专利名称：一种重金属铜人工抗原的合成方法
技术领域：
一种重金属铜人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。
背景技术：
随着经济的迅猛发展重金属污染在我国越来越严重。虽然，用植物修复重金属污染土壤是当前国内外学术界的研究热点，但能有效减少环境中重金属含量的技术还停留在试验阶段，为了减少重金属从食物链进入人体，方便、简单、可靠地检测环境中重金属含量的技术是关键。现在常用的重金属检测技术，如原子吸收光谱法，电感耦合等离子体发射光谱法和动态磷光分析等技术，都需要昂贵的检测仪器和复杂的前处理，如高温、高压、强酸消化等。并且由于仪器测定条件变化与检测结果密切相关，需要非常专业的分析测试人员操作，因此，只有研究机构的中心实验室才具备测试条件，样品的检测周期相对较长，检测过程复杂，检测成本较高，不适应我国食品抽检实践中快速和简便的需要。当前，免疫检测技术已被广泛应用于毒素、杀虫剂、炸药等的环境污染和危险物的检测。与其他检测系统相比，免疫检测方法具有快速、廉价、简便、灵敏和特异的优点，可便携进行现场检测。近年来， 国内外已经开展了对重金属免疫分析方法的研究，但国内外尚没有针对铜酶联免疫检测的报道，为了弥补这一空白，有必要制备重金属铜人工抗原。
发明内容
本发明的目的是提供一种重金属铜人工抗原的合成方法。所制备的产品用于重金属的免疫分析方法研究。为今后人们的研究提供了必需的人工抗原。本发明的技术方案一种重金属铜人工抗原的合成方法，以二乙烯三胺五乙酸 DTPA为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联。工艺步骤为(1)重金属铜人工抗原的合成称取0. 147g的氯化铜溶于ImL浓硝酸中制备成铜离子溶液。称取6mg的DTPA至1. 5mL离心管中，先加入10 μ L的10mol/L的Κ0Η，再加入 990 μ L的0. lmol/L，pH值为9. 7的羟乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制备成DTPA 螯合剂溶液。称取0. 25g BSA 溶于 5mL、0. lmol/L、pH 值为 7. 4 的 HEPES 中制备成 50mg/mL 的 BSA溶液。先往反应器中加入520 μ L的DTPA螯合剂溶液，再加入12 μ L的铜离子溶液。在室温下、在磁力搅拌器上反应Ih以上，形成半抗原反应液。往半抗原反应液中几乎同时加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L、pH值为9. 7的HEPESdjff pH值至9. 0。反应过夜后，用Cenricon-30超滤离心管对蛋白质复合物进行分离纯化。即得重金属铜人工抗原。(2)重金属铜人工抗原的鉴定重金属铜人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结
3果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。偶联物蛋白浓度测定配制浓度为0，40，60，80，100，120，160, 200 μ g -πιΓ1的牛血清白蛋白溶液1. 5mL，加入5mL考马斯亮蓝染色液，立即混勻，30°C水浴温热5分钟，每个浓度做平行样.在595nm处测吸光值，绘制牛血清白蛋白浓度与吸光值的关系曲线。将抗原溶液按一定比例稀释，在595nm处测定抗原溶液的吸光值，从曲线上得到抗原溶液的相应的蛋白浓度。本发明的有益效果本发明成功合成了重金属铜人工抗原，合成步骤简洁，有效， 可完全用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对重金属研究的需要。
图1重金属铜人工抗原制备前后的紫外扫描图。
具体实施例方式实施例1(1)重金属铜人工抗原的合成称取0. 147g的氯化铜溶于ImL浓硝酸中制备成铜离子溶液。称取6mg的DTPA至1. 5mL离心管中，先加入10 μ L的10mol/L的KOH溶液，再加入990 μ L的0. lmol/L、pH值为9. 7的羟乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制备成DTPA螯合剂溶液。称取0. 25g BSA溶于5mL、0. lmol/L、pH值为7. 4的HEPES中制备成 50mg/mL的BSA溶液。先往反应器中加入520 μ L的DTPA螯合剂溶液，再加入12 μ L的铜离子溶液。在室温下、在磁力搅拌器上反应Ih以上，形成半抗原反应液。往半抗原反应液中几乎同时加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L,pH值为9. 7的HEPES,调节pH值至9.0。反应过夜后，用Centricon-30超滤离心管对蛋白质复合物进行分离纯化。即得重金属铜人工抗原。(2)重金属铜人工抗原的鉴定人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结果，利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。
权利要求
1. 一种重金属铜人工抗原的合成方法，其特征在于以二乙烯三胺五乙酸DTPA为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联；(1)重金属铜人工抗原的合成称取0. 147g的氯化铜溶于ImL浓硝酸中制备成铜离子溶液；称取6mg的DTPA至1. 5mL离心管中，先加入10 μ L的10mol/L的KOH溶液，再加入 990 μ L的ρ H 9. 7,0. lmol/L的羟乙基哌嗪乙硫磺酸HEPES溶液，溶解后即制备成DTPA螯合剂溶液；称取0. 25g牛血清白蛋白BSA溶于5mL、0. lmol/L、pH值为7. 4的HEPES溶液中制备成 50mg/mL 的 BSA 溶液；先往反应器中加入520 μ L的DTPA螯合剂溶液，再加入12 μ L的铜离子溶液，在室温下在磁力搅拌器上反应Ih以上，形成半抗原反应液；往半抗原反应液中几乎同时加入500 μ L的BSA溶液和200 μ L的0. lmol/L、pH值为 9. 7的HEPES溶液，调节pH值至9. 0 ；反应过夜后用Centricon-30超滤离心管对蛋白质复合物进行分离纯化，即得重金属铜人工抗原；(2)重金属铜人工抗原的鉴定重金属铜人工抗原采用凝胶电泳法鉴定其偶联结果， 利用标准蛋白得到标准曲线，计算其偶联比。
全文摘要
一种重金属铜人工抗原的合成方法，属于生物化工技术领域。本发明以二乙烯三胺五乙酸(DTPA)为螯合剂，将铜离子与载体蛋白牛血清白蛋白BSA偶联，成功合成了重金属铜的人工抗原，所制备的产品用于重金属的免疫分析方法研究。本发明合成步骤简洁，有效，可完全用于免疫分析中，为以后人们的研究提供了方便的途径，可以满足国内对重金属免疫分析方法研究的需要。
文档编号C07K14/765GK102219852SQ20101020828
公开日2011年10月19日 申请日期2010年6月18日 优先权日2010年6月18日
发明者严文静, 勇倩倩, 胥传来, 邓小芳, 陈莲君, 马文蔚 申请人:江南大学