专利名称：一种超级泰乐菌素的提纯方法
技术领域：
本发明涉及一种超级泰乐菌素提纯方法，具体地说涉及利用酸提碱沉二次结晶，通过精' 制干燥，在获得高回收率的同时，得到高纯度的超级泰乐菌素的一种方法。
背景技术：
超级泰乐菌素，化学名为3-0-乙酰-4" -0-异戊酰泰乐菌素(如图)。超级泰乐菌素在水 溶液中呈弱碱性，溶液为碱性条件时，会以沉淀的形式结晶出来。溶液为酸性条件时，超级 泰乐菌素与大多数酸形成相应的盐，易溶于水。
泰乐菌素作为专用兽药和饲料添加剂在我国已使用多年，但由于其耐药性的问题，目前 欧盟已经下令禁止了磷酸泰乐菌素作为词料添加剂的使用。超级泰乐菌素是泰乐菌素经 Str印to/7^ces "er/77ot^ara/7s生物转化，在3位乙酰化及4〃位异戊酰化，再经多步骤纯 化而得到的全新大环内酯类抗生素，因化学结构的改变使其在抗菌谱、抗菌活性、抗耐药性、 化学稳定性、口服吸收性、血药浓度、动物残留等方面发生了巨大的正向变化。使用剂量仅 为泰乐菌素的四分之一即可达到比泰乐菌素更为卓越的效果。作为泰乐菌素的替代产品，超 级泰乐菌素因其使用剂量低，无残留，能有效的防治禽畜支原体病和提高饲料转化率，是一 种优良的禽畜专用大环内酯类抗生素和饲料添加剂。
美国专利4092473报道了超级泰乐菌素的提纯方法使用弱酸性处理反应混合物，离心， 过滤，调节清夜的pH值到中性至弱碱性，然后用乙酸乙酯、甲苯、苯进行抽提大环内酯类 抗生素。上述方法采用有机溶媒作溶剂，操作毒性大，易污染环境，且成本高，在现代化的 工业生产应用中应寻找到一种更安全环保的提纯方法。
发明内容
本发明的目的在于避免现有技术中存在的不足，提供了一种能节约有机溶媒，降低生产 成本，减少环境污染，利于工业化生产的超级泰乐菌素提取方法。
所述的超级泰乐菌素的提纯工艺，采用酸提碱沉二次结晶的技术方案，其特征在于按下
述工艺步骤进行
(1) 发酵超级泰乐菌素的生产菌株，经过多级培养发酵，得到"原始超级泰乐菌素发酵
液"；
(2) —次酸溶将"超级泰乐菌素发酵液"，加入酸性溶液，调节pH1 6，优选pH2 5.5，
调节pH后搅拌l 5小时，优选1 3小时，得到"超级泰乐菌素一次酸溶液"；
(3) —次碱沉将上述"超级泰乐菌素一次酸溶液"，加入碱性溶液，调节pH7 12，优 选pH7,5 10，静置4小时以上，得到"超级泰乐菌素一次结晶物"；
(4) 二次酸溶将上述"超级泰乐菌素一次结晶物"，加入酸性溶液，调节pHl~6，优 选pH2 5.5，调节pH后搅拌1~5小时，优选1 3小时，得到"超级泰乐菌素二次酸溶液"；
(5) 二次碱沉将上述"超级泰乐菌素二次酸溶液"，加入碱性溶液，调节pH7 12，优 选pH7.5~10，得到"超级泰乐菌素二次结晶物"。对该结晶物进行常规精制、干燥处理得到 超级泰乐菌素的固体物成品。
本发明的超级泰乐菌素的提纯方法，所述的碱性溶液包括氢氧化钠、氢氧化钾、碳酸钠、 碳酸氢钠、氨水溶液中的一种；所述的酸性溶液包括硫酸、盐酸、酒石酸、磷酸、拧檬酸溶 液中的一种。
本发明的超级泰乐菌素的提纯方法，所述的步骤(2)中，发酵液用水稀释，发酵液降温 至20 40。C，优选20 30。C。
本发明的超级泰乐菌素的提纯方法，所述的步骤(3)中， 一次酸溶液板框过滤，滤液进 入结晶罐，滤液升温至35 60。C，优选40 60。C。
本发明的超级泰乐菌素的提纯方法，所述的步骤(4)中， 一次结晶物用酸水溶解，溶液 降温至20-45°C ，优选20 35°C 。
本发明的超级泰乐菌素的提纯方法，所述的步骤(5)中，二次酸溶液板框过滤，滤液进 入结晶罐，滤液升温至30 60。C，优选30 5(TC。
附图超级泰乐菌素的结构式
具体实施例方式
下述通过对本发明的提纯方法的具体实施例的详细描述进一步阐述本发明，但实施例不 是对本发明的限制。 实施例1
超级泰乐菌素转化菌在发酵罐中经过约170小时的发酵培养后得到超级泰乐菌素发酵液 50吨，加入水稀释至70吨，使发酵液降温至20'C;向该稀释液中加入6mol/L盐酸溶液，调 节发酵液的pH至2，搅拌3小时。取样HPLC检测，效价为4572 u/ml，超级泰乐菌素溶出
