV的特征吸收峰。（见图2)
[0062] 水柏枝有效部位中的有效成分可水解鞣质类化合物的检识方法采用，高效液相色 谱。高效液相色谱测定方法为采用二元高压梯度洗脱方式，分析色谱柱为⑶SM0SIL5C 18-PAQ Waters(4.6i.d. X250mm)型，流动相为A(含有2%醋酸的水)和B(乙腈），洗脱梯度为0_ 111^11，5%8，1-5111丨11，5%-15%8,5-4〇111丨11，15%-20%8，柱温为25°(：，检测波长为28〇11111。高效 液相色谱图见图3。
[0063] 宽苞水柏枝有效部位中的有效成分可水解鞣质类化合物对应的结构式如下：
[0069] 药理活性试验：
[0070] 实验例1:宽苞水柏枝有效部位(SBZ组)抑制巴豆油致小鼠耳肿胀的试验。
[0071] 将昆明种小鼠随机分为模型组，空白对照组，SBZ组，每组7只。各给药组均灌胃 (ig)给予相应药物1次，给药量l〇〇mg/kg，模型组给予等体积0.1 %聚山梨酯-80溶液。lh后， 各组小鼠左耳两面均匀涂抹2%巴豆油致敏，致敏4h后处死，剪下左右耳廓，用直径8mm的不 锈钢打孔器制成大小相同的耳片，分别称质量，以两耳质量差值作为肿胀度。
[0072]巴豆油致小鼠耳肿胀的试验结果为：有效部位的抑制率为65.2%，且未见动物死 亡。提示有效部位有非常显著的抗炎活性。
[0073]结论:巴豆油致小鼠耳炎是能够模拟炎症反应的模型，本发明通过实验研究发现， 宽苞水柏枝提取活性部位有显著抑制小鼠耳肿胀作用，可用于制备抗炎药物。
[0074]实验例2:宽苞水柏枝有效部位(SBZ组)对大鼠佐剂性关节炎的作用
[0075] 实验动物:Wistar大鼠（180± 10)g，SPF级，军事医学科学院实验动物中心提供，合 格证号 SCXK(军）2007-004。
[0076]受试药物：SBZ组分;地塞米松磷酸钠注射液(Dex)，国药集团容生制药有限公司 (国药准字H41020036)。
[0077] 实验方法:将Wistar大鼠随机分为模型(Model)组，Dex组和SBZ组，每组分别为10 只，10只，8只。将卡介苗置于57°C水浴灭活45min，溶解于石蜡与羊毛脂按2 :1混合的溶液 中，乳化制成卡介苗质量浓度为l〇mg/ml的乳剂。2周后，大鼠分为模型组，地塞米松(0.2mg/ kg)组，SBZ(20mg/kg)组，各组大鼠两侧足周长及体质量均无统计学差异。分组当日各组开 始皮下给予相应药物l〇ml/kg，对照组、模型组给予相同体积0.1%聚山梨酯-80溶液，连续 给药15d，每天1次。于给药第5、9、12、15天测量大鼠两后足周长，按5级评分法对全身各个关 节进行评价，即〇分，无红肿；1分，趾关节红肿；2分，趾关节和足跖肿胀;3分，踝关节以下的 足爪肿胀;4分，包括踝关节在内的全部足爪肿胀。
[0078]根据评分结果计算多发性关节炎指数(AI，AI =四肢关节评分之和）。给药末处死 动物，大鼠取脾脏、胸腺称重，计算脾脏指数、胸腺指数。每组取注射侧踝关节，10%福尔马 林溶液浸泡后以8%硝酸溶液脱钙，经脱水、浸蜡、包埋、切片等处理，HE染色，光镜下（X 100)观察。
[0079] 实验结果:见表1，表2,图4。
[0080]表1宽苞水柏枝有效部位对佐剂性关节炎大鼠胸腺指数和脾脏指数的影响
[0082] 注：与空白组相比###p〈0 · 001，与模型组相比*p〈0 · 05 · IR:抑制率
[0083]表2宽苞水柏枝有效部位对佐剂性关节炎大鼠体重的影响 [0084]
[0085] 注：与模型组相比*ρ〈0·05。
[0086]宽苞水柏枝有效部位20mg/kg在给药12d可以抑制佐剂性关节炎大鼠继发性足肿 胀，抑制率为4.53% (P〈0.05)(Dex同时间点抑制率为11.4%)，在给药15d可以抑制佐剂性 关节炎胸腺指数，但对脾脏指数没有影响。SBZ在给药期间对大鼠体重没有明显的抑制作 用。
[0087]实验例3:宽苞水柏枝有效部位(SBZ组)对大鼠胶原型关节炎的作用评价 [0088] 实验动物:Wistar大鼠，雄性，110-130g，SPF级，军事医学科学院实验动物中心提 供，合格证号SCXK(军)2007-004。实验动物按体重随机分为5组，分别为空白组（11只）、模型 组（12只）、SBZ组（12只）、和Dex组（12只）。
