专利名称：一种鳄鱼胶原蛋白及其制备方法和用途的制作方法
技术领域：
本发明涉及一种鳄鱼胶原蛋白及其制备方法和用途。
背景技术：
胶原蛋白是一种白色、不透明、无支链的纤维型蛋白质，分子含糖及大量甘氨酸、 脯氨酸和羟脯氨酸，主要存在于动物肌腱、韧带、软骨、皮肤及其他结缔组织中，占人体或者 其它动物体内总蛋白含量的25 33%。它具有支撑器官和保护肌体的功能，从动物中提取 不同组织中不同类型的胶原蛋白，其功能和作用也不同。随着生物化学的发展，人们对胶原 蛋白的认识逐渐提高，现在已经肯定胶原蛋白和免疫球蛋白一样，富有多样性和组织分布 的特异性，是与各组织、器官机能有关的功能性蛋白闭。鳄鱼皮、鳞甲、骨骼、掌及尾部含有 大量的胶原蛋白，但现在对其开发尚不完全。
发明内容
本发明目的在于公开一种鳄鱼胶原蛋白，本发明的目的还在于公开该胶原蛋白的 制备方法，本发明的目的还在于公开该胶原蛋白在抗衰老、组织修复和伤口促愈方面的用 途。本发明目的是通过如下方案实现的。本发明鳄鱼胶原蛋白是由如下方法制备而成取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成 丝，取鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至5-15%的Na2CO3中，浸泡2_6小时后，水洗 至中性；再浸没至2-6%的HCl中，浸泡2-6小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理 后，加入固液比1 2-4的2-6%乙酸-醋酸溶液，密闭，于40-60°C恒温水浴中，20-40min 后，加入酶底比为1-3%的胃蛋白酶，充分搅拌，35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤， 3000-5000r/min离心20-40min，取上清液，备用；沉淀再加入固液比1 2-4的2-6%乙 酸-醋酸溶液，密闭，于40-60°C恒温水浴中，20-40min后，加入酶底比为1_3%的胃蛋白酶， 充分搅拌，35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤，3000-5000r/min离心20_40min，取上清液； 合并上清液，加入2-3moL/LNaCl进行沉淀后，于5_15°C，8000_12000r/min离心10_20min， 弃上清液，取沉淀以0. 3-0. 8mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出透 析袋中的胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。本发明鳄鱼胶原蛋白优选由如下方法制备而成取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成 丝，取鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至10%的Na2CO3中，浸泡4小时后，水洗至中 性；再浸没至4%的HCl中，浸泡4小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理后，加入固 液比1 3的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶底比为2% 的胃蛋白酶，充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心30min，取上清液，备 用；沉淀再加入固液比1 3的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶底比为2%的胃蛋白酶，充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心 30min，取上清液；合并上清液，加入2. 6moL/LNaCl进行沉淀后，于10°C，10000r/min离心 15min，弃上清液，取沉淀以0. 5mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出 透析袋中的胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。
图1 胃蛋白酶酶解温度单因素考察；图2 胃蛋白酶酶解固液比单因素考察；鳄鱼皮、鳞甲、骨骼、掌及尾部含有大量的胶原蛋白，通过物理、化学、生物技术等 适当的方法处理后，能获得优质胶原蛋白，本发明公开了一种鳄鱼胶原蛋白的制备方法，不 仅可提高鳄鱼生产加工的附加值，同时可减少环境污染，获得良好的经济效益与社会效益。 药效学实验表明，本发明鳄鱼胶原蛋白在抗衰老、组织修复、伤口促愈和增强免疫方面具有 显著效果。下述实验例和实施例用于进一步说明但不限于本发明。实验例1本发明鳄鱼胶原蛋白提取方法中酶解工艺的单因素考察实验一、热水提与乙酸+酶水解对胶原蛋白组成的影响1、仪器与试剂日立L-8800型氨基酸自动分析仪，乙酸，胃蛋白酶(Sigma)，茚三酮(国药集团化 学试剂有限公司)2、氨基酸含量测定采用离子交换色谱法(GB/T 5009. 124-2003)，氨基酸自动分析仪工作条件分离 柱为4. 6mmX 600mm，进样量为每次20 μ 1，离子交换柱缓冲液泵流速0. 40ml/min，茚三酮泵 流速为 0. 3ml/min。3、操作过程A、本发明实施例1所述工艺制备得到的本发明鳄鱼胶原蛋白。B、热水提工艺取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物， 刮去脂肪，切成丝，取鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至10 %的Na2CO3中，浸泡4小 时后，水洗至中性；再浸没至4%的HCl中，浸泡4小时后，水洗至中性；取经过上述酸碱处 理过的样品，热水提M小时，粗滤，离心，取上清液，盐析，冻干，得到热水提胶原蛋白。利用氨基酸自动分析仪，A和B两种胶原蛋白进行比较。其中，色氨酸以4. 2molNaOH水解，过甲酸氧化法处理测定胱氨酸，其余氨基酸以 6molHCL水解测定；上机浓度为10. 45 μ g/50 μ L。结果见表1表1氨基酸含量检测表
权利要求
