一种苯基取代的烷基胺的制备方法和纯化方法
【专利摘要】本发明公开了苯基取代的烷基胺的制备方法和纯化方法。该方法包括下列步骤：(1)将灰产色链霉菌(Streptomyces griseochromogenes)接种至种子培养基中培养，得种子液；其中，所述的培养的时间为12h～48h；所述的培养的温度为28～35℃；(2)将所述的种子液接种至发酵培养基中培养，得含式I化合物的发酵液。本发明的制备方法原料廉价易得、制备周期短、绿色环保、工艺简单；同时采用本发明的纯化方法能够获得HPLC纯度在90％以上的目标化合物，纯度高。
【专利说明】
一种苯基取代的烷基胺的制备方法和纯化方法
技术领域
[0001] 本发明涉及一种苯基取代的烷基胺的制备方法和纯化方法。
【背景技术】
[0002] 微生物具有来源广泛、种类多、易培养、次级代谢产物丰富且结构新颖等特点，许 多微生物来源的化合物具有良好的生物活性，因此筛选微生物来源的天然产物对药物的开 发具有极其重要的作用。临床上的许多药物及其先导化合物，往往都来源于微生物天然产 物。随着技术的进步，具有潜在药理活性的新化合物不断地从微生物中分离出来，如抗生素 107891 (专利公开号：CA2593801A1)、泰乐菌素（专利CN1148047A)等，均显示出良好的生 物活性。
[0003] W02007091393A1中报道1-苯（1R，2R)-1，2, 3-三胺丙烷用于合成大环内酯类抗生 素10-A红霉素。但是在该专利中并没有提及1-苯（1R，2R)-1，2, 3-三胺丙烷的制备方法。 另外，该化合物的化学合成鲜有文献报道，并且该化合物不易获得，在工业上不能大规模制 备，因此，本领域亟需一种1-苯（1R，2R)-1，2, 3-三胺丙烷的制备方法和纯化方法，以解决 上述技术难题。
【发明内容】
[0004] 本发明所要解决的技术问题是为了克服现有的1-苯（1R，2R)_1，2, 3-三胺丙烷不 易获得、在工业上不能大规模制备等缺陷而提供了一种苯基取代的烷基胺的制备方法和纯 化方法。本发明的制备方法原料廉价易得、制备周期短、绿色环保、工艺简单；同时采用本发 明的纯化方法能够获得HPLC纯度在90%以上的目标化合物，纯度高。
[0005] 本发明主要是通过以下技术方案解决上述技术难题的。
[0006] 本发明提供了一种如式I所示的1-苯（1R，2R)-1，2, 3-三胺丙烷的制备方法，其 包括下列步骤：
[0007]
[0008] (1)将灰产色链霉菌（Streptomyces griseochromogenes)接种至种子培养基中 培养，得种子液；其中，所述的培养的时间为12h~48h ;所述的培养的温度为28~35°C ;
[0009] (2)将所述的种子液接种至发酵培养基中培养，得含式I化合物的发酵液。
[0010] 步骤（1)中，所述的灰产色链霉菌可为本领域常规的灰产色链霉菌，只要属于灰 产色链霉菌属并且在发酵过程中能够产生式I化合物，即可。所述的灰产色链霉菌较佳 地购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC)保藏的菌株编号为CICC 11007的灰产 色链霉菌或中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏的菌株编号为 4. 1964,分离号为LMG19891的灰产色链霉菌。上述灰产色链霉菌均可在上述保藏中心购 买得到，其网上购买相关的网页说明和信息具体见附件1和附件2。所述的将灰产色链霉 菌接种至种子培养基中培养的方法和条件可为本领域常规的方法和条件。所述的灰产色链 霉菌可以灰产色链霉菌孢子粉的形式或以灰产色链霉菌甘油水溶液的形式接种到种子培 养基中，本发明优选以灰产色链霉菌甘油水溶液形式添加到种子培养基中。所述的灰产色 链霉菌甘油水溶液中，所述的甘油水溶液的浓度可为本领域常规的浓度，较佳地为15 %~ 50%，所述的百分比（％)是指甘油的质量（g)与水的体积（L)之间的百分比，即50%的甘 油水溶液一般是指1L甘油水溶液中含有50g甘油，即50g/L的甘油水溶液。所述的灰产 色链霉菌甘油水溶液中，所述的灰产色链霉菌的活菌数较佳地为1X 10s~5X 10 9/mL。所 述的灰产色链霉菌甘油水溶液与种子培养基的体积比可为本领域常规的体积比，较佳地为 1:50~1:250 ;更佳地为1:100。所述的培养的温度较佳地为30°C。所述的培养的振荡速 度较佳地为200~250r/min，更佳地为220r/min。所述的培养的时间较佳地为24h。