[0089]受试药物：SBZ组分;地塞米松磷酸钠注射液(Dex)，国药集团容生制药有限公司 (国药准字H41020036)。
[0090] 实验方法：
[0091] 1.造模配制胶原乳剂，胶原溶于0.1M的冰醋酸使成4mg/ml，4°C过夜，加入同等体 积的弗氏完全佐剂进行乳化，制备终浓度为2mg/ml的胶原乳剂。除空白组外，每只大鼠在0d 左后足跖皮内注射胶原乳剂0.1ml进行初次免疫，7d尾根部皮内注射胶原乳剂0.1ml进行加 强免疫。
[0092] 2.分组给药加强免疫后观察大鼠后肢足爪关节肿胀情况，出现明显肿胀后根据踝 关节周长随机平均分组。造模14d开始给药，连续给药20d。
[0093] 药物分组及给药：对照组（不作处理），模型组（给予溶媒），DeX(0.2mg/kg)，SBZ (200mg/kg)，各给药组均为口服给药。
[0094] 3.药物对关节炎症的治疗作用
[0095]每天观察左、右后脚爪的肿胀度，体重变化，毛色、进食及精神状态。
[0096] 致炎16(1、20(1、23(1、26(1、29(1、32(1、34(1用特制的尺测量注射侧和注射对侧踝关节周 长，并按公式计算药物抑制率：
[0098] 4.胸腺脾脏指数测定:34d处死所有动物，取胸腺、脾脏，称重，
[0099] 计算胸腺指数、脾脏指数，脏器指数计算为每10g体重相应的脏器mg数。
[0100] 5.病理检查：大鼠处死后，每组随机取4只留取病理样本。分别取下注射侧和注射 对侧大鼠踝关节，福尔马林固定，5%硝酸脱钙，石蜡包埋，切片，HE染色，光镜检查踝关节病 变情况，并进行评分。
[0101] 评分标准：
[0102] 1)关节周围软组织：
[0103] 0分:未见异常；
[0104] 1分:局部软组织轻度炎性改变:关节周围局部软组织水肿，可见少量中性粒细胞、 淋巴细胞浸润；
[0105] 2分:局部软组织炎性改变明显：关节周围软组织明显水肿，小血管充血，大量中性 粒细胞、淋巴细胞浸润，局部可见炎性肉芽组织形成；
[0106] 3分:局部软组织炎性改变显著：关节周围软组织显著水肿，小血管充血，大量中性 粒细胞、淋巴细胞浸润，局部炎性肉芽组织增生，大量肉芽肿及脓肿形成；
[0107] 2)滑膜组织
[0108] 0分:未见异常；
[0109] 1分:局部滑膜组织轻度炎性改变:软骨周围滑膜组织轻度水肿，滑膜细胞肿胀、单 层排列，周围可见少量中性粒细胞、淋巴细胞浸润；
[0110] 2分:局部滑膜组织炎性改变明显:软骨周围滑膜组织明显水肿，滑膜细胞肿胀、增 生明显、呈多层排列，滑膜组织周围散在中性粒细胞及淋巴细胞浸润；
[0111] 3分:局部滑膜组织炎性改变显著:软骨周围滑膜组织显著增生，炎性反应显著，滑 膜周围大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润，毛细血管增生，局部可见炎性肉芽肿形成；
[0112] 3)软骨
[0113] 0分:未见异常；
[0114] 1分:关节面软骨组织轻度受损，可见软骨内血管翳形成，关节面基本完整；
[0115] 2分:关节软骨破坏明显，局部关节面软骨可见缺损，缺损部位炎性纤维组织增生， 中性粒细胞、淋巴细胞浸润；
[0116] 3分:炎症累积整个关节腔，关节软骨破坏显著，关节面软骨严重缺损，缺损部位被 炎性纤维组织替代，局部大量中性粒细胞、淋巴细胞浸润；
[0117] 4)骨组织、骨髓腔
[0118] 0分:未见异常；
[0119] 1分:局部可见个别骨小梁断裂，骨髓腔融合，未见骨髓腔内出现炎症反应；
[0120] 2分:骨组织受损明显，受损处炎性纤维组织增生，大量中性粒细胞、淋巴细胞浸 润，局部骨小梁断裂明显，骨髓腔融合，骨髓腔内可见中性粒细胞浸润(或骨髓细胞增生活 跃），但未见骨髓腔内炎性组织增生；
[0121] 3分:骨组织受炎性组织侵蚀严重，炎症累及骨髓腔，局部可见骨髓腔内大量炎性 纤维组织增生，骨髓为组织为炎性纤维组织所替代；
[0122] 5)总分
