专利名称：一种可同时显示肌内神经和血管的肌肉标本制作方法
技术领域：
本发明涉及医学解剖学技术领域，是一种能够同时直观地显示肌内神经和 血管的肌肉标本制作方法。
背景技术：
在医学研究或教学中往往需要应用显示肌内神经和血管的标本，有关骨骼 肌肌内神经和血管的信息对于解剖学、生理学以至临床医师都是非常有用的。
关于肌内神经标本的制作方法，Sihler's肌内神经染色法是由Sihler在19 世纟己提出白勺(Sihler C. Uber Muskelspindeln und intramuskulare Nervenendigungen bei ScMangen und Froschen[J]. Arch Mikros Anat Entwickl, 1895, 46:709-723.) 。 lfc匕 后各国学者对这一方法进行了数次改良，并且命名为SiWer，s染色技术以纪念它 的发明者。Sihler's染色技术能在保持肌肉大体形态的情况下使整个标本变得透 明或者半透明，将神经主干及其分支染成蓝紫色，祌经在肌肉内的分布及走行 清晰可见。具体步骤为①固定10%的甲醛固定标本3周，液体变混浊时更 换液体；②浸软和除色素固定后的组织在流水下冲洗2小时，置入3%氢氧化 钾(每100毫升加入3%双氧水0.2毫升)，2 3天换液一次，直至肌肉淡黄色 褪尽，肌肉发白呈半透明，此过程一般需要2~3周；③脱钙肌肉流水下冲洗 半小时，入Sihler， sl溶液(冰醋酸1份，甘油2份，1%水合氯醛12份)每5 天换液一次，脱钙后的肌肉会丧失透明度或皱縮，此过程需要2 3周；④染色 脱钙后的肌肉流水下冲洗半小时，浸入Sihler， sll溶液(1份Ehrlich苏木素液，2份甘油，12份1%水合氯醛)，此过程约需2 3周；⑤脱色染色后，肌肉重
新入Sihler' sl溶液中，使肌肉纤维脱色，神经分支及肌肉内分支变成蓝紫色，
此过程约需20小时； 中和脱色后的肌肉流水下冲洗半小时，入0.05%碳酸 锂溶液(需要加热才能溶解)中浸泡2小时，屮间轻轻搅动数次；⑦透明中
和后的肌肉逐渐入40%， 60%， 80%， 100%甘油中，每一个浓度浸泡3天，最 后标本避光保存于100%甘油中。在最初的一段时间里，这种方法主要用来研究 喉部的小块肌肉，后来经过进一步的改良(Liu J， Kumar VP， Shen Y, et al. Modified Sihler's technique for studying the distribution of intramuscular nerve branches in mammalian skeletal muscle[J]. Anat Rec, 1997， 247(1):137-144,)，开始 用于人体比较扁阔的骨骼肌，取得了比较理想的效果。到目前为止，这一技术 被认为是研究肌内神经的最好方法。
关于肌内血管标本的制作方法，伦琴发现X线后，1896年Haschek在尸体 的手部血管里注射了白垩，拍摄了第一张血管造影照片。从那以后，各种各样 的造影剂被用来试验，其中硫酸钡和氧化铅是比较常用的。1920年Gough在血 管内注射了硫酸钡和乳胶的混合物，取得了成功。1936年，Salmon完善了氧化 铅灌注技术，曾一度代替了硫酸钡乳胶，被认为是研究细小血管网的标准技术。 1999年，钼耙拍照被引用到了硫酸钡造影中(Tan BK, Ng RTH， Tay NS. Tissue microangiography using a simplified barium sulphate cadaver injection technique [J]. A皿AcadMed Singapore, 1999, 28:152.)，使得这一技术重新得到了认可。至今， 硫酸钡乳胶灌注技术仍为研究血管的简单有效的方法。
