专利名称：干细胞培养的制作方法
干细胞培养对相关申请的交叉引用本申请要求于2008年12月3日提交的美国临时申请号61/200，808的优先权，将该申请的全部内容结合入本文中用于所有目的。
背景技术：
胚胎干细胞(ESCs)是多能细胞，其具有无限地自我更新和分化成身体的所有细胞类型的能力(Thomson, J. Α.等，Science (科学)282 (5391) :1145-1147(1998) ；Thomson, J.A.&Odorico，J. S.，Trends Biotechnol (生物技术趋势)18 O) :53-57 (2000))。此能力提供了希望，即有一天ESC将被用来替换损失的和损伤的细胞，并且提供常规药物所不能达到的治疗。然而，为了充分实现hESC的临床潜力，需要建立化学成分限定的、无饲养细胞-和动物产品、稳定的培养条件。尽管已经报道了几种化学成分限定培养基Mao， S.等.，Proc Natl Acad Sci USA (美国国家科学院院刊)103 (18) :6907-6912(2006) ；Lu, J.等.，Proc Natl Acad Sci USA (美国国家科学院院刊)103 (15) :5688-5693(2006)； Ludwig, Τ. E.等.，Nat Biotechnol (自然生物技术)24(2) 185-187 Q006))，但由于细胞在它们中的性能欠佳，它们大多仍然是不令人满意的。尤其是在这些条件下，当细胞通过胰蛋白酶传代为单一细胞时，它们经历广泛的细胞死亡。许多介导hESC自我更新的信号传导途径是已知的，包括 FGF，TGF-0，Wnt，等(James, D.等·，Development (发育)132 (6) 1273-1282(2005) ；Xu,R. H.等.，Nat Methods (自然方法)2(3) :185-190(2005) ；Beattie, G.M.等.，Stem Cells (干细胞)23 (4) :489-495(2005) ；Greber，B.，Lehrach，H.，&Adjaye， J.，Stem Cells (干细胞)25 O) :455-464(2007) ；Sato, N.等·，Nat Med (自然-医学)10(1) 55-63 (2004) )0然而，它们中没有一个似乎能在此过程中充当存活因子，其分子机制是复杂的。发明简述本发明提供了具有下式的化合物
权利要求
1.具有下式的化合物
2.权利要求1所述的化合物，其中环A是取代或未被取代的芳基。
3.权利要求1所述的化合物，其中环A是取代或未被取代的苯基。
4.权利要求1所述的化合物，其中环B是取代或未被取代的杂环烷基，或取代或未被取代的杂芳基。
5.权利要求1所述的化合物，其中环B是取代或未被取代的杂芳基。
6.权利要求1所述的化合物，其中环B是取代或未被取代的吡唑基，取代或未被取代的呋喃基，取代或未被取代的咪唑基，取代或未被取代的异噁唑基，取代或未被取代的噁二唑基，取代或未被取代的噁唑基，取代或未被取代的吡咯基，取代的或未被取代的吡啶基，取代或未被取代的嘧啶基，取代或未被取代的哒嗪基，取代或未被取代的噻唑基，取代或未被取代的三唑基，取代或未被取代的噻吩基，取代或未被取代的二氢噻吩-吡唑基，取代或未被取代的硫茚基，取代或未被取代的咔唑基，取代或未被取代的苯并噻吩基，取代或未被取代的苯并呋喃基，取代或未被取代的吲哚基，取代或未被取代的喹啉基，取代或未被取代的苯并三唑基，取代或未被取代的苯并噻唑基，取代或未被取代的苯并噁唑基，取代或未被取代的苯并咪唑基，取代或未被取代的异喹啉基，取代或未被取代的异吲哚基，取代或未被取代的吖啶基，取代或未被取代的苯并异噻唑基，或取代或未被取代的二甲基乙内酰脲。
7.权利要求1所述的化合物，其中L2是取代或未被取代的C1-Cltl烷基。
8.权利要求1所述的化合物，其中L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
9.权利要求1所述的化合物，其中L2是亚甲基。
10.权利要求1所述的化合物，其中环A是取代或未被取代的芳基；环B是取代或未被取代的杂芳基；R1是氢；并且L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