[0123] 由于从关节周围软组织呈现炎性表现，病程迀延，滑膜组织、软骨、骨组织和骨髓 腔呈现炎性反应是一个病程逐渐加重的过程，在对每个样品在上述四个方面的病理表现进 行综合评定时使用加权平均数(关节周围组织计权数为1，滑膜组织计权数为2,软骨计权数 为3，骨组织及骨髓腔计权数为4)。
[0124] 实验结果:模型组较对照组明显肿胀，显示造模成功;造模后动物足爪肿胀，活动 不便，毛色、精神状态及进食无明显变化，地塞米松组动物较模型组及对照组精神活跃，SBZ 组较模型组未见明显变化；
[0125] 1)各实验组体重变化情况。
[0126] 造模后，动物较对照组随肿胀程度增加体重差加大，阳性对照药地塞米松(Dex)与 模型组相比，体重显著下降，SBZ对体重无明显影响（见图5);如图5所示，给药后，模型组与 对照组相比，体重差随肿胀程度加重增加，造模后动物体重增长减缓，除行走不便，模型组 进食、毛色、精神状态无明显变化;DEX可显著降低动物体重，且精神旺盛；SBZ给药后，动物 体重无明显变化，提示给药剂量在给药期间无明显毒副作用。
[0127] 2)药物对大鼠胶原性关节炎足爪肿胀的影响。
[0128] 造模后，阳性对照药Dex显著抑制胶原型关节炎大鼠注射侧及对侧肿胀（p〈 0.001)，SBZ组对足爪肿胀未见明显抑制作用（见表3及表4);致炎14d后，动物后肢注射侧及 对侧明显肿胀(P〈〇.〇〇1)，Dex给药2d即显示显著性差异，至给药20d对注射侧及对侧肿胀抑 制率分别为26.3%、11.4%，SBZ对足爪肿胀无明显抑制作用。
[0129] 表3宽苞水柏枝有效部位对大鼠胶原性关节炎左后肢肿胀的作用(注射侧）
[0130]
[0131] 1 ·#ρ〈0·05，##ρ〈0·01，###ρ〈0·001与对照组比较；*Ρ〈0·05，**Ρ〈0·01，***Ρ〈 0.001，与模型组比较；
[0132] 2.给药组关节肿胀度后数值为踝关节肿胀抑制率（％ )。
[0133] 表4宽苞水柏枝有效部位对大鼠胶原性关节炎右后肢肿胀的作用(注射对侧）
[0135] 1 ·#ρ〈0·05，##ρ〈0·01，###ρ〈0·001与对照组比较；*Ρ〈0·05，**Ρ〈0·01，***Ρ〈
0.001，与模型组比较；
[0136] 2.给药组关节肿胀度后数值为踝关节肿胀抑制率（％ )。
[0137] 3)药物对脾脏、胸腺指数的影响
[0138] 造模后，脾脏指数显著升高(ρ〈0.001)，Dex显著降低脾脏指数(ρ〈0.001)，SBZ组脾 脏指数稍有降低，但无显著性差异;造模后，胸腺指数稍有降低，无显著性差异，Dex显著降 低脾脏指数(P〈〇. 001)，SBZ组胸腺指数降低(p〈0.05)(见表5)。
[0139] 表5宽苞水柏枝有效部位对大鼠胶原性关节炎脾脏、胸腺指数的影响
[0141] *脏器指数计算为每10g体重相应的脏器mg数;模型组与对照组比较p值，各给药组 与模型组比较，分析统计学差异。
[0142] 脾脏和胸腺是主要的免疫器官，在炎症反应中发挥重要的调节作用。造模后脾脏 指数显著升高(p〈〇.001)，胸腺指数稍有降低，无显著性差异，提示免疫系统活化，参与炎症 反应;DEX显著降低脾脏和胸腺指数(p〈0.001)，具有明显的免疫调节活性;给予SBZ后脾脏 指数稍有降低，但无显著性差异，胸腺指数降低，其中SBZ组有显著性差异(p〈0.05)，提示药 物可能有一定的免疫调节活性，但作用不强。
[0143] 4.药物对胶原性关节炎踝关节病理评分的影响
[0144] 模型组与对照组相比，病理评分显著升高(p〈0.001)，Dex显著降低注射侧及对侧 病理评分(P〈〇. 05); SBZ显著降低注射侧病理评分(p〈0.05)，但对对侧的病理评分未见显著 性影响（见表6及表7)。
[0145] 表6药物对大鼠胶原性关节炎踝关节作用病理评分表(注射侧）
[0147] 1 · #p〈〇 · 05，##p〈0 · 01，###p〈0 · 001与对照组比较；*P〈0 · 05，**P〈0 · 01，***P〈 0.001，与模型组比较；
[0148] 2.给药组关节肿胀度后数值为与模型组相比对应的抑制率（％ )。
[0149] 表7药物对大鼠胶原性关节炎踝关节作用病理评分表(注射对侧）
[0150]
