漆酶及其在低温使用的方法

专利名称：漆酶及其在低温使用的方法
技术领域：
本系统、组合物和方法涉及漆酶和编码此类漆酶的核酸序列。该漆酶可以在用于修饰粗斜棉布织物的颜色的改进方法中与介质联合使用。背景漆酶是含铜的酚氧化酶，已知其在存在氧的情况下是有效的氧化剂。漆酶发现于微生物、真菌和高等生物中。可以将漆酶用于多种应用，包括纸浆和纸漂白、纸浆废水的处理、脱墨、工业脱色、衣物洗涤剂中的漂白剂、口腔护理牙齿增白剂，以及作为催化剂或促进剂用于聚合和氧化反应。漆酶可以用于许多工业，包括洗涤剂工业、纸和纸浆工业、纺织品工业和食品工业中的多种应用。在一个应用中，将酚氧化酶用作为洗涤剂洗涤期间去除衣物上的污迹，例如食物污迹的辅助物。大多数漆酶在酸性pH范围内显示出pH最佳值，而在中性或碱性pH中失活。已知漆酶由多种真菌产生，包括曲霉属(Aspergillus)、脉孢菌属 (Neurospora)、柄孢壳属(Podospora)、葡萄孢属(Botrytis)、侧耳属(Pleurotus)、层孔菌属(Fornes)、射脉菌属(Phlebia)、栓菌属(Trametes)、多孔菌属(Polyporus)、 葡萄穗霉属(Stachybotrys)、丝核菌属(Rhizoctonia)、双极蠕孢属(Bipolaris)、 弯孢霉属(Curvularia)、壳单孢属(Amerosporium)、香茹属(Lentinus)、毁丝霉属 (Myceliophtora)、鬼伞属(Coprinus)、梭孢壳属(Thielavia)、下皮黑孔属(Cerrena)、链霉菌属(Sti^ptomyces)和Melanocarpus的物种。然而，仍对在多种应用中具有不同性能谱的漆酶存在需要。对于许多应用，可以通过使用介质，也称作增强剂，来改进漆酶的氧化效力。本领域已知的包括漆酶和介质的系统是漆酶-介质系统(LMS)。相同的化合物也可以用于活化或起始漆酶的作用。存在几种已知的在漆酶-介质系统中使用的介质。这些包括HBT (1-羟基苯并三唑)、ABTS[2,2'-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-亚磺酸)]、NHA(N-羟基乙酰苯胺)、 NEIAA (N-乙酰基-N-苯基羟胺)、HBTO (3-羟基1，2，3-苯并三嗪-4 (3H)-酮)和VIO (紫尿酸)。此外，已经发现了几种可以用作为介质的含有NH-OH或者N-O基团的化合物。官能团和取代基对介质效率的影响很大。即使是相同种类的化合物，取代基也可以改变漆酶对底物的特异性，从而极大地增加或降低介质的效力。此外，介质可能对一种特定的应用是有效的，但是却不适合于另一种应用。当前的介质的另一缺点是，它们在使用期间倾向于聚合。因此，需要发现用于特定应用的有效介质。此种应用之一是纺织品的漂白，其中介质不会过于昂贵或者危险也是重要的。漆酶-介质系统的其他应用给出如下。用于在低温使用漆酶的方法提供了节约能源方面的优点，例如，在纺织品加工方法中，其中可以降低用于加热加工浴的能量输入。研发在低温使用漆酶的方法用于应用例如酶促漂白将是期望的。概述描述了涉及漆酶的酶氧化系统、组合物和方法。在一个方面，提供了纺织品加工方法，包括在低于40°C，并且在足够造成纺织品的颜色修饰的条件下，将纺织品与漆酶和，任选地，介质接触一段时间。在一些实施方案中，颜色修饰选自颜色的增亮、颜色的改变、色光的改变、再沉积/回染的降低、和漂白。在一些实施方案中，温度是约20°C至低于40°C。在一些实施方案中，温度是约20°C至约35°C。在一些实施方案中，温度是约20°C至约30°C。 在一些实施方案中，温度是约201至约231。在一些实施方案中，温度是201、211、221、 23°C、24°C、25°C、26°C、27°C、28°C、29°C、30°C、31°C、32°C、33°C、34°C或 35°C。在一些实施方案中，温度是自来水的环境温度。在一些实施方案中，纺织品是靛蓝染色的粗斜棉布。在一些实施方案中，纺织品是硫磺染色的粗斜棉布。在一些实施方案中，在纺织品与漆酶和介质接触前或同时，将粗斜棉布退浆和/或石洗。在一些实施方案中，在同一浴中进行石洗和纺织品与漆酶和介质接触。在一些实施方案中，该方法进一步包括同时或顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触。在一些实施方案中，顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，并且其中在纺织品与漆酶和介质接触前进行纺织品与纤维素酶接触。在一些实施方案中，在同一浴中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，而无需在纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触之间排干浴液。在一些实施方案中，纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触在低于 40°C的温度进行。在一些实施方案中，温度是约20°C至低于40°C。在一些实施方案中，温度是约20°C至约35°C。在一些实施方案中，温度是约20°C至约30°C。在一些实施方案中， 温度是约20°C至约23°C。在一些实施方案中，温度是20°C、2rC、22°C、23°C、24°C、25°C、 洸°〇、271、281、291、301、311、321、331、341或；351。在一些实施方案中，温度是自来水的环境温度。在一些实施方案中，纤维素酶与漆酶协同作用以产生具有更大程度的纺织品颜色增亮、颜色改变、色光改变、再沉积/回染降低、和/或漂白的纺织品。在一些实施方案中， 纤维素酶与漆酶叠加作用以产生与没有包括纤维素酶的相同方法比较，具有更大程度的纺织品颜色增亮、颜色改变、色光改变、再沉积/回染降低、和/或漂白的纺织品。在一些实施方案中，漆酶是微生物的漆酶。在一些实施方案中，漆酶来自下皮黑孔属物种。在一些实施方案中，漆酶来自单色下皮黑孔菌(Cerrena unicolor)。在一些实施方案中，漆酶是来自单色下皮黑孔菌的漆酶D。在一些实施方案中，漆酶具有与选自SEQ ID NO :2、SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、 SEQ ID NO 8,SEQ ID NO 10,SEQ ID NO 12,SEQ IDNO 14,SEQ ID NO 16,SEQ ID NO :18、 SEQ ID N0:19和SEQ ID NO :20的氨基酸序列至少70%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与选自 SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :10,SEQ ID NO :12,SEQ ID NO :14,SEQ ID NO :16,SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19 禾口 SEQID NO :20的氨基酸序列至少80%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与选自 SEQ ID NO 2,SEQ ID N0:4、SEQ ID N0:6、SEQ ID N0:8、SEQ ID NO :10、SEQ IDNO :12, SEQ ID NO :14,SEQ ID NO :16、SEQ ID NO :18、SEQ ID NO :19 禾口 SEQ ID NO :20 的氨基酸序
列至少90%或者甚至至少95%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID N0:19或SEQ ID NO :20至少70%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID N0:19或SEQ ID N0:20至少80% 同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID N0:19或SEQ ID NO :20至少90%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，漆酶具有与SEQ ID N0:19或SEQ ID N0: 20至少95%同一性的氨基酸序列。在一些实施方案中，在即用型组合物中，将漆酶和介质一起提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质以固体形式提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质提供为颗粒。在具体的实施方案中，介质是syringonitrile。在另一方面，提供了编码此类漆酶的核酸序列和用于表达漆酶的载体以及宿主细胞。在方法中漆酶可以在低温使用，所述方法中能量输入的降低将是所期望的，例如纺织品加工。在一些实施方案中，包含、组成为或基本组成为描述于SEQ ID NOs :2、4、6、8、10、 12、14、16、18、19 或 20 的任一氨基酸序列或者与任一 SEQ ID NOs :2、4、6、8、12、14、16、18、 19 或 20 具有至少约 60%、65%、70%、80%、90%、91%、92%、93%、94%、95%、96%、97%、 98%、99%或甚至99. 5%同一性的氨基酸序列。在特定的实施方案中，漆酶具有与SEQ ID N0:19 或 SEQ ID NO :20 至少 70 %、80 %、90 %、91 %、92 %、93 %、94 %、95 %、96 %、97 %、 98%、99%或甚至99. 5%同一性的氨基酸序列。在仍更特定的实施方案中，漆酶具有SEQ ID N0:19或SEQ ID NO :20的氨基酸序列。优选地，此类多肽具有可以例如，用本文所述的测定法测定的漆酶酶促活性。在另一方面，提供了包含漆酶的组合物，所述漆酶含有、组成为或或基本组成为任一前述氨基酸序列。在一些实施方案中，组合物进一步包含缓冲系统以维持溶液中的组合物的约5. 5至约6.5的pH。在一些实施方案中，组合物进一步包含介质。介质可以选自，例如，乙酰丁香酮、丁香醛、丁香酰胺、甲基丁香酰胺、2-羟乙基丁香酰胺、丁香酸甲酯、二甲基丁香酰胺、丁香酸和4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈(syringonitrile)。在一个实施方案中， 介质是4-羟基-3，5-二甲氧基苄腈。在一些实施方案中，组合物是固体形式。在一些实施方案中，在即用型组合物中，将漆酶和介质一起提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质以固体形式提供。在一些实施方案中，将漆酶和介质提供为颗粒。在具体的实施方案中，介质是 syringonitrile。在一些实施方案中，将漆酶在约5至约7的pH、约20°C至约30°C的温度、约5 1 至约10 1的浴比使用约15至约60分钟。本系统、组合物和方法的这些和其他方面以及实施方案从说明书和附图中是显而易见的。附图简述

图1显示，如实施例1中所述，在不同温度用漆酶修饰石洗粗斜棉布的颜色的效^ ο图2显示，如实施例2中所述，漆酶和介质比率对修饰石洗粗斜棉布的颜色的影响。图3显示，如实施例3中所述，温度对用“即用型”漆酶组合物修饰石洗粗斜棉布的颜色的影响。图4显示，如实施例3中所述，温度对石洗粗斜棉布上漆酶的颜色修饰性能的影响。图5显示，如实施例4-6中所述，与漆酶介导的颜色修饰组合的纤维素酶处理的效果。发明详述描述了涉及漆酶的酶氧化系统、组合物和方法。该系统、组合物和方法，例如，对于低温加工纺织品以实现颜色修饰是有用的。该工艺使用比常规纺织品加工技术更少的能量，并涉及更环保的化学试剂。将对该系统、组合物和方法的多个方面和实施方案进行描述。定义除非本文另外定义，本文中所用的全部技术术语及科学术语具有与本发明所属领域的技术人员通常理解的相同意义。Singleton等人，DICTIONARY OF MICROBIOLOGY AND MOLECULAR BIOLOGY，第 2 版，John Wiley and Sons, New York(1994)和 Hale 与 Markham， THEHARPER COLLINS DICTIONARY OF BIOLOGY,Harper Perennial,NY(1991)提供了本发明中所使用的众多术语的通用字典。定义了以下的术语用于额外说明。如本文中所用，术语“酶”指催化化学反应的蛋白质。酶的催化功能构成了其“催化活性”或“活性”。酶一般根据其催化反应的类型，例如，酚类的氧化、肽键的水解、核苷酸的掺入等分类。如本文中所用，术语“底物”指酶在上面执行其催化活性以产生产物的物质(例如，化学化合物)。如本文中所用，“漆酶”是含多个铜的氧化酶(EC 1. 10. 3. 2)，其通过单电子夺取催化酚类、多酚类和苯胺的氧化，同时在4电子转移过程中将氧还原成水。如本文中所用，“变体”蛋白质包括相关和衍生蛋白质，其通过少量的氨基酸替换、 插入和/或缺失不同于亲本/参考蛋白质。