专利名称：一种从女贞中联合制备高纯度熊果酸和齐墩果酸的方法
技术领域：
本发明属于天然药物技术领域。具体涉及了一种从女贞中提取并纯化其主要的活性成分熊果酸、齐墩果酸。
背景技术：
女贞为木樨科女贞属植物，学名为Ligustrum Lucidum Ait，它是四季常绿大灌木或小乔木，全球有约50种，在我国就有38种，广泛分布于华东，华南，西南及华中地区，植物资源丰富，分布极广。随着药理作用研究的深入，发现女贞属植物具有多种生理活性，但对女贞属植物的化学成份研究还并不充分。长期以来，对女贞属植物我们所研究的部位利用不彻底，基本不入药，浪费很大。熊果酸⑴rsolic acid，UA)，又名乌索酸，乌苏酸、α -香树脂醇，是一种弱酸性五环三萜类化合物。在自然界分布很广，是多种天然产物的功能成分。熊果酸纯品为白色针状结晶(乙醇中结晶)，味苦，其基本骨架是多氧菔的五环母核。化学名 (3 β ) -3-HydroxyurS-12-en-28-oic acid,分子式 C30H4803，相对分子质量 456. 68，熔点 ^549rC，易溶于二氧六环、吡啶，可溶于甲醇、乙醇、丁醇、丁酮，略溶于丙酮，微溶于苯、 氯仿、乙醚，不溶于水和石油醚。UA在自然界分布较广，如在陆英、枇杷叶、熊果、女贞子、山楂、车前草、夏枯草、白花蛇舌草等植物中以游离形式存在或与糖结合成甙存在。熊果酸具有多种生物活性，日本等国家已经将其作为天然抗氧化剂应用于食品中。齐墩果酸是熊果酸的同分异构体，又称土当归酸，具有清热、抗炎、强心、降血糖， 降血脂、抑制变态反应、利胆和退黄等活性，为保肝良药。熊果酸和齐墩果酸广泛存在于特定科属的叶和果实中，不同的原材料分离纯化得到纯度较高的熊果酸或齐墩果酸，主要采用柱层析或大孔树脂富集等手段，可是要把理化性质极其相似的熊果酸和齐墩果酸分别得到纯度较高的产品，难度依然较大，尽管柱层析法能很好地分离熊果酸和近似杂质，但该法上样量小，收得率低，不利于大规模工业化生产。同时洗脱剂需用石油醚、苯、氯仿、甲醇、乙酸乙酯等有机溶剂，成本大，不利于生产安全，还对环境造成危害。女贞叶和女贞子中都含有一定量的熊果酸和齐墩果酸。已报道的提取方法主要以有机溶液浸提结合一定分离手段为主，例如CN1358733以乙醇回流提取、 活性炭脱色、干燥等相结合的方法得到女贞叶中的熊果酸，虽然该发明较简便，但只能得到熊果酸粗品。
发明内容
本发明所要解决的技术问题在于克服上述方法的不足之处，研究设计一种成本低、环境友好，便于工业化生产的简易制备高纯度熊果酸和齐墩果酸的方法。本发明提供的技术方案是一种从女贞中联合制备高纯度熊果酸和齐墩果酸的方法，所述女贞为女贞叶或女贞子；将女贞叶片或女贞子用碱水煮沸，趁热过滤，碱化物用热水洗涤，除去含蜡杂质。将得到的药渣以纯水为提取液，在沸水水浴中提取，过滤，除去糖类、鞣质等水溶性杂质。将过滤得到的滤渣，以乙醇溶液为溶剂，在水浴中回流提取后过滤， 得到乙醇提取液；将乙醇提取液用活性炭脱色，滤除活性炭，调节乙醇提取液PH值至11左右，静置过滤杂质后将滤液减压浓缩至小体积(浓缩前体积的1/3-1/4)，有大量不溶物析出，过滤，滤出物为齐墩果酸粗品，滤液调节PH值至3-4，加等体积的纯水，置于4°C过夜，滤出不溶物，得到熊果酸粗品；将齐墩果酸粗品用纯水洗，不溶物用无水乙醇溶解，调节PH为 11，加活性炭脱色，放置过滤，滤液PH调至1，析出沉淀物，将沉淀物用碱水煮沸，过滤，重复 2-3次，将不溶物用纯水煮沸，趁热过滤得水洗物，将水洗物再次用无水乙醇溶解，活性炭脱色，过滤，滤液PH调至1，析出沉淀物，沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸。将熊果酸粗品用NaOH水溶液洗，接着用纯水洗，然后用无水乙醇重结晶两次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重结晶，即得到高纯度的熊果酸。本发明采用上述方法，以廉价易得的女真叶或女贞子为原料用乙醇回流提取。“三废”处理量小且容易，乙醇可回收再用，提取后所剩废渣可用作肥料。因而本发明对环境基本不产生污染，而且所获得的熊果酸成本较低。主要是利用熊果酸和齐墩果酸在水中不溶解，在乙醇中不同PH溶解性能不同的特性设计的。得率高，产品纯。产物经波谱分析，其结果与熊果酸和齐墩果酸的标准一致。另外，本发明的方法简便、快捷，适合工厂化大规模生产。
具体实施例方式一种从女贞叶或女贞子中提取和分离纯化熊果酸、齐墩果酸的方法。将女贞叶片或女贞子用碱水煮沸，趁热过滤，碱化物用热水洗涤，除去含蜡杂质。将得到的药渣以纯水为提取液，在沸水水浴中提取，过滤，除去糖类、鞣质等水溶性杂质。将过滤得到的滤渣，以乙醇溶液为溶剂，在水浴中回流提取后过滤，得到乙醇提取液；将乙醇提取液用活性炭脱色，滤除活性炭，调节乙醇提取液PH值至11左右，静置过滤杂质后将滤液减压浓缩至小体积(浓缩前体积的1/3-1/4)，有大量不溶物析出，过滤，滤出物为齐墩果酸粗品，滤液调节 PH值至3-4，加等体积的纯水，置于4°C过夜，滤出不溶物，得到熊果酸粗品；将齐墩果酸粗品用纯水洗，不溶物用无水乙醇溶解，调节PH为11，加活性炭脱色，放置过滤，滤液PH调至 1，析出沉淀物，将沉淀物用碱水煮沸，过滤，重复2-3次，将不溶物用纯水煮沸，趁热过滤得水洗物，将水洗物再次用无水乙醇溶解，活性炭脱色，过滤，滤液PH调至1，析出沉淀物，沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸。将熊果酸粗品用NaOH水溶液洗，接着用纯水洗，然后用无水乙醇重结晶两次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重结晶，即得到高纯度的熊果酸。下面结合实施例对本发明详细说明实施例1 取女贞叶干品lKg，加入5%氢氧化钠水溶液8L，煮沸30分钟，趁热滤除碱水液， 用热水洗涤药渣，将残渣加入到IOL水中煮沸1. 5小时，倾去水煮液，残渣用95%乙醇分3 次回流提取，每次乙醇用量为6L ；合并醇提液，加醇提液体积0. 3%的活性炭，在50-60°C下搅拌脱色1小时；滤除活性炭，脱色醇提液用lmol/L氢氧化钠水溶液调至PH为11左右，静置12小时后过滤，除沉淀，滤液减压浓缩至未浓缩前体积的1/3左右(5L)；有大量不溶物析出，此不溶物为齐墩果酸粗品，过滤，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH在3_4之间。向滤液中加入5L水，放置4°C过夜，有大量沉淀析出。过滤，析出物为熊果酸粗品。齐墩果酸的纯化将上述得到的齐墩果酸粗品10. 4g用适量纯水洗，水不溶物用175ml无水乙醇溶解，用10%氢氧化钠水溶液调节PH至11，加入3g活性炭，置于50-60°C水浴搅拌15分钟， 滤除活性炭，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH至1，析出沉淀物9. 6g。