11.权利要求1所述的化合物，其中R2是氢。
12.权利要求1所述的化合物，其中R1是氢或是未被取代的C1-Cltl烷基。
13.权利要求1所述的化合物，其中R1是氢。
14.权利要求1所述的化合物，具有下式
15.权利要求14所述的化合物，其中L2是取代或未被取代的C1-Cltl烷基。
16.权利要求14所述的化合物，其中L2是未被取代的C1-Cltl烷基。
17.权利要求14所述的化合物，其中L2是亚甲基。
18.权利要求14所述的化合物，其中X是-N=或-CH =。
19.权利要求14所述的化合物，其中ζ是2且邻近顶点处的两个R3结构部分连接在一起形成取代或未被取代的杂环烷基。
20.权利要求14所述的化合物，其中ζ是1。
21.权利要求14所述的化合物，其中y是0或1。
22.权利要求14所述的化合物，其中R3是-0R18，且R18是氢或未被取代的C1-Cltl烷基。
23.权利要求14所述的化合物，其中 L2是亚甲基；X 是-N =或-CH =； R1是氢；并且 y和ζ是0。
24.权利要求1所述的化合物，具有下式
25.具有下式的化合物
26.权利要求25所述的化合物，其中环D是取代或未被取代的苯基。
27.权利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的烷基或取代或未被取代的环烷基。
28.权利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的C1-Cltl烷基或取代或未被取代的3-7元环烷基。
29.权利要求25所述的化合物，其中R2°是取代或未被取代的C1-C5烷基或取代或未被取代的3-6元环烷基。
30.权利要求25所述的化合物，其中R2°是未被取代的C1-C5烷基或未被取代的3-6元环烷基。
31.权利要求25所述的化合物，其中R22是氢；并且Rm是取代或未被取代的环烷基，取代或未被取代的杂环烷基，取代或未被取代的芳基， 或取代或未被取代的杂芳基。
32.权利要求25所述的化合物，其中R22是氢；并且R23是取代或未被取代的取代或未被取代的芳基。
33.权利要求25所述的化合物，其中R22和R23连接在一起形成取代或未被取代的杂环烷基，或取代或未被取代的杂芳基。
34.权利要求25所述的化合物，其中R22和R23连接在一起形成取代或未被取代的吡咯基，取代或未被取代的异二氢氮杂茚基，取代或未被取代的哌啶基，或取代或未被取代的四氢喹啉基。
35.权利要求25所述的化合物，具有下式
36.权利要求35所述的化合物，其中R28为-0R4°，其中R4°为氢或未被取代的C1-Cltl烷基。
37.权利要求36所述的化合物，其中R4°为氢或未被取代的C1-C5烷基。
38.权利要求35所述的化合物，其具有下式
39.权利要求38所述的化合物，其中R2°为未被取代的C1-Cltl烷基。
40.权利要求38所述的化合物，其中R28为-0R4°，其中R4°为氢或未被取代的C1-Cltl烷基，或被取代或未被取代的C3-C6环烷基取代的C1-Cltl烷基。
41.权利要求38所述的化合物，其中q为1。
42.权利要求38所述的化合物，其具有下式
43.权利要求25所述的化合物，其具有下式
44.一种体外稳定分离的细胞的方法，所述方法包括使动物细胞与足量的式I或式III 化合物(例如，权利要求1-43所述的化合物中的任一种)接触以稳定所述细胞。
45.权利要求44所述的方法，其中进一步包括在所述化合物的存在下改变所述细胞的条件或环境，其中在缺少所述化合物的条件下所述改变步骤会导致细胞的细胞编程变化。
46.权利要求45所述的方法，其中所述改变步骤包括使所述细胞解冻和使所述细胞与其它细胞解离的至少一个。
47.权利要求44所述的方法，其中所述细胞是贴壁的。
48.权利要求44所述的方法，其中所述细胞处于混悬液中。
49.权利要求44所述的方法，还包括确定所述细胞的表型。
50.权利要求44所述的方法，包括从动物中分离所述细胞。
51.权利要求50所述的方法，其中所述动物是人。
52.权利要求50所述的方法，其中所述动物是非人动物。
53.权利要求44所述的方法，其中所述化合物是式I化合物。
54.权利要求44所述的方法，其中所述化合物是式III化合物。
