专利名称：：一种抗人IL-13Rα2单克隆抗体的重链和轻链的可变区的制作方法
技术领域：
：本发明属于生物医学
技术领域：
，涉及一种单克隆抗体，特别涉及一种抗人IL-13Ra2单克隆抗体(FMMU-IL-13Ra2-7)的重链和轻链可变区，包括其氨基酸序列及其核苷酸序列。
背景技术：
：恶性肿瘤是危害人类健康的重大疾病，针对其的治疗手段目前仍处于研究和探索阶段。继传统的手术治疗、放疗、化疗和免疫治疗之后，以结合基因工程和蛋白质工程技术为代表的靶向抗体药物治疗正成为治疗肿瘤的新兴研究领域，受到基础医学和临床医学研究领域科研工作者的广泛关注。人IL-13Roc2是特异性高表达于人神经胶质瘤、头颈部肿瘤、卵巢癌和肾癌等恶性肿瘤细胞表面的肿瘤特异性标志物，在恶性肿瘤的靶向治疗中发挥重要作用。人IL-13Rot2作为人神经胶质瘤、头颈部肿瘤、卵巢癌和肾癌等恶性肿瘤细胞的治疗靶点早在1988年已引起美国FDA的注意，该组织先后制备了针对人IL-13Ra2治疗靶点的药物IL-13-PE38和针对人IL-13Ra2的单链抗体ScFv-PE融合分子。尽管IL-13-PE38已在神经胶质瘤、头颈部肿瘤、卵巢癌和肾癌等恶性肿瘤细胞的治疗中取得了疗效并已被美国FDA批准进入临床I/II期治疗，但由于在治疗肿瘤过程中，IL-13-PE38不仅与肿瘤细胞表面特异性表达的人IL-13Roc2结合，它还可以与表达于正常组织细胞表面的IL-13Ral结合，损伤正常组织和细胞。由于缺乏严格的靶向性，限制了IL-13-PE38的进一步应用。为解决针对人IL-13Rot2的特异性耙向问题，美国FDA应用噬菌体展示库技术获得针对人IL-13Rot2的单链抗体，进而构建IL-13Ra2(ScFv)-PE38真核表达载体并表达获得了人源化的IL-13Ra2(ScFv)-PE38抗体制剂，但后续研究发现该分子与人IL-13Roc2亲和力较低，需要大剂量使用才能达到有效的杀伤肿瘤细胞的效果。抗体单体分子是由两条相同的重链(H链)和两条相同的轻链(L链)，通过链间二硫键连接而成的四肽链结构。H链和L链包括氨基(N)端和羧基(C)端，靠近N端的可变区(V区)由高变区/互补决定区(HVR/CDR)和骨架区(FR)组成；靠近C端为恒定区(C区)。重链可变区(VH)和轻链可变区(VL)形成的蛋白质折叠是抗原结合部位，其中的CDR/HVR是抗体与抗原决定基互补结合的部位，C区引发抗原抗体识别后的反应。抗体根据FR/C区不同可分为人源、鼠源等，鼠源性抗体在人体内使用时具有免疫原性，易引起人体的免疫反应，这些免疫反应可引起对鼠源性抗体的清除以及免疫复合物介导的超敏反应。为了克服鼠源性抗体的缺陷，需要构建高亲和力的特异性的嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体。在构建人源化抗体过程中，采用噬菌体抗体库等技术获得的人源化抗体亲和力不高，使用剂量大。为提高抗体的亲和力，最为重要的是获得具有良好特异性和亲和力的鼠源性亲本抗体，克隆其轻链和重链可变区基因，然后将可变区基因克隆入相应载体构建相应的基因工程抗体重组DNA，表达基因工程抗体来实现人源化。因此，筛选出特异性分泌高亲和力鼠源性单克隆抗体的杂交瘤细胞克隆，从中克隆出高亲和力抗体的重链和轻链可变区基因，分析其氨基酸序列对进一步构建高亲和力和特异性的人源化基因工程抗体具有决定性的意义。
发明内容本发明的目的在于，提供一种高亲和力的抗人IL-13Roc2单克隆抗体的重链和轻链可变区，包括其基因及其氨基酸序列，为构建高亲和力的抗人IL-13Roc2嵌合或人源化基因工程抗体提供支持。为了实现上述发明目的，本发明的技术方案是(1)制备一组小鼠抗人IL-13Rot2单克隆抗体，从中筛选出具有高亲和力的抗人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7;实验证实该单克隆抗体能够特异性地结合人IL-13Ra2，所述的证实实验包括ELISA检测、流式细胞仪检测及病理切片免疫组织化学检测，(2)克隆该单克隆抗体轻链和重链可变区基因；所述的单克隆抗体可变区基因序列如SEQIDNO.3和SEQIDN0.4所示；(3)获得该单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认该基因序列和相应蛋白序列的惟一性；所述的单克隆抗体可变区氨基酸序列如SEQIDNO.l和SEQIDN0.2所示，并分析出其CDR区；轻链的3个CDR序列分别为，CDRhLys-Ser-Val-Ser-Thr-Ser-Gly-Tyr-Ser-Tyr,CDR2:Leu-Val-Ser，CDR3:Gin-His-lie-Arg-Glu-Leu-Thr-Arg;重链的3个互补决定区(CDR)序列分别为，CDR1:Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Trp，CDR2:lie-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-Ser，CDR3:Ala-Thr-Gly-Thr-Glu-Phe-(4)设计构建以人IL-13Rcx2为靶点的基因工程抗体或疫苗。