率为96%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将一次酸溶过滤液升温至40。C，加入4mol/L氢氧 化钾溶液，缓慢调节pH值至7.5，静置4小时，产生超级泰乐菌素结晶，板框过滤得到一次 结晶物，拾测上清液效价为82 u/mL —汝结晶物雨水溶艇.溶液瞎媳至？rrr,加人6m0i/T 盐酸溶液使全部溶解，调节发酵液的pH至2，搅拌3小时。取样HPLC检测，超级泰乐菌素 溶出率为93%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将二次酸溶过滤液升温至30°C，加入4mol/L氢 氧化钾溶液，缓慢调节pH值至7.5，得到超级泰乐菌素二次结晶物，检测上清效价液效价为 77 u/ml，精制干燥后得到超级泰乐菌素的固体物成品。HPLC法测定超级泰乐菌素含量为 81%，回收率为90%。
实施例2
超级泰乐菌素转化菌在发酵罐中经过约170小时的发酵培养后得到超级泰乐菌素发酵液 50吨，加入水稀释至70吨，发酵液降温至25。C;向该稀释液中加入4mol/L硫酸溶液，调节 发酵液的pH至3.8，搅拌1小时。取样HPLC检测，效价为4821 u/ml，超级泰乐菌素溶出率 为97%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将一次酸溶过滤液升温至40。C，加入4mol/L碳酸钠 溶液，缓慢调节pH值至8，静置8小时，产生超级泰乐菌素结晶，板框过滤得到一次结晶物， 检测上清液效价为80 u/ml。 一次结晶物用水溶解，溶液降温至25。C，加入4mol/L硫酸溶液 使全部溶解，调节发酵液的pH至2.5，搅拌1小时。取样HPLC检测，超级泰乐菌素溶出率 为94%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将二次酸溶过滤液升温至3(TC,加入2mol/L碳酸钠 溶液，缓慢调节pH值至7.5，得到超级泰乐菌素二次结晶物，检测上清效价液效价为81 u/ml， 精制干燥后得到超级泰乐菌素的固体物成品。HPLC法测定超级泰乐菌素含量为82%，回收 率为89%。
实施例3
超级泰乐菌素转化菌在发酵罐中经过约170小时的发酵培养后得到超级泰乐菌素发酵液 50吨，加入水稀释至70吨，使发酵液降温至30。C;向该稀释液中加入8mol/L酒石酸溶液， 调节发酵液的pH至5.5，搅拌2小时。取样HPLC检测，效价为4427u/ml，超级泰乐菌素溶 出率为95%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将一次酸溶过滤液升温至6(TC，加入6mol/L碳 酸氢钠溶液，缓慢调节pH值至10，静置6小时，产生超级泰乐菌素结晶，板框过滤得到一 次结晶物，检测上清液效价为79u/ml。 一次结晶物用水溶解，溶液降温至35'C，加入8mol/L 酒石酸溶液使全部溶解，调节发酵液的pH至5.5，搅拌2小时。取样HPLC检测，超级泰乐 菌素溶出率为90%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将二次酸溶过滤液升温至5CTC，加入3mol/L
碳酸氢钠溶液，缓慢调节pH值至10，得到超级泰乐菌素二次结晶物，检测上清效价液效价 为75u/ml，精制千燥后得到超级泰乐菌素的固体物成品。HPLC法测定超级泰乐菌素含量为 81%，回收率为87%。
实施例4
超级泰乐菌素转化菌在发酵罐中经过约170小时的发酵培养后得到超级泰乐菌素发酵液 50吨，加入水稀释至70吨，使发酵液降温至2(TC;向该稀释液中加入6mol/L磷酸溶液，调 节发酵液的pH至l，搅拌5小时。取样HPLC检测，效价为4832 u/ml，超级泰乐菌素溶出 率为96%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将一次酸溶过滤液升温至35'C，加入4mol/L氢氧 化钠溶液，缓慢调节pH值至7，静置10小时，产生超级泰乐菌素结晶，板框过滤得到一次 结晶物，检测上清液效价为78u/ml。 一次结晶物用水溶解，溶液降温至2(TC，加入6mol/L 磷酸溶液使全部溶解，调节发酵液的pH至l，搅拌5小时。取样HPLC检测，超级泰乐菌素 溶出率为93%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将二次酸溶过滤液升温至3(TC，加入4mol/L氢 氧化钠溶液，缓慢调节pH值至7，得到超级泰乐菌素二次结晶物，检测上清效价液效价为 72 Wml，精制干燥后得到超级泰乐菌素的固体物成品。HPLC法测定超级泰乐菌素含量为 82%,回收率为90%。
