专利名称：一种富集纯化狼毒中狼毒素的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种狼毒素的纯化方法，特别是涉及一种利 用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。
背景技术：
狼毒又叫续毒、绵大戟、山萝卜、闷花头、热加巴、一扫光、搜山虎、一把香、 药罗卜，有毒性，为瑞香科植物瑞香狼毒或大戟科植物狼毒大戟、月腺大戟的根。根 含二萜、黄酮、木脂素、香豆精类成分，包括狼毒素(chamaejasmin)A、B、C，狼毒素、异 狼毒素(isochamae jasmin)，7_ 甲氧基狼毒素(7-methoxychamae jasmin)，新狼毒素 (neochamaejasmin)A、B，狼毒色酮(chamaechromone)及二氧山奈酷(dihydrokaempferol) 等。植物狼毒的根入药具有泻水逐饮、破积杀虫之功效；现代研究表明，中药狼毒亦具有抗 癌的作用。狼毒素临床上用于治疗皮肤病，结核病，肿瘤以及慢性气管炎等。近年来，人们发 现天然植物狼毒中含有大量的狼毒素，由于其原料狼毒可大片繁殖，易于栽种，来源较广， 从中提取狼毒素已取得了可喜进展。名称为“一种瑞香狼毒提取物制剂及其新用途”的专 利申请中便公开了将狼毒经有机试剂直接浸提狼毒提取物工艺流程。上述专利文献中的 狼毒素提取工艺主要是经过用有机试剂浸提等步骤提取而成，其分离效果远远不如间歇蒸 馏-大孔吸附树脂耦合法处理后在进行硅胶柱层析分离的效果。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种 利用间歇蒸馏大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。为实现上述目的，本发明采用的技术方案是一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其步骤 如下(1)将干狼毒粉碎后用甲醇加热回流提取；(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 0 2. 5，静置、抽滤、并用水洗涤至中性，减 压浓缩得狼毒素粗提物；(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼 毒素各阶段洗脱液；(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得狼毒素半成品，其含量为35%以上；(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并以丙酮，甲醇以不同体积比例进行洗 脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得狼毒素，其含量在95%以上。所述的步骤(1)中，狼毒粉碎后过40 80目筛在进行有机溶剂提取。所述的步骤(1)中，甲醇浓度为75%，提取时间为3 4小时，可提取2 3次。所述的步骤(1)中，提取的方法为浸泡法、回流提取法、渗漉法、煎煮法、连续提取 法中的一种或一种以上。所述的步骤(1)中，加入甲醇的体积为狼毒粉碎体积的5 10倍。所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为磷酸。所述的步骤中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、 S-8、D 3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-II型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动 态吸附。所述的步骤(5)中所述的洗脱为用30 90%的乙醇进行洗脱。所述的在步骤( 和(7)中，所采取的检测方法均为薄层色谱法跟踪检测。所述的步骤(7)中所采取的丙酮与甲醇的体积为1 7 1。本发明应用间歇蒸馏-大孔吸附技术耦合分离纯化狼毒素，对狼毒素的吸附选择 性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分 离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35%以上的狼毒素半成品和含量95%以上的狼毒 素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力 强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐 类及强离子低分子化合物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附狼毒素， 吸附快、解析也快，吸附容量较大。
具体实施例方式实施例1 一种利用间歇蒸馏大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方 法，其步骤如下(1)将干狼毒粉碎后过60目筛，用狼毒粉体积5倍的甲醇加热回流提取2次，每次 2小时；(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 0，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素；(4)将所得狼毒素提物用大孔吸附树脂层析柱上进行吸附，所用的大孔树脂为天 津南开大学所生产的NKA-II型树脂；(5)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%的乙醇在大孔吸附树脂层柱中依
次进行梯度洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量为35%狼毒素半成品；(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒 素各阶段洗脱液；(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量95% 狼毒素。
4