55.一种改善动物的病症的方法，所述方法包括施用足量的式I或式III化合物(例如，权利要求1-43所述的化合物中的任一种)于需要所述方法的动物以改善所述病症。
56.权利要求55所述的方法，其中所述病症选自由组织损伤、卒中和癌症组成的组。
57.权利要求56所述的方法，其中所述组织选自由胰腺、肝、肠、肺和肾组成的组。
58.权利要求55所述的方法，其中所述病症包括移植组织或器官的至少部分排斥。
59.权利要求58所述的方法，其中所述移植包括骨髓、脐带血、纯化的造血干细胞或祖细胞、心脏细胞、神经细胞、胰腺β细胞或肝细胞的移植。
60.权利要求55所述的方法，其中所述化合物是式I化合物。
61.权利要求55所述的方法，其中所述化合物是式III化合物。
62.一种维持细胞存活的方法，所述方法包括，产生分离的干细胞、祖细胞或分化细胞；和诱导所述分离的细胞中E-钙黏着蛋白的稳定，从而维持细胞存活。
63.权利要求62所述的方法，其中所述诱导步骤包括使所述分离的干细胞与足以提高分离的干细胞的存活率的量的式I化合物(例如，权利要求I-M所述的化合物中的任一种)接触，与缺少所述化合物的情况相比，所述式I化合物的量将分离的干细胞的存活率提高至少2倍。
64.权利要求62所述的方法，其中所述诱导步骤包括在表面上培养所述分离的干细胞，其中包含E-钙黏着蛋白胞外结构域的分子栓系在所述表面上。
65.一种分离的细胞群，其包含足以提高分离的细胞的存活率的量的稳定所述细胞中的E-钙黏着蛋白的分子，与缺少所述分子的情况相比，所述分子的量将分离的细胞的存活率提高至少2倍。
66.权利要求65所述的细胞群，其中所述分子包含式I化合物(例如，权利要求I-M 所述的化合物中的任一种)。
67.权利要求65所述的细胞群，其中所述细胞选自由干细胞、诱导的干细胞、多能干细胞、祖细胞、分化细胞、β细胞和成纤维细胞组成的组。
68.一种分离的细胞群，其包含足以提高分离的细胞的存活率的量的式I或式III化合物(例如，权利要求1-43所述的化合物中的任一种)，与缺少所述化合物的情况相比，所述式I或式III化合物的量将分离的细胞的存活率提高至少2倍。
69.权利要求68所述的细胞群，其中所述细胞选自由干细胞、诱导的干细胞、多能干细胞、祖细胞、分化细胞、β细胞和成纤维细胞组成的组。
70.一种维持干细胞存活的方法，所述方法包括，产生分离的细胞；和激活所述分离的细胞中的蛋白激酶C(PKC)，从而维持细胞存活。
71.权利要求70所述的方法，其中所述激活步骤包括使足量的佛波醇12-肉豆蔻酸酯 13-乙酸酯(PMA)与所述分离的细胞接触，从而与缺少PMA时的存活率相比提高所述细胞的存活率。
72.—种分离的干细胞群，其包含足以提高分离的干细胞的存活率的量的蛋白激酶C 激活物，与缺少所述PKC激活物的情况相比，所述蛋白激酶C激活物的量将分离的干细胞的存活率提高至少2倍。
73.权利要求1所述的化合物，其中每个取代基独立地选自由下列各项组成的组Ch。烷基，CH。杂烷基，-OR ‘，= 0，= NR ‘，= N-OR ‘，-NR ‘ R 〃，-SR ‘，-卤素，-SiR ‘ R 〃 R ‘ 〃，-OC(O)R ‘，-C(O)R ‘，-CO2R ‘，-CONR ‘ R 〃，-OC(O) NR' R"，-NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，_NR〃 C(O)2R'，-NR-C(NR' R〃 R'“) = NR" “ ,-NR-C(NR' R〃 ) = NR' “，-S(O)R'，-S(O)2R'，-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，-CN，-NO2，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，其中每个R'，R〃 ,R'‘‘和R"‘‘独立地选自由氢，C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基和芳基烷基组成的组。
