专利名称：一种落新妇苷的制备方法
技术领域：
本发明涉及一种从中药材黄杞叶(Engelhardria roxburghiana Wall)中制备落新妇苷的方法。
背景技术：
落新妇苷(astilbin)3，3，4’，5，7-pentahydroxyflavanone3-(6-deoxy-(L-mannopyranoside))是一种黄酮类化合物，1950年由KozoHayashi和Kazuhiko Ouchi首次从植物落新妇中提取得到。落新妇苷的结构式如下 文献报道，落新妇苷具有杀虫(Pest Manag.Sci.2002；58503-507)、抑制辅酶A还原酶(Zhonghua Yi Xue Za Zhi(Taipei)2001；64382-387)、抑制醛糖还原酶(Biosci.Biotechnol.Biochem.1997；61651-654，)、肝保护(Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids 1997；56331-334)、镇痛、抗水肿(Arzneimittelforschung 2000；50281-285)、抗氧化(Biosci.Biotechnol.Biochem.1996；60513-515)等活性，落新妇苷还能显著改善免疫性肝损伤(Eur.J.Pharmacol.1999；37793-100；J.Pharm.Pharmacol.2004，56495-502)，诱导PHA活化的Jurkat细胞凋亡(Pharmacol.Res.2001；44135-139)，通过抑制活化T淋巴细胞的功能来抑制迟发型超敏反应和治疗小鼠胶原型关节炎(Inflamm Res.2003；52(8)334-40.J.Pharm.Pharmacol.2003；55691-696)等。
目前落新妇苷的主要来源是从中药材土茯苓或落新妇中提取，土茯苓中落新妇苷的含量由于品种、产地、产收季节的不同，含量在0.1％-2.0％不等。而在中国广西、贵州等地生长的黄杞树，其树叶中所含的落新妇苷量，均数倍于土茯苓中的含量，而黄杞树叶在当地长期仅被作为茶叶使用，显然浪费了宝贵的资源。
发明内容
1、发明目的本发明的目的是提供一种可大量获得落新妇苷的简单易行的可用于工业化生产的落新妇苷的制备方法。
2、技术方案本发明所述的落新妇苷的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将黄杞叶药材粉碎后依次经过浓度为90％-95％(重量)的乙醇与浓度为20％-80％(重量)的乙醇渗漉提取；(2)将步骤(1)中用90％-95％的乙醇提取所得提取液经石油醚脱脂后浓缩成浸膏，浸膏醇沉；(3)将步骤(2)中所得母液与步骤(1)中用20％-80％的乙醇提取所得提取液合并浓缩后，用乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯萃取，萃取物进行醇沉；(4)将步骤(2)与步骤(3)所得沉淀物合并溶解后，过大孔吸附树脂或聚酰胺柱，用浓度为20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干溶剂得落新妇苷粗品，再经重结晶得落新妇苷纯品；(5)将所得重结晶母液再次过大孔吸附树脂或聚酰胺柱，用20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干溶剂后再经重结晶得落新妇苷纯品。
在步骤(1)中，提取前将药材粉碎成粗粉；所用90％-95％的乙醇水溶液，其用量是所用药材重量的13倍至20倍，优选15倍；所用20％-80％的乙醇水溶液，其用量是所用药材重量的5倍至15倍，优选7倍；药材的浸泡时间是2-12小时，渗漉提取时间是1-12小时，优选3-10小时，更优选5-8小时。
在步骤(2)中，石油醚用量是所用药材重量的1-4倍重量，优选2-3倍重量，最优选2倍重量；浸膏醇沉中所用乙醇是各种浓度的乙醇水溶液，加入乙醇水溶液沉淀后，混合液中的乙醇最终浓度可以是0-95％重量，优选20％-80％重量，最优选50％重量。
在步骤(3)中，浓缩液的体积是所用药材体积的0.2-1倍，优选0.5倍；萃取用乙酸乙酯液可以是含0％-20％(体积)乙醇的乙酸乙酯液，最优选含10％(体积)乙醇的乙酸乙酯溶液；乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯的用量是所用药材重量的1-4倍，优选2-3倍，最优选2.5倍。
