从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统的制作方法
【技术领域】
[0001]本发明属于植物化学技术领域，具体的，本发明涉及一种从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统。
【背景技术】
[0002]广金钱草为豆科山蚂幢属植物Desmodium styracifolium(Osbeck)Merr.，其药用部位为干燥地上部分，主要化学成分为黄酮、皂苷、多糖、生物碱等化合物。具有清热除湿，利尿通淋之功效。用于热淋、沙淋、石淋、小便涩痛、水肿尿少、黄疸尿赤、尿路结石。新夏佛塔苷(Neo-schaftoside)也叫6_C_葡萄糖-8_C_ β -阿拉伯糖洋序素，为淡黄色粉末；分子式:C26H28O14;分子量:564，其结构式如图1所不。
[0003]新夏佛塔苷为广金钱草药材2010版药典规定所用对照品夏佛塔苷的旋光异构体，是广金钱草中重要的药效物质之一，且含量相对较高。但目前市场上无新夏佛塔苷对照品的出售，且现有提取分离该化合物的方法和系统亟待改进。
【发明内容】
[0004]本发明旨在至少在一定程度上解决现有技术中的技术问题至少之一或者提供一种商业选择。为此，本发明的一个目的在于提出一种从广金钱草中提取分离新夏佛塔苷的方法和系统，利用该提取分离方法和系统得到的新夏佛塔苷，纯度高，有利于作为广金钱草鉴别和含量测定用的对照品、以及作为广金钱草及其相关药物制剂的质量控制。
[0005]依据本发明的一方面，本发明提供一种提取分离新夏佛塔苷的方法，该方法包括以下步骤:利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。
[0006]本发明的该方法，利用多级色谱分离，包括组合利用大孔树脂色谱技术，反相中压色谱制备及反相高压色谱技术，采用醇-水体系，从广金钱草提取物中分离提取新夏佛塔苷，该工艺操作简单，生产时间短，产品收率高，纯度高，能够获得纯度达到95%以上的新夏佛塔苷，获得的新夏佛塔苷可作为含量测定用化学对照品。该工艺步骤以及各个步骤的参数条件，是发明人综合考虑、多次调整试验大孔树脂色谱、反相中压色谱和反相高压色谱的组合顺序及其各自的洗脱检测条件对广金钱草中的新夏佛塔苷的分离纯化效果的影响而确定下来的，该提取纯化过程不涉及毒性相对强的有机溶剂，提取分离操作过程及提取物都安全可靠。
[0007]图2为本发明的一个实施例中的提取分离图1所示化合物新夏佛塔苷的方法的步骤流程图。根据本发明的实施例，上述本发明一方面的新夏佛塔苷提取分离方法，还可以具有以下技术特征至少之一:
[0008]根据本发明的一个实施例，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括:利用浓度50-95%的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液，除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。两次浓度为50-95%乙醇回流提取获得提取物，是发明人经过多次试验摸索确定的，既能充分利用原料也能节省时间，利于规模化生产制备；去除提取液中的乙醇和/或离子，利于排除它们对后续分离纯化的干扰。
[0009]根据本发明的一个实施例，所述两次回流提取，其中一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h，另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为lh-2h，任选的为1.5h。回流时，浓度为50-95%乙醇和广金钱草的比例以及回流时间，是发明人经过多次试验检测确定的，能够使原料得到高提取。
[0010]根据本发明的一些实施例，所述第一醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-35 %，较佳的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-30 %，所述第一色谱为大孔树脂。该乙醇-水洗脱体系中乙醇的浓度是发明人结合后续色谱分离条件、多次试验检测洗脱下来的峰中的新夏佛塔苷比例，经过多次调整优化确定的。
[0011]根据本发明的一些实施例，所述第二醇体系为乙醇-水体系，该乙醇-水体系中的乙醇的浓度为5-30 %，所述第二色谱为反向色谱，较佳的，选择的反向色谱为反向中压色谱，更佳的，选择ODS柱，其柱压为1-1Obar，洗脱流速为5?30ml/min。该乙醇-水洗脱体系中的乙醇浓度是发明人结合第一流份中目标成分的比例，以及第一色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。
[0012]根据本发明的一个实施例，所述利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，包括:利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一流份进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[a, b]的乙醇-水体系对所述第一流份进行梯度洗脱200min，收集以获得所述第二流份，其中，a的取值范围为5-12 %，b的取值范围为25-30 %。先利用一个浓度的乙醇-水体系等度洗脱，再进行梯度洗脱，能够提高分离提取效率；等度洗脱和梯度洗脱的乙醇浓度或浓度范围，以及洗脱时间，是发明人考虑收率、时间、回收的流份的复杂度、流份中目标成分的比例等，多次试验确定的。
[0013]根据本发明的另一个实施例，所述第三醇体系为纯甲醇，所述第三色谱为反相色谱，较佳的，选择的反向色谱为反向高压色谱，较佳的，选择C18柱(10 X 250mm，5 μ m)，其柱压为 2800-3200psi，流速为 4_5mL/min。
[0014]根据本发明的一个实施例，所述利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括:利用甲醇浓度为c的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱d min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份。其中，c的取值范围为22-30%，d的取值范围为25-38。该甲醇-水洗脱体系中的甲醇浓度是发明人结合第二流份中目标成分的比例，以及第二色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。
[0015]如图3所示，根据本发明的另一个实施例，所述利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括:利用甲醇浓度为e的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱f min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98 %以上流份，接着用甲醇浓度为e的甲醇-水体系将纯度为90 %?98 %的流份进行等度洗脱，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份。再将经第三色谱分离得到的纯度98%以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末。其中，e的取值范围为22-30%，f的取值范围为25-38ο该甲醇-水洗脱体系中的甲醇浓度是发明人结合第二流份中目标成分的比例，以及第二色谱分离中的乙醇-水洗脱体系，多次试验优化确定的，利于在简单操作和短时间内，获得收率高、纯度高的新夏佛塔苷。
[0016]依据本发明的另一方面，本发明提供一种提取分离新夏佛塔苷的系统，该系统能够用以实施上述本发明一方面或者任一实施例中的新夏佛塔苷提取分离方法，该系统包括:回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括，第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离单元相连，用于利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。图4显示本发明的一个实施例中的提取分离系统1000的结构，包括回流提取装置100和色谱分离装置200，色谱分离装置包括第一色谱分离单元202、第二色谱分离单元204和第三色谱分离单元206。上述对本发明一方面的新夏佛塔苷提取分离方法的技术特征和优点的描述，同样适用本发明这一方面的系统，在此不再赘述。本领域技术人员可以理解，该系统还能包括其它的装置、子装置或者功能单元来实施上述的相应的实施例。
[0017]本发明的附加方面和优点将在下面的描述中部分给出，部分将从下面的描述中变得明显，或通过本发明的实践了解到。
【附图说明】
[0018]本发明的上述和/或附加的方面和优点从结合下面附图对实施例的描述中将变得明显和容易理解，其中:
[0019]图1显示新夏佛塔苷的化学结构式；
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