[0011] 步骤（1)中，所述的种子培养基可为本领域灰产色链霉菌培养常规的种子培养 基，较佳地，所述的种子培养基包括酵母提取物3g/L~5g/L、麦芽提取物8g/L~15g/L和 葡萄糖3g/L~5g/L，其中，g/L是指各组分与种子培养的质量体积比；更佳地，所述的种子 培养基包括酵母提取物4g/L、麦芽提取物10g/L和葡萄糖4g/L。
[0012] 步骤⑵中，所述的将所述的种子液接种至发酵培养基中培养的方法和条件可为 本领域常规的方法和条件。所述的种子液与所述的发酵培养基的体积比较佳地为1:100~ 1:150 ;所述的培养的温度较佳地为28~35°C，更佳地为30°C。所述的培养的振荡速度较 佳地为200~250r/min，更佳地为220r/min。所述的培养的时间较佳地为144~192h。
[0013] 步骤（2)中，所述的发酵培养基可为本领域灰产色链霉菌种子液发酵培养常规的 发酵培养基，较佳地，所述的发酵培养基包括NaCl lg/L~1. 5g/L、K2HP040 . 8~1. 2g/L、可 溶性淀粉 10 ~15g/L、蛋白胨 2g/L ~3g/L、CaC032g/L ~3g/L、（NH4)S042g/L ~3g/L、无 机盐溶液〇· 8mL/L~L 2mL/L、MgS04 · 7H20 2g/L~3g/L和水(λ 8~L 2L ;所述的发酵培 养基中，g/L是指各组分与发酵培养基的质量体积比；mL/L是指各组分与发酵培养基的体 积比；所述的无机盐溶液包括 FeS04 · 7H20 lg/L ~1. 2g/L、ZnS04 · 7H20 lg/L ~1. 2g/L、 MgCl2 ·6Η2〇]^/1~1. 2g/L和水0. 8~1. 2L ;所述的无机盐溶液中，g/L是指各组分与无机 盐溶液的质量体积比。更佳地，所述的发酵培养基包括NaCl lg/L、K2HP04lg/L、可溶性淀粉 l〇g/L、蛋白胨 2g/L、CaC032g/L、（NH4)S042g/L、无机盐溶液 lmL/L、MgS04 · 7H20 2g 和水；所 述的无机盐溶液包括 FeS04 · 7H20 lg/L、ZnS04 · 7H20 lg/L、MgCl2 · 6H20 lg/L 和水。所述 的发酵培养基和所述的无机盐溶液的pH值较佳地为7. 2~7. 4。
[0014] 步骤（2)得到含式I化合物的发酵液后，还可进一步包括后处理的操作。所述的 后处理的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，较佳地包括下列步骤：将步骤（2)得 到的含式I化合物的发酵液进行离心处理，得到的沉淀与酮类溶剂混合，超声，再进行离心 处理，得到上清液，除去酮类溶剂，即得式I化合物粗品。其中，所述的离心的速度较佳地 为3500~5000r/min ;更佳地为4000r/min。所述的离心的时间较佳地为20~40min ;更 佳地为30min。所述的超声的方法和条件可为本领域常规的方法和条件，较佳地为在40~ 70kHZ (优选42kHZ)处理10~60min (优选40min)。所述的超声的次数不作具体限定，一般 为2~3次。所述的酮类溶剂可为本领域常规的酮类溶剂，较佳地为丙酮。所述的酮类溶剂 的用量不作具体限定，所述的酮类溶剂与含式I化合物的发酵液的体积比较佳地为1:1~ 1:3,更佳地为1: 2。所述的除去酮类溶剂的方法可为本领域常规的方法，较佳地为减压浓 缩。所述的减压浓缩的温度较佳地为40~45°C。所述的减压浓缩的真空度较佳地为700~ 800mmHg 更佳地为 758mmHg。
[0015] 所述的后处理结束后，还可进一步包含纯化的操作。所述的纯化的方法和条件可 为本领域常规的方法和条件，本发明优选下列方法和条件：
