专利名称：一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法及其制成的落新妇苷的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法及其制成的落新妇苷。
背景技术：
目前，从土茯苓中提取落新妇苷的方法，是采用传统的热回流提取或渗漉、高温浓缩、再经大孔吸附树脂或聚酰胺柱纯化的方法。例如，中国发明专利号200510040944. 2公开了一种含落新妇苷的制备方法，中国发明专利申请号200910057058. 9提供了两种从土茯苓中制备落新妇苷的方法，中国发明专利申请号201010296335. 4涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，中国发明专利 申请号201010603971. 7涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，上述专利或申请公开是采用传统的热回流提取或渗漉，经高温浓缩，再经大孔吸附树脂或聚酰胺柱纯化的方法。由于落新妇苷长时间高温提取和浓缩过程容易引起氧化，而且存在提取过程繁琐、提取温度高、时间长、提取率低、耗能高、杂质多、纯化方式复杂、污染大的缺点。
发明内容
本发明的目的是针对上述存在问题，提供一种提取过程简单方便、提取温度低、提取时间短、提取率高、耗能少、杂质少、无污染的从土茯苓中提取落新妇苷的方法及其制成的落新妇苷。本发明，提取步骤包括
A)、取土茯苓药材洗净后粉碎过1(Γ40目筛，加入浓度为4(Γ80%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材乙醇水溶液=1 :8 16，浸泡O. 5 Ih后，采用频率26 40 KHz的超声波以低温温度20 50°C提取1(T60 min后经常规过滤得提取液；
B)、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液乙酸乙酯=1:广4，搅拌混匀后萃取，反复萃取次1飞次，合并乙酸乙酯层；
C)、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20 40°C真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩
液；
D)、将上述的浓缩液加入浓度为3(Γ70%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药O. 25 lg/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液；
E)、将上述的浓缩药液在温度4 25°C结晶，离心取结晶物得到落新妇苷粗品，反复结晶后得到落新妇苷湿纯品；
F)、上述落新妇苷湿纯品经低温干燥后得到含水量<5%的落新妇苷纯品。本发明，所述的一级膜为微滤膜，膜孔径为20(T2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为800(Tl00000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为10(T500Dal的纳滤膜。本发明,所用中药材土获茶为百合科植物光叶菝葜Smilax glabra Roxb.的干燥根茎，是一种常用的清热中药，具有解毒、除湿、利关节等功效，用于治疗湿热淋浊、带下、痈肿、瘰疬、疥癣、梅毒及汞中毒所致的肢体拘挛、筋骨疼痛。现代药理实验表明土茯苓具有抗菌、抑制肿瘤细胞增殖、保护肝细胞及心血管系统等多种活性。土茯苓中主要的活性成分为落新妇苷。本发明，所涉及药物落新妇苷，英文名=Astilbin，别名花旗松素-3-0-a -L-批喃鼠李糖苷，是一种二氢黄酮类化合物，为土茯苓的主要有效成分。落新妇苷是1950年由Kozo Hayashi和Kazuhiko Ouchi首次从植物落新妇中提取得到的化合物,据文献报道,落新妇苷具有多种显著的生物学活性，包括抑制辅酶A还原酶，抑制醛糖还原酶，保护肝脏，镇痛，抗水肿等。近年又来有报道称落新妇苷有显著的选择性免疫抑制作用，且它的选择性作用与以往的免疫抑制剂相比具有明显优势，因此可以作为一种新的免疫抑制剂用于免疫相关疾病的治疗。本发明，与现有技术相比，具有如下积极效果
1)、采用超声波提取，提取时间显著缩短，是传统乙醇渗漉提取方法的1/6 1/12;提取得率大大提高；提取温度相对传统高温煎煮温度降低了 30 60°C;杂质减少；提高含量，有利于分离纯化，综合能耗降低，是传统提取设备的1/3 1/6，解决了因为土茯芩含淀粉比较多，如果提取温度过高容易产生糊精，影响后工序的纯化的问题；
