专利名称：一种艾滋病疫苗及其制备方法与应用的制作方法
技术领域：
本发明涉及用生物工程技术制备的疫苗及其制备方法与应用，特别是涉及一种艾滋病疫苗及其制备方法与应用。
艾滋病又称获得性免疫缺陷综合征，是由人类免疫缺陷病毒(HIV)引起的一种免疫性疾病。由于其传播迅速、疾病死亡率极高，且目前尚无特效治疗，更无疫苗可以预防，因而有“世纪瘟疫”之称。
现有的用于临床的抗艾滋病药物仅能推迟发病期和延长病人的生命，并且价格昂贵，毒性大。本发明的发明人研究发现，多表位的表位多肽能够诱导高滴度的、预先定义的、多中和表位特异性的中和抗体，该理论对研究制造艾滋病疫苗具有指导意义。同时，国外抗艾滋病药物临床研究结果证明，针对HIV-1膜蛋白gp160上的几个特定中和表位的中和抗体(单克隆抗体)在被动免疫治疗中的组合使用能抑制HIV-1病毒的粘膜传染以及母婴传播，并能清除血液中的HIV-1病毒(Nature Medicine 1999，5204；Nature Medicine 2000，6200；Nature Medicine 1999，5211)，这表明几种中和抗体的组合使用是一种有效的艾滋病免疫治疗战略。
本发明的目的是提供一种有效的艾滋病疫苗。
本发明的另一个目的是提供一种制备上述艾滋病疫苗的方法。
本发明的再一目的是提供上述艾滋病疫苗在生产治疗艾滋病的药物中的应用。
为实现上述目的，本发明采取以下设计方案一种艾滋病疫苗，它基本上包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的表位多肽，所述表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个表位，或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个且又至少一次重复的表位。
所述人免疫缺陷病毒膜蛋白为gp160。
所述中和表位及其变异表位的氨基酸残基序列可以选自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
为了诱导强免疫应答，所述疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
一种制备艾滋病疫苗的方法，基本上包括以下步骤(1)、人工合成至少一条分别含有人免疫缺陷病毒膜蛋白的至少一个中和表位及其变异表位或者至少一次重复的至少一个中和表位及其变异表位的表位多肽；(2)、将上述表位多肽分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物；(3)、将上述耦联物配以可接受的佐剂制备成艾滋病疫苗。
具体地说，上述该制备艾滋病疫苗的方法中人免疫缺陷病毒膜蛋白为gp160，并且其中的中和表位及其变异表位的氨基酸残基序列可选自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD一种治疗艾滋病的药物，由上述艾滋病疫苗为主要活性成分，配以药用佐剂组成。
根据本发明的发明人最先提出的表位疫苗的理论(Immunology Today，20588-589，1999年12月；Immunobiology，201323-331，1999年12月；Scand.J.Immunology.2000年，51497-501；Int.Arch.Allergy Immunology，2000年，12180-84)，本发明的艾滋病疫苗是一种能刺激人体对艾滋病病毒产生多方位抗体的多联疫苗，即使在艾滋病病毒产生变异的情况下，注射了该疫苗的人体内也会有相应的抗体来杀灭入侵的病毒，产生的抗体量为10-240毫克/毫升血清。同时该疫苗的有效成分是耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的包含有人免疫缺陷病毒膜蛋白gp160上的中和表位或变异表位的表位多肽，这些表位多肽不具有艾滋病病毒的遗传活性，没有复性并诱发艾滋病的可能。
研究表明，抗艾滋病病毒的抗体在艾滋病治疗中能降低病毒的载量，延缓疾病的进行。本发明创造性地将HIV-1的多联—表位疫苗、多表位—表位疫苗和抗变异—表位疫苗用于艾滋病的治疗，不但无毒性，而且在提高艾滋病的免疫治疗效果的同时，还可降低艾滋病治疗成本。
根据本发明，可以按照艾滋病病毒的变异情况，很快生产出其相应类型的疫苗，不需进行长时间的试验，降低生产成本。该技术将对世界预防医学研究产生重大影响，并将带来巨大的经济效益和社会效益。
下面结合非限制性具体实施例对本发明作进一步说明。
实施例一制备以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的艾滋病单表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160中1个主要中和表位为基础的1条表位多肽。其序列为C-GPGRAFYGGPGRAFYGGPGRAFY2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)将上述表位多肽与载体蛋白BSA耦联；3.将耦联物配以铝佐剂制备成HIV-1单表位—表位疫苗。
实施例二制备以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的艾滋病单表位—多联—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的3条表位多肽。这3条表位多肽的序列为C-ELDKWAG ELDKWAG ELDKWAG ELDKWAC-GPGRAFYGGPGRAFYGGPGRAFYC-RILAVERYLKDGRILAVERYLKD2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinimide ester)分别将上述表位多肽与载体蛋白BSA耦联；3.将3种耦联物混合后配以铝佐剂制备成HIV-1多联—表位疫苗，其中，各种耦联物的加入量由适用人群的统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