实施案例2 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的 方法，其步骤如下(1)将干狼毒粉碎后过80目筛，用狼毒粉体积8倍的甲醇加热回流提取3次，每次 2小时；(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 3，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素粗提 物；(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开 大学所生产的D4006型树脂；(5)用30^^50^^70^^90%的乙醇在大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟 踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量36. 4%狼毒素半成品；(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒 素各阶段洗脱液；(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量 96. 8%狼毒素。实施案例3 —种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的 方法，其步骤如下(1)将干狼毒粉碎后过40目筛，用狼毒粉体积10倍的甲醇加热回流提取3次，每 次3小时；(2)将经步骤(1)处理的狼毒提取液抽滤，将提取液减压回收甲醇得初提物；(3)将所获初提物用酸调其PH值为2. 5，静置、抽滤、减压回收溶剂得狼毒素粗提 物；(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂层析柱子、上进行吸附，所用的大孔树脂 为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂；(5)用40^^60^^80%的乙醇在大孔吸附树脂层析柱子中依次进行梯度洗脱，用 薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒素各阶段洗脱液；(6)将狼毒素各阶段洗脱液浓缩回收乙醇，得到含量37%狼毒素半成品；(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并用丙酮，甲醇依次以1 1、2 1、 3 1、4 1、5 1、6 1、7 1的体积比进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集狼毒 素各阶段洗脱液；(8)将所收集的狼毒素洗脱液，采用活性炭脱色、重结晶方法精制得到含量97% 狼毒素。
权利要求
1.一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法，其特征在 于，其步骤如下(1)将干狼毒粉碎后用甲醇加热回流提取；(2)将经(1)处理的狼毒素提取液过滤，回收甲醇得初提物；(3)将所收获初提物调PH值至2-2.5，分离、收集沉淀物，并用水洗涤至中性，得到狼毒 素的粗提物。(4)将所得狼毒素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附；(5)用不同浓度乙醇水溶液对大孔吸附树脂进行洗脱，收集狼毒素各阶段洗脱液；(6)将狼毒素洗脱液浓缩回收洗脱剂，得狼毒素半成品；(7)将所得狼毒素半成品上硅胶层析柱，并以甲醇，丙酮以不同体积比进行洗脱，收集 狼毒素各阶段洗脱液；(8)将所收集到的狼毒素洗脱液进行精制的狼毒素。
2.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法其特质是所述的步骤(1)中，狼毒粉后过40 80目筛再进行甲醇加热回流提取。
3.根据权利要求1所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在所属的步骤(1)中，甲醇的醇度为75%，提取时间为3 4小时，可提 取2 3次。
4.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是所述的步骤(1)中，提取的方法为浸渍法、回流提取法，渗漉法、煎煮法、 连续提取法中的一种或一种以上。
5.根据权利要求3所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是；所属的步骤(1)中，加入甲醇的体积为狼毒粉体积的5 10倍。
6.根据权利要求5所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在所述的步骤(3)中，调节PH值所用的酸为磷酸
7.根据权利要求6所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是步骤中所述吸附为静态吸附或动态吸附步骤(5)中所述的洗脱为 用30 90%的乙醇水溶液进行洗脱。
8.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是在步骤( 和(7)中，洗脱过程中采用薄层色谱法跟踪检测。
9.根据权利要求8所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素 的方法，其特征是步骤(7)中所采用丙酮与甲醇得体积比为1 7 1。
10.根据权利要求7所述的利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒 素的方法，其特征是在步骤(8)中，采用活性炭脱色、重结晶方法进行精制。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用间歇蒸馏-大孔吸附树脂耦合法富集纯化狼毒中狼毒素的方法。其特点是应用间歇蒸馏-大孔吸附耦合技术分离纯化狼毒素，对狼毒素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大；提取方便快捷，原料来源丰富，生产成本低廉，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量35％以上的狼毒素半成品和含量95％以上的狼毒素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附狼毒素，吸附快、解析也快，吸附容量较大。
文档编号C07D311/40GK102093327SQ20101062313
公开日2011年6月15日 申请日期2010年12月20日 优先权日2010年12月20日
发明者刘德文, 姚德利, 姚德坤, 姚航, 郑君, 闫峰, 黄运生 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司