1.一种鳄鱼胶原蛋白，其特征在于该胶原蛋白由如下方法制备而成取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成丝，取 鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至5-15%的Na2CO3中，浸泡2_6小时后，水洗至中 性；再浸没至2-6%的HCl中，浸泡2-6小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理后，加 入固液比1 2-4的2-6 %乙酸-醋酸溶液，密闭，于40-60 V恒温水浴中，20-40min后，加入 酶底比为1-3%的胃蛋白酶，充分搅拌，35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤，3000-5000r/ min离心20-40min，取上清液，备用；沉淀再加入固液比1 2_4的2_6 %乙酸-醋酸溶 液，密闭，于40-60°C恒温水浴中，20-40min后，加入酶底比为的胃蛋白酶，充分搅拌， 35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤，3000-5000r/min离心20_40min，取上清液；合并上清 液，加入 2-3moL/LNaCl 进行沉淀后，于 5_15°C，8000-12000r/min 离心 10_20min，弃上清液， 取沉淀以0. 3-0. 8mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出透析袋中的 胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。
2.如权利要求1所述的鳄鱼胶原蛋白，其特征在于该胶原蛋白由如下方法制备而成取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成丝，取鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至10%的Na2CO3中，浸泡4小时后，水洗至中性； 再浸没至4%的HCl中，浸泡4小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理后，加入固液比 1 3的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶底比为2%的胃蛋 白酶，充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心30min，取上清液，备用；沉 淀再加入固液比1 3的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶 底比为2%的胃蛋白酶，充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心30min，取 上清液；合并上清液，加入2. 6moL/LNaCl进行沉淀后，于10°C，10000r/min离心15min，弃 上清液，取沉淀以0. 5mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出透析袋中 的胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。
3.如权利要求1-2任一所述的鳄鱼胶原蛋白的制备方法，其特征在于该方法包括如下 步骤取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成丝，取 鳄鱼骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至5-15%的Na2CO3中，浸泡2_6小时后，水洗至中 性；再浸没至2-6%的HCl中，浸泡2-6小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理后，加 入固液比1 2-4的2-6 %乙酸-醋酸溶液，密闭，于40-60 V恒温水浴中，20-40min后，加入 酶底比为1-3%的胃蛋白酶，充分搅拌，35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤，3000-5000r/ min离心20-40min，取上清液，备用；沉淀再加入固液比1 2_4的2_6 %乙酸-醋酸溶 液，密闭，于40-60°C恒温水浴中，20-40min后，加入酶底比为的胃蛋白酶，充分搅拌， 35-40°C水浴，酶解4-8小时后，粗滤，3000-5000r/min离心20_40min，取上清液；合并上清 液，加入 2-3moL/LNaCl 进行沉淀后，于 5_15°C，8000-12000r/min 离心 10_20min，弃上清液， 取沉淀以0. 3-0. 8mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出透析袋中的 胶原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。
4.如权利要求3所述的鳄鱼胶原蛋白的制备方法，其特征在于该方法包括如下步骤 取鲜鳄鱼皮，刮去脂肪，清洗，切成小块，取鳄鱼鳞清洗除去杂物，刮去脂肪，切成丝，取鳄鱼 骨除去肌肉，打碎；将上述物质浸没至10%的Na2CO3中，浸泡4小时后，水洗至中性；再浸没至4%的HCl中，浸泡4小时后，水洗至中性；经过上述酸碱脱脂处理后，加入固液比1 3 的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶底比为2%的胃蛋白酶， 充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心30min，取上清液，备用；沉淀再 加入固液比1 3的4%乙酸-醋酸溶液，密闭，于50°C恒温水浴中，30min后，加入酶底比 为2%的胃蛋白酶，充分搅拌，37°C水浴，酶解6小时后，粗滤，4000r/min离心30min，取上清 液；合并上清液，加入2. 6moL/LNaCl进行沉淀后，于10°C，10000r/min离心15min，弃上清 液，取沉淀以0. 5mol/L醋酸溶解后，转入透析袋透析，至无氯离子检出；倒出透析袋中的胶 原蛋白溶液，冷冻干燥，得本发明鳄鱼胶原蛋白粉。
5.如权利要求1-2任一所述的鳄鱼胶原蛋白在制备具有抗衰老、组织修复和伤口促愈 作用的药物中的应用。
6.如权利要求1-2任一所述的鳄鱼胶原蛋白在制备具有调节机体免疫作用的药物中 的应用。
7.如权利要求5所述的应用，其特征在于其中所述的抗衰老、组织修复和伤口促愈是 指促3T3细胞体外增殖。
全文摘要
本发明公开了一种鳄鱼胶原蛋白的制备方法，不仅可提高鳄鱼生产加工的附加值，同时可减少环境污染，获得良好的经济效益与社会效益。药效学实验表明，本发明鳄鱼胶原蛋白在抗衰老、组织修复、伤口促愈和增强免疫方面具有显著效果。
文档编号C07K14/78GK102108098SQ20101025086
公开日2011年6月29日 申请日期2010年8月11日 优先权日2010年8月11日
发明者张博 申请人:北京洪源澳达生物技术发展有限公司