74.权利要求1所述的化合物，其中环A为环烷基，杂环烷基，芳基，或杂芳基，每个任选地被1-5个R3基团取代；环B为杂环烷基或杂芳基，每个任选地被1-5个R4基团取代；L1 为-C (0) -NR2-或-NR2-C (0)-；L2为键，C1,亚烷基或C1,杂亚烷基；R1和R2独立地为氢，C1,烷基，C1,杂烷基，C3_8环烷基，C3_8杂环烷基，芳基，或杂芳基；每个 R3 禾口 R4 独立地为-CN，-S(O)nR6, -NR7R8, -C(O)R9, -NR10-C(O) R11，-NR12-C(O) -OR13, -C(O)NR14R15, -NR16S(O)2R17, -OR18, -S (O)2NR19, C1^10 烷基，C1^10 杂烷基， 环烷基，杂环烷基，芳基，或杂芳基，其中η为0至2的整数，其中两个R3结构部分任选地连接在一起形成环烷基，杂环烷基，芳基，或杂芳基；和R6，R7，R8，R9，R10，R11, R12, R13, R14, R15, R16，R17, R18 和 R19 各自独立地为氢，C1,烷基，C1, 杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，或杂芳基。
75.权利要求25所述的化合物，其中每个取代基独立地选自由下列各项组成的组Ch。烷基，CH。杂烷基，-OR ‘，= 0，= NR ‘，= N-OR ‘，-NR ‘ R 〃，-SR ‘，-卤素，-SiR ‘ R 〃 R ‘ 〃，-OC(O)R ‘，-C(O)R ‘，-CO2R ‘，-CONR ‘ R 〃，-OC(O) NR' R"，-NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，_NR〃 C(O)2R'，-NR-C(NR' R〃 R'“) = NR" “ ,-NR-C(NR' R〃 ) = NR' “，-S(O)R'，-S(O)2R'，-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，-CN，-NO2，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，其中每个R'，R〃 ,R'‘‘和R"‘‘独立地选自由氢，C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基和芳基烷基组成的组。
76.权利要求25所述的化合物，其中环D为芳基或杂芳基，每个任选地被1-5个R基团取代；L3 为-C (0) NH-或-S (0) 2NH-；R20为C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，或杂芳基，每个任选地被1-5个 R基团取代；R21 为-NR22R23 或-OR24 ；R22和铲3独立地为氢，C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，或连接在一起形成杂环烷基或杂芳基，每个任选地被1-5个R基团取代；R24为C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基，杂芳基，每个任选地被1-5个R 基团取代；并且每个R基团独立地选自由下列各项组成的组=C1,烷基，C1,杂烷基，-OR'，= 0， = NR' ，= N-OR' ，-NR' R〃，-SR'，-卤素，-SiR' R “ R ‘ 〃，-OC(O)R' ，-C(O) R'，-CO2R'，-CONR' R"，-OC(O)NR' R"，_NR〃 C(O)R'，-NR' -C(O)NR" R' “，-NR" C(O)2R' ,-NR-C(NR' R" R' “ ) = NR" “ ,-NR-C(NR' R" ) = NR' “ ,-S(O)R' ,-S(0)2 R' ,-S(O)2NR' R〃 ,-NRSO2R'，_CN，-NO2，环烷基，杂环烷基，芳基和杂芳基，其中每个R'， R"，R'“和R"“独立地选自由氢，C1,烷基，C1,杂烷基，环烷基，杂环烷基，芳基和芳基烷基组成的组。
全文摘要
本发明涉及用于稳定细胞的化合物和它们的使用方法。
文档编号C07D513/02GK102307882SQ200980156028
公开日2012年1月4日 申请日期2009年12月3日 优先权日2008年12月3日
发明者丁生, 徐悦 申请人:斯克里普斯研究所