专利名称：一种富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种花色苷的纯化方法，特别是涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法。
背景技术：
蓝靛果忍冬又叫蓝靛果、羊奶子、黑瞎子果、山茄子果、蓝果，是忍冬科忍冬属多年生落叶小灌木。果实为浆果，富含糖类，有机酸，矿物质，多种维生素和微量元素，具有较高的营养价值和药用价值，是理想的天然保健营养食品。果实可鲜食，可加工成饮料，适于提取天然的紫红色素。种子含花色苷，全株叶含桃叶珊瑚苷，具有一定的医用价值。蓝靛果忍冬中含有花青素苷，无色花青素苷，儿茶酸及芸香甘等物质，经临床试验验证对心脑血管疾病有一定疗效，还可防止血管破裂，降低血压，并有抗病毒，抗癌，和改善肝脏解毒作用等功效。花色苷是花色素与糖以糖苷键结合而成的一类化合物，广泛存在于植物的花、果实、茎、叶和根器官的细胞液中，使其呈现由红、紫红到兰等不同颜色。花色苷是类黄酮—— 以黄酮核为基础的一类物质中能呈现红色的一族化合物。近年来，人们发现天然植物蓝靛果忍冬中含有大量的花色苷，由于其原料蓝靛果忍冬来源较广，从中提取花色苷已取得了可喜进展。名称为“大孔树脂纯化蓝靛果花色苷的制备工艺”的专利申请中便公开了将蓝靛果忍冬经醇提后进行树脂柱吸附花色苷工艺流程。上述专利文献中的花色苷提取工艺主要是经过用乙醇提取后调酸过树脂柱等步骤提取而成，其分离效果远远不如大孔吸附树脂处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其步骤如下(1)将干蓝靛果忍冬粉碎后用乙醇加热回流提取；(2)将经步骤(1)处理的蓝靛果忍冬提取液抽滤，将提取液减压回收乙醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 0 2. 3，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，得花色苷粗提物；(4)将所得花色苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(6)将花色苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得花色苷半成品，其含量为35%以上；(7)将所得花色苷半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的花色苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得花色苷，其含量在95%以上。所述的步骤(1)中，蓝靛果忍冬粉碎后过40 80目筛在进行有机溶剂提取。所述的步骤(1)中，乙醇浓度为70%，提取3次，每次2小时。所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。所述的步骤(1)中，加入乙醇的体积为蓝靛果忍冬粉碎体积的15 20倍。所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为盐酸。所述的步骤中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。所述的步骤(5)中所述的洗脱为用30 90%的乙醇进行洗脱。所述的在步骤( 和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1 7 1。本发明应用大孔吸附技术分离纯化花色苷，对花色苷的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35%以上的花色苷半成品和含量95%以上的花色苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附花色苷， 吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施例方式实施例1 一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其步骤如下(1)将干蓝靛果忍冬粉碎后过60目筛，用蓝靛果忍冬粉体积15倍的乙醇回流提取 3次，每次2小时；(2)将经步骤(1)处理的蓝靛果忍冬提取液抽滤，将提取液减压回收乙醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 3，静置、抽滤、减压回收溶剂得蓝靛果忍冬粗提物；(4)将所得蓝靛果忍冬粗提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-II型树脂；(5)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依
次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(6)将花色苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为35%花色苷半成品；(7)将所得花色苷半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的花色苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95% 花色苷。实施案例2 —种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其步骤如下(1)将干蓝靛果忍冬粉碎后过80目筛，用蓝靛果忍冬粉体积20倍的乙醇回流提取 3次，每次2小时；(2)将经步骤(1)处理的蓝靛果忍冬提取液抽滤，将提取液减压回收乙醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 2，静置、抽滤、减压回收溶剂得蓝靛果忍冬粗提物；(4)将所得花色苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂；(5)用30^^50^^70^^90%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(6)将花色苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量35. 8%花色苷半成品；(7)将所得花色苷半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的花色苷洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95% 花色苷。实施案例3 —种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其步骤如下(1)将干蓝靛果忍冬粉碎后过40目筛，蓝靛果忍冬粉体积20倍的乙醇回提取3 次，每次2小时；(2)将经步骤(1)处理的蓝靛果忍冬提取液抽滤，提取液减压回收乙醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值2. 0，静置抽滤、减压回收溶剂得花色苷粗提物；(4)将所得花色苷粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用40^^60^^80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(6)将花色苷各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量36. 7%花色苷半成品；(7)将所得花色苷半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集花色苷各阶段洗脱液；(8)将所收集的花色洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量96. 2% 花色苷。
权利要求
1.一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征在于，其步骤如下(1)将干蓝靛果忍冬粉碎后用乙醇加热回流提取；(2)将经(1)处理的蓝靛果忍冬提取液过滤，回收乙醇得初提物；(3)将所收获初提物用调PH值至2-2.3，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到花色苷的粗提物。(4)将所得花色苷粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集花色苷各阶段洗脱液；(6)将花色苷洗脱液浓缩回收洗脱剂，得花色苷半成品；(7)将所得花色苷半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集花色苷各阶段洗脱液；(8)将所收集到的花色苷洗脱液进行精制的花色苷。
2.根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法其特质是所述的步骤(1)中，蓝靛果忍冬粉后过40 80目筛再进行乙醇加热回流提取。
3.根据权利要求1或2所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是在所属的步骤(1)中，乙醇醇度为70%，可提取3次，每次2小时。
4.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是所述的步骤(1)中，提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求3所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入乙醇得的体积为蓝靛果忍冬粉体积的15 20倍。
6.根据权利要求5所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是在所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为盐酸。
7.根据权利要求6所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法， 其特征是步骤中所述吸附为静态吸附或动态吸附步骤(5)中所述的洗脱为用30 90%的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是在步骤( 和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法，其特征是步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1 7 1。
10.根据权利要求7所述的利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法， 其特征是在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用大孔吸附树脂富集纯化蓝靛果忍冬中花色苷的方法。其特点是应用大孔吸附技术分离纯化花色苷，对花色苷的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的花色苷半成品和含量95％以上的花色苷终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附花色苷，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
文档编号C07H17/065GK102532219SQ20101062296
公开日2012年7月4日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者刘德文, 姚德利, 姚德坤, 姚航, 郑君, 闫峰, 黄运生 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司