在一些实施方案中，不同的氨基酸的数量是约1、 2、3、4、5、10、20、25、30、35、40、45和50个的任一个。在一些实施方案中，变体相差约1至约 10个氨基酸残基。在一些实施方案中，变体蛋白质具有与亲本/参考蛋白质至少约35%、 40%,45%,50%,55%,60%,65%,70%,75%,80%,85%,90%,91 %,92%,93%,94%, 95%、96%、97%、98%、99%或甚至99. 5%的氨基酸序列同一性。如本文中所用，术语“类似序列，，指相对于亲本/参考蛋白质内的序列，提供了相似的功能、三级结构和/或保守残基的蛋白质内的多肽序列。例如，在含有α螺旋或β折叠结构的结构区域中，在类似序列中的取代氨基酸残基保持了相同的结构特征。在一些实施方案中，相对于变体衍生的亲本蛋白质，类似序列导致变体蛋白质显示出类似或改进的功能。如本文中所用，“同源蛋白质”或“同源物”指与参考蛋白质(例如，来自不同来源的漆酶)具有类似的功能(例如，酶活性)和/或结构的蛋白质(例如，漆酶)。同源物可以来自进化上相关的或不相关的物种。在一些实施方案中，同源物具有与参考蛋白质类似的四级、三级和/或一级结构，因此，可以允许用来自同源物的类似区段或片段取代参考蛋白质中的区段或片段，与用来自非同源蛋白质的序列区段和片段的取代比较，具有参考蛋白质的结构和/或功能的降低的破坏性。如本文中所用，“野生型”、“天然的”和“天然存在的”蛋白质是那些在自然界发现的蛋白质。术语“野生型序列”指在自然界发现的或天然存在的氨基酸或核酸序列。在一些实施方案中，野生型序列是蛋白质改造项目，例如，产生变体蛋白质的起点。如本文中所用，“信号序列”指与蛋白质的氨基端部分结合的氨基酸序列，并且其有助于蛋白质的成熟形式从细胞中分泌。胞外蛋白质的成熟形式缺少该信号序列，所述信号序列在分泌过程中被剪切。如本文中所用，术语“培养”指在合适的条件下，在用于表达目标多肽的液体、半固体或固体培养基中培育微生物细胞群体。在一些实施方案中，如本领域已知，培养在容器或反应器中进行。如本文中所用，术语“衍生物”指通过添加一个或多个氨基酸到氨基端末端和羧基端之一或二者、在氨基酸序列中的一个或多个不同位点替换一个或多个氨基酸残基、在蛋白质的任一末端或两末端或者在氨基酸序列中的一个或多个位点缺失一个或多个氨基酸残基，和/或在氨基酸序列的一个或多个位点插入一个或多个氨基酸，自亲本/参考蛋白质衍生的蛋白质。通常通过修饰编码天然蛋白质的DNA序列、转化该DNA序列到合适的宿主细胞中并表达该修饰的DNA序列以形成衍生蛋白质来完成蛋白质衍生物的制备。如本文中所用，术语“表达”指过程，通过其基于基因的核酸序列产生多肽。该过程包括转录和翻译二者。如本文中所用，术语“表达载体”指含有与能在宿主中实现表达编码序列的一个或多个合适的控制序列有效连接的DNA编码序列(例如，基因序列)的DNA构建体。此类控制序列包括用于实现转录的启动子、用以控制该转录任选的操纵基因序列、编码合适的mRNA 核糖体结合位点的序列和控制转录和翻译的终止的序列。载体可以是质粒、噬菌体颗粒或者简单的潜在基因组插入片段。一旦转化到合适的宿主中，该载体可以独立于宿主基因组复制和发挥功能，或者在一些情况中，可以整合到宿主自身的基因组中。如本文中所用，术语“宿主细胞”指细胞或细胞系，其中可以将用于产生多肽的重组表达载体转染、转化或者以其他方式导入用于多肽的表达。宿主细胞包括单个宿主细胞的后代，和由于天然、随机或故意突变，与亲本细胞不一定相同(在形态或在总基因组DNA 组成)的后代。宿主细胞可以是细菌和真菌的。宿主细胞包括用表达载体在体内转染或转化的细胞。如本文中所用，术语“导入”，在将核酸序列插入到细胞中的情况下，包括“转染”、 “转化”和“转导”，并指掺入核酸序列到真核或原核细胞中，其中将该核酸序列掺入到细胞的基因组(例如，染色体、质粒、质体或线粒体DNA)中，转变成自主复制子或者瞬时表达。如本文中所用，“清洁组合物”和“清洁制剂”指可用于从待清洁的物品除去不需要的化合物的组合物，所述物品例如织物、餐具、隐形眼镜、毛发(洗发剂)、皮肤(肥皂和乳膏)、牙齿(漱口剂、牙膏)和其他固体和表面。这些术语包括选择用于特定类型的所希望的清洁组合物的任一物质/化合物以及产品的形式(例如，液体、凝胶、颗粒、或喷雾组合物)，只要该组合物与组合物中使用的酶相容。通过考虑待清洁的表面、物品或织物以及在使用期间用于清洁条件的组合物的希望形式，可以容易地进行清洁组合物材料的特定选择。该术语也指适合于清洁、漂白、消毒和/或杀菌物体和/或表面的任一组合物。该术语意图包括但不限于洗涤剂组合物(例如，液体和/或固体洗衣剂和精细织物洗涤剂；硬表面清洁制剂，例如用于玻璃、木材、陶瓷的和金属的台面和窗户的清洁制剂；地毯清洁剂； 烤箱清洁剂；织物清凉剂；织物软化剂；和纺织品和衣物去斑剂(prespotter)，以及餐具洗涤剂)。事实上，术语“清洁组合物”和“清洁制剂”包括(除非另外指明)，颗粒或粉末形式的全效或强效洗涤剂，特别是清洁洗涤剂；液体、凝胶的或者糊剂形式的全效洗涤剂，特别是所谓的强效液体(HDL)型；液体精细织物洗涤剂；手洗餐具洗涤剂或轻渍餐具洗涤剂， 特别是那些高发泡型；家用和公用的机洗餐具洗涤剂，包括多种片剂、颗粒、液体和助漂洗类型；液体清洁和消毒剂，包括抗菌型手洗洗涤类型、清洁棒、漱口剂、假牙清洁剂、汽车或地毯洗涤剂、浴室清洁剂；洗发剂和染发液；沐浴凝胶和泡沫浴和金属清洁剂；以及清洁助剂例如漂白添加剂和“染色棒”或预处理类型。如本文中所用，术语“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”用于指意图在用于清洁脏物体的洗涤介质中使用的混合物。在一些实施方案中，该术语用于指洗涤织物和/或衣物 (例如，“衣物洗涤剂”)。在备选的实施方案中，该术语指其他洗涤剂，例如那些用于清洁盘子、刀叉等的洗涤剂(例如，“餐具清洁洗涤剂”)。除酶外，“洗涤剂组合物”和“洗涤剂制剂”还包括含有表面活性剂、助洗剂、漂白剂、漂白活化剂、上蓝剂和荧光染料、结块抑制剂、 掩蔽剂、酶活化剂、抗氧化剂和助溶剂的洗涤剂。如本文中所用，短语“洗涤剂稳定性”指在洗涤剂组合物中的酶，和任选地，相关的底物和介质的稳定性。在一些实施方案中，在使用洗涤剂期间评价稳定性，而在其他实施方案中，该术语指储存期间洗涤剂组合物的稳定性。如本文中所用，术语“硬表面清洁组合物”指用于清洁硬表面例如地板、墙壁、瓷砖、不锈钢容器(发酵罐)、浴室和厨房设备等的洗涤剂组合物。该组合物可以以任一形式提供，包括但不限于固体、液体、乳剂等。如本文中所用，术语“餐具洗涤组合物”指用于清洁餐具的组合物的所有形式，包括但不限于颗粒和液体形式。如本文中所用，术语“消毒”指去除或杀死微生物，包括真菌、细菌、孢子等。如本文中所用，术语“织物清洁组合物”指用于清洁织物的洗涤剂组合物的形式， 包括但不限于颗粒、液体和棒状形式。如本文中所用，术语“多核苷酸”、“核酸”和“寡核苷酸”可以互换地用于指任一长度和任一三维结构的核苷酸的多聚形式，无论是单链的还是多链的(例如，单链的、双链的、三链的等)，其含有脱氧核糖核苷酸、核糖核苷酸和/或脱氧核糖核苷酸或者核糖核苷酸类似物或修饰形式，包括修饰的核苷酸或碱基或者它们的类似物。由于遗传密码是简并的，一种以上的密码子可以用于编码一种特定的氨基酸。可以使用任一类型的修饰的核苷酸或核苷酸类似物，包括增加核酸酶抗性的修饰(例如，脱氧、2' -0-甲基、硫代磷酸酯等)，只要该多核苷酸在使用的条件下保留了需要的功能性。对检测或捕获而言，也可以掺入标记，例如，放射性或非放射性标记或者锚定物，例如，生物素。术语多核苷酸也包括肽核酸(PNA)。多核苷酸可以是天然存在的或者非天然存在的。可以通过非核苷酸组分中断核苷酸的序列。可以用备选的连接基团取代一个或多个磷酸二酯键。例如，可以用P(O)S(“硫代酯(thioate)”)、P(S)S( “二硫代酯(dithioate) ”)、(0)NR2( “酰胺酯(amidate)"), P (0) R、P (0) OR'、⑶或CH2 ( “ formacetal，，)取代磷酸酯，其中每一 R或R ‘独立地是H或者取代的或非取代的烷基(1-20C)，其任选地含有醚(-0-)键、芳基、烯基、环烷基、环烯基或芳烷基。在多核苷酸中的并非所有键都需要是相同的。多核苷酸可以是线性的或者环形的或者包含线性和环形部分的组合。如本文中所用，术语“多肽”、“蛋白质”和“肽”指由氨基酸(即，氨基酸残基)组成的组合物。使用用于氨基酸残基的常规单字母或三字母密码。多肽可以是线性的或分支的，可以包含修饰的氨基酸，并可以被非氨基酸中断。该术语也包括已经天然修饰或者通过干预修饰的氨基酸多聚体；例如，二硫键形成、糖基化、脂质化、乙酰化、磷酸化或任一其他操作或修饰，例如与标记组分缀合。该定义内也包括，例如，含有一个或多个氨基酸类似物 (包括，例如，非天然氨基酸等)，以及本领域已知的其他修饰的多肽。如本文中所用，术语“引物”指寡核苷酸，无论是天然存在的，例如，如在纯化的限制片段中天然存在的，还是合成产生的，其在合适的温度和PH，在核苷酸和聚合酶存在的情况下，当与互补核酸温育时，能作为核酸合成的起始点。引物优选地是单链，但是可以备选地是双链。如果是双链，那么在将引物用于制备延伸产物前，首先应处理引物以使其链分开。优选地，引物是寡脱氧核糖核苷酸。引物的确切长度应取决于许多因素，包括温度、引物的来源和使用的方法。如本文中所用，术语“回收的”、“分离的”、“纯化的，，和“分开的，，指从与其天然相
关的或者作为异源表达的结果相关的至少一种组分中除去的物质(例如，蛋白质、核酸或细胞)。如本文中所用，术语“纺织品”指纤维、纱、织物、衣物和非针织材料。该术语包括天然，以及合成的(例如，制造的)材料，以及天然和合成的混合物制造的纺织品。术语“纺织品”指未加工的和加工的纤维、纱、机织或编织织物、非机织物和衣物。在一些事实方案中， 纺织品含有纤维素。如本文中所用，短语“需要加工的纺织品”指需要退浆、洗刷、漂白和/或生物抛光以产生需要的效果的纺织品。如本文中所用，短语“需要颜色修饰的纺织品，，指就颜色而言需要改变的纺织品。 这些纺织品可能已经或者可能还没有进行其他处理。类似地，这些纺织品可能需要或者可能不需要随后的处理。如本文中所用，术语“织物”指纤维和/或纱的生产组装，所述纤维和/或纱具有与其厚度和足够的内聚力有关的大表面面积以产生对组装有用的机械强度。如本文中所用，术语“颜色修饰”指与统称为纺织品材料的纤维、纱、织物、衣物或非织造材料相关的颜色的色度、饱和度、强度、亮度和/或色调的改变。不被理论所限制，建议通过修饰与纺织品材料相关的生色团产生颜色修饰，从而改变其外观。生色团可以与用于生产纺织品的材料天然接合(例如，棉的白色)或者与特定的整理，例如染色或印刷相关。颜色修饰包括化学修饰生色团，以及化学修饰与生色团连接的材料。颜色修饰的实例包括褪色、漂白和改变色调。对靛蓝染色的粗斜纹布的特定的颜色修饰是褪色成“老式外观”，其比新近染色的粗斜纹布具有更少强烈的蓝色/紫色色调和更柔和的灰色外观。如本文中所用，术语“漂白”指处理纺织品材料例如纤维、纱、织物、衣物或非织造材料以产生更浅的颜色的方法。该术语包括，例如，在纺织品加工应用的情况下，产生更亮和/或更白的纺织品，以及例如，在清洁应用的情况下，减轻污迹的颜色。如本文中所用，术语“浆液”和“上浆”指在纺织品工业中使用的化合物，以通过增加纱的耐磨性和强度改进织造性能。浆液通常由淀粉或淀粉样化合物制备。如本文中所用，术语“退浆”和“退浆”指通常在应用特定的整理剂、染料或漂白剂前，从纺织品中消除/去除浆液(一般是淀粉)的工艺。如本文中所用，术语“退浆酶”指用于去除浆液的酶。示例性酶是淀粉酶、纤维素酶和甘露聚糖酶。如本文中所用，术语“ ％同一性”指编码如本文中所述的漆酶的核酸序列与另一核酸序列之间的核酸序列同一性的水平，或者如本文所述的漆酶与另一氨基酸序列之间的氨基酸序列同一性的水平。可以使用常规的序列比对程序进行比对。核酸和氨基酸序列同一性的示例性水平包括但不限于，与给定序列，例如，如本文中所述的编码漆酶的序列或漆酶的氨基酸序列至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、 至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%或甚至至少99%、或者更高的序列同一性。可以用于鉴定两序列之间的同一性的示例性电脑程序包括但不限于，在互联网 www. ncbi. nlm. nih. gov/BLAST 上公共可得到的 BLAST 程序套件，例如，BLASTN、BLASTX 和 TBLASTX、BLASTP 和 TBLASTN。也参见，Altschul，等人，1990 和 ltschul，等人，1997。当将给定的核酸序列相对于GenBank DNA序列和其他公共数据库中的核酸序列进行评价时，一般使用BLASTN程序实施序列搜索。对BLASTX程序优选由于搜索针对在 GenBank蛋白质序列和其他公共数据库中氨基酸序列已经在所有读框翻译的核酸序列。 BLASTN和BLASTX 二者都使用11. 0的开放空位罚分和1. 0的延伸空位罚分的默认参数，并使用BL0SUM-62矩阵运行(参见，例如，Altschul，等人，1997)。为了确定两个或更多序列之间的“％同一性”，可以使用，例如，用包括10.0 的开放空位罚分和0.1的延伸空位罚分的默认参数和BLOSUM 30相似性矩阵运行的 6. 5MacVector版本6. 5的CLUSTAL-W程序进行选定序列的比对。如本文中所用，术语“化学介质”和“介质”可以互换地用于指用作为对显示出氧化酶活性的酶(例如，漆酶)与第二底物或电子供体之间的穿梭电子的氧化还原介质的化学化合物。此类化学介质在本领域也已知为“增强剂”和“促进剂”。如本文中所用，术语“排干”或“滴下”就织物材料存在的浴而言，指完全或部分排放/排空浴中存在的溶剂和试剂。排干浴一般在工艺阶段之间进行，以使在一个加工步骤中存在的溶剂和试剂不会干扰随后的加工工步骤。排干可以伴随一个或多个漂洗步骤以进一步去除此类溶剂和试剂。