但是上述标本的制作方法不能同时反映在同一块肌肉内的神经和血管的分布和走向，亦即或者制成肌内神经的分布标本，或者制成肌内血管的分布标本， 对某一块肌肉的肌内神经和血管的研究而言，只能采用取自两个不同个体的肌 肉或者同一个体两侧相应的肌肉分别制作标本，两个标本甚至是由不同的人制 作的，这样就不能很客观地反映同一块肌肉的肌内神经和血管的分布和走向及 其两者之间的相对位置。
Taylor (Taylor GI, Gianoutsos MP, Morris SF. The neurovascular territories of the skin and muscles: anatomic study and clinical implications[J]. Plast Reconstr Surg, 1994, 94(1):1-36.)于1994年进行了在同一块肌肉上研究肌内神经和血管的尝试， 他先在血管内注射了硫酸钡氧化铅混合物，拍一张X光片，再将肌内神经解剖 分离后用一种叫做multifilament computer link cable的细金属丝标记，再拍一张 X光片，然后将这两张X光片通过图片重叠，得到减影照片，以此作为同一块 肌肉内的神经和血管的信息。1999年Yang (Yang D, Morris SF. Neurovascular anatomy of the rectus femoris muscle related to functioning muscle transfer[J]. Plast Reconstr Surg, 1999, 104(1):102-106.)用相同方法研究了股直肌。这种方法虽然 取得了比较好的结果，但是显示肌内神经用的仍然是解剖分离的方法，不仅操 作繁琐，而且不能追踪到肌内神经的终末分支，并且直接的分离往往造成肌肉 纤维的损伤和破坏神经和肌肉之间的关系，不能客观地反映肌内神经和血管两 者之间的相对位置，所以还不是一种理想的方法。
发明内容
本发明提供一种利用同一块肌肉制作既能显示肌内神经又能显示肌内血管 的肌肉标本的方法。
51. 血管灌注带色乳胶
在新鲜尸体相关组织的血管内用生理盐水清除淤血后灌注带色的乳胶，通 常为红色乳胶，也可为蓝紫色以外的其他颜色乳胶，待乳胶凝固后分离出该组 织，分离时注意保留完整的血管神经蒂，此时该肌肉标本的血管被灌注成带色；
2. 肌内祌经染色
按Sihler，s肌内神经染色法，上述肌肉标本经固定、浸软和除色素、脱钙、 染色、脱色、中和以及透明各歩骤，使肌肉变成透明或者半透明，肌内神经呈 蓝紫色，该肌肉标本就能清晰地显示蓝紫色肌内神经和红色或区别于蓝紫色的 其他颜色的血管分布和走向；
3. 封存标本
将上述标本浸于100%甘油用玻璃盒封存。
本发明方法制作的肌肉标本形态完整，轮廓清晰，在同一块肌肉上就能够 清晰直观地显示肌内神经和血管的分布和走向，客观地反映肌内神经和血管两 者之间的相对位置，有利于医学研究或教学培训。
具体实施例方式
现结合实施例对本发明作详细描述。
实施例l:腓肠肌肌内神经血管标本的制作
1、乳胶灌注液的制备
液态乳胶(上海乳胶厂)加1%的红色色浆(上海一品色浆有限公司)充分 混合使液态乳胶呈红色，用六层脱脂纱布过滤将杂质残渣除去备用。
62、 新鲜尸体血管灌注