2)、通过采用微滤、超滤及纳滤的三级膜分离和浓缩，避免物质破坏，不存在化学反应，不用加热，节约能源，还对热敏感氧化的物质有很好的保护作用，相对传统的大孔吸附树脂或聚酰胺柱纯化的方法效率高、无污染、没有三废产品。本发明，具有提取过程简单方便、提取温度低、提取时间短、提取率高、耗能少、杂质少、无污染的优点。
具体实施例方式实施例I :一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，包含以下步骤
A)、取土茯苓药材洗净后粉碎过20目筛，加入浓度为60%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材乙醇水溶液=1 :10，浸泡O. 5h后，取容积30L的料液，采用功率1500±10%W，频率26 40 KHz的超声波，转速3 16r/min，以低温温度20 50°C提取30min后经常规过滤得提取液；
B)、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液乙酸乙酯=1:1，搅拌混匀后萃取，反复萃取次3次，合并乙酸乙酯层；
C)、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20 40°C真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩
液；
D)、将上述的浓缩液加入浓度为50%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药O.25 lg/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液；一级膜为微滤膜，膜孔径为20(T2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为800(Tl00000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为10(T500Dal的纳滤膜，收取得到浓缩药液；
E)、将上述的浓缩药液在温度4 25°C结晶，离心取结晶物得到落新妇苷粗品，反复结晶后得到落新妇苷湿纯品；F)、上述落新妇苷湿纯品经低温干燥后得到含水量< 5%的落新妇苷纯品。实施例2 : —种落新妇苷，由以下步骤提取得到
A)、取土茯苓药材洗净后粉碎过20目筛，加入浓度为60%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材乙醇水溶液=1 :10，浸泡O. 5h后，取容积30L的料液，采用功率1500±10%W，频率26 40 KHz的超声波，转速3 16r/min，以低温温度20 50°C提取30min后经常规过滤得提取液；
B)、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液乙酸乙酯=1:1，搅拌混匀后萃取，反复萃取次3次，合并乙酸乙酯层；
C)、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20 40°C真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩
液；
D)、将上述的浓缩液加入浓度为50%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药O.25 lg/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液；一级膜为微滤膜，膜孔径为20(T2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为800(Tl00000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为10(T500Dal的纳滤膜，收取得到浓缩药液；
E)、将上述的浓缩药液在温度4 25°C结晶，离心取结晶物得到落新妇苷粗品，反复结晶后得到落新妇苷湿纯品；
F)、上述落新妇苷湿纯品经低温干燥后得到含水量<5%的落新妇苷纯品。本发明，所获得的落新妇苷纯品可制成片剂、胶囊、颗粒剂、粉剂或针剂等。本发明，通过正交试验得出超声波提取的最佳工艺条件；在对单因子分析和试验的基础上，对影响落新妇苷提取效果的几个因素，着重考虑提取时间、提取温度、提取次数及乙醇浓度四个因素。试验结果表明，落新妇苷的最佳提取条件是时间30分钟，温度40°C，次数2次，乙醇水溶液60%。本发明，微滤膜选用偏聚氟乙烯材料，膜孔径为200nm。目的是去除浓缩液中的悬浮物颗粒及部分蛋白质等大分子物质。结果表明采用滤膜对提取液进行除杂，能够去除23. 22^25. 74%固形物质，蛋白质的去除率为14. Γ16. 84%，落新妇苷的透过率为96. 54 99. 12%。本发明，超滤膜选用聚醚砜材料，截留分子量为13000Dal。目的是去除浓缩液中的更多悬浮物颗粒和多糖、果胶及蛋白质等大分子物质。结果表明采用超滤膜对提取的浓缩液进行除杂，能够去除73. If76. 25%固形物质，蛋白质的去除率为80. 23^87. 93%，落新妇苷的透过率为90. (Γ92. 14%。本发明，纳滤膜选用聚醚砜材料，截留分子量为300Dal。目的是希望去除料液中的无机盐、水份及乙醇等小分子物质，浓缩落新妇苷。结果表明采用纳滤膜对超滤液进行除杂，能够去除95. 2%无机盐，落新妇苷的截留率达96. 22^99. 8%。本发明，采用低温超声波提取工艺，与传统高温浓缩的实验比较，结果见下表
