专利名称：一种制备新西兰兔烫伤模型的方法
技术领域：
本发明涉及一种制备动物烫伤模型的方法，特别涉及一种制备新西兰兔 烫伤模型的方法。
背景技术：
建立动物烫伤模型是研究烧伤创面修复及用药的一个极为重要的实验方 法和手段。 一个理想的模型将有助于更科学、更准确地认识烫伤后机体各系 统及局部创面的发展演变规律，探索针对性的防治措施。目前关于烧伤、烫 伤的动物模型大多集中于大鼠。虽然有应用家兔如新西兰兔作为烧伤、烫伤 动物模型的报道，但其报道的实验条件差异很大，不能作为通用指标来应用。
实用的动物烫伤模型是研究烫伤药物和治疗方法的前提。由于新西兰兔 体积较大，在烫伤实验中，创面烫伤程度除了与温度和持续时间相关，还受 压力因素的影响。因为目前多采用加热铁板、铜板、烫伤器等方法造成烫伤， 此类烫伤用物的致伤部位为一坚硬的平面，与动物圆形的体型皮肤表面不相 吻合，所以只能通过施加压力，使皮肤形成一平面，这在烫伤过程中势必使 皮肤弧面顶点先受热力损伤，最后是弧面的最低点。这种热力致伤过程的不 平衡性导致创面烫伤程度深浅不一，不能真实的反映出符合实际的烫伤程度。
发明内容
本发明的目的在于提供一种以新西兰兔制作烫伤模型的方法，可获得较
为真实反映动物实际烫伤程度的i度、浅n度、深n度、m度的烫伤模型， 具有烫伤模型建立简便、重复性好、准确可靠的特点。 为达到以上目的，本发明是采取如下技术方案予以实现的 一种制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于，包括下述步骤
(1) 选用25-40层方纱布块，放入99°。的水浴锅里5分钟后取出，再放 入35 'C保温的脱脂棉上面停留21秒，以温度计检测保温效果最好的纱布块；
(2) 取若干成年雄性新西兰兔，将新西兰兔背部提前一天脱毛，称重后 对其耳缘静脉注射麻醉；
(3) 用长直钳夹住保温效果最好的纱布块浸入热水中，待水温恒定于99 °C
时，取出，立即平铺于新西兰兔背部脱毛部位，以纱布接触新西兰兔皮肤后 开始计时，烫伤时间在3-25秒；
(4) 去除纱布，烫伤创面用凡士林油纱加无菌棉球包扎，并将新西兰兔 单笼饲养；
(5) 烫伤后24 h取标本进行HE染色，在烫伤温度均为99。C条件下，根 据不同的烫伤时间，建立新西兰兔的烫伤模型烫伤时间3-5 s为I度烫伤模 型；烫伤时间7-13s为浅II度烫伤模型；烫伤时间15-19s为深II度烫伤模型; 烫伤时间21-25 s为III度烫伤模型。
上述方法中，所述保温效果最好的纱布块为3cm见方的35层。所述烫伤时 间取奇数秒，共计12个时间点。所述新西兰兔背部脱毛采用用8%的硫化钠。 所述对新西兰兔耳缘静脉注射麻醉是使用3%戊巴比妥钠按新西兰兔体重30111 g/k g的剂量进行的。
本发明的有益效果是选用纱布作为致伤用物，其一是柔软、容易变形、 可与动物体型皮肤表面很好的吻合，能真实的反映出符合实际的烫伤程度； 二是纱布中浸满热水，可利用热水的重力作用使其与皮肤弧面紧贴，而无需 再施以压力；此外，绷紧的纱布在致伤过程中不会起皱。这些因素均有利于 降低系统误差。本发明方法具有烫伤面积及深度控制准确，操作简便、重复 性好的优点，是研究创伤修复机制的较好模型。
图1A-图lE为新西兰兔烫伤前后的HE染色观察比较图(100x)。其中 图1A是皮肤正常的HE染色状态图；图1B是I度(5S)烫伤HE染色状 态图；图1C是浅II度(13S)烫伤HE染色状态图；图'1D是深II度(19S) HE染色状态图；图1E是III度(25S)烫伤HE染色状态图。