于新鲜尸体的胭窝上方10cm处离断小腿，分别向胭动脉、胭静脉内插管， 将生理盐水由腦动脉插管输入，胭静脉插管流出，以清除血管中的淤血，待静 脉流出液基本澄清后，停止输注，再用60ml注射器向胭动脉内灌注上述配制的 乳胶灌注液，至推注有弹性阻力时停止灌注，乳胶灌注量为34ml，结扎动脉血 管以防乳胶溢出。将小腿浸泡于福尔马林液，等待乳胶凝固。
3、 肌肉标本解剖分离
乳胶凝固后，按常规解剖显露腓肠肌，观察血管神经来源，将腓肠肌分离， 注意保留完整的血管神经蒂，此时肌内血管被灌注成红色。
4、 将上述标本进行Sihler's肌内神经染色
具体步骤如下
① 固定肌肉组织将上述肌肉标本浸于10%的甲醛3周，以固定肌肉组 织；
② 浸软和除色素将固定后的组织置入3%氢氧化钾，2 3天换液一次， 共换液8次，肌肉发白呈半透明；
③ 脱钙将上述呈半透明的肌肉在流水下冲洗半小时，置入Sihler'sl溶 液(冰醋酸1份，甘油2份，1%水合氯醛12份)，每5天换液一次， 共换液5次；
染色将上述脱钙后的肌肉在流水下冲洗半小时，浸入Sihler，sII溶液
(1份Ehrlich苏木素液，2份甘油，12份1%水合氯醛)染色3周； 脱色将上述染色后的肌肉重新浸入Sihler，sl溶液中，直至肌肉纤维
7脱色，祌经及其肌肉内分支呈蓝紫色；
⑥ 中和将上述脱色后的肌肉在流水下冲洗半小时，入0.05%碳酸锂溶液 中浸泡2小时；
⑦ 透明将上述中和后的肌肉依次入40%， 60%， 80°/。， 100%甘油中， 每一个浓度浸泡3天，最后标本避光保存于100%甘油中。
经过以上处理的肌肉标本，肌肉变为半透明，肌内神经和血管分别呈蓝紫色 和红色。
5、拍照及标本封装
将医用观片灯平放，肌肉标本置于观片灯上，可见肌肉的形态完整，轮廓清 晰，肌肉呈透明或者半透明，肌肉纤维呈淡蓝色，肌内神经被染成蓝紫色，经 过乳胶灌注的血管呈红色。这样在同一块肌肉上就能够清晰直观地显示肌内神 经和血管的分布和走向，同时也显示了神经和血管两者的相应位置。用数码相 机拍照后，将标本固定于有机玻璃盒内，加注100%甘油封存，避光保存。
根据需要，可按照上述方法制作各种可同时显示肌内神经和血管的肌肉标本。
权利要求
1.一种可同时显示肌内神经和血管的肌肉标本制作方法，步骤如下1)血管灌注带色乳胶在新鲜尸体相关组织的血管内用生理盐水清除淤血后灌注带色乳胶，待乳胶凝固后分离出该组织，分离时注意保留完整的血管神经蒂，此时该肌肉标本的血管被灌注带色；2)肌内神经染色按Sihler’s肌内神经染色法，上述肌肉标本经固定、浸软和除色素、脱钙、染色、脱色、中和以及透明各步骤，使肌肉变成透明或者半透明，肌内神经被染成蓝紫色；3)封存标本将上述标本浸于100％甘油用玻璃盒封存。
2. 按权利要求1所述的肌肉标本制作方法，其特征在于所说的带色乳胶为带红色的乳胶。
全文摘要
本发明涉及医学解剖学技术领域，是一种能够同时直观地显示肌内神经和血管的肌肉标本制作方法。将新鲜尸体相关组织的血管用生理盐水清除淤血后灌注带色乳胶，待乳胶凝固后分离出该组织，再进行Sihler’s肌内神经染色，使肌肉变成透明或者半透明，肌内神经被染成蓝紫色，同时肌内血管显示所灌注乳胶的颜色，最后将标本浸于100％甘油用玻璃盒封存。本发明方法制作的肌肉标本形态完整，轮廓清晰，在同一块肌肉上就能够清晰直观地显示肌内神经和血管的分布和走向，客观地反映肌内神经和血管两者之间的相对位置，有利于医学研究或教学培训。
文档编号G09B23/00GK101667352SQ20091019739
公开日2010年3月10日 申请日期2009年10月20日 优先权日2009年10月20日
发明者于大志, 党瑞山, 刘安堂, 竞 易, 华 江, 童 韩 申请人:中国人民解放军第二军医大学