将沉淀物加入到 60ml，5%氢氧化钠水溶液中煮沸30分钟，过滤，将不溶物用60ml煮沸纯水洗涤，趁热过滤得水洗物8. Ig,将水洗物用80ml无水乙醇溶解，加入0. Sg活性炭，置于50_60°C水浴搅拌 15分钟，过滤，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH至1，析出齐墩果酸，过滤，沸蒸馏水水洗得到齐墩果酸4. 7g。产物经波谱分析，其结果与齐墩果酸标准一致。熊果酸的纯化将上述得到的熊果酸粗品42. 8g用适量氢氧化钠溶液洗涤，接着用适量纯水洗涤，将不溶物37. 9g用适量无水乙醇重结晶两次，再用200ml体积比为1 1的甲醇乙醇混合溶液结晶一次，最终得到熊果酸19. 3g。产物经波谱分析，其结果与熊果酸标准一致。实施例2:取女贞子干品lKg，加入5%氢氧化钠水溶液8L，煮沸30分钟，趁热滤除碱水液，用热水洗涤药渣，将残渣加入到IOL水中煮沸2小时，倾去水煮液，残渣用90%乙醇分3次回流提取，每次乙醇用量为6L ；合并醇提液，加醇提液体积0. 3%的活性炭，在50-60°C下搅拌脱色1小时；滤除活性炭，脱色醇提液用lmol/L氢氧化钠水溶液调至PH为11左右，静置12 小时后过滤，除沉淀，滤液减压浓缩至未浓缩前体积的1/3左右(5L)；有大量不溶物析出， 此不溶物为齐墩果酸粗品，过滤，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH在3_4之间。向滤液中加入5L水，放置4°C过夜，有大量沉淀析出。过滤，析出物为熊果酸粗品。齐墩果酸的纯化将上述得到的齐墩果酸粗品17. 9g用适量纯水洗，水不溶物用无水乙醇溶解，用10%氢氧化钠水溶液调节PH至11，加入5. 7g活性炭，置于50-60°C水浴搅拌15分钟，滤除活性炭，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH至1，析出沉淀物15. 4g。将沉淀物加入到90ml，5%氢氧化钠水溶液中煮沸30分钟，过滤，将不溶物用60ml煮沸纯水洗涤，趁热过滤得水洗物13. lg，将水洗物用120ml无水乙醇溶解，加入1. 2g活性炭，置于50-60°C水浴搅拌15分钟，过滤，滤液用6mol/L盐酸水溶液调节PH至1，析出齐墩果酸，过滤，沸蒸馏水水洗得到齐墩果酸8. 7g。产物经波谱分析，其结果与齐墩果酸标准一致。熊果酸的纯化将上述得到的熊果酸粗品62g用适量氢氧化钠溶液洗涤，接着用适量纯水洗涤，将不溶物50. 7g用适量无水乙醇重结晶两次，再用200ml体积比为1 1的乙醇醋酸混合溶液结晶一次，最终得到熊果酸29. 7g。产物经波谱分析，其结果与熊果酸标准一致。
权利要求
1.一种从女贞中联合制备高纯度熊果酸和齐墩果酸的方法，其特征在于，所述原料女贞为女贞叶或女贞子；该制备方法包括下列步骤A)将女贞叶片或女贞子用碱水煮沸，趁热过滤，碱化物用热水洗涤，除去含蜡杂质。将得到的药渣以纯水为提取液，在沸水水浴中提取，过滤，将过滤得到的滤渣，以乙醇溶液为溶剂，在水浴中回流提取后过滤，得到乙醇提取液；B)将乙醇提取液用活性炭脱色，滤除活性炭，调节乙醇提取液PH值至碱性，静置过滤杂质后将滤液减压浓缩至小体积，过滤，滤出物为齐墩果酸粗品，滤液调节PH值至酸性，加等体积的纯水，置于4°C过夜，滤出不溶物，得到熊果酸粗品；C)将齐墩果酸粗品用纯水洗，不溶物用无水乙醇溶解，调节PH为碱性，加活性炭脱色， 放置过滤，滤液调至酸性，析出沉淀物，将沉淀物用碱水煮沸，过滤，重复2-3次，将不溶物用纯水煮沸，趁热过滤得水洗物，将水洗物再次用无水乙醇溶解，活性炭脱色，过滤，滤液调至酸性，析出沉淀物，沸蒸馏水水洗即可得到高纯度的齐墩果酸；D)将熊果酸粗品用碱水洗，接着用纯水洗，然后用无水乙醇重结晶两次，最后用甲醇乙醇混合溶液或乙醇醋酸混合溶液重结晶，即得到高纯度的熊果酸。