在步骤(4)中，所用吸附树脂是聚酰胺或各种型号的大孔吸附树脂，优选大孔吸附树脂，更优选非极性大孔吸附树脂；洗脱液是浓度20％-80％(重量)的乙醇水溶液，优选20％-70％的乙醇水溶液，最优选30％重量；重结晶所用溶剂可以采用水或有机溶剂，有机溶剂可以采用乙醇、甲醇、氯仿或乙酸乙酯等各种常用有机溶剂，优选乙醇水溶液，最优选50％重量乙醇水溶液；重结晶的次数可以是1-5次，优选两次。
3、有益效果采用本发明的落新妇苷提取方法，(1)从黄杞叶中提取落新妇苷，提取得率在50％以上，落新妇苷的纯度在90％以上。(2)采用本发明方法所得的落新妇苷，经按《中华人民共和国药典》2005版一部高效液相色谱法进行测定，结果表明，提取物中落新妇苷的含量高于90％，表明本发明工艺可行。(3)本发明的落新妇苷提取方法，具有提取工艺简单，成本低，提取率高，提取得到的落新妇苷单体纯度高等特点，适用于工业化生产。
具体实施例方式
下面是本发明的实施例，但本发明不仅限于所述实施例。
实施例1将黄杞叶药材粉碎成粗粉，用药材重量10倍的95％乙醇与15倍量的80％乙醇分别渗漉提取，收集渗漉液。95％乙醇提取液用石油醚脱脂后，浓缩至浸膏，加入乙醇使溶液浓度为20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀，分取沉淀，母液与80％乙醇提取液合并，浓缩至每毫升3克生药，用相当于生药2倍量的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物浓缩至浸膏，加入乙醇水溶液使溶液浓度为20％的乙醇水溶液，溶解后放置析沉淀。分取沉淀，将两次醇沉所得沉淀合并，水溶解后过聚酰胺柱，用蒸馏水洗涤柱床，用60％重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后，20％重量乙醇水溶液重结晶得落新妇苷，重结晶后母液挥去醇后再过聚酰胺柱，60％重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后再用20％重量乙醇水重结晶。得落新妇苷，提取率为51.4％，落新妇苷含量为90％。
实施例2将黄杞叶药材粉碎成粗粉，用药材重量15倍90％乙醇与10倍量的60％乙醇分别渗漉提取，收集90％乙醇提取液与60％乙醇提取液，90％乙醇提取液用石油醚脱脂后将提取液浓缩至浸膏，加入乙醇使溶液浓度为60％重量的乙醇水溶液，溶解，放置析沉淀，60％乙醇提取液与前述醇沉后母液合并，浓缩后用含5％乙醇的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯萃取物浓缩至浸膏后加入乙醇使乙醇浓度为60％，溶解后放置析沉淀，将两次醇沉所得沉淀合并，水溶解后过LSA-10大孔树脂(西安兰深生产)柱，用70％乙醇溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后，60％乙醇重结晶得落新妇苷单体，重结晶后母液挥去醇后再过LSA-7大孔树脂柱，70％乙醇洗脱，洗脱液挥去溶剂后再用60％乙醇重结晶。得落新妇苷，含量为90％，提取率为53.5％。
实施例3黄杞叶药材粉碎，用药材重量20倍95％乙醇与8倍量20％乙醇梯度渗漉提取，分别收集95％乙醇提取液与40％乙醇提取液，95％乙醇提取液用石油醚脱脂后将提取液浓缩至浸膏，水溶解后放置析沉淀，40％乙醇提取液与前述醇沉后母液合并浓缩后用含20％乙醇的乙酸乙酯萃取，乙酸乙酯部位浓缩至浸膏后加入乙醇使乙醇浓度为80％，溶解后放置，将两次醇沉所得沉淀合并，水溶解后过聚酰胺柱，用50％乙醇溶液洗脱，洗脱液挥去溶剂后，70％乙醇重结晶得落新妇苷单体，重结晶后母液挥去醇后再过聚酰胺柱，50％乙醇洗脱，洗脱液挥去溶剂后再用70％乙醇重结晶。得含量为90％的落新妇苷，提取率为52.8％。
实施例4落新妇苷纯度测定实验。取上述提取方法制备得到的落新妇苷单体适量，甲醇溶解定容于容量瓶中，微孔滤膜过滤后，注入高效液相色谱仪中，用《中华人民共和国药典》2005年一部高效液相色谱法测定含量。
色谱条件Water 600高效液相色谱仪，Waters 2487紫外检测器；色谱柱∶Symmetry C18柱(4.6mm×250mm，5μm)；流动相∶甲醇-冰醋酸-水(45∶1∶54)；检测波长291nm；柱温30℃；流速1ml/min；进样量5μl。