具体实施例方式
以下结合实施例及附图对本发明作进一步的详细描述。 实验材料
选用成年雄性新西兰兔(第四军医大学实验动物中心)96只，体重2kg 土 500g。 OLYMPUS CX31显微镜及摄像系统(日本)，LEICA-2135型旋转 切片机(德国)，石蜡包埋切片机(上海)，BCD~218WH恒温水箱(广州)， 长直钳，医用纱布。 实验方法
纱布保温程度的检测——分别制备3 cmx3 cm的纱布25层、30层、 35层和40层各一块，用长直钳夹住两边，放入99'C的水浴锅里5分钟后放 入35 'C保温的脱脂棉上面停留21秒，以温度计检测保温效果最好的纱布块 做烫伤工具，最终确定最佳纱布层数。
表l不同纱布层数的保温效果纱布层数原始温度21秒后温度温度差
25层99 'C92 °C7 "C
30层99 。C93 。C6°C
35层99 'C94'C5 °C
40层99 °C94'C5 'C
最佳保温纱布层数，即达到最佳保温效果的最少纱布层数，如表1所示，35层和40层纱布的保温效果相同，因此，最终确定35层纱布为最佳层数。 烫伤过程——新西兰兔背部预先1天用8 %硫化钠脱毛。称重后以3 % 戊巴比妥钠(30 mg/k g)耳缘静脉注射麻醉。用长直钳夹住面积为3 c mx3 cm的35层纱布浸入热水中，待水温恒定于99 。C时，取出，立即平 铺于兔背部待烫部位，以纱布接触新西兰兔皮肤后开始计时，烫伤时间分别 为3 s 、 5 s 、 7 s 、 9 s 、 11 s 、 13 s 、 15 s 、 17 s 、 19 s 、 21 s 、 23 s 、 25 s 。创面用凡士林油纱加无菌棉球包扎，单笼饲养。伤后24h取标本，经 HE染色后，从组织病理学的角度对烫伤的程度进行分级，并判断烫伤深度， 以及有无毛囊、汗腺附件存在。统计学处理烫伤的分级结果与烫伤的时间， 经SPSS10.0软件进行Spearman's等级相关分析，i><0.05为差异有统计学意 义。
烫伤程度的观察与分析——如图1所示，从大体形态学上观察，烫伤后家 兔创面与正常组织的分界明显，创面明显高出正常皮肤。随着烫伤时间的延长， 创面潮湿、质感较硬，色泽渐暗，颜色由白至灰白。正常皮肤经过HE染色后， 可见清晰有序的表皮、真皮以及皮下组织(图1A)。烫伤5 s的新西兰兔，损 伤波^及表皮层，真皮以及皮下组织完好，为I度烫伤(图1B)。烫伤13 s的 新西兰兔，表皮内有水疱形成，部分剥落，真皮水肿、间质疏松，胶原纤维断 裂，为浅II度(图1C)。烫伤19s的新西兰兔，真皮层间质疏松、充血，胶 原纤维融合成片，嗜酸性染色性能减退，呈嗜双色性，大部分皮脂腺、汗腺、 毛囊被破坏，结构不清，真皮深部可见残余毛囊，真皮深层受损，仅残留深部 皮肤附件者为深II度(图1D)。烫伤25s的新西兰兔，除有深n度的损伤特 征外还有以下特征烫伤皮肤伤及到皮下脂肪，皮肤全层基本变为无细胞结构
的坏死性组织和坏死的脂肪组织为m度创面(图1E)。相关性分析表明，烫伤
程度与烫伤时间呈正相关(1=0.966，尸O.OOl)。
烫伤模型的建立——如表2所列，本发明以新西兰兔制作烫伤模型，筛 选出温度适合、时间较短的烫伤条件。烫伤温度为99°C，持续时间3s、 5
s即可作为新西兰兔I度烫伤模型；持续时间7 s 、 9 s 、 11 s 、 13 s即可作 为新西兰兔浅II度烫伤模型；持续时间15 s 、 17 s 、 19 s即可作为新西兰兔 深II度烫伤模型，愈合后有瘢痕生成；烫伤温度为99'C、持续时间21 s 、 23