如本文中所用，术语“第二底物”和“电子供体”可以互换地用于指染料、颜料 (例如，靛蓝)、生色团(例如，多酚类、花色素苷或类胡萝卜素)或其他第二底物，电子可以通过显示出氧化酶活性的酶在所述底物中来回穿梭。除非另外说明，以下简称/首字母缩写词具有以下含义
EC酶学委员会EDTA乙二胺四乙酸kDa千道尔顿MW分子量w/v重量/体积w/w重量/重量ν/ν体积/体积Wt %重量百分比°C摄氏度H2O 水dH20或DI去离子水ClIH2OMilli-Q 过滤去离子水g 或 gm 克μ g 微克mg 毫克kg 千克μ L 禾口 μ 1 微升mL 禾口 ml 毫升mm 毫米μ m 微米M 摩尔mM毫摩尔μ M微摩尔U 单位sec 禾口"秒min 禾口'分钟hr/J、时eq.当量N正常的RTU即用型U 单位owg 按商品的重量(on weight of goods)CIE 国际照明委员会(International Commission on Illumination)数字范围包括定义范围的数字。单数冠词“一个”、“一”、“这个”等，除非上下文清楚指明，包括其复数指代。除非另外说明，多肽以氨基端到羧基端的方向从左向右书写，并且多核苷酸以5'至3'的方向书写。应当理解，描述的具体方法、方案和试剂并不意图限制，因为可以在实施或测试本发明的组合物和方法中使用等同的方法和材料。尽管为了方便读者将说明书分成了几个部分，但是不应将在每部分的标题解释为限制并且一个部分中的描述可应用于另一部分。所有在此引用的出版物明确地引入作为参考。
漆酶和漆酶相关的酶酶氧化系统、组合物和方法包括一种或多种漆酶或者漆酶相关的酶，在本文中总体上指“漆酶”或“漆酶酶类”。根据国际生物化学与分子生物学联盟(IUBMB)的命名委员会，此类漆酶包括由EC 1. 10. 3. 2所涵盖的任一漆酶。来自微生物和植物来源的漆酶是本领域已知的。微生物漆酶可以来自细菌或真菌(包括丝状真菌和酵母)。合适的实例包括衍生自或者可衍生自曲霉属、脉孢菌属(例如，粗糙脉孢菌(N.crassa))、 柄孢壳属、葡萄孢属、金钱菌属(Collybia)、下皮黑孔属(Cerrena)(例如，单色下皮黑孔菌(C.unicolor))、葡萄穗霉属、革耳属(Panus)(例如，野生革耳(P. rudis))、梭孢壳属(Thielavia)、层孔菌属 Glomes)、香茹属(Lentinus)、侧耳属(Pleurotus)、栓菌属 (Trametes)(例如，T. villosahe、杂色栓菌(T. versicolor))、丝核菌属(例如，立枯丝核菌(R. solani))、鬼伞属(例如，褶纹鬼伞(C. plicatilis)和灰盖鬼伞(C. cinereus))、 小脆柄菇属(Psatyrella)、毁丝霉属(例如，嗜热毁丝霉(M. thermophila))、柱顶孢属(khytalidium)、射脉菌属(例如，射脉菌(P. radita) (W0 92/01046))或革盖菌属 (Coriolus)(例如，毛革盖菌(C. hirsutus) (JP 2238885))、绵皮孔菌属(Spongipellis)、 多孑L菌属、虫拟赌菌(Ceriporiopsis subvermispora)、粗皮灵芝(Ganoderma tsunodae)禾口木霉属(Trichoderma)菌株。漆酶可以通过培养用包含编码漆酶的核苷酸序列的重组DNA载体转化的宿主细胞产生。该DNA载体可以进一步包含允许漆酶在培养基中表达，并任选地允许漆酶从培养物中回收的核苷酸序列。可以将含有编码漆酶的多核苷酸序列的表达载体转化到合适的宿主细胞中。宿主细胞可以是真菌细胞，例如丝状真菌细胞，所述丝状真菌细胞的实例包括但不限于木霉属 (Trichoderma)(例如，里氏木霉(T. reesei)(以前分类为T. Iongibrachiatum并且目前也称为红褐肉座菌(Hypocreajecorina))、绿色木霉(T. viride)、康宁木霉(T. koningii)、哈茨木霉(T. harzianum))、曲霉属(例如，黑曲霉(A. niger)、构巢曲霉(A. nidulans)、米曲霉 (A. oryzae)和泡盛曲霉(A. awamori))、青霉属(Penicillium)、腐质霉属(Humicola)(例如，特异腐质霉(H. insolens)和灰腐质霉(H. grisea))、镰孢属(Fusarium)(例如，禾赤镰抱(Fusarium graminum)禾口腹状键抱(Fusarium venenatum))、脉抱菌属(Neurospora) > 1 座菌属(Hypocrea)或毛霉属(Mucor)。表达漆酶的宿主细胞也可以来自下皮黑孔属(例如，单色下皮黑孔菌)。可以通过涉及原生质体形成和原生质体的转化的方法转化真菌细胞，然后使用本领域已知的技术再生细胞壁。备选地，宿主生物可以来自细菌属物种，例如芽孢杆菌属(Bacillus)[例如，枯草芽孢杆菌(B. subtilis)、地衣芽孢杆菌(B. Iicheniformis)、迟缓芽孢杆菌(B. Ientus)、 嗜热脂肪芽孢杆菌(B. stearothermophilus)(现在是嗜热脂肪土芽孢杆菌(GecAacillus stearothermophilus))禾口短芽孢杆菌(B. brevis)]、假单胞菌属(Pseudomonas)、链霉菌属(Str印tomyces)(例如，天蓝色链霉菌(S. coelicolor)、浅青紫链霉菌(Streptomyces Iividans))或大肠杆菌。细菌细胞的转化可以通过常规方法，例如，如在Maniatis，T等人， "Molecular Cloning :A Laboratory Manual, "Cold Spring Harbor, 1982 中所述的方法进行。也可以通过标准方法实施合适DNA序列的筛选和载体的构建(参见上文)。用于培养转化的宿主细胞的培养基可以是任意适合于培育宿主细胞的常规培养基。在一些实施方案中，将表达的酶分泌到培养基中并可以通过熟知的方法将其回收。例如，如美国专利申请公开号2008/0196173中所述，可以从培养基中回收漆酶。在一些实施方案中，将酶表达在细胞内并在破坏细胞膜后回收。在具体的实施方案中，表达宿主可以是在CBHl启动子和终止子控制下，具有漆酶编码区的里氏木霉(Trichoderma reesei)(参见，例如美国专利申请号5，861，271)。如在美国专利申请号7，413，887中公开，表达载体可以是，例如，pTrex3g。在一些实施方案中， 如美国专利申请公开号2008/0196173或2009/0221030中所述表达漆酶。以下漆酶基因和漆酶描述于美国公开号2008/0196173 A.来自CBS115. 075菌株的下皮黑孔属漆酶Al基因多核苷酸序列(SEQ ID NO 1)
0124]ATGAGCTCAAAGCTACTTGCTCTTATCACTGTCGCTCTCGTCTTGCCACT500125]AGGCACCGACGCCGGCATCGGTCCTGTTACCGACTTGCGCATCACCAACC1000126]AGGATATCGCTCCAGATGGCTTCACCCGACCAGCGGTACTAGCTGGGGGC1500127]ACATTCCCTGGAGCACTTATTACCGGTCAGAAGGTATGGGAGATCAACTT2000128]GGTTGAATAGAGAAATAAAAGTGACAACAAATCCTTATAGGGAGACAGCT2500129]TCCAAATCAATGTCATCGACGAGCTTACCGATGCCAGCATGTTGACCCAG3000130]ACATCCATTGTGAGTATAATTTAGGTCCGCTCTTCTGGCTATCCTTTCTA3500131]ACTCTTACCGTCTAGCATTGGCACGGCTTCTTTCAGAAGGGATCTGCGTG4000132]GGCCGATGGTCCTGCCTTCGTTACTCAATGCCCTATCGTCACCGGAAATT4500133]CCTTCCTGTACGACTTTGATGTTCCCGACCAACCTGGTACTTTCTGGTAC5000134]CATAGTCACTTGTCTACTCAATATTGCGATGGTCTTCGTGGCCCGTTCGT5500135]TGTATACGATCCAAAGGATCCTAATAAACGGTTGTACGACATTGACAATG6000136]GTATGTGCATCATCATAGAGATATAATTCATGCAGCTACTGACCGTGACT6500137]GATGCTGCCAGATCATACGGTTATTACCCTGGCAGACTGGTACCACGTTC7000138]TCGCAAGAACTGTTGTCGGAGTCGCGTAAGTACAGTCTCACTTATAGTGG7500139]TCTTCTTACTCATTTTGACATAGGACACCCGACGCAACCTTGATCAACGG8000140]TTTGGGCCGTTCTCCAGACGGGCCAGCAGATGCTGAGTTGGCTGTCATCA8500141]ACGTTAAACGCGGCAAACGGTATGTTATTGAACTCCCGATTTCTCCATAC9000142]ACAGTGAAATGACTGTCTGGTCTAGTTATCGATTTCGTCTGGTCTCCATC9500143]TCATGTGACCCTAATTACATCTTTTCTATCGACAACCATTCTATGACTGT10000144]CATCGAAGTCGATGGTGTCAACACCCAATCCCTGACCGTCGATTCTATTC10500145]AAATCTTCGCAGGCCAACGATACTCGTTCGTCGTAAGTCTCTTTGCACGA11000146]TTACTGCTTCTTTGTCCATTCTCTGACCTGTTTAAACAGCTCCATGCCAA11500147]CCGTCCTGAAAACAACTATTGGATCAGGGCCAAACCTAATATCGGTACGG12000148]ATACTACCACAGACAACGGCATGAACTCTGCCATTCTGCGATACAACGGC12500149]GCACCTGTTGCGGAACCGCAAACTGTTCAATCTCCCAGTCTCACCCCTTT13000150]GCTCGAACAGAACCTTCGCCCTCTCGTGTACACTCCTGTGGTATGTTTCA13500151]AAGCGTTGTAATTTGATTGTGGTCATTCTAACGTTACTGCGTTTGCATAG14000152]CCTGGAAACCCTACGCCTGGCGGCGCCGATATTGTCCATACTCTTGACTT1450
GAGTTTTGTGCGGAGTCAACATTCGTAAAGATAAGAGTGTTTCTAATTTC1500
TTCAATAATAGGATGCTGGTCGCTTCAGTATCAACGGTGCCTCGTTCCTT1550
GATCCTACCGTCCCCGTTCTCCTGCAAATTCTCAGCGGCACGCAGAATGC1600
ACAAGATCTACTCCCTCCTGGAAGTGTGATTCCTCTCGAATTAGGCAAGG1650
TCGTCGAATTAGTCATACCTGCAGGTGTCGTCGGTGGACCTCATCCGTTC1700
CATCTCCATGGGGTACGTAACCCGAACTTATAACAGTCTTGGACTTACCC1750
GCTGACAAGTGCATAGCATAACTTCTGGGTCGTGCGAAGTGCCGGAACCG1800
ACCAGTACAACTTTAACGATGCCATTCTCCGAGACGTCGTCAGTATAGGA1850
GGAACCGGGGATCAAGTCACCATTCGTTTCGTGGTATGTTTCATTCTTGT1900
GGATGTATGTGCTCTAGGATACTAACCGGCTTGCGCGTATAGACCGATAA1950
CCCCGGACCGTGGTTCCTCCATTGCCATATCGACTGGCACTTGGAAGCGG2000
GTCTCGCTATCGTATTTGCAGAGGGAATTGAAAATACTGCTGCGTCTAAT2050
TTAACCCCCCGTACGCGGTTTCCCTCACATCCTGGAGCTAAGCAGCTTAC2100
TAACATACATTTGCAGAGGCTTGGGATGAGCTTTGCCCGAAGTATAACGC2150
GCTCAGCGCACAAAAGAAGGTTGCATCTAAGAAAGGCACTGCCATCTAAT2200