本发明的技术效果本发明筛选出高亲和力抗人IL-13Roc2的单克隆抗体FMMU-IL-13Roc2-7，并克隆出其轻链和重链可变区，测序后得到其独特的核苷酸序列，为构建具有良好药用价值的抗人IL-13Roc2嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体奠定了基础。5图1是抗人IL-13Roc2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7与胶质瘤细胞系U251表面人IL-13Ra2结合的流式细胞仪检测结果图(FITC:异硫氰酸荧光素，横轴为细胞数，纵轴为荧光强度)；图la为抗葡萄球菌肠毒素D(SED)单克隆抗体对照图，图lb为FMMU-IL-13Ra2-7单抗结果图。图2是抗人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7与胶质瘤细胞系U87表面人IL-13Ra2结合的流式细胞仪检测结果图；图2a为SED对照图，图2b为FMMU-IL-13Ra2-7单抗结果图。图3是抗人IL-13Ra2单克隆抗体(FMMU-IL-13Ra2-7)检测胶质瘤石蜡切片中人IL-13Ra2表达的免疫组织化学染色图。具体实施例方式下面对本发明作详细说明。可变区基因的完整核苷酸序列，尤其是其功能性片段的核苷酸序列(如CDR等)以及抗体可变区的氨基酸序列，是嵌合抗体、单链抗体或人源化抗体构建的基础。为此，申请人用重组人IL-13Ra2免疫BALB/c小鼠，制备了一组小鼠抗人IL-13Rot2单克隆抗体，克隆并从中筛选出能分泌高亲和力人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7的杂交瘤细胞株，该株杂交瘤细胞具有稳定分泌抗体的能力。克隆该单克隆抗体轻链和重链可变区基因；所述的单克隆抗体可变区基因序列如SEQIDNO.3和SEQIDN0.4所示；获得该单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认该基因序列和相应蛋白序列的惟一性及其CDR序列；所述的单克隆抗体可变区氨基酸序列如SEQIDNO.l和SEQIDNO.2所示.本发明具体按以下步骤实施1小鼠抗人IL-13Ra2高亲和力抗体的制备1.1单克隆抗体的制备、纯化重组人IL-13Rot2分子委托武汉三鹰生物技术有限公司制备。按单克隆抗体制备方法(细胞和分子免疫学实验技术第一版，P9-P17)，用重组人IL-13Ra2免疫BALB/c小鼠(购自第四军医大学实验动物中心)，制备一组小鼠抗人IL-13Ra2单克隆抗体，从杂交瘤细胞株FMMU-IL-13Ra2-l14中选择能分泌高亲和力的抗人IL-13Ra2单克隆抗体，发现FMMU-IL-13Ra2-7杂交瘤细胞株分泌的抗体具有较高的亲和力及与细胞表面天然表达的人IL-13Ra2分子结合的能力。按小鼠腹水制备方法制备腹水(细胞和分子免疫学实验技术第一版,P9-P17)。腹水经硫酸铵沉淀后，采用ProteinA亲和层析法纯化。用SDS-PAGE鉴定纯化抗体的纯度，纯化的抗体FMMU-IL-13Ra2-7纯度达到95%。1.2抗人IL-13Ra2单克隆抗体效价测定实验用IgG亚类检测试剂盒(美国Sigma公司)分别检测制备的FMMU-IL-13Ra2-l14单克隆抗体的IgG亚类，间接ELISA法(细胞和分子免疫学实验技术，第一版，P44-46)检测FMMU-IL-13Ra2-l14杂交瘤细胞株的腹水效价。以重组人IL-13Ra2为抗原，检测FMMU-IL-13Ra2-l~14单克隆抗体在免疫印迹法(分子克隆实验指南，第二版，P888-P897)中结合抗原的能力。用流式细胞术(细胞和分子免疫学实验技术，第一版，P78-P89)检测FMMU-IL-13Ra2-l~14单克隆抗体识别高表达人IL-13Ra2的胶质瘤细胞系U251细胞上天然IL-13Ra2的能力。腹水效价实验结果如表1所示，第7、14杂交瘤细胞株产生的腹水效价最高，为10:表明其与抗原亲和力很高；将上述两株单克隆抗体用于免疫印迹实验均得到阳性结果。但第14株杂交瘤细胞株不能在流式细胞术检测中获得阳性结果，表明其可能不能识别细胞表面的天然IL-13Ra2分子。