s、 25s已超过新西兰兔深n度烫伤范围，应作为ni度烫伤范围。这种模型
建立方法简便、重复性好，为相关实验奠定了可靠的实验基础。
表2根据不同烫伤时间的新西兰兔烫伤模型分级(烫伤温度为99'C)
烫伤时间(s)烫伤分级有无毛囊、 汗腺附件标本数
I度有"7
5I度有8
浅II度有8
9浅n度有8
11浅II度有9
13浅n度有"7
15深n度有8
17深n度有.8
19深n度有
21m度无8
23m度无9
25m度无9
权利要求
1、一种制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于，包括下述步骤(1)选用25-40层方纱布块，放入99℃的水浴锅里5分钟后取出，再放入35℃保温的脱脂棉上面停留21秒，以温度计检测保温效果最好的纱布块；(2)取若干成年雄性新西兰兔，将新西兰兔背部提前一天脱毛，称重后对其耳缘静脉注射麻醉；(3)用长直钳夹住保温效果最好的纱布块浸入热水中，待水温恒定于99℃时，取出，立即平铺于新西兰兔背部脱毛部位，以纱布接触新西兰兔皮肤后开始计时，烫伤时间在3-25秒；(4)去除纱布，烫伤创面用凡士林油纱加无菌棉球包扎，并将新西兰兔单笼饲养；(5)烫伤后24h取标本进行HE染色，在烫伤温度均为99℃条件下，根据不同的烫伤时间，建立新西兰兔的烫伤模型烫伤时间3-5s为I度烫伤模型；烫伤时间7-13s为浅II度烫伤模型；烫伤时间15-19s为深II度烫伤模型；烫伤时间21-25s为III度烫伤模型。
2、 根据权利要求l所述的制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于， 所述保温效果最好的纱布块为3cm见方的35层。
3、 根据权利要求l所述的制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于， 所述烫伤时间取奇数秒，共计12个时间点。
4、 根据权利要求l所述的制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于， 所述新西兰兔背部脱毛采用8 %的硫化钠。
5、 根据权利要求l所述的制备新西兰兔烫伤模型的方法，其特征在于， 所述对新西兰兔耳缘静脉注射麻醉是使用3n/。戊巴比妥钠按新西兰兔体重30mg/k g的剂量进行的。
全文摘要
本发明公开了一种制备新西兰兔烫伤模型的方法，以医用纱布作为热载体，首先确定可持续保温的最佳纱布层数；将恒温热水浴中加热至99℃的纱布分别在新西兰兔背部烫3s-25s共计12个时间点；伤后24h取标本，经HE染色评价烫伤程度，并对烫伤的时间和程度作相关性分析，根据不同的烫伤时间建立烫伤模型为Ⅰ度烫伤模型的致伤时间3s～5s；浅Ⅱ度烫伤模型的致伤时间7s～13s；深Ⅱ度烫伤模型的致伤时间15s～19s；Ⅲ度烫伤模型的致伤时间21s～25s。本发明方法具有烫伤面积及深度控制准确，操作简便、重复性好的优点，是研究创伤修复机制的较好模型。
文档编号G09B23/00GK101344998SQ200810150748
公开日2009年1月14日 申请日期2008年8月29日 优先权日2008年8月29日
发明者军 于, 刘利兵, 周幸春, 张学策, 萍 曲, 芳 杨, 茹 铁 申请人:中国人民解放军第四军医大学