对照品落新妇苷，自制，无色针状结晶，mp182～186℃，经UV、IR、1H-NMR、13C-NMR、MS等测定，其数据与文献报道一致，鉴定为落新妇苷。TLC图谱上为单一斑点，HPLC检测为单峰，归一化含量在99％以上。
按上述方法测定，提取物中落新妇苷的含量在90％以上。
综上所述，本发明的落新妇苷提取方法，能有效地从含落新妇苷的药材中提取得到落新妇苷，提取物中落新妇苷含量均高于90％以上，而且工艺简单可行，成本低，适用于工业化生产。
如上描述了本发明所公开的落新妇苷的提取方法。但需理解其中包含了本领域技术人员所理解的变化和改变。这些变化和改变也包含在权利要求所限定的本
权利要求
1.一种落新妇苷的制备方法，其特征在于该方法包括以下步骤(1)将黄杞叶药材粉碎后依次经过浓度为90％-95％(重量)的乙醇与浓度为20％-80％(重量)的乙醇渗漉提取；(2)将步骤(1)中用90％-95％的乙醇提取所得提取液经石油醚脱脂后浓缩成浸膏，浸膏醇沉；(3)将步骤(2)中所得母液与步骤(1)中用20％-80％的乙醇提取所得提取液合并浓缩后，用乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯萃取，萃取物进行醇沉；(4)将步骤(2)与步骤(3)所得沉淀物合并溶解后，过大孔吸附树脂或聚酰胺柱，用浓度为20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干溶剂得落新妇苷粗品，再经重结晶得落新妇苷纯品；(5)将所得重结晶母液再次过大孔吸附树脂或聚酰胺柱，用20％-80％(重量)的乙醇水溶液洗脱，洗脱液挥干溶剂后再经重结晶得落新妇苷纯品。
2.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，所用90％-95％的乙醇水溶液，其用量是所用药材重量的13-20倍。
3.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，所用20％-80％的乙醇水溶液，其用量是所用药材重量的5-15倍。
4.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(1)中，药材的浸泡时间是2-12小时，渗漉提取时间是1-12小时。
5.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(2)中，石油醚用量是所用药材重量的1-4倍。
6.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，浓缩液的体积是所用药材体积的0.2-1倍。
7.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(3)中，乙酸乙酯或含乙醇的乙酸乙酯的用量是所用药材重量的1-4倍。
8.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，所用吸附树脂是聚酰胺或各种型号的大孔吸附树脂。
9.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，洗脱液是浓度20％-80％(重量)的乙醇水溶液。
10.根据权利要求1所述的一种落新妇苷的制备方法，其特征在于在步骤(4)中，重结晶所用溶剂可以采用水或有机溶剂，有机溶剂可以采用乙醇、甲醇、氯仿或乙酸乙酯有机溶剂；重结晶的次数可以是1-5次。
全文摘要
本发明公开了一种含落新妇苷的制备方法，该方法的步骤是将药材粉碎，经过两种浓度乙醇水溶液分别渗漉提取，90％－95％重量的乙醇水提取液经石油醚脱脂后浓缩成浸膏，浸膏醇沉后，其母液与20％－80％重量乙醇水提取液合并，浓缩后用含乙醇的乙酸乙酯液萃取，萃取物经醇沉后与前述沉淀混合，溶解后过大孔吸附树脂或聚酰胺柱，20％－80％重量乙醇水溶液洗脱，洗脱液经重结晶后得落新妇苷。采用本发明方法，从黄杞叶中提取落新妇苷，提取得率在50％以上，落新妇苷的含量在90％以上；本方法具有简便，成本低，得率高，提取得到的落新妇苷纯度高，适用于工业化生产等优点。
文档编号C07H1/00GK1724552SQ20051004094
公开日2006年1月25日 申请日期2005年7月8日 优先权日2005年7月8日
发明者陈婷, 姚毅, 徐强 申请人:南京大学