而第7株杂交瘤细胞株则能够识别细胞表面的天然IL-13Ra2分子，利用其可变区制备的基因工程抗体更有可能与细胞表面的天然IL-13Ra2结合并进一步发挥生物学作用。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>1.3抗人IL-13Roc2单克隆抗体FMMU-IL-13Rot2-7与胶质瘤细胞系U251和U87表面人IL-13Ra2结合采用间接免疫荧光染色法结合流式细胞术检测FMMU-IL-13Roc2-7单抗与胶质瘤细胞系U251和U87表面天然IL-13Ra2分子的结合能力(细胞和分子免疫学实验技术，第一版，P78-80)，以FMMU-IL-13Ra2-7为一抗，FITC标记羊抗小鼠抗体为二抗，流式细胞仪分析。如图l、2所示，与SED对照相比，FMMU-IL-13Ra2-7单抗与高表达人IL-13Ra2的胶质瘤细胞系结合能力明显增强，说明FMMU-IL-13Ra2-7单抗特异性识别胶质瘤细胞表面的IL-13Ra2分子。1.4抗人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Rot2-7检测胶质瘤切片中人IL-13Ra2的表达以FMMU-IL-13Ra2-7单克隆抗体为一抗，用免疫组织化学方法(病理学技术，第一版，P367-372)检测FMMU-IL-13Ra2-7识别胶质瘤石蜡切片中人IL-13Ra2的能力。如图3所示，可见FMMU-IL-13Ra2-7单克隆抗体可特异性识别胶质瘤肿瘤细胞表面的人IL-13Ra2分子。2人IL-13Ra2mAb轻链和重链可变区基因的克隆2.1FMMU-IL-13Ra2-7杂交瘤细胞的培养按常规方法复苏(细胞培养，第一版，P88)FMMU-IL-13Ra2-7细胞，用含10%小牛血清的RPMI1640培养基于37°C，5%C02孵箱中培养。2.2总RNA的提取和cDNA第一链的合成用TRIZOLReagent(购自美国GIBCO公司)，按说明书提取总RNA。cDNA第一链合成试剂盒购自Fermentas公司(美国)，按产品说明书进行反转录合成cDNA第一链。2.3PCR法扩增FMMU-IL-13Rot2-7VL和FMMU-IL-13Roc2-7VH基因PCR法扩增试剂盒购自Takara公司，以cDNA第一链为模板进行PCR。反应体积50pl，反应条件为95°C30s,58°Clmin，循环35次；VL、Vh的正、反向引物核苷酸序列为VlF:gttagatctccagcttggtcccVlB:gacattcagctgacccagtctccaVHF:tgaggagacggtgaccgtggtcccttggccccagVhB:aggtsmarctgcagsagtcwgg(IUB标准兼并碱基代码s:c/g;m:a/c;r:a/g;w:a/t)2.4PCR扩增产物的克隆和筛选PCR产物经1.5%琼脂糖凝胶电泳，用小量胶回收试剂盒(购自美国Axygen公司)回收抗体重链和轻链可变区片段，用pMD18T试剂盒(购自日本Takara公司)将该片段按说明书插入pMD18T载体中。转化E.coliXL-10(购自北京中国普通微生物菌种保藏中心)，用五co/I和I限制性核酸内切酶(购自Takara公司)消化法筛选重组阳性克隆(酶切得到400bp片段)。用双脱氧核酸末端终止法测定基因序列，由北京奥科生物技术有限责任公司完成，测定结果如SEQIDN0.3和SEQIDN0.4所示。3FMMU-IL-13Ra2-7轻链和重链可变区的氨基酸序列及同源性分析3.1确定测序无误后，在GenBank+EMBL+DDBJ+PDB数据库中，进行核苷酸序列同源性分析(Blastn)。分析结果表明，FMMU-IL-13Rcx2-7单抗轻链可变区基因与小鼠抗角蛋白单克隆抗体克隆2H8免疫球蛋白轻链可变区同源性最高，同源性为328/330,同源性百分比为99%，(见BLASTNl，说明书第14页)；FMMU-IL-13Roc2-7单抗重链可变区基因与小鼠Igu链B2基因V-D-J1区同源性最高，同源性为319/355，同源性百分比为89%，(见BLASTN2,说明书第15页)。3.2将可变区基因翻译成氨基酸序列，如SEQIDNO.l和SEQIDN0.2所示。在non-redundantGenbankCDStranslations+PDB+SwissProt+PIR+PRF蛋白质数据库中,进行氨基酸序列词源性分析(Blastp)。分析结果表明，FMMU-IL-13Rot2-7单抗轻链氨基酸序列与抗角蛋白抗体免疫球蛋白轻链可变区同源性最高，同源性为109/110，同源性百分比为99%,(见BLASTP3，说明书第16页)；FMMU-IL-13Ra2-7单抗重链氨基酸序列与小鼠抗独特性抗体重链同源性最高，同源性为105/117，同源性百分比为89%(见BLASTP4，说明书第16页)。