[0016] (1)将所述的式I化合物粗品采用反相硅胶柱层析进行分离纯化；洗脱液依次为 水、10%、20%、30%、40%、60%、80%和100%的甲醇-水混合液，所述的百分比（％)是指 甲醇的体积与水的体积比；收集30%的甲醇-水混合液的洗脱液，浓缩，得浓缩物A ;
[0017] (2)将所述的浓缩物A采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为20%的甲 醇-水混合液，所述的百分比（％)是指甲醇的体积与水的体积比；收集含式I化合物的洗 脱液，浓缩，得浓缩物B ;
[0018] (3)将所述的浓缩物B采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为水，收集含式I 化合物的洗脱液，浓缩，得浓缩物C ;
[0019] (4)将所述的浓缩物C采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为20%的甲 醇-水混合液，所述的百分比（％)是指甲醇的体积与水的体积比；收集含式I化合物的洗 脱液，浓缩，得式I化合物产品。
[0020] 步骤（1)中，所述的反相硅胶层析中的层析柱可为本领域常规的层析柱，一般根 据含式I化合物的粗品的质量进行常规选择。其中，所述的层析柱一般以十八烷基硅烷键 合硅胶（〇DS_C ls)为填充剂。所述的十八烷基硅烷键合硅胶市售可得，较佳地为YMC公司生 产的批号为9955的0DS-C ls。所述的0DS-Cls与所述的式I化合物的粗品的质量比可按照 本领域常规进行选择，较佳地为1. 5:1~3. 0:1 ;更佳地为2. 5:1。较佳地，所述的水、10%、 20%、30%、40%、60%、80%和100%的甲醇-水混合液与所述的含式1化合物的粗品的体 积质量比分别为30mL/g~35mL/g。
[0021] 步骤（2)~（4)中，所述的制备液相中，除流动相外，其他色谱条件可为本领域常 规的色谱条件，本发明优选下列色谱条件：制备液相色谱仪可为本领域常规的制备液相色 谱仪，较佳地为岛津公司型号为LC20AP的制备液相色谱仪。层析柱可为本领域常规的层析 柱，较佳地为反相硅胶层析柱，其固定相一般为十八烷基键合硅胶。层析柱可为本领域常规 的层析柱，较佳地为 Ultimate AQ_C1S层析柱（14 X 150mm，5 μ m 或者 14 X 250mm，10 μ m)。柱 温可为本领域常规的柱温，较佳地为35~45°C (优选40°C)。检测波长一般为210nm。流 速一般为lmL/min~4mL/min。进样体积一般为10uL~400uL，较佳地为10uL~20uL。
[0022] 步骤⑴~⑷中，所述的浓缩的方法和条件可为本领域浓缩常规的方法和条 件，只要能除去相应地洗脱液，即可，较佳地为减压浓缩。所述的减压浓缩的温度较佳地为 40°C~45°C。所述的减压浓缩的真空度较佳地为700~800mmHg，更佳地为758mmHg。
[0023] 本发明中，所述的水是指纯水，即去离子水。
[0024] 本发明中，室温是指10~30°C。
[0025] 在不违背本领域常识的基础上，上述各优选条件，可任意组合，即得本发明各较佳 实例。
[0026] 本发明所用试剂和原料均市售可得。
[0027] 本发明的积极进步效果在于：
[0028] 本发明的制备方法原料廉价易得、制备周期短、更加绿色环保、工艺简单。并且本 发明的纯化方法能够获得HPLC纯度在90%以上的目标化合物，纯度高。
【附图说明】
[0029] 图1为实施例1含式I化合物的发酵液制备的流程图。
[0030] 图2为实施例3对含式I化合物的粗品进行分离纯化的流程图。
【具体实施方式】
[0031] 下面通过实施例的方式进一步说明本发明，但并不因此将本发明限制在所述的实 施例范围之中。下列实施例中未注明具体条件的实验方法，按照常规方法和条件，或按照商 品说明书选择。