权利要求
1.一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法，包含以下步骤 A)、取土茯苓药材洗净后粉碎过1(Γ40目筛，加入浓度为4(Γ80%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材乙醇水溶液=1 :8 16，浸泡O. 5 Ih后，采用频率26 40 KHz的超声波以低温温度20 50°C提取1(T60 min后经常规过滤得提取液； B)、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液乙酸乙酯=1:广4，搅拌混匀后萃取，反复萃取次1飞次，合并乙酸乙酯层； C)、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20 40°C真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩液； D)、将上述的浓缩液加入浓度为3(Γ70%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药 O. 25 lg/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液； E)、将上述的浓缩药液在温度4 25°C结晶，离心取结晶物得到落新妇苷粗品，反复结晶后得到落新妇苷湿纯品； F)、上述落新妇苷湿纯品经低温干燥后得到含水量<5%的落新妇苷纯品。
2.根据权利要求I所述的提取落新妇苷的方法，其特征在于所述的一级膜为微滤膜，膜孔径为20(T2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为800(Tl00000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为10(T500Dal的纳滤膜。
3.一种落新妇苷，由以下步骤提取得到 A)、取土茯苓药材洗净后粉碎过1(Γ40目筛，加入浓度为4(Γ80%的乙醇水溶液混匀，料液重量比为土茯苓药材乙醇水溶液=1 :8 16，浸泡O. 5 Ih后，采用频率26 40 KHz的超声波以低温温度20 50°C提取1(T60 min后经常规过滤得提取液； B)、取上述的提取液加入乙酸乙酯，体积比为提取液乙酸乙酯=1:广4，搅拌混匀后萃取，反复萃取次1飞次，合并乙酸乙酯层； C)、将上述的乙酸乙酯层以低温温度20 40°C真空浓缩后，回收乙酸乙酯，得到浓缩液； D)、将上述的浓缩液加入浓度为3(Γ70%的乙醇水溶液稀释，稀释至相当于含生药O. 25 lg/ml的溶液，溶液经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤一级膜、超滤二级膜分离大分子物质，再经纳滤三级膜分离小分子杂质，收取得到浓缩药液； E)、将上述的浓缩药液在温度4 25°C结晶，离心取结晶物得到落新妇苷粗品，反复结晶后得到落新妇苷湿纯品； F)、上述落新妇苷湿纯品经低温干燥后得到含水量<5%的落新妇苷纯品。
4.根据权利要求3所述的落新妇苷，其特征在于所述的一级膜为微滤膜，膜孔径为20(T2000nm，二级膜为超滤膜，采用截留分子量为800(Tl00000Dal的超滤膜，三级膜为纳滤膜，采用截留分子量为10(T500Dal的纳滤膜。
全文摘要
本发明涉及一种从土茯苓中提取落新妇苷的方法及其制成的落新妇苷，包括取土茯苓药材洗净粉碎后加入乙醇水溶液通过超声波低温提取；提取液加入乙酸乙酯后，反复萃取合并乙酸乙酯层；以低温真空浓缩得浓缩液后加入乙醇水溶液稀释，经高速离心沉淀后上清，上清液依次通过微滤、超滤及纳滤的三级膜分离和浓缩，得到浓缩药液；反复结晶后得到落新妇苷湿纯品，再经低温干燥后得到落新妇苷纯品。具有提取过程简单方便、提取温度低、提取时间短、提取率高、耗能少、杂质少、无污染的优点。
文档编号C07H1/08GK102964407SQ20121054269
公开日2013年3月13日 申请日期2012年12月15日 优先权日2012年12月15日
发明者罗观堤 申请人:广东世信药业有限公司