专利名称：一种新型昆虫排卵用玻片的制作方法
技术领域：
本实用新型涉及一种家蚕等昆虫转基因过程中的排卵用玻片。
背景技术：
转基因昆虫研究是当今发展的前沿领域，不但可以用来研究新基因的功能，还可以用来改变昆虫的遗传结构，有利于进一步提高资源昆虫的利用率或开辟新的害虫防治途径。对于提高资源昆虫的利用率来说，主要以家蚕研究为主，长期以来人们一直专注于用家蚕作为生物反应器来生产异源蛋白质，早期的研究已经清楚证明家蚕是一种非常好的异源蛋白生产反应器。第一个报道的实例是用重组的编码人类干扰素 (alpha-interferon)的杆状病毒表达载体感染家蚕幼虫(Metal et al.，1985)。这个研究显示象这种人类蛋白也能够在家蚕中高水平地转录生产，并很容易从其血淋巴中纯化出所生产的蛋白。随后，家蚕幼虫被用来作为宿主成功生产了许多别的由杆状病毒编码的重组蛋白(Choudary et al. 1995)。除了被用来作为杆状病毒介导的异源基因表达宿主外，也有通过转基因家蚕来生产重组蛋白。这种方法牵涉到将外源基因插入到家蚕基因组中，随后分离在缺乏杆状病毒感染的情况下能永远表达外源基因产物的后代。转基因昆虫明显的优点就是在缺乏任何病毒感染的情况下可持久提供重组蛋白的源泉。目前将外源基因导入家蚕基因中主要有两种明显不同的方法，一种是通过杆状病毒作为载体来实现，通常效率较低，转基因后代低于0. (Yamao et al.，1999)。第二种方法是利用PiggyBac作为载体来实现的，转基因效率比前者提高十倍左右(Tamura et al. 2000)。这种方法已经被用来构建了转基因家蚕来编码和表达外源蛋白(Imamura et al. 2003 ；Inoue et al. 2005)。排卵是转基因昆虫方法中必须经历的步骤，然后才通过卵注射，筛选等鉴定出转基因个体。目前排卵方法通常是采用普通载玻片，在上排上若干卵，在卵一侧用胶固定。该方法所需操作时间长，而且用胶固定对卵有一定的伤害，影响卵的孵化率。
发明内容本实用新型目的在于设计一种新的玻片，以简化排卵方法，节省时间，提高所处理卵的孵化率。本实用新型的另一目的在于保护此种新型玻片在昆虫转基因过程中排卵的用途。本实用新型的目的可以通过以下技术方案来实现一种新型昆虫排卵用玻片，其特征在于所述玻片表面设有多条条状排列的突起， 突起右边设有多个半球形凹陷，凹陷紧贴突起的右边。突起高为0.05厘米-0.15厘米；突起厚为0.02厘米-0.08厘米；突起之间间隔为0. 57厘米-0. 63厘米。[0012]每条突起的旁边设有5-8个凹陷；玻片表面的突起为6-10条。凹陷表面直径为0.05-0. 12厘米，深度为0. 03-0. 07厘米。凹陷之间的间隔为0.3-0. 5厘米。如此设置排卵玻片好处在于方便排列卵，卵嵌在凹陷里，和玻片表面粘着更牢固， 卵左边有突起的条状突起挡着，可防止从卵右边注射时经常导致的卵的移位。使用此新型玻片，卵不需用胶水加固，杜绝了胶水与卵的接触，提高卵的孵化率。在玻片的另一面标示每一凹陷处。本实用新型提供的技术方案与现有技术相比，具有以下有益效果( 1)在排卵过程中，减少用黏胶在卵一侧加固的工序，提高排卵速率。(2)卵不需用胶水加固，杜绝了胶水与卵的接触，减少了对卵过多的人为操作，提
高其孵化率。( 3 )增加了每张玻片排卵数量，提高了卵的孵化效率。
图1为本实用新型提供的新型玻片的结构示意图。
具体实施方式