[0151] 1 · #p〈0 · 05，##p〈0 · 01，###p〈0 · 001与对照组比较；*P〈0 · 05，**P〈0 · 01，***P〈 0.001，与模型组比较；
[0152] 2.给药组关节肿胀度后数值为与模型组相比对应的抑制率（％ )。
[0153] 模型组与对照组相比，注射侧及对侧病理评分显著升高（p〈0.001)，关节周围组 织、滑膜组织增生、软骨破坏、骨组织及骨髓腔破坏均较为严重;DEX显著抑制炎症破坏，总 分抑制率分别为注射侧46.6% (p〈0.001)、对侧46.8% (p〈0.01); SBZ对注射侧软骨、骨组织 及骨髓腔破坏表现出一定的抑制作用，对对侧病理评分无明显抑制作用，总分抑制率分别 为 21·4%(ρ〈0·05)、8·8%。
[0154] 结论：以上结果显示，宽苞水柏枝有效部位对胶原性关节炎大鼠足爪肿胀抑制活 性未见显著统计学差异;对某些关键指标，如脾脏指数、胸腺指数，踝关节病理评分表现出 一定的抑制作用，显示化合物对缓解和抑制类风湿关节炎局部炎症的进展，具有潜在的调 节抑制活性，预防和治疗风湿、类风湿性关节炎中的用途。
【主权项】
1. 水柏枝有效部位的制备方法，其特征在于，包括下面步骤： (1) 将水柏枝Myricaria germanica L.Desv及同属植物的嫩枝，适当粉碎，然后用溶剂 渗漉、浸提或加热回流提取，提取液常压或减压浓缩得浸膏； (2) 此浸膏经分离方法精制、纯化得到水柏枝有效部位。2. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤（1)中所述的水柏枝及其同属植物为 宽苞水柏枝、水柏枝。3. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤（1)中所述的提取溶剂为水、醇类、丙 酮、或水与醇类或丙酮的混合溶剂;其中所述的醇类包括：甲醇、乙醇、丙醇或丁醇中的一种 或几种的混合溶剂。4. 根据权利要求1的制备方法，其特征在于，步骤(2)中所述的分离方法为萃取后层析； 其中所述的层析方法包括大孔吸附树脂层析、MCI树脂层析、葡聚糖凝胶Sephadex LH-20层 析、Toyoperal凝胶层析或反相硅胶层析、或上述层析方法的组合。5. 根据权利要求4的制备方法，其特征在于，所述的萃取所使用的溶剂为石油醚、甲苯、 乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、异丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、水中的一种或数种 混合溶剂;所述的层析所用的溶剂为石油醚、甲苯、乙醚、三氯甲烷、二氯甲烷、乙酸乙酯、正 丁醇、异丙醇、丙酮、乙醇、甲醇、水中的一种或数种混合溶剂。6. 根据权利要求5的制备方法，其特征在于，所述的混合溶剂选自水和乙醇的混合溶 剂，其中乙醇的百分比为30%-50%。7. -种水柏枝有效部位，其特征在于，所述的有效部位按照权利要求2-6中任一所述的 制备方法制备得到。8. 根据权利要求7的水柏枝有效部位，其特征在于，所述的有效部位的有效成分是可水 解鞣质类化合物。9. 一种药物组合物，其特征在于，含有有效剂量的权利要求7-8的水柏枝有效部位及药 学上可接受的载体。10. 根据权利要求9中的药物组合物，其特征在于，所述的药物组合物包括注射液、片 剂、胶囊、丸剂、口服液、贴剂、汤剂、颗粒或滴丸剂型。11. 权利要求7-8任一所述的水柏枝有效部位或权利要求9-10任一所述的药物组合物 在制备预防和/或治疗风湿、类风湿性关节炎药物中的用途。
【文档编号】A61K31/7024GK106063802SQ201610262319
【公开日】2016年11月2日
【申请日】2016年4月25日 公开号201610262319.0, CN 106063802 A, CN 106063802A, CN 201610262319, CN-A-106063802, CN106063802 A, CN106063802A, CN201610262319, CN201610262319.0
【发明人】李帅, 侯琦, 刘佳宝, 袁绍鹏, 白金叶, 张瑛
【申请人】中国医学科学院药物研究所