TTTTGTAACAAACAAGGAGGGTCTCTTGTACTTTTATTGGGATTTCTTTC2250
TTGGGGTTTATTGTTAAACTTGACTCTACTATGTTTGGAAGACGAAAGGG2300
GCTCGCGCATTTATATACTATCTCTCTTGGCATCACCTGCAGCTCAATCC2350
TTCAACCACCTAA2363
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 2)
MSSKLLALITVALVLPLGTDAGIGPVTDLRITNQDIAPDGFTRPAVLAGG50
TFPGALITGQKGDSFQINVIDELTDASMLT QTSIHWHGFFQKGSAffADGP100
AFVTQCPIVTGNSFLYDFDVPDQPGTFffYHSHLSTQYCDGLRGPFVVYDP150
KDPNKRLYDIDNDHTVITLADffYHVLARTVVGVATPDATLINGLGRSPDG200
PADAELAVINVKRGKRYRFRLVSISCDPNYIFSIDNHSMTVIEVDGVNTQ250
SLTVDSIQIFAGQRYSFVLHANRPENNYffIRAKPNIGTDTTTDSGMNSAI300
LRYNGAPVAEPQTVQSPSLTPLLEQNLRPLVYTPVPGNPTPGGADIVHTL350
DLSFDAGRFSINGASFLDPTVPVLLQILSGTQNAQDLLPPGSVIPLELGK400
VVELVIPAGVVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGTDQYNFNDAILRDVVSIGG450
TCDQVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGLAIVFAEGIENTAASNLTPQ500
AffDELCPKYNALSAQKKLNPSTT523
B.来自CBS154. 29菌株的下皮黑孔属漆酶A2基因
多核苷酸序列(SEQ ID NO 3)
ATGAGCTCAAAGCTACTTGCTCTTATTACTGTCGCTCTCGTCTTGCCACT50
AGGCACTGACGCCGGCATCGGTCCTGTTACCGACTTGCGCATCACCAACC100
AGGATATCGCTCCAGATGGCTTCACCCGACCAGCTGTACTGGCTGGGGGC150
ACATTCCCCGGAGCACTGATTACCGGTCAGAAGGTATGGGAGATCGATTT200
CGTTGAATAGAGAAATACAACTGAAAACAAATTCTTATAGGGAGACAGCT250
TCCAAATCAATGTCATCGACGAGCTTACCGATGCCAGCATGTTGACCCAG300
ACATCCATTGTGAGTATAATATGGGTCCGCTCTTCTAGCTATCCTTTCTA350
ACTCTTACCCTCTAGCATTGGCACGGCTTCTTTCAGAAGGGATCTGCGTG400
GGCCGATGGTCCTGCCTTCGTTACTCAATGTCCTATCGTCACCGGAAATT450
CCTTCCTGTACGACTTTGATGTCCCCGACCAACCTGGTACTTTCTGGTAC500
CATAGTCACTTGTCTACTCAATATTGCGATGGTCTTCGGGGCCCGTTCGT550
TGTATACGATCCAAAGGATCCTAATAAACGGTTGTACGACATTGACAATG600
GTATGTGCATCATCATAAAAATATAATTCATGCAGCTACTGACCGCGACT650
GATGCTGCCAGATCATACGGTTATTACCCTGGCAGACTGGTACCACGTTC700
TCGCACGAACTGTTGTCGGAGTCGCGTAAGTACAGTCTGACTTATAGTGG750
TCTTCTTACTCATTTTGACATAGGACACCCGACGCAACCTTGATCAACGG800
TTTGGGCCGTTCTCCAGACGGGCCAGCAGATGCTGAGTTGGCTGTCATCA850
ACGTTAAACGCGGCAAACGGTATGTCATTGAACTCCCGATTTCTCCATTC900
ACATTGAAATGACTGTCTGGTCTAGTTATCGATTCCGTCTGGTCTCCATC950
TCATGTGACCCTAATTACATCTTTTCTATCGACAACCATTCTATGACTGT1000
CATCGAAGTCGATGGTGTCAACACCCAATCCCTGACCGTCGATTCTATCC1050
AAATCTTCGCAGGCCAACGCTACTCGTTCGTCGTAAGTCTCTTTGAATGG1100
TTGGTGCTTTTTCTGTCCATTCTCTAACCTGTTTATACAGCTCCATGCCA1150
ACCGTCCTGAAAACAACTATTGGATCAGGGCCAAACCTAATATCGGTACG1200
GATACTACCACAGACAACGGCATGAACTCTGCCATTCTGCGATACAACGG1250
CGCACCTGTTGCGGAACCGCAAACTGTTCAATCTCCCAGTCTCACCCCTT1300
TGCTCGAACAGAACCTTCGCCCTCTCGTGTACACTCCTGTGGTATGTTTC1350
AAAGCGTTGTAATTTGATTGTGGTCATTCTAACGTTACTGCCTTTGCACA1400
GCCTGGAAATCCTACGCCTGGCGGGGCCGATATTGTCCATACTCTTGACT1450
TGAGTTTTGTGCGGAGTCAACATTCGTAAAGATAAGAGTGTTTCTAATTT1500
CTTCAATAATAGGATGCTGGTCGCTTCAGTATCAACGGTGCCTCGTTCCT1550
TGATCCTACCGTCCCTGTTCTCCTGCAAATTCTCAGCGGCACGCAGAATG1600
CACAAGATCTACTCCCTCCTGGAAGTGTGATTCCTCTCGAATTAGGCAAG1650
GTCGTCGAATTAGTCATACCTGCAGGTGTTGTCGGTGGACCTCATCCGTT1700
CCATCTCCATGGGGTACGTAACCCGAACTTATAACAGTCTTGGACTTACC1750
CGCTGACAAGTGTATAGCATAACTTCTGGGTCGTGCGAAGTGCCGGAACC1800
GACCAGTACAACTTTAACGATGCCATTCTCCGAGACGTCGTCAGTATAGG1850
AGGAACCGAGGATCAAGTCACCATTCGATTCGTGGTATATACTTCATTCT1900
TGTGGATGTATGTGCTCTAGGATACTAACTGGCTTGCGCGTATAGACCGA1950
TAACCCCGGACCGTGGTTCCTCCATTGCCATATCGACTGGCACTTGGAAG2000
CGGGTCTCGCTATCGTATTTGCAGAGGGAATTGAAAATACTGCTGCGTCT2050
AATCCAACCCCCCGTATGCGGTTTCCCACACATTCTGAATCTAAGCAGCT2100
TACTAATATACATTTGCAGAGGCTTGGGATGAGCTTTGCCCGAAGTATAA2150
CGCGCTCAACGCACAAAAGAAGGTTGCATCTAAGAAAGGCACTGCCATCT2200
AATCCTTGTAACAAACAAGGAGGGTCTCTTGTACTTTTATTGGGATTTAT2250
TTCTTGGGGTTTATTGTTCAACTTGATTCTACTATGTTTGGAAGTAGCGA2300
TTACGAAAGGGGCTTGCGCATTTATATACCATCTTTCTTGGCACCACCTG2350
CAGCTCAATCCTTCAACCACCTAA2374
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 4)
MSSKLLALITVALVLPLGTDAGIGPVTDLRITNQDIAPDGFTRPAVLAGG50
TFPGALITGQKGDSFQINVIDELTDASMLT QTSIHWHGFFQKGSAffADGP100
AFVTQCPIVTGNSFLYDFDVPDQPGTFffYHSHLSTQYCDGLRGPFVVYDP150
KDPNKRLYDIDNDHTVITLADffYHVLARTVVGVATPDATLINGLGRSPDG200
PADAELAVINVKRGKRYRFRLVSISCDPNYIFSIDNHSMTVIEVDGVNTQ250
SLTVDSIQIFAGQRYSFVLHANRPENNYffIRAKPNIGTDTTTDNGMNSAI300
LRYNGAPVAEPQTVQSPSLTPLLEQNLRPLVYTPVPGNPTPGGADIVHTL350
DLSFDAGRFSINGASFLDPTVPVLLQILSGTQNAQDLLPPGSVIPLELGK400
VVELVIPAGVVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGTDQYNFNDAILRDVVSIGG450
TEDQVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGLAIVFAEGIENTAASNPTPQ500
AffDELCPKYNALNAQKKLNPSTT523
C.来自CBS115. 075菌株的下皮黑孔属漆酶Bl基因
多核苷酸序列(SEQ ID NO 5)
ATGTCTCTTCTTCGTAGCTTGACCTCCCTCATCGTACTAGTCATTGGTGC50
ATTTGCTGCAATCGGTCCAGTCACTGACCTACATATAGTGAACCAGAATC100
TCGACCCAGATGGTTTCAACCGCCCCACTGTACTCGCAGGTGGTACTTTC150
CCCGGTCCTCTGATTCGTGGTAACAAGGTACGCTTCATAACCGCCCTCCG200
TAGACGTAGGCTTCGGCTGACATGACCATCATCTGTAGGGAGATAACTTT250
MMTTMTGTGATTGACGACTTGACAGAGCACAGTATGCTCAAGGCTAC300
GTCCATCGTAAGTCCCTGATTAACGTTTCACCTGGTCATATCGCTCAACG350
TCTCGAAGCACTGGCATGGGTTCTTCCAGAAGGGAACCAACTGGGCCGAT400
GGCCCCGCCTTTGTCACCCAATGTCCTATCACATCAGGAAACGCCTTCCT450
GTATGATTTCAACGTTCCGGACCAAGCTGGTACTTTCTGGTACCACAGCC500
ATCTCTCTACACAGTATTGTGACGGTCTTCGTGGTGCCTTTGTCGTCTAT550
GATCCTAATGATCCCAACAAGCAACTCTATGATGTTGATAACGGCAAGTT600
CCTTGCATATTTCATTTCTATCATATCCTCACCTGTATTGGCACAGAAAG650
CACCGTGATTACCTTGGCTGATTGGTATCATGCCCTTGCTCAGACTGTCA700
CTGGTGTCGCGTGAGTGACAAATGGCCCTCAATTGTTCACATATTTTCCT750
GATTATCATATGATAGAGTATCTGATGCAACGTTGATCAACGGATTGGGA800
CGTTCGGCCACCGGCCCCGCAAATGCCCCTCTGGCGGTCATCAGTGTCGA850
GCGGAATAAGAGGTCAGTTCCATAATTATGATTATTTCCCGCGTTACTTC900
CTAACAATTATTTTTGTATCCCTCCACAGATATCGTTTCCGATTGGTTTC950
TATTTCTTGCGACCCTAACTTTATTTTCTCAATTGACCACCACCCAATGA1000
CCGTAATTGAGATGGACGGTGTTAATACCCAATCTATGACCGTAGATTCG1050
ATCCAAATATTCGCAGGTCAACGATATTCATTTGTCGTAGGTTATTATAA1100
ACTGCCCACCGATCATCTCTCACGTAACTGTTATAGATGCAAGCCAACCA1150
ACCAGTTGGAAATTATTGGATCCGCGCTAAACCTAATGTTGGGAACACAA1200
CTTTCCTTGGAGGCCTGAACTCCGCTATATTACGATATGTGGGAGCCCCT1250
GACCAAGAACCGACCACTGACCAAACACCCAACTCTACACCGCTCGTTGA1300