[0032] 下述实施例中灰产色链霉菌购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC)菌株 编号为CICC 11007的灰产色链霉菌或中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心 (CGMCC)保藏的菌株编号为4. 1964,分离号为LMG19891的灰产色链霉菌。橄榄色链霉菌 (Streptomyces olivaceus)购自中国工业微生物菌种保藏管理中心（CICC)菌株编号为 CICC 11009的橄榄色链霉菌。制备用硅胶层析柱厂商：月旭材料科技（上海）有限公司， 规格：250X 15mm。制备液相色谱仪生产厂家：岛津，型号：LC20AP。
[0033] 实施例1
[0034] (1)将保藏在甘油管（50%的甘油）中的灰产色链霉菌500 μ L (中国工业微生物 菌种保藏管理中心（CICC)菌株编号为CICC 11007的灰产色链霉菌，其中灰产色链霉菌活 菌数为5 X l〇7mL)接种至含50mL种子培养基的250mL三角摇瓶中，30°C，220r/min振荡培 养24h，作为种子液；种子培养基：酵母提取物4g/L，麦芽提取物10g/L，葡萄糖4g/L。
[0035] (2)接种lmL的种子液至750mL的三角摇瓶（含100mL发酵培养基）中，30°C， 220r/min的条件下培养168h ;即得含式I化合物的发酵液；发酵培养基：NaCl lg/L， K2HP04lg/L，可溶性淀粉 10g/L，蛋白胨 2g/L，CaC032g/L，（NH4)S042g/L，无机盐溶液 lmL/L， MgS04 · 7H20 2g，水，pH 7· 2。无机盐溶液配方为：FeS04 · 7H20 lg/L，ZnS04 · 7H20 lg/L， MgCl2 · 6H20 lg/L，水，pH 7. 2。
[0036] 流程图具体见图1，共富集30L灰产色链霉菌发酵液。
[0037] 实施例2
[0038] 富集得到30L灰产色链霉菌发酵液后，4000r/min离心30min，弃去上清，加入15L 丙酮浸泡菌体，辅以超声（42kHZ)处理40min(反复三次超声处理h^OOr/min离心30min， 取上清，旋转蒸发（40~45°C，真空度758mmHg)至干，得到含式I化合物的粗品（即灰产色 链霉菌菌体的丙酮萃取组分），共32g，灰产色链霉菌发酵液后处理过程如图1所示。
[0039] 实施例3
[0040] (1)将实施例2得到的含式I化合物的粗品，用40mL无水乙醇溶解，采用反相硅胶 柱层析（8(^，005-(： 18)(￥]\?：公司，批号：9955)依次用水、10%、20%、30%、40%、60%、80%、 100%甲醇-水混合液洗脱，流速10mL/min，每个梯度用1L洗脱液洗脱，将30%甲醇洗脱液 减压浓缩至干，得浓缩物A，低温（-4°C )保存，备用；
[0041] (2)将所述的浓缩物A采用制备液相进行分离纯化，制备液相的色谱分析条件如 下：层析柱：Ultimate AQ-C1S(5 μπι, 14X 150mm)，检测波长：210nm，流动相：甲醇-水混合 液，流速：lmL/min，柱温：40°C，进样：10 μ L，洗脱液：20 %甲醇-水混合液。式I化合物的 出峰时间：3. 67min。收集含式I化合物的洗脱液，减压浓缩至干，得浓缩物Β ;
[0042] (3)将所述的浓缩物B用10mL纯水溶解，采用制备液相分离纯化，制备液相的色谱 分析条件如下：层析柱：Ultimate AQ-Cls(10ym, 14X250mm)，检测波长：210nm，流动相：甲 醇-水混合液，流速：4mL/min，柱温：40°C，进样：400 μ L。洗脱浓度：0%甲醇。式I化合物 的出峰时间：5min ;收集含式I化合物的洗脱液，减压浓缩至干，得浓缩物C ;
[0043] (4)将所述的浓缩物C用纯水溶解，再次采用制备液相分离；制备液相的色谱分析 条件如下：层析柱：Ultimate AQ-Cls(5ym, 14X 150mm)，检测波长：210nm，流动相：甲醇-水 混合液，流速：lmL/min，柱温：40°C，进样：20 μ L。洗脱液：20%甲醇-水混合液。式I化合物 的出峰时间：4min。收集含式I化合物的洗脱液，减压浓缩至干，得式I化合物产品4. 7mg。 分离纯化的流程图具体见图2。