实施例11)家蚕品系为Wl-pnd，来自日本，用人工饲料饲养，温度控制在25°C左右。2)将雌雄蚕配对，用圆锥形罩杯将成对的雌雄蚕蛾罩在产卵用的纸上，使其卵集中产在纸的特定部位上。3)取部分卵(附在纸上)，先用自来水冲洗，再用水在培养皿里泡上10分中左右，此时很容易将卵从纸上分开，集中在培养皿里。4)普通常用排卵载玻片，无突起，无凹陷。5)用普通载玻片排卵用细毛笔将蚕卵均勻排在载玻片上，共8排，每排6粒卵，每个卵的卵孔部位朝上，每个卵的卵窝部位朝右，在每个卵的左侧和玻片间用木工胶涂上，使卵和玻片间粘着坚固，室内自然晾干后，用福尔马林熏蒸4分钟左右，进行卵表面消毒。普通排卵100粒约需时间为90分钟。6)在实体显微镜下进行显微注射，从卵右侧进行注射，注射后的卵孔用木工胶封上。7)注射后的蚕卵连着载玻片一起放进25°C的恒温箱中进行培养，观察孵化率等情况。孵化率为30%。实施例21)家蚕品系为Wl-pnd，来自日本，用人工饲料饲养，温度控制在25°C左右。2)将雌雄蚕配对，用圆锥形罩杯将成对的雌雄蚕蛾罩在产卵用的纸上，使其卵集中产在纸的特定部位上。3)取部分卵(附在纸上)，先用自来水冲洗，再用水在培养皿里泡上10分中左右，此时很容易将卵从纸上分开，集中在培养皿里。4)新设计的载玻片该薄片长7. 6厘米，宽3. 6厘米，厚0. 1厘米；玻片表面设有10条条状突起，每条突起高0. 08厘米，突起厚0. 05厘米，突起之间间隔为0. 6厘米，最左边的突起距离玻片左边缘1厘米，最右侧的一条距离玻片右边缘0. 7厘米；紧贴着每条嵴的右边有6个半球形的凹陷，每凹陷表面直径为0.12厘米，深0.05厘米，各凹陷之间的间隔，及上下顶端凹陷距离玻片上下边缘的间隔均为0. 41厘米；在玻片的另一面，对着每一凹陷处，用红色漆标示。5)用新设计的载玻片排卵用细毛笔在条状突起右边的每凹陷里排入一个卵，共 10排，每排6粒卵，卵嵌在凹陷里，紧贴着条状突起。每个卵的卵孔部位朝上，每个卵的卵窝部位朝右，室内自然晾干后，用福尔马林熏蒸4分钟左右，进行卵表面消毒。本实用新型排卵100粒约需时间为45分钟。6)在实体显微镜下进行显微注射，从卵右侧进行注射，注射后的卵孔用木工胶封上。7)注射后的蚕卵连着载玻片一起放进25°C的恒温箱中进行培养，观察孵化率情况。孵化率为40%。
权利要求1.一种新型昆虫排卵用玻片，其特征在于所述玻片表面设有多条条状排列的突起，突起右边设有多个半球形凹陷，凹陷紧贴突起的右边。
2.如权利要求1所述的玻片，其特征在于所述突起高为0.05厘米-0. 15厘米；所述突起厚为0. 02厘米-0. 08厘米；突起之间间隔为0. 57厘米-0. 63厘米。
3.如权利要求1所述的玻片，其特征在于所述凹陷表面直径为0.05厘米-0. 12厘米， 深度为0. 03厘米-0. 07厘米。
4.如权利要求3所述的玻片，其特征在于所述凹陷之间的间隔为0.3厘米-0. 5厘米。
5.如权利要求1所述的玻片，其特征在于在玻片的另一面标示每一凹陷处。
6.如权利要求1所述的玻片，其特征在于每条突起的右边设有5-8个凹陷；突起为 6-10 条。
专利摘要本实用新型涉及一种家蚕等昆虫转基因过程中的排卵用玻片。本实用新型是在普通排卵玻片表面设有多条条状排列的突起，突起右边设有多个半球形凹陷，凹陷紧贴突起的右边。如此设置排卵玻片好处在于方便排列卵，卵嵌在凹陷里，和玻片表面粘着更牢固，卵左边有突起的条状突起挡着，可防止从卵右边注射时经常导致的卵的移位。使用此新型玻片，卵不需用胶水加固，杜绝了胶水与卵的接触，提高卵的孵化率，同时在排卵过程中，减少用黏胶在卵一侧加固的工序，提高排卵速率，简化排卵方法。
文档编号G02B21/34GK202008548SQ201120017530
公开日2011年10月12日 申请日期2011年1月20日 优先权日2011年1月20日
发明者王方海 申请人:中山大学