GGCGAACCTACGACCCCTCGTCTATACTCCTGTGGTATGTTGTTCTCGTT1350
ACATATACCAAACCTAATATGAAGACTGAACGGATCTACTAGCCGGGACA1400
GCCATTCCCTGGCGGTGCTGATATCGTCAAGAACTTAGCTTTGGGTTTCG1450
TACGTGTATTTCACTTCCCTTTTGGCAGTAACTGAGGTGGAATGTATATA1500
GAATGCCGGGCGTTTCACAATCAATGGAGCGTCCCTCACACCTCCTACAG1550
TCCCTGTACTACTCCAGATCCTCAGTGGTACTCACAATGCACAGGATCTT1600
CTCCCAGCAGGAAGCGTGATCGAACTTGAACAGAATAAAGTTGTCGAAAT1650
CGTTTTGCCCGCTGCGGGCGCCGTTGGCGGTCCTCATCCTTTTCACTTAC1700
ATGGTGTAAGTATCAGACGTCCTCATGCCCATATTGCTCCGAACCTTACA1750
CACCTGATTTCAGCACAATTTCTGGGTGGTTCGTAGCGCCGGTCAAACCA1800
CATACAATTTCAATGATGCTCCTATCCGTGATGTTGTCAGTATTGGCGGT1850
GCAAACGATCAAGTCACGATCCGATTTGTGGTATGTATCTCGTGCCTTGC1900
ATTCATTCCACGAGTAATGATCCTTACACTTCGGGTTCTCAGACCGATAA1950
CCCTGGCCCATGGTTCCTTCACTGTCACATTGACTGGCATTTGGAGGCTG2000
GGTTCGCTGTAGTCTTTGCGGAGGGAATCAATGGTACTGCAGCTGCTAAT2050
CCAGTCCCAGGTAAGACTCTCGCTGCTTTGCGTAATATCTATGAATTTAA2100
ATCATATCAATTTGCAGCGGCTTGGAATCAATTGTGCCCATTGTATGATG2150
CCTTGAGCCCAGGTGATACATGA2173
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 6)
MSLLRSLTSLIVLVIGAFAAIGPVTDLHIVNQNLDPDGFNRPTVLAGGTF50
PGPLIRGNKGDNFKINVIDDLTEHSMLKATSIHWHGFFQKGTNWADGPAF100
VTQCPITSGNAFLYDFNVPDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPND150
PNKQLYDVDNGNTVITLADffYHALAQTVTGVAVSDATLINGLGRSATGPA200
NAPLAVISVERNKRYRFRLVSISCDPNFIFSIDHHPMTVIEMDGVNTQSM250
TVDSIQIFAGQRYSFVMQANQPVGNYffIRAKPNVGNTTFLGGLNSAILRY300
VGAPDQEPTTDQTPNSTPLVEANLRPLVYTPVPGQPFPGGADIVKNLALG350
FNAGRFTINGASLTPPTVPVLLQILSGTHNAQDLLPAGSVIELEQNKVVE400
IVLPAAGAVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGQTTYNFNDAPIRDVVSIGGAN450
DQVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGFAVVFAEGINGTAAANPVPAAff500
NQLCPLYDALSPGDT515M
D.来自CBS1M. 29菌株的下皮黑孔属漆酶B2基因
多核苷酸序列(SEQ ID NO 7)
CACCGCGATGTCTCTTCTTCGTAGCTTGACCTCCCTCATCGTACTAGCCA50
CTGGTGCATTTGCTGCAATCGGTCCAGTCACCGACCTACATATAGTGAAC100
CAGAATCTCGCCCCAGATGGTTTAAACCGCCCCACTGTACTCGCAGGTGG150
TACTTTCCCCGGTCCTCTGATTCGTGGTAACAAGGTACGCTTCATAACCG200CCCTCCGTAGACGTAGGCTTCGGCTGACATGACCATCATCTGTAGGGAGA250TAACTTTAAAATTAATGTGATTGACGACTTGACAGAACACAGTATGCTCA300AGGCTACGTCCATTGTAAGTCCCTGATTAACGTTTCACCTGGTCATATCG350CTCAACGTCTCGAAGCACTGGCATGGGTTCTTCCAGAAGGGAACCAACTG400GGCCGATGGCCCCGCCTTTGTCACCCAATGTCCTATCACATCAGGAAACG450CCTTCTTGTATGATTTCAACGTTCCGGACCAAGCTGGTACTTTCTGGTAC500CACAGCCATCTCTCYACACAGTATTGTGACGGTCTTCGTGGTGCCTTTGT550CGTCTATGATCCTAATGATCCCAACAAGCAACTCTATGATGTTGATAACG600GCAAGTCCCTTGCATATTTCAGTTCTATCATATCCTCACCTGTATTGGCA650CAGAAAGCACCGTGATTACCTTGGCTGATTGGTATCATGCCCTTGCTCAG700ACTGTCACTGGTGTCGCGTGAGTGACAAATGGCCCTTAATTGTTCACATA750TTTTCCTGATTATCATATGATAGAGTATCTGATGCAACGTTGATCAACGG800ATTGGGACGTTCGGCCACCGGCCCCGCAAATGCCCCTCTGGCGGTCATCA850GTGTCGAGCGGAATAAGAGGTCAGTTCCATAATTATGATTATTTCCCGCG900TTACTTCCTAACGATTATTTTTGTATCCCTCCACAGATATCGTTTCCGAT950TGGTTTCTATTTCTTGCGACCCTAACTTTATTTTCTCAATTGACCACCAC1000CCAATGACCGTAATTGAGATGGACGGTGTTAATACCCAATCTATGACCGT1050AGATTCGATCCAAATATTCGCAGGTCAACGATATTCATTTGTCGTAGGTT1100ATTATAAACTGCCCACCGATCATCTCTCACGTAACTGTTATAGATGCAAG1150CCAACCAACCAGTTGGAAATTATTGGATCCGYGCTAAACCTAATGTTGGG1200AACACAACTTTCCTTGGAGGCCTGAACTCCGCTATATTACGATATGTGGG1250AGCCCCTGACCAAGAACCGACCACTGACCAAACACCCAACTCTACACCGC1300TCGTCGAGGCGAACCTACGTCCCCTCGTCTATACTCCTGTGGTATGTTGT1350TCTCGTTACATATACCAAACCTAATATGAGGACTGAACGGATCTACTAGC1400CGGGACAGCCATTCCCTGGCGGTGCTGATATCGTCAAGAACTTAGCTTTG1450GGTTTCGTACGTGTATTTCACTTCCCTTTTGGCAGTAACTGAGGTGGAAT1500GTATATAGAATGCCGGGCGTTTCACAATCAATGGAACATCCTTCACACCT1550CCTACAGTCCCTGTACTACTCCAGATCCTCAGTGGTACTCACAATGCACA1600GGATCTTCTTCCAGCAGGAAGCGTGATCGAACTTGAACAGAATAAAGTTG1650TCGAAATCGTTCTGCCCGCTGCGGGCGCCGTTGGCGGTCCTCATCCTTTC1700CACTTACATGGTGTAAGTATCAGACGTCCTCATGCCTATATTGCTCCGAA1750CCTTACACACCTGATTTCAGCACAATTTCTGGGTGGTTCGTAGCGCCGGT1800CAAACCACATACAATTTCAATGATGCTCCTATCCGTGATGTTGTCAGTAT1850TGGCGGTGCAAACGATCAAGTCACGATCCGATTTGTGGTATGTATCTCGT1900GCCTTGCATTCATTCCACGAGTAATGATCCTTACACTTCGGGTTCTCAGA1950CCGATAACCCTGGCCCATGGTTCCTTCACTGTCACATTGACTGGCATTTG2000GAGGCTGGGTTCGCTGTAGTCTTTGCGGAGGGAATCAATGGCACTGCAGC2050TGCTAATCCAGTCCCAGGTAAGACTCTCGCTGCTTTGCGTAATATCTATG2100
AATTTAAAGCATATCAATTTGCAGCGGCTTGGAATCAATTGTGCCCGTTG2150
TATGATGCCTTGAGCCCAGGTGATACATGATTACTCGTAGCTGTGCTTTC2200
TTATACATATTCTATGGGTATATCGGAGTAGCTGTACTATAGTATGTACT2250
ATACTAGGTGGGATATGYTGATGTTGATTTATATAATTTTGTTTGAAGAG2300
TGACTTTATCGACTTGGGATTTAGCCGAGTACATACTGATCTCTCACTAC2350
AGGCTTGTTTTGTCTTTGGGCGCTTACTCAACAGTTGACTGTTTTTGCTA2400
TTACGCATTGAACCGCATTCCGGTCYGACTCGTGTCCTCTACTGTGACTT2450
GTATTGGCATTCTAGCACATATGTCTCTTACCTATAGGAACAATATGTCT2500
CAACACTGTTCCAAAACCTGCGTAAACCAAATATCGTCCATCAGATCAGA2550
TCATTAACAGTGCCGCACTAACCTAATACACTGGCARGGACTGTGGAAAT2600
CCCTATAAATGACCTCTAGACCGTGAGGTCATTGCAAGGTCGCTCTCCTT2650
GTCAAGATGACCC2663
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 8)
MSLLRSLTSLIVLATGAFAAIGPVTDLHIVNQNLAPDGLNRPTVLAGGTF50
PGPLIRGNKGDNFKINVIDDLTEHSMLKATSIHWHGFFQKGTNWADGPAF100
VTQCPITSGNAFLYDFNVPDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPND150
PNKQLYDVDNGNTVITLADffYHALAQTVTGVAVSDATLINGLGRSATGPA200
NAPLAVISVERNKRYRFRLVSISCDPNFIFSIDHHPMTVIEMDGVNTQSM250
TVDSIQIFAGQRYSFVMQANQPVGNYffIRAKPNVGNTTFLGGLNSAILRY300
VGAPDQEPTTDQTPNSTPLVEANLRPLVYTPVPGQPFPGGADIVKNLALG350
FNAGRFTINGTSFTPPTVPVLLQILSGTHNAQDLLPAGSVIELEQNKVVE400
IVLPAAGAVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGQTTYNFNDAPIRDVVSIGGAN450
DQVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGFAVVFAEGINGTAAANPVPAAff500
NQLCPLYDALSPGDT515
E.来自ATCC20013菌株的下皮黑孔属漆酶B3基因(部分)
多核苷酸序列(SEQ ID NO 9)
GTGGGGGCGGATCCCTAACTGTTTCGAATCGGCACCGAAGTATGCAGGTG50
TGACGGAGATGAGGCGTTTTTTCATCTTCCACTGCAGTATAAAATGTCTC100
AGGTAACGTCCAGCTTTTTGTACCAGAGCTACCTCCAAATACCTTTACTC150
GCAAAGGTTTCGCGATGTCTCTTCTTCGTAGCTTGACCTCCCTCATCGTA200
CTAGCCACTGGTGCATTTGCTGCAATCGGTCCAGTCACTGACCTACATAT250
AGTGAACCAGAATCTCGCCCCAGATGGTTTCAACCGCCCCACTGTACTCG300
CAGGTGGTACTTTCCCCGGTCCTCTGATTCGTGGTAACAAGGTACGCTTC350