[0044] 式I化合物：白色粉末，可溶于甲醇，DMS0,水。HPLC纯度为92. 3 %。核磁共振谱 数据如下：ESI-MS m/z:188[M-Na]+。计算分子量为 165。iH-NMRGOOMHzAOWD) δ :7.24-7 ? 35 (m，5H)，δ 3· 7-4. 6 (m，2H)，δ 2· 96-3. 02 (m，2H)，δ 1· 32 (s，1H) · 13C-NMR 137. 4 (C-4)，13 0· 4 (C-6, C-8)，129. 9 (C-5, C-9)，128. 3 (C-7)，49. 6 (C-l)，57. 8 (C-2)，38. 4 (C-3)。
[0045] 实施例4
[0046] 将实施例1中的培养时间缩短为144h，灰产色链霉菌替换为中国微生物菌种保藏 管理委员会普通微生物中心（CGMCC)保藏的菌株编号为4. 196,分离号为LMG19891的灰产 色链霉菌，其余培养条件与实施例1 一致，按照实施例2、实施例3的分离步骤进行分离，最 终获得式I化合物产品4. 2mg，HPLC纯度为92. 1% ;其理化性质及核磁共振波谱同实施例 3〇
[0047] 实施例5
[0048] 将实施例1中的培养时间延长为192h，其余培养条件与实施例1 一致，按照实施例 2、实施例3进行分离纯化，最终获得式I化合物产品5mg，HPLC纯度为93. 0% ;其理化性质 及核磁共振波谱同实施例3。
[0049] 对比实施例1
[0050] 将实施例1中的灰产色链霉菌替换为橄榄色链霉菌（Streptomyces olivaceus)， 其余操作均与实施例1相同，获得的发酵液中没有式I化合物。说明橄榄色链霉菌发酵培 养过程中不能产生式I化合物。
[0051] 对比实施例2
[0052] 将实施例1中的种子培养基220r/min振荡培养72h，其余培养条件与实施例1 一 致，按照实施例2、实施例3的分离步骤进行分离，最终未能获得式I化合物，有可能是因为 种子老化，导致接种到新鲜的发酵培养基上后菌株错过最优次级代谢发酵时间，因此不产 生式I化合物。
[0053] 对比实施例3
[0054] 种子培养基25°C培养，220r/min振荡培养24h，其余条件与实施例1 一致，照实施 例2、实施例3的分离步骤进行分离，最终未能获得式I化合物，培养温度低于28°C，灰产色 链霉菌生长缓慢，种子培养基浓度过低，活力过差。
【主权项】
1. 一种如式I所示的I-苯（IR, 2R)-1，2, 3-=胺丙烷的制备方法，其特征在于，其包括 下列步骤：(1) 将灰产色链霉菌（Streptomyces griseoc虹omogenes)接种至种子培养基中培养， 得种子液；其中，所述的培养的时间为12h~4她；所述的培养的溫度为28~35°C ; (2) 将所述的种子液接种至发酵培养基中培养，得含式I化合物的发酵液。2. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的灰产色链霉菌为 购自中国工业微生物菌种保藏管理中屯、保藏的菌株编号为CICC 11007的灰产色链霉菌 或中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中屯、保藏的菌株编号为4. 1964,分离号为 LMG19891的灰产色链霉菌。3. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的灰产色链霉菌W灰 产色链霉菌抱子粉的形式或W灰产色链霉菌甘油水溶液的形式接种到种子培养基中；所述 的灰产色链霉菌甘油水溶液中，所述的甘油水溶液是指质量浓度为15%~50%的甘油水 溶液，所述的百分比是指甘油的质量与水的体积之间的百分比，用g/L表示；所述的灰产色 链霉菌甘油水溶液中，所述的灰产色链霉菌的活菌数为1 X 1〇8~5 X 10 7mL ;所述的灰产色 链霉菌甘油水溶液与种子培养基的体积比为1:50~1:250。4. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于， 步骤（1)中，所述的培养的溫度为30°C;所述的培养的振荡速度为200~25化/min ;所 述的培养的时间为24h ; 和/或，步骤（2)中，所述的种子液与所述的发酵培养基的体积比为1:100~1:150 ; 所述的培养的溫度为28~35°C;所述的培养的振荡速度为200~25化/min ;所述的培养的 时间为144~19化。