编码FMMU-IL-13Rot2-7mAb的轻链和重链可变区的基因的核苷酸序列和氨基酸序列同源性分析结果表明未发现与本发明相同的基因序列。3.3利用IMGT/V-QUEST分析可变区结构，确定CDR区。将测序所得FMMU-IL-13Ra2-7抗体轻链和重链可变区序列，在IMGT/V-QUEST网站(http:Vimgt.cines.fr/IMGT_vquest/vquest)分析，得出其CDR区。FMMU-IL-13Ra2-7抗体轻链CDR区CDR1:Lys-Ser-Val國Ser-Thr國Ser-Gly國Tyr-Ser-TyrCDR2:Leu國Val曙SerCDR3:Gln陽His画Ile-Arg-Glu-Leu-Thr-ArgFMMU-IL-13Ra2-7抗体重链CDR区CDR1:Gly画Tyr誦Thr醒Phe-Thr誦Asn-Tyr曙TrpCDR2:Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-SerCDR3:Ala國Thr國Gly-Thr國Glu-Phe-Thr-Tyr4.基因工程抗体设计基于抗人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7的表达、纯化以及序列分析，设计构建以下生物制品(1)抗人IL-13Ra2单链抗体的构建将本发明的单克隆抗体FMMU-IL-13Rot2-7的轻链和重链可变区基因插入表达载体pCONTAB5E中，获得的单链抗体基因转化表达菌株，通过诱导该基因的表达，制备对恶性肿瘤有潜在治疗作用的单链抗体。(2)人源化抗体的构建将本发明的单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7轻链和重链可变区的CDR区移植到人源可变区的FR中，形成CDR移植抗体(CDR-gmftedantibody)也称重构抗体(reshapingantibody)或人源化抗体(humanizedantibody)。禾偶CDR移植技术改造抗体，可以获得保持鼠源性亲本mAb的特异性，同时更加接近人抗体的新型抗体，用于制备对恶性肿瘤有潜在治疗作用的人源化抗体。(3)根据本发明的基因序列及其编码的氨基酸序列，制备针对人IL-13Ra2功能表位的如人鼠嵌合抗体、Fab抗体、疫苗或其他生物制品。抗人IL-13Ra2单克隆抗体FMMU-IL-13Ra2-7氨基酸序列及基因序列〈110〉中国人民解放军第四军医大学<120〉一种抗人IL-13Ra2单克隆抗体的可变区〈160〉4〈210〉1〈211〉110〈212>PRT<213〉人工合成〈400>1AsplieGhiLeuThrGinSerProAlaSerLeuAlaValSerLeuGlyGinArgAlaThr15101520lieSerTyrArgAlaSerLysSerValSerThrSerGlyTyrSerTyrMetHisTrpAsn2125303540GinGinLysProGlyGinProProArgLeuLeulieTyrLeuValSerAsnLeuGluSer4145505560GlyValProAlaArgPheSerGlySerGlySerGlyThrAspPheThrLeuAsnlieHis6165707580ProValGluGluGluAspAlaAlaThrTyrTyrCysGinHislieArgGluLeuThrArg8185卯95腦SerGluGlyGlyProSerTipArgSerAsn101105110〈210>2〈211〉114<212〉PRT<213〉人工合成〈400>2ValGinLeuGinGluSerGlyAlaGluLeuAlaArgProGlyAlaSerVallysLeuSer15101520CysLysAlaSerGlyTyrThrPheThrAsnTyrTrpLeuGinTrpValLysGinArgPro2125303540GlyGinGlyLeuGluTrplieGlyAlalieTyrProGlyAsnAspAspSerArgTyrAla4145505560GinLysPheAsnValLysAlaThrLeuThrAlaAspLysSerSerSerThrAlaTyrMet6165707580GinLeuSerAsnLeuAlaSerGluAspSerAlaValTyrTyrCysAlaThrGlvThrGlu81859095100PheThrTvsTrpGlyGinGlyThrThrValThrValSerSer101105110114〈210〉3<211〉330〈212〉DNA<213〉人工合成<400〉3gacattcagctgacccagtctcctgcttccttagctgtatctctggggcagagggccacc60atctcatacagggccagcaaaagtgtcagtacatctggctatagttatatgcactggaac120caacagaaaccaggacagccacccagactcctcatctatcttgtatccaacctagaatct180ggggtccctgccaggttcagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat240cctgtggaggaggaggatgctgcaacctattactgtcetgcacattagggagcttacacgt300tcggaggggggaccaagctggagatctaac330<210〉4<211〉342<212〉DNA〈213>人工合成〈400〉4ggtgcaactgcaggagtctggggctg肪ctggcaagacctggggcttcagtgaagttgtc60ctgcaaggcttctggctacacctttactaactactggttgcagtgggtaaaacagaggcc120tggacagggtctggagtggattggggccatttatcctggaaatgatgattctaggtacgc180tcsaaagttcaatgtcaaggccacattgactgcag3tasatcgtcc3gcacagccacatg240tcaactcagcaatttggcatctgaggactctgcggtctattactgtgcaactgggacgga300gtttacttactggggccaagggaccacggtcaccgtctcctc34215FMMU-IL-13Ra2-7轻链和重链可变区的基因序列及氨基酸序列同源性分析BLASTN1RID:EK1F2W4W01RDatabase:AllGenBank+EMBL+DDBJ+PDBsequences(butnoEST,STS,GSS，environmentalsamplesorphase0，1or2HTGSsequences)7,567,972sequences;25,029,697,616totallettersLength=330gb|AY247150.11Musmusculusclone2H8anti-keratinimmunoglobulinlightchainvariableregionmRNA，partialcdsLength=330Score=599bits(324),Expect=3e-168Identities=328/330(99%),Gaps=0/330(0%)Strand=Plus/PlusQuery1GACATTCAGCTGACCCAGTCTCCTGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACC60Sbjct1GACATTCAGCTGACCCAGTCTCCAGCTTCCTTAGCTGTATCTCTGGGGCAGAGGGCCACC60Query61ATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAAC120Sbjct58ATCTCATACAGGGCCAGCAAAAGTGTCAGTACATCTGGCTATAGTTATATGCACTGGAGC120Query301TCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATCTAAC330Sbjct298TCGGAGGGGGGACCAAGCTGGAGATCTAAC330BLASTN2■DP6ZPU5Z013Database:AllGenBank+EMBL+DDBJ+PDBsequences(butnoEST,STS，GSS，environmentalsamplesorphase0，1or2HTGSsequences)7,538,883sequences;24,955,484,671totallettersLength=342gb|M25110.llMUSIGHZZBMouseIgmu-chainB2geneV-D-JH1region,partialcdsLength=630Score=444bits(240),Expect=le_121Identities=319/355(89%),Gaps=14/355(3%)Strand=Plus/PlusQuery:1GGTGCAACTGCAGGAGTCTGGGGCTGAACTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTC60IIIIIIISbjct:276GGTTCAGCTCCAGCAGTCTGGGGCTGAGCTGGCAAGACCTGGGGCTTCAGTGAAGTTGTC335Query:61CTGCAAGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAACTACTGGTTGCAGTGGGTAAAACAGAGGCC120Sbjct:336CTGCMGGCTTCTGGCTACACCTTTACTAGCTACTGGATGCAGTGGGTAAAACAGAGGCC395Query:121TGGACAGGGTCTGGAGTGGATTGGGGCCATTTATCCTGGAAATGATGATTCTAGGTACGC180Sbjct:396TGGACAGGGTCTGGAATGGATTGGGGCTATTTATCCTGGAGATGGTGATACTAGGTACAC455Query:181TCAAAAGTTCAATGTCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCGTCCAGCACAGCCTACAT240Sbjct:456TCAGAAGTTCAAGGGCAAGGCCACATTGACTGCAGATAAATCCTCCAGCACAGCCTACAT515Query:241GCAACTCAGCAATTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAC-TGGG-ACG298Sbjct:516GCAACTCAGCAGCTTGGCATCTGAGGACTCTGCGGTCTATTACTGTGCAAGATGGGGAAG575Query:299GAG-T--T--TACTT--A—-CTGGGGC-CAAGGGACCACGGTCACCGTCTCCTC342Sbjct:576TAGCTACTGGTACTTCGATGTCTGGGGCGCA-GGGACCACGGTCACCGTCTCCTC629<formula>formulaseeoriginaldocumentpage18</formula>权利要求1、一种抗人IL-13Rα2单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，轻链的3个互补决定区(CDR)序列分别为，CDR1Lys-Ser-Val-Ser-Thr-Ser-Gly-Tyr-Ser-Tyr，CDR2Leu-Val-Ser，CDR3Gln-His-Ile-Arg-Glu-Leu-Thr-Arg；重链的3个互补决定区(CDR)序列分别为，CDR1Gly-Tyr-Thr-Phe-Thr-Asn-Tyr-Trp，CDR2Ile-Tyr-Pro-Gly-Asn-Asp-Asp-Ser，CDR3Ala-Thr-Gly-Thr-Glu-Phe-Thr-Tyr。2、如权利要求1所述的抗人IL-13R(x2单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，所述的轻链可变区氨基酸序列如SEQIDNO.l所示，所述的重链可变区氨基酸序列如SEQIDN0.2所示。3、一种抗人IL-13Rcx2单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，编码轻链可变区的核苷酸序列如SEQIDN0.3所示，编码重链可变区的核苷酸序列如SEQIDN0.4所示。4、权利要求1或3所述的抗人IL-13Rot2单克隆抗体的重链和轻链的可变区，其特征在于，应用于构建以人IL-13Roc2为耙点的基因工程抗体或疫苗的制备。全文摘要一种抗人IL-13Rα2单克隆抗体的重链和轻链的可变区，用重组人IL-13Rα2免疫BALB/c小鼠，制备一组小鼠抗人IL-13Rα2单克隆抗体，并筛选出具有高亲和力的抗人IL-13Rα2单克隆抗体FMMU-IL-13Rα2-7。克隆该单克隆抗体轻链和重链可变区基因，获得该单克隆抗体轻链和重链可变区基因序列和氨基酸序列，确认这些基因序列与蛋白序列的惟一性。可变区的氨基酸序列以及编码这些可变区的基因序列在构建针对人IL-13Rα2为靶点的对恶性肿瘤有治疗作用的单链抗体、嵌合抗体、人源化抗体或疫苗方面有重要的潜在应用价值。文档编号C07K16/18GK101440130SQ200810232360公开日2009年5月27日申请日期2008年11月21日优先权日2008年11月21日发明者宋朝君,徐竹蔚,琨杨,金伯泉,陈丽华,龚玖瑜申请人:中国人民解放军第四军医大学