ATAACCGCCCTCCGTAGACGTAGGCTTCGGCTGACATGACCATCATCTGT400
AGGGAGATAACTTTAAAATTAATGTGATTGACGACTTGACAGAACACAGT450
ATGCTCAAGGCCACGTCCATTGTAAGTCCCTGATTAACGTTTCACCTGGT500
CATATCGCTCAACGTCTCGAAGCACTGGCATGGGTTCTTCCAGAAGGGAA550
CCAACTGGGCCGATGGCCCCGCCTTTGTCACCCAATGTCCTATCACATCA600
GGAAACTCCTTCCTGTATGATTTCAACGTTCCGGACCAAGCTGGTACTTT650
CTGGTACCACAGCCATCTCTCTACACAGTATTGTGACGGTCTTCGTGGTG700
CCTTTGTCGTCTATGATCCTAATGATCCCAACAAGCAACTCTATGATGTT750
GATAACGGCAAGTCCCTTGCATATTTCATTTCTATCATATCCTCACCTGT800
ATTGGCACAGAAAGCACCGTGATTACCTTGGCTGATTGGTATCATGCCCT850
TGCTCAGACTGTCACTGGTGTCGCGTGAGTGACAAATGGCCCTCAATTGT900
TCACATATTTTCCTGATTATCATATGATAGAGTATCTGATGCAACGTTGA950
TCAACGGATTGGGACGTTCGGCCACCGGCCCCGCAAATGCCCCTCTGGCG1000
GTCATCAGTGTCGAGCGGAATAAGAGGTCAGTTCCATAATTATGATTATT1050
TCCCGCGTTACTTCCTAACAATTATTCTTGTATCCCTCCACAGATATCGC1100
TTCCGATTGGTGTCTATTTCTTGCGACCCTAACTTTATTTTCTCAATTGA1150
TCACCACCCAATGACCGTAATTGAGATGGACGGTGTTAATACCCAATCTA1200
TGACCGTAGATTCGATCCAAATATTCGCAGGTCAACGATATTCATTTGTC1250
GTAGGTTATTATAAACTGCCCACCGATCATCTCTCACGTAACTGTTATAG1300
ATGCAAGCCAACCAACCRGTTGGAAATTATTGGATCC1337
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 10)
MSLLRSLTSLIVLATGAFAAIGPVTDLHIVNQNLAPDGFNRPTVLAGGTF50
PGPLIRGNKGDNFKINVIDDLTEHSMLKATSIHWHGFFQKGTNWADGPAF100
VTQCPITSGNSFLYDFNVPDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPND150
PNKQLYDVDNGKTVITLADffYHALAQTVTGVAVSDATLINGLGRSATGPA200
NAPLAVISVERNKRYRFRLVSISCDPNFIFSIDHHPMTVIEMDGVNTQSM250
TVDSIQIFAGQRYSFVMQANQPVGNYffI278
F.来自CBS1M. 29菌株的下皮黑孔属漆酶C基因(部分)
多核苷酸序列(SEQ ID NO 11)
TGCAATCGGACCGGTBGCTGACCTTCACATTACGGACGATACCATTGCCC50
CCGATGGTTTCTCTCGTCCTGCTGTTCTCGCTGGCGGGGGTTTCCCTGGC100
CCTCTCATCACCGGAAACAAGGTAATGCCTAATGGTTGCGTCTTTGTTGG150
TGCTCTCATTCATCCACGACATTTTGTACCAGGGCGACGCCTTTAAACTC200
AATGTCATCGATGAACTAACGGACGCATCCATGCTGAAGYCGACTTCCAT250
CGTAAGTCTCGCTGTATTGCTCCTTGAGCCATTTCATTGACTATAACTAC300
AACCAGCACTGGCATGGATTCTTCCAAAAGGGTACTAATTGGGCAGATGG350
TCCCGCTTTTGTGAACCAATGCCCCATCACCACGGGAAACTCCTTCTTGT400
ACGACTTCCAGGTTCCTGATCAAGCTGGTAAGCATGAGATTACACTAGGA450
AAGTTTAATTTAATAACTATTCAATCAGGAACCTACTGGTATCATAGTCA500
TTTGTCTACGCAATACTGTGATGGTCTCAGAGGTGCATTCGTTGTCTACG550
ACCCTTCAGATCCTCACAAGGATCTCTACGACGTCGACGACGGTGAGCTT600
TGCTTTTTTCATTGGTATCCATTATCGCTCACGTGTCATTACTGCGCCAC650
AGAAAGTACCGTCATCACTTTGGCTGATTGGTATCATACTTTGGCTCGTC700
AGATTGTTGGCGTTGCGTGAGTAGTCTTGTACCGACTGAAACATATTCCA750
GTTGCTGACTTCCCCACAGCATTTCTGATACTACCTTGATAAACGGTTTG800
GGCCGCAATACCAATGGTCCGGCTGATGCTGCTCTTGCTGTGATCAATGT850
TGACGCTGGCAAACGGTGTGTCCAGATTACTATACTCCCCATGACGTCTC900
AATGCTGATGTGTACTACTTCCAGGTACCGTTTCCGTCTTGTTTCCATAT950
CCTGTGACCCCAATTGGGTATTCTCGATTGACAACCATGACTTTACGGTC1000
ATTGAAGTCGATGGTGTTAACAGTCAACCTCTCAACGTCGATTCTGTTCA1050
GATCTTCGCCGGACAACGTTACTCGTTCGT1080
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 12)
AIGPVADLHITDDTIAPDGFSRPAVLAGGGFPGPLITGNKGDAFKLNVID50
ELTDASMLKXTSIHWHGFFQKGTNWADGPA FVNQCPITTG NSFLYDFQVP100
DQAGTYffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDPSDPHKDLYDVDDESTVITLAD150
WYHTLARQIVGVAISDTTLINGLGRNTNGPADAALAVINVDAGKRYRFRL200
VSISCDPNWVFSIDNHDFTVIEVDGVNSQPLNVDSVQIFA GQRYSF246
G.来自CBS1M. 29菌株的下皮黑孔属漆酶Dl基因
多核苷酸序列(SEQ ID NO 13)
GATTCTAATAGACCAGGCATACCAAGAGATCTACAGGTTGACAGACCATT50
CTTCTAGGCGGCATTTATGCTGTAGCGTCAGAAATTATCTCTCCATTTGT100
ATCCCACAGGTCCTGTAATAACACGGAGACAGTCCAAACTGGGATGCCTT150
TTTTCTCAACTATGGGCGCACATAGTCTGGACGATGGTATATAAGACGAT200
GGTATGAGACCCATGAAGTCAGAACACTTTTGCTCTCTGACATTTCATGG250
TTCACACTCTCGAGATGGGATTGAACTCGGCTATTACATCGCTTGCTATC300
TTAGCTCTGTCAGTCGGAAGCTATGCTGCAATTGGGCCCGTGGCCGACAT350
ACACATTGTCAACAAAGACCTTGCTCCAGATGGCGTACAACGTCCAACCG400
TGCTTGCCGGAGGCACTTTTCCTGGGACGTTGATCACCGGTCAGAAAGTA450
AGGGATATTAGTTTGCGTCAAAGAGCCAACCAAAACTAACCGTCCCGTAC500
TATAGGGTGACAACTTCCAGCTCAATGTCATCGATGATCTTACCGACGAT550
CGGATGTTGACGCCAACTTCCATTGTGAGCCTATTATTGTATGATTTATC600
CGAATAGTTTCGCAGTCTGATCATTGGATCTCTATCGCTAGCATTGGCAC650
GGTTTCTTCCAGAAGGGAACCGCTTGGGCCGACGGTCCCGCCTTCGTAAC700
TCAGTGCCCTATAATAGCAGATAACTCTTTTCTGTATGACTTCGACGTCC750
CAGACCAAGCTGGTACTTTCTGGTATCATAGTCATCTATCCACTCAGTAC800
TGTGACGGTTTACGTGGTGCCTTCGTTGTGTACGATCCTAACGATCCTCA850
CAAAGACCTATACGATGTTGATGACGGTGGGTTCCAAATATTTGTTCTGC900
AGACATTGTATTGACGGTGTTCATTATAATTTCAGAGAGCACCGTGATTA950
CCCTTGCGGATTGGTACCATGTTCTCGCCCAGACCGTTGTCGGCGCTGCG1000
TGAGTAACACATACACGCGCTCCGGCACACTGATACTAATTTTTTTTTAT1050
TGTAGCACTCCTGATTCTACCTTGATCAACGGGTTAGGCCGTTCACAGAC1100
CGGACCCGCTGATGCTGAGCTGGCTGTTATCAGCGTTGAACATAACAAAC1150
GGTATGTCATCTCTACCCAGTATCTTCTCTCCTGCTCTAATTCGCTGTTT1200
CACCATAGATACCGTTTCCGTTTGGTTTCGATTTCGTGCGACCCCAACTT1250
TACCTTCTCCGTTGATGGTCATAATATGACTGTCATCGAAGTCGATGGTG1300TCAACACACGACCCCTGACCGTTGACTCTATTCAAATCTTCGCCGGACAG1350AGGTATTCCTTTGTCGTAAGTTAATCGATATATTCTCCTTATTACCCCTG1400TGTAATTGATGTCAATAGCTCAATGCTAACCAACCCGAAGACAATTACTG1450GATCCGTGCTATGCCAAACATCGGTAGAAATACAACAACACTGGACGGAA1500AGAATGCCGCTATCCTTCGATACAAGAATGCTTCTGTAGAAGAGCCCAAG1550ACCGTTGGGGGCCCCGCTCAATCCCCGTTGAATGAAGCGGACCTGCGTCC1600ACTCGTACCTGCTCCTGTGGTATGTCTTGTCGCGCTGTTCCATCGCTATT1650TCATATTAACGTTTTGTTTTTGTCAAGCCTGGAAACGCTGTTCCAGGTGG1700CGCAGACATCAATCACAGGCTTAACTTAACTTTCGTACGTACACCTGGTT1750GAAACATTATATTTCCAGTCTAACCTCTCTTGTAGAGTAACGGCCTCTTC1800AGCATCAACAACGCCTCCTTCACTAATCCTTCGGTCCCCGCCTTATTACA1850AATTCTGAGCGGTGCTCAGAACGCTCAAGATTTACTTCCAACGGGTAGTT1900ACATTGGCCTTGAACTAGGCAAGGTTGTGGAGCTCGTTATACCTCCTCTG1950GCAGTTGGAGGACCGCACCCTTTCCATCTTCATGGCGTAAGCATACCACA2000CTCCCGCAGCCAGAATGACGCAAACTAATCATGATATGCAGCACAATTTC2050TGGGTCGTCCGTAGTGCAGGTAGCGATGAGTATAACTTTGACGATGCTAT2100CCTCAGGGACGTCGTRAGCATTGGAGCGGGGACTGATGAAGTCACAATCC2150GTTTCGTGGTATGTCTCACCCCTCGCATTTTGAGACGCAAGAGCTGATAT2200ATTTTAACATAGACCGACAATCCGGGCCCGTGGTTCCTCCATTGCCATAT2250TGATTGGCATTTGGAGGCAGGCCTTGCCATCGTCTTCGCTGAGGGCATCA2300ATCAGACCGCTGCAGCCAACCCAACACCCCGTACGTGACACTGAGGGTTT2350CTTTATAGTGCTGGATTACTGAATCGAGATTTCTCCACAGAAGCATGGGA2400TGAGCTTTGCCCCAAATATAACGGGTTGAGTGCGAGCCAGAAGGTCAAGC2450CTAAGAAAGGAACTGCTATTTAAACGTGGTCCTAGACTACGGGCATATAA2500GTATTCGGGTAGCGCGTGTGAGCAATGTTCCGATACACGTAGATTCATCA2550CCGGACACGCTGGGACAATTTGTGTATAATGGCTAGTAACGTATCTGAGT2600TCTGGTGTGTAGTTCAAAGAGACAGCCCTTCCTGAGACAGCCCTTCCTGA2650GACAGCCCTTCCTGAGACGTGACCTCCGTAGTCTGCACACGATACTYCTA2700AATACGTATGGCAAGATGACAAAGAGGAGGATGTGAGTTACTACGAACAG2750AAATAGTGCCCGGCCTCGGAGAGATGTTCTTGAATATGGGACTGGGACCA2800ACATCCGGA2809翻译的蛋白质序列(SEQID