5. 如权利要求1所述的制备方法，其特征在于， 步骤（1)中，所述的种子培养基包括酵母提取物3g/L~5g/L、麦芽提取物8g/L~15g/ L和葡萄糖3g/L~5g/l，其中，g/L是指各组分与种子培养的质量体积比； 和/或，步骤似中，所述的发酵培养基包括化Cl Ig/L~1. 5g/L、K2HP〇4〇. 8~1. 2g/ L可溶性淀粉 10 ~15g/l、蛋白腺 2g/L ~3g/L、CaC〇32g/L ~3g/L、（NH4)S〇42g/L ~3g/L、 无机盐溶液0. 8血/L~I. 2血/1、1拆〇4 ? 7&0 2g/L~3g/L和水0. 8~I.化；所述的发酵 培养基中，g/L是指各组分与发酵培养基的质量体积比；mL/L是指各组分与发酵培养基的 体积比；所述的无机盐溶液包括化S〇4 ? 7&0 Ig/L~1. 2g/L、ZnS〇4 ? 7&0 Ig/L~1. 2g/L、 MgClz 'SHsOlg/L~1. 2g/L和水0. 8~1. 2L ;所述的无机盐溶液中，g/L是指各组分与无机 盐溶液的质量体积比；所述的发酵培养基和所述的无机盐溶液的抑值为7. 2~7. 4。6. 如权利要求1~5任一项所述的制备方法，其特征在于，步骤似得到含式I化合 物的发酵液后，还进一步包括后处理的操作；所述的后处理包括下列步骤：将步骤（2)得到 的含式I化合物的发酵液进行离屯、处理，得到的沉淀与酬类溶剂混合，超声，再进行离屯、处 理，得到上清液，除去酬类溶剂，即得式I化合物粗品。7. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的离屯、的速度为3500~5000r/ min ;所述的离屯、的时间为20~40min ;所述的超声为：在40~70kHZ下处理10~60min ; 所述的超声的次数为2~3次；所述的酬类溶剂为丙酬；和/或，所述的酬类溶剂与含式I 化合物的发酵液的体积比为1:1~1:3。8. 如权利要求6所述的制备方法，其特征在于，所述的后处理结束后，还进一步包含纯 化的操作；所述的纯化的方法包括下列步骤： (1) 将所述的式I化合物粗品采用反相硅胶柱层析进行分离纯化；洗脱液依次为水、 10%、20%、30%、40%、60%、80%和100%的甲醇-水混合液，所述的百分比是指甲醇的体 积与水的体积比；收集30%的甲醇-水混合液的洗脱液，浓缩，得浓缩物A ; (2) 将所述的浓缩物A采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为20%的甲醇-水混 合液，所述的百分比是指甲醇的体积与水的体积比；收集含式I化合物的洗脱液，浓缩，得 浓缩物B ; (3) 将所述的浓缩物B采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为水，收集含式I化合 物的洗脱液，浓缩，得浓缩物C ; (4) 将所述的浓缩物C采用制备液相色谱进行分离纯化；流动相为20%的甲醇-水混 合液，所述的百分比是指甲醇的体积与水的体积比；收集含式I化合物的洗脱液，浓缩，得 式I化合物产品。9. 如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤（1)中，所述的水、10%、20%、 30 %、40 %、60 %、80 %和100 %的甲醇-水混合液与所述的含式I化合物的粗品的体积质量 比分别为30血/g~35血/邑。10. 如权利要求8所述的制备方法，其特征在于，步骤（2)~（4)中，所述的制备液相的 色谱条件为：层析柱为反相硅胶层析柱；所述的反相硅胶层析柱固定相为十八烷基键合娃 胶；柱溫为35~45°C;检测波长为210皿；流速为1血/min~4mL/min ;进样体积为IOuL~ 400uL〇
【文档编号】C12P13/00GK105985991SQ201510072702
【公开日】2016年10月5日
【申请日】2015年2月11日
【发明人】朱宝泉, 范必成, 林军, 胡海峰, 周斌
【申请人】上海医药工业研究院, 中国医药工业研究总院