实施例三制备以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的艾滋病多表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的1条多表位—表位多肽，其序列为CGELDKWAGGPGRAFYG ELDKWAGGPGRAFY2.利用戊二醛将上述多表位—表位多肽与载体蛋白牛血清白蛋白耦联；3.将上述耦联物配以铝佐剂制备成HIV-1多表位—表位疫苗。
实施例四制备以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的艾滋病多联—多表位—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位为基础的3条多表位—表位多肽。这3条多表位—表位多肽的序列为CELDKWAGGPGRAFYG ELDKWAGGPGRAFYCGPGRAFYGELDKWAGRILAVERYLKD
CGPGRAFYGRILAVERYLKDGGPGRAFY2.利用戊二醛将上述3条多表位—表位多肽分别与载体蛋白牛血清白蛋白耦联；3.将3种耦联物分别配以铝佐剂制备成HIV-1多表位—表位疫苗，其中，各种耦联物的加入量由适用人群的统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
实施例五制备以HIV-1 gp160主要中和表位及变异中和表位为基础的艾滋病抗变异—多联—表位疫苗1.人工合成以HIV-1 gp160主要中和表位及变异中和表位为基础的变异表位—表位多肽，这些变异表位—表位多肽的序列为CELDKWAGELDKWAGELDKWAGELDKWACELEKWAGELEKWAGELEKWAGELEKWACELDEWAGELDEWAGELDEWAGELDEWACELNKWAGELNKWAGELNKWAGELNKWACGPGQTFYGGPGQTFYGGPGQTFYCGPGQAWYGGPGQAWYGGPGQAWYCGPGQAWYGELNKWAGGPGQAWYGELNKWA2.利用MBS(m-maleimidobenzoyl-N-hydroxy succinmide ester)将这些变异表位—表位多肽分别与载体蛋白BSA耦联；3.将上述耦联物混合后配以铝佐剂制备成HIV-1抗变异—表位疫苗，其中，各种耦联物的加入量由适用人群的统计学处理得出的各位点的变异机率进行调整。
上述各实施例中的抗艾滋病疫苗可以作为制备治疗艾滋病药物的基本活性成分，在将上述各实施例的疫苗用作治疗艾滋病的药物时，可以根据情况配以适当的佐剂，具体用量可根据不同人的情况来进行调整。
权利要求
1.一种艾滋病疫苗，它基本上包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的表位多肽，所述表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个表位，或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个且又至少一次重复的表位。
2.根据权利要求1所述的一种艾滋病疫苗，其特征在于所述人免疫缺陷病毒膜蛋白为gp160。
3.根据权利要求1或2所述的一种艾滋病疫苗，其特征在于所述中和表位及其变异表位的氨基酸残基序列选自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
4.根据权利要求1或2所述的一种艾滋病疫苗，其特征在于所述疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
5.根据权利要求3所述的一种艾滋病疫苗，其特征在于所述疫苗中还包括可接受的药用佐剂。
6.一种制备艾滋病疫苗的方法，基本上包括以下步骤(1)、人工合成至少一条分别含有人免疫缺陷病毒膜蛋白的至少一个中和表位及其变异表位或者至少一次重复的至少一个中和表位及其变异表位的表位多肽；(2)、将上述表位多肽分别耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物；(3)、将上述耦联物配以可接受的佐剂制备成艾滋病疫苗。
7.根据权利要求6一种制备艾滋病疫苗的方法，其特征在于所述人免疫缺陷病毒膜蛋白为gp160。
8.根据权利要求6或7一种制备艾滋病疫苗的方法，其特征在于所述中和表位及其变异表位的氨基酸残基序列选自GPGRAFYGPGQTFYGPGQAWYELDKWAELEKWAELNKWAELDEWARILAVERYLKD
9.一种治疗艾滋病的药物，由权利要求1或2中的任何一种物质为主要活性成分，配以药用佐剂组成。
10.一种治疗艾滋病的药物，由权利要求3中的任何一种物质为主要活性成分，配以药用佐剂组成。
全文摘要
本发明公开了一种艾滋病疫苗,它的制备方法及其应用,本发明的疫苗基本上包括至少一个耦联到载体蛋白或载体多肽上形成耦联物的表位多肽,该表位多肽含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个表位,或者含有人免疫缺陷病毒膜蛋白中和表位及其变异表位中的至少一个且做至少一次重复的表位。它的制备方法基本上包括以下步骤:(1)人工合成多肽;(2)将上述多肽耦联到载体蛋白或载体多肽上;(3)配以佐剂制备成疫苗。该疫苗可以用来作为治疗艾滋病的药物。
文档编号C07K14/16GK1339320SQ0012348
公开日2002年3月13日 申请日期2000年8月18日 优先权日2000年8月18日
发明者陈应华, 丁健, 陆韵 申请人:清华大学