2.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤A中碱水为5%氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，除杂时碱水的加入量(mL)与加入的女贞叶或女贞子质量((g)的液固比为6-8倍， 煮沸时间控制在20-30分钟；步骤A中水提时纯水的加入量(mL)与女贞叶或女贞子质量((g)的液固比为8-12倍， 沸水水浴中提取时间为1-2小时；步骤A中醇提时乙醇溶液的浓度为80%以上，加入量(mL)与女贞叶或女贞子质量 ((g)的液固比为10-15倍，每次提取时间为1.5-2小时，提取2-3次。
3.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤B中所用调碱试剂为lmol/L氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，PH应控制在9-11范围内；步骤B中所用调酸试剂为6mol/L盐酸水溶液，PH应控制在3-4范围内；步骤B中滤液减压浓缩体积应为浓缩前体积的1/3-1/4范围内。
4.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤C中所用调碱试剂为10%氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，PH应控制在11 ；步骤C中所用调酸试剂为6mol/L盐酸水溶液，PH应控制在1 ；步骤C中所用煮沸碱水为5%氢氧化钠或氢氧化钾水溶液，煮沸时间应控制在 15-30分钟，所用量(ml)和沉淀物(g)的液固比为6-8倍。
5.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，步骤D中所用的碱水洗液为氢氧化钠或氢氧化钾水溶液；重结晶所采用的甲醇和乙醇混合溶液的体积比为1 1，重结晶所采用的乙醇和醋酸混合溶液的体积比为1 1。
6.根据权利要求1所述的方法，其特征在于，各步骤中脱色醇提液加入液固比为 0. 1-1. 0%活性炭，搅拌吸附15-60分钟，重复2-3次，脱色温度为50-60°C。
全文摘要
一种从女贞中联合制备高纯度熊果酸和齐墩果酸的方法，所述女贞为女贞叶或女贞子。该制备方法以女贞叶或女贞子为原料，通过将女贞叶或女贞子碱水除杂、水煮、乙醇提取、活性炭脱色、调碱除杂、减压浓缩析出齐墩果酸粗品，调酸析出熊果酸粗品及采用水洗、重结晶等步骤纯化齐墩果酸和熊果酸。本发明以廉价易得的女真叶或女贞子为原料用乙醇回流提取。“三废”处理量小且容易，乙醇可回收再用，提取后所剩废渣可用作肥料。因而本发明对环境基本不产生污染；得率高，产品纯。另外，本发明的方法简便、快捷，适合工厂化大规模生产。
文档编号C07J63/00GK102351939SQ20111026022
公开日2012年2月15日 申请日期2011年9月5日 优先权日2011年9月5日
发明者付鸿, 华慧颖, 司方博, 司福亭, 周晓莉, 姚虹, 宁建中, 岳福兴, 曾超, 李靖靖, 王宇飞, 王文武, 高建炳 申请人:曾超