1.进行实施例1的步骤1-3，获得广金钱草原料药。
[0057]2.三级色谱分离
[0058](I)将广金原料药300-400重量份用AB_8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂20:80, 30:70, 45:55，65:35梯度洗脱，每个梯度冲到接近无色即可，合并各流份，分别得20 %，30 %，45 %，65 %共四个部位。
[0059](2)将色谱分离I得到的30%部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离II，具体为:用乙醇-水，条件为5%等度30min，5-25%梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。
[0060](3)将色谱分离II得到的20-30流份合并，进一步用C18高压液相色谱分离，即色谱分离III，具体为:用甲醇-水，条件为30%甲醇-水等度25min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份，纯度为90%?98%的流份再经C18高效液相色谱精制即可将纯度提高至98%以上。将色谱分离III纯度98%以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末，经鉴定其为新夏佛塔苷，HPLC 纯度 98.1% ο
[0061]其中，(I)对应上述所称的第一色谱分离，(2)对应上述所称的第二色谱分离，(3)对应上述所称的第三色谱分离。
[0062]实施例5
[0063]1.进行实施例1的步骤1-3，获得广金钱草原料药。
[0064]2.三级色谱分离
[0065](2)将广金原料药300-400重量份用AB_8大孔树脂色谱分离，即色谱分离I，乙醇-水混合溶剂25:75，35:65，45:55，65:35梯度洗脱，每个梯度冲到无颜色即可，合并各流份得25%，35%，45%，65%共四个部位。
[0066](2)将色谱分离I得到的25%部位用ODS反相中压色谱分离，即色谱分离II，具体为:用乙醇-水，条件为5%等度30min，5-25%梯度200min洗脱，按照色谱图出峰顺序，分份收集，每200-400体积份收集一份，共收集30-40个流份，高效液相色谱检识后合并相同流份。
[0067](3)将色谱分离II得到的20-30流份合并，进一步用C18高压液相色谱分离，即色谱分离III，具体为:用甲醇-水，条件为25%甲醇-水等度32min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份，纯度为90%?98%的流份再经C18高效液相色谱精制即可将纯度提高至98%以上。将色谱分离III纯度98%以上的流份合并，减压浓缩去除溶剂即可得目标提取物，为淡黄色粉末，HPLC纯度98.5%。
[0068]其中，(I)对应上述所称的第一色谱分离，(2)对应上述所称的第二色谱分离，(3)对应上述所称的第三色谱分离。
[0069]实施例2和3的工艺条件生产出的新夏佛塔苷，纯度明显低于实施例1、实施例4以及实施例5分离提取的新夏佛塔苷。
[0070]在本说明书的描述中，参考术语“一个实施例”、“一些实施例”、“示例”、“具体示例”、或“一些示例”等的描述意指结合该实施例或示例描述的具体特征、结构、材料或者特点包含于本发明的至少一个实施例或示例中。在本说明书中，对上述术语的示意性表述不一定指的是相同的实施例或示例。而且，描述的具体特征、结构、材料或者特点可以在任何的一个或多个实施例或示例中以合适的方式结合。
[0071]尽管已经示出和描述了本发明的实施例，本领域的普通技术人员可以理解:在不脱离本发明的原理和宗旨的情况下可以对这些实施例进行多种变化、修改、替换和变型，本发明的范围由权利要求及其等同物限定。
【主权项】
1.一种提取分离新夏佛塔苷的方法，其特征在于，包括以下步骤: 利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物； 利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其中包括， 利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份， 利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份， 利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物，包括: 利用浓度50-95%的乙醇对所述广金钱草进行两次回流提取，合并两次回流提取所得的提取液，获得合并提取液， 除去所述合并提取液中的乙醇，和/或除去所述合并提取液中的乙醇和离子，以及任选的，进行干燥，以获得所述提取物。3.根据权利要求2所述的方法，其特征在于，所述两次回流提取，其中 一次的乙醇和广金钱草的重量比为12:1，回流提取的时间为1.5h-3h，任选的为2h， 另一次的乙醇和广金钱草的重量比为10:1，回流提取的时间为lh-2h，任选的为1.5h。4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第一醇体系为乙醇-水体系，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-35 %， 优选的，所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为20-30%， 所述第一色谱为大孔树脂。5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第二醇体系为乙醇-水体系， 所述乙醇-水体系中的乙醇的浓度为5-30%， 所述第二色谱为反向色谱。6.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述反向色谱为反向中压色谱， 任选的，所述反向中压色谱为C18柱，其柱压为l-10bar，洗脱流速为5?30ml/min。7.根据权利要求5所述的方法，其特征在于，所述利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，包括: 利用乙醇浓度为a的乙醇-水体系对所述第一流份进行等度洗脱30min，接着换用乙醇浓度为[a，b]的乙醇-水体系对所述第一流份进行梯度洗脱200min，收集以获得所述第二流份，其中， a的取值范围为5-12%，b的取值范围为25-30%。8.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，所述第三醇体系为甲醇-水体系，所述第三色谱为反相色谱， 任选的，所述反向色谱为反相高压色谱，色谱柱为C18柱(10 X 250mm，5 μ m)，流速为4-5mL/min，其柱压为 2800 ?3200psi。9.根据权利要求8所述的方法，其特征在于，利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷，包括: 利用甲醇浓度为c的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱d min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份，其中c的取值范围为22-30%，d的取值范围为25-38 ； 利用甲醇浓度为e的甲醇-水体系对所述第二流份进行等度洗脱f min，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份，接着用甲醇浓度为e的甲醇-水体系将纯度为90%?98%的流份进行等度洗脱，按照色谱峰自动收集，合并目标流份，高效液相色谱检识后合并收集纯度98%以上流份。再将经第三色谱分离得到的纯度98%以上的流份合并，减压浓缩，其中e的取值范围为22-30%，f的取值范围为25-38 ο10.一种提取分离新夏佛塔苷的系统，其特征在于，包括: 回流提取装置，用以利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物； 色谱分离装置，用于利用醇体系对所述提取物进行多级色谱分离，其包括， 第一色谱分离单元，与所述回流提取装置相连，用于利用第一醇体系对所述提取物进行第一色谱分离，获得第一流份， 第二色谱分离单元，与所述第一色谱分离单元相连，用于利用第二醇体系对所述第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份， 第三色谱分离单元，与所述第二色谱分离单元相连，用于利用第三醇体系对所述第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。
【专利摘要】本发明提供了一种提取分离新夏佛塔苷的方法，该方法包括以下步骤：利用乙醇对广金钱草进行回流提取，获得广金钱草提取物；利用醇体系对提取物进行多级色谱分离，其中包括，利用第一醇体系对提取物进行第一色谱分离，获得第一流份，利用第二醇体系对第一流份进行第二色谱分离，获得第二流份，利用第三醇体系对第二流份进行第三色谱分离，以获得所述新夏佛塔苷。利用本发明的方法从广金钱草中分离提取新夏佛塔苷，工艺简单，生产时间短，收率高，纯度高，能够获得纯度95％以上的新夏佛塔苷。
【IPC分类】C07H17/07, C07H1/08
【公开号】CN104926897
【申请号】CN201510347295
【发明人】王学海, 许勇, 李莉娥, 杨仲文, 杨婷, 余通, 冯芸, 尹海龙, 黄璐, 杨成兵, 黄天赐, 曹儒宾, 谢长
【申请人】武汉光谷人福生物医药有限公司
【公开日】2015年9月23日
【申请日】2015年6月19日