NO 14)MGLNSAITSLAILALSVGSYAAIGPVADIHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGG50TFPGTLITGQK⑶NFQLNVIDDLTDDRMLT PTSIHWHGFFQKGTAffADGP100AFVTQCPIIADNSFLYDFDV PDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDP150NDPHKDLYDVDDGGTVITLA DffYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTG200PADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTR250PLTVDSIQIFAGQRYSFVLN ANQPEDNYffIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAI300
LRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRL350
NLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGK400
VVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGA450
GTDEVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQ500
AffDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI526
H.来自CBS115.075菌株的下皮黑孔属漆酶D2基因
多核苷酸序列(SEQ ID NO 15)
GATCTGGACGATGGTATATAAGACGATGGTATGAGACCCATGAAGTCTGA50
ACACTTTTGCTCTCTGACATTTCATGGTTCATACTCTCGAGATGGGATTG100
AACTCGGCTATTACATCGCTTGCTATCTTAGCTCTGTCAGTCGGAAGCTA150
TGCTGCAATTGGGCCCGTGGCCGACATACACATTGTCAACAAAGACCTTG200
CTCCAGATGGTGTACAACGTCCAACCGTGCTCGCCGGAGGCACTTTTCCT250
GGGACGTTGATCACCGGTCAGAAAGTAAGGAATATTAGTTTGCGTCAAAG300
AGCCAACCAAAATTAACCGTCCCGTCCCATAGGGTGACAACTTCCAGCTC350
AATGTCATTGATGATCTTACCGACGATCGGATGTTGACACCAACTTCCAT400
TGTGAGCCTATTATTGTATGATTTATCCGTATAGTTTCTCAGTCTGATCA450
TTGGCTCTCTATCGCTAGCATTGGCACGGTTTCTTCCAGAAGGGAACCGC500
TTGGGCCGACGGTCCCGCCTTCGTAACTCAGTGCCCTATAATAGCAGATA550
ACTCTTTTCTGTATGACTTCGACGTCCCCGACCAAGCTGGTACTTTCTGG600
TATCATAGTCATCTATCCACTCAGTACTGTGACGGTTTACGTGGTGCCTT650
CGTTGTGTACGATCCTAACGATCCTCACAAAGACCTATACGATGTTGATG700
ACGGTGGGTTCCAAATACTTGACCAAGAAACATTATATTGATAGTATCCA750
CTCTGATTTTCAGAGAGCACCGTGATTACCCTTGCGGATTGGTACCATGT800
TCTCGCCCAGACCGTTGTCGGCGCTGCGTGAGTAACACATACACGCGCTC850
CGGCACACTGATACTAATTTTTTATTGTAGCACTCCTGATTCTACCTTGA900
TCAACGGGTTAGGCCGTTCACAGACCGGACCCGCTGATGCTGAGCTGGCT950
GTTATCAGCGTTGAACATAACAAACGGTATGTCATCTCTACCCATTATCT1000
TCTCTCCTGCTTTAATTCGCTGTTTCACCATAGATACCGATTCCGTTTGG1050
TTTCGATTTCGTGCGACCCCAACTTTACCTTCTCCGTTGATGGTCATAAT1100
ATGACTGTCATCGAAGTCGACGGTGTCAACACACGACCCCTGACCGTTGA1150
CTCTATTCAAATCTTCGCCGGACAGAGGTATTCCTTTGTCGTAAGTTAAT1200
CGATATATTCTCCCTATTACCCCTGTGTAATTGATGTCAACAGCTCAATG1250
CTAACCAACCCGACGACAATTACTGGATCCGTGCTATGCCAAACATCGGT1300
AGAAATACAACAACACTGGACGGAAAGAATGCCGCTATCCTTCGATACAA1350
GAATGCTTCTGTAGAAGAGCCCAAGACCGTTGGGGGCCCCGCTCAATCCC1400
CGTTGAATGAAGCGGACCTGCGTCCACTCGTACCTGCTCCTGTGGTATGT1450
CTTGTCGTGCTGTTCCATCGCTATTTCATATTAACGTTTTGTTTTTGTCA1500
AGCCTGGAAACGCTGTTCCAGGTGGCGCAGACATCAATCACAGGCTTAAC1550
TTAACTTTCGTACGTACACCTGGTTGAAACATTATATTTCCAGTCTAACC1600
TCTTGTAGAGTAACGGCCTTTTCAGCATCAACAACGCCTCCTTCACTAAT1650
CCTTCGGTCCCCGCCTTATTACAAATTCTGAGCGGTGCTCAGAACGCTCA1700
AGATTTACTTCCAACGGGTAGTTACATTGGCCTTGAACTAGGCAAGGTTG1750
TGGAGCTCGTTATACCTCCTCTGGCAGTTGGAGGACCGCACCCTTTCCAT1800
CTTCATGGCGTAAGCATACCACACTCCCGCAGCCAGAATGACGCAAACTA1850
ATCATGATATGCAGCACAATTTCTGGGTCGTCCGTAGTGCAGGTAGCGAT1900
GAGTATAACTTTGACGATGCTATCCTCAGGGACGTCGTGAGCATTGGAGC1950
GGGGACTGATGAAGTCACAATCCGTTTCGTGGTATGTCTCACCCCTCGCA2000
TTTTGAGACGCAAGAGCTGATATATTTTAACATAGACCGACAATCCGGGC2050
CCGTGGTTCCTCCATTGCCATATTGATTGGCATTTGGAGGCAGGCCTTGC2100
CATCGTCTTCGCTGAGGGCATCAATCAGACCGCTGCAGCCAACCCAACAC2150
CCCGTACGTGACACTGAGGGTTTCTTTATAGTGCTGGATTACTGAATCGA2200
GATTTCTCCACAGAAGCATGGGATGAGCTTTGCCCCAAATATAACGGGTT2250
GAGTGCGAGCCAGAAGGTCAAGCCTAAGAAAGGAACTGCTATTTAAACG2299
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 16)
MGLNSAITSLAILALSVGSYAAIGPVADIHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGG50
TFPGTLITGQK⑶NFQLNVIDDLTDDRMLT PTSIHWHGFFQKGTAffADGP100
AFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDP150
NDPHKDLYDVDDGGTVITLADffYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTG200
PADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTR250
PLTVDSIQIFAGQRYSFVLNANQPDDNYffIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAI300
LRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRL350
NLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGK400
VVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGA450
GTDEVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQ500
AffDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI526
I.来自CBS1M.四菌株的下皮黑孔属漆酶E基因(部分)
多核苷酸序列(SEQ ID NO 17)
TGCAATCGGACCGGTGGCCGACCTCAAGATCGTAAACCGAGACATTGCAC50
CTGACGGTTTTATTCGTCCCGCCGTTCTCGCTGGAGGGTCGTTCCCTGGT100
CCTCTCATTACAGGGCAGAAAGTACGTTACGCTATCTCGGTGCTTTGGCT150
TAATTAAACTATTTGACTTTGTGTTCTCTTAGGGGAACGAGTTCAAAATC200
AATGTAGTCAATCAACTGACCGATGGTTCTATGTTAAAATCCACCTCAAT250
CGTAAGCAGAATGAGCCCTTTGCATCTCGTTTTATTGTTAATGCGCCCAC300
TATAGCATTGGCATGGATTCTTCCAGAAGGGAACAAACTGGGCAGACGGT350
CCTGCGTTCGTGAACCAATGTCCAATCGCCACGAACAATTCGTTCTTGTA400
TCAGTTTACCTCACAGGAACAGCCAGGTGAGTATGAGATGGAGTTCATCC450
GAGCATGAACTGATTTATTTGGAACCTAGGCACATTTTGGTACCATAGTC500
ATCTTTCCACACAATACTGCGATGGTTTGCGAGGGCCACTCGTGGTGTAT550
GACCCACAAGACCCGCATGCTGTTCTCTACGACGTCGACGATGGTTCGTA600
CTTCGCATATCCACGCTCGCTTTCATACAATGTAAACTTTGTTCCTCCAG650
AAAGTACAATCATCACGCTCGCGGATTGGTATCATACCTTGGCTCGGCAA700
GTGAAAGGCCCAGCGTAAGGCACTTTAGTGTTTCCTCATAGTCCAAGAAA750
TTCTAACACGCCTTCTTCATCAGGGTTCCTGGTACGACCTTGATCAACGG800
GTTGGGGCGTCACAACAATGGTCCTCTAGATGCTGAACTAGCGGTGATCA850
GTGTTCAAGCCGGCAAACGGCAAGTTCAATTCACACTTTTCACTCTGTAC900
CTTCTTCCTGACATTCTTTTCTTGTAGTTACCGCTTCCGCCTGATTTCAA950
TTTCATGCGATCCCAACTACGTATTCTCCATTGATGGCCATGATATGACT1000