实施例5
超级泰乐菌素转化菌在发酵罐中经过约170小时的发酵培养后得到超级泰乐菌素发酵液 50吨，加入水稀释至70吨，使发酵液降温至4(TC;向该稀释液中加入8mol/L柠檬酸溶液， 调节发酵液的pH至6，搅拌4小时。取样HPLC检测，效价为4615u/ml，超级泰乐菌素溶 出率为95%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将一次酸溶过滤液升温至6(TC，加入6mol/L氨 水溶液，缓慢调节pH值至12，静置9小时，产生超级泰乐菌素结晶，板框过滤得到一次结 晶物，检测上清液效价为78 u/ml。 一次结晶物用水溶解，溶液降温至45'C，加入8mol/L柠 檬酸溶液使全部溶解，调节发酵液的pH至6，搅拌4小时。取样HPLC检测，超级泰乐菌素 溶出率为92%。板框过滤，滤液进入结晶罐。将二次酸溶过滤液升温至60°C，加入6mol/L氨 水溶液，缓慢调节pH值至12，得到超级泰乐菌素二次结晶物，检测上清效价液效价为73 uAnl， 精制千燥后得到超级泰乐菌素的固体物成品。HPLC法测定超级泰乐菌素含量为83%，回收 率为89%。
权利要求
1、一种超级泰乐菌素的提纯方法，其特征在于包括如下工艺步骤(1)发酵超级泰乐菌素的生产菌株，经过多级培养发酵，得到“原始超级泰乐菌素发酵液”(2)一次酸溶将“超级泰乐菌素发酵液”，加入酸性溶液，调节pH1～6，优选pH2～5.5，调节pH后搅拌1～5小时，优选1～3小时，得到“超级泰乐菌素一次酸溶液”；(3)一次碱沉将上述“超级泰乐菌素一次酸溶液”，加入碱性溶液，调节pH7～12，优选pH7.5～10，静置4小时以上，得到“超级泰乐菌素一次结晶物”；(4)二次酸溶将上述“超级泰乐菌素一次结晶物”，加入酸性溶液，调节pH1～6，优选pH2～5.5，调节pH后搅拌1～5小时，优选1～3小时，得到“超级泰乐菌素二次酸溶液”；(5)二次碱沉将上述“超级泰乐菌素二次酸溶液”，加入碱性溶液，调节pH7～12，优选pH7.5～10，得到“超级泰乐菌素二次结晶物”。对该结晶物进行常规精制、干燥处理得到超级泰乐菌素的固体物成品。
2、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述的碱性溶液包括氢氧化钠、氢 氧化钾、碳酸钠、碳酸氢钠、氨水溶液中的一种。
3、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于所述的酸性溶液包括硫酸、盐酸、酒石酸、磷酸、柠檬酸溶液中的一种。
4、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于在步骤(2)中，发酵液用水稀释，发酵液降温20 4(TC，优选20 30'C。
5、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于在步骤(3)中， 一次酸溶液板框过 滤，滤液进入结晶罐，滤液升温至35^60'C，优选40 60'C。
6、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于在步骤(4)中， 一次结晶物用酸水 溶解，溶液降温至20 45'C，优选20 35'C。
7、 根据权利要求1所述的提纯方法，其特征在于在步骤(5)中，二次酸溶液板框过 滤，滤液进入结晶罐，滤液升温至30 6(TC，优选30 50'C。
全文摘要
本发明涉及一种从微生物发酵产物中提取超级泰乐菌素的方法，该方法采用二次结晶法，摒弃了传统意义上的有机溶媒萃取法，在减少环境污染，简化提纯步骤，降低生产成本的同时，可以得到与溶媒萃取法提纯物相当纯度的产品，更适用于工业化生产。由本发明所述方法制备的产品可作为兽药超级泰乐菌素酒石酸盐的原料药。
文档编号C07H1/06GK101381756SQ20071014602
公开日2009年3月11日 申请日期2007年9月7日 优先权日2007年9月7日
发明者余志强, 王华丽, 郑应华, 郭丽清, 鹏 齐 申请人:中牧实业股份有限公司