GTCATCGAAGTGGATAGTGTTAACAGTCAACCTCTCAAGGTAGATTCTAT1050
CCAAATATTTGCAGGTCAGAGATATTCGTTCGTGGTGAGTCAGATCAGGG1100
CATATCCTTTTGTCGATACGTCATTGACCATATAATGCTACAAGCTGAAT1150
GCCAACCAACCAG1163
翻译的蛋白质序列(SEQID NO 18)
AIGPVADLKIVNRDIAPDGFIRPAVLAGGSFPGPLITGQKGNEFKINVVN50
QLTDGSMLKSTSIHWHGFFQKGTNWADGPAFVNQCPIATNNSFLYQFTSQ100
EQPGTFffYHSHLSTQYCDGLRGPLVVYDPQDPHAVLYDVDDESTIITLAD150
WYHTLARQVKGPAVPGTTLINGLGRHNNGPLDAELAVISVQAGKRQVQFT200
LFTLYRFRLISISCDPNYVFSIDGHDMTVIEVDSVNSQPLKVDSIQIFAG250
QRYSFVLNANQP262
可以在本文描述的方法中使用的具有下列氨基酸序列(SEQ ID NO19;信号序列以斜体标出)的漆酶D
MGLNSAITSLAILALSVGSYAAIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGG50
TFPGTLITGQK⑶NFQLNVIDDLTDDRMLT PTSIHWHGFFQKGTAffADGP100
AFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFffYHSHLSTQYCDGLRGAFVVYDP150
NDPHKDLYDVDDGGTVITLADffYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTG200
PADAELAVISVEHNKRYRFRLVSISCDPNFTFSVDGHNMTVIEVDGVNTR250
PLTVDSIQIFAGQRYSFVLNANQPEDNYffIRAMPNIGRNTTTLDGKNAAI300
LRYKNASVEEPKTVGGPAQSPLNEADLRPLVPAPVPGNAVPGGADINHRL350
NLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGK400
VVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFffVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGA450
GTDEVTIRFVTDNPGPffFLHCHIDffHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQ500
AffDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI526
该多肽的成熟加工形式如下(SEQ IDNO 20)
AIGPVADLHIVNKDLAPDGVQRPTVLAGGTFPGTLITGQK⑶NFQLNVIDDLTDDRMLTPTS
IHWHGFFQKGTAWADGPAFVTQCPIIADNSFLYDFDVPDQAGTFWYHSHLSTQYCDGLRGAF
VVYDPNDPHKDLYDVDDGGTVITLADWYHVLAQTVVGAATPDSTLINGLGRSQTGPADAELA
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PAPVPGNAVPGGADINHRLNLTFSNGLFSINNASFTNPSVPALLQILSGAQNAQDLLPTGSYIGLELGKVVELVIPPLAVGGPHPFHLHGHNFWVVRSAGSDEYNFDDAILRDVVSIGAGTDEVTIRFVTDNPGPWFLHCHIDWHLEAGLAIVFAEGINQTAAANPTPQAWDELCPKYNGLSASQKVKPKKGTAI在一些实施方案中，适合于在本组合物和方法中使用的漆酶是缺少可以用于指导全长多肽从细胞分泌的信号序列的成熟多肽。合适的成熟多肽与选自SEQ ID NO 2, SEQ ID NO :4、SEQ ID NO :6、SEQ ID NO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO 16,SEQID NO 18、SEQ ID NO :19 JPSEQ ID NO :20 的氨基酸序列具有至少 60%、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、至少91%、至少92 %、至少 93 %、至少94 %、至少95 %、至少96 %、至少97 %、至少98 %、或甚至至少99 %、或者甚至更多氨基酸序列同一性。优选地，如用本文中所述的测定法和方法测定的，此类多肽具有酶促的漆酶活性。在一些实施方案中，相对于全长或成熟的亲本/参考序列，适用于在本组合物和方法中使用的漆酶是截短的。此类截短的多肽可以通过全长或者成熟多肽序列的蛋白水解降解或者通过工程化编码截短多肽的多核苷酸产生。相对于选自SEQ ID NO 2,SEQ ID NO 4、SEQ ID NO :6、SEQ IDNO :8、SEQ ID NO :10、SEQ ID NO :12、SEQ ID NO :14、SEQ ID NO 16, SEQ ID NO 18, SEQ ID N0:19和SEQ ID NO :20的氨基酸序列，示例性多肽是在氨基端和/或羧基端截短的。截短可以是少量的，例如1、2、3、4、5、6、7、8、9或10个氨基酸残基， 或者是整个结构域或功能域。合适的截短多肽可以具有与一种或多种以上参考的氨基酸序列的对应部分至少60 %、至少65 %、至少70 %、至少75 %、至少80 %、至少85 %、至少90 %、 至少91%、至少92%、至少93%、至少94%、至少95%、至少96%、至少97%、至少98%、或甚至至少99%或者更多的氨基酸序列同一性。优选地，如用本文中所述的测定法和方法测定的，此类多肽具有酶促的漆酶活性。介质在一些实施方案中，酶氧化系统、组合物和方法进一步包括增强漆酶的活性的一种或多种化学介质剂。介质(也称为增强剂或促进剂)是用作为对显示出氧化酶活性的酶与染料、色素(例如，靛蓝)、生色团(例如，多酚类(polyphenolic)、花色素苷或类胡萝卜素)或其他第二底物或电子供体之间有效的穿梭电子的氧化还原介质的化学物。在一些实施方案中，化学介质是酚类化合物，例如，丁香酸甲酯或相关的化合物， 如在例如，PCT申请号WO 95/01似6和WO 96/U845中所述。介质也可以是N-羟基化合物、 N-肟化合物或N-氧化物化合物，例如，N-羟基苯并三唑、紫尿酸或N-羟基乙酰苯胺。介质也可以是吩气i嗪/吩噻嗪化合物，例如，吩噻嗪-10-丙酸。介质可以进一步是2，2'-连氮基双(3-乙基苯并噻唑啉-6-磺酸)(ABTS)。其他化学介质是本领域熟知的，例如，在PCT 申请号WO 95/014 中公开的已知增强漆酶活性的化合物。介质也可以是乙酰丁香酮、丁香酸甲酯、丁香酸乙酯、丁香酸丙酯、丁香酸丁酯、丁香酸己酯或丁香酸辛酯。在一些实施方案中，介质是4-氰基-2，6- 二甲氧基苯酚、4-酰胺基_2，6_ 二甲氧基苯酚或它们的N-取代的衍生物例如，如，4-(N-甲基酰胺基)_2，6-二甲氧基苯酚、 4-[N-(2-羟基乙基)酰胺基]_2，6-二甲氧基苯酚或4-(N，N-二甲基酰胺基)-2，6-二甲氧基苯酚。
在一些实施方案中，介质通过以下通式描述
权利要求
1.纺织品加工方法，其包括在低于40°C的温度下，并且在足够造成纺织品的颜色修饰的条件下，将纺织品与漆酶和介质接触一段时间。
2.权利要求2的方法，其中所述颜色修饰选自颜色的增亮、颜色的改变、色光的改变、 再沉积/回染的降低、和漂白。
3.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述温度是约20°C至低于40°C。
4.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述温度是约20°C至约30°C。
5.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述织物是靛蓝染色的粗斜纹布。
6.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述织物是硫磺染色的粗斜纹布。
7.权利要求1的纺织品加工方法，其中在将所述纺织品与漆酶和介质接触前或同时， 将所述粗斜纹布退浆和/或石洗。
8.权利要求1的纺织品加工方法，其中所述石洗和所述纺织品与漆酶和介质接触在同一浴中发生。
9.权利要求1的纺织品加工方法，其进一步包括将所述纺织品与纤维素酶接触，同时或顺次地将所述织物与漆酶和介质接触。
10.权利要求9的纺织品加工方法，其中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶接触，并且其中在所述纺织品与漆酶和介质接触之前，进行纺织品与纤维素酶接触。
11.权利要求10的纺织品加工方法，其中在同一浴中顺次地进行纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触，并且在纺织品与纤维素酶接触和纺织品与漆酶和介质接触之间不排干浴。
12.权利要求9-11中任一项的纺织品加工方法，其中所述纺织品与纤维素酶接触和所述纺织品与漆酶和介质接触在低于40°C的温度下进行。
13.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶是微生物漆酶。
14.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶来自下皮黑孔菌属物种。
15.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶来自单色下皮黑孔菌。
16.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶是来自单色下皮黑孔菌的漆酶D。
17.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与选自SEQIDNO 2, SEQ ID NO: 4、SEQ ID NO :6, SEQ ID N0:8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO :18,SEQID NO :19禾口 SEQ ID NO :20的氨基酸序列至少70%同一性的氨基酸序列。
18.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与选自SEQIDNO 2, SEQ ID N0: 4、SEQ ID NO :6, SEQ ID N0:8、SEQ ID NO: 10、SEQ ID NO: 12、SEQ ID NO: 14、SEQ ID NO: 16,SEQ ID NO :18,SEQID NO :19禾口 SEQ ID NO :20的氨基酸序列至少80%同一性的氨基酸序列。
19.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQID NO 19或SEQ ID NO 20至少70%同一性的氨基酸序列。
20.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQID NO 19或SEQ ID NO 20至少80%同一性的氨基酸序列。
21.权利要求1-12任一项的方法，其中所述漆酶具有与SEQID NO 19或SEQ ID NO 20至少90%同一性的氨基酸序列。
22.权利要求1-21任一项的方法，其中所述介质是syringonitrile。
23.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是约20°C至约35°C。
24.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是约20°C至约23°C。
25.权利要求1-21任一项的方法，其中所述温度是自来水的环境温度。
26.权利要求1-25任一项的方法，其中将所述漆酶和介质在即用型组合物中一起提{共。
27.权利要求1-25任一项的方法，其中所述漆酶和介质以固体形式提供。
全文摘要
描述了漆酶和编码此类漆酶的核酸序列。该漆酶可以在用于修饰粗斜纹布织物的颜色的改进方法中与介质联合使用。也描述了使用漆酶的低温和单浴纺织品加工。
文档编号D06L3/11GK102264892SQ200980152157
公开日2011年11月30日 申请日期2009年12月22日 优先权日2008年12月24日
发明者A·J·克劳尔, J·C·麦考利夫, P·佩里库, W·阿什顿, 王华明 申请人:丹尼斯科美国公司