专利名称：大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定和用途的制作方法
技术领域：
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定和用途。
背景技术：
大叶蟹甲草(Paraseneciofirmus Kom.异名为 cacalia firma kom.)菊科 (compositae)蟹甲草属(Parasenecio或cacalia)植物,又名大叶兔儿伞,在民间作为山野菜食用。主要分布在吉林(抚松、长白山、浑江)，生于密林下或林缘和林中空地，海拔 800-1100米。朝鲜北部也有分布。经文献检索发现国内外对大叶蟹甲草的相关研究鲜见报道。
发明内容
I、大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤步骤⑴称取干燥的大叶蟹甲草叶粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加 500ml-600ml蒸馏水浸泡5h_6h，超声lh，温度为30°C，功率为80W ；步骤(2):将(I)中大叶蟹甲草叶粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4-5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；步骤(3):将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使大叶蟹甲草叶挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，密封，放入冰箱4°C保存备用;步骤(4):将步骤(3)中所得大叶蟹甲草叶挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为η-棕榈酸18. 98%, I-十三烯9. 89 %，丁香烯环氧物 8. 05%, (S) ^一环烯 6. 04%，9，12，15-十八碳三烯酸 3. 84%, (-)-斯巴醇 2. 97%，贝壳杉烯 2. 83%，丁香烯 2. 12%。2、大叶蟹甲草叶挥发油用途，其特征在于用于制备抑制大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌的药物制剂。根据本发明，本发明中的“ ％ ”是重量百分比。
具体实施例方式本发明所述的大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定和用途包括以下实施例，下面的实施例可进一步说明本发明，但不以任何方式限制本发明。实施例I :I、大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤步骤⑴称取干燥的大叶蟹甲草叶粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加500ml 蒸馏水浸泡5h，超声lh，温度为30°C，功率为80W ；
步骤(2):将(I)中大叶蟹甲草叶粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4，获得上面浮有挥发油的水溶液；步骤(3):将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使大叶蟹甲草叶挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，密封，放入冰箱4°C保存备用;步骤(4):将步骤(3)中所得大叶蟹甲草叶挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为η-棕榈酸18. 98%, I-十三烯9. 89 %，丁香烯环氧物 8. 05%, (S) ^一环烯 6. 04%，9，12，15-十八碳三烯酸 3. 84%, (-)-斯巴醇 2. 97%，贝壳杉烯 2. 83%，丁香烯 2. 12%。步骤(5):将(3)中大叶蟹甲草叶挥发油进行抑菌试验，大叶蟹甲草叶挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。实施例2:I、大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤步骤(I):称取干燥的大叶蟹甲草叶粗粉100g，经粉碎后置玻璃容器中，加600ml 蒸馏水浸泡6h，超声lh，温度为30°C，功率为80W ；步骤(2):将(I)中大叶蟹甲草叶粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；步骤(3):将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器，使大叶蟹甲草叶挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，密封，放入冰箱4°C保存备用;步骤(4):将步骤(3)中所得大叶蟹甲草叶挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为η-棕榈酸18. 98%, I-十三烯9. 89%，丁香烯环氧物
8.05%, (S) ^一环烯 6. 04%，9，12，15-十八碳三烯酸 3. 84%, (-)-斯巴醇 2. 97%，贝壳杉烯 2. 83%，丁香烯 2. 12%。步骤(5):将⑶中大叶蟹甲草叶挥发油进行抑菌试验，大叶蟹甲草叶挥发油对大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌均有不同程度的抑制作用。药理试验大叶蟹甲草叶挥发油的抑菌作用I实验材料大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌和金黄色葡萄球菌均由吉林农业大学预防兽医学实验室提供，37°C在蛋白胨牛肉汤中培养12h。培养基为牛肉膏蛋白胨培养基。菌的活化与培养时用液体培养基，组成为牛肉膏蛋白胨氯化钠蒸馏水(3 : 10 : 5 : 1000)。菌的保存及抑菌实验时用固体培养基，组成为牛肉膏蛋白胨氯化钠琼脂蒸馏水(3 : 10 : 5 : 22 : 1000)。2实验方法2. I培养基的配制取牛肉膏O. 6g、蛋白胨2g、氯化钠lg、蒸馏水200ml，混合并搅拌使其完全溶解，配成液体培养基。用量筒量取液体培养基，将其平均分装在10个50ml的三角瓶内，每瓶20ml。取牛肉膏3g、蛋白胨10g、氯化钠5g、琼脂22g、蒸馏水1000ml，混合后将其置于电炉子上加热，使琼脂完全溶解，配成固体培养基。用量筒量取固体培养基，将其平均分装在5个150ml 的三角瓶内，每瓶100ml。三角瓶瓶口均用棉塞塞紧并用牛皮纸包扎。2. 2 灭菌将配好的固体培养基、液体培养基均放入高压灭菌锅中灭菌，温度上升到121°C 时，开始计时20min。培养皿、量筒、镊子、剪刀、6mm滤纸片(放在小烧杯中)、滴管、氨瓶等实验器材均放入烘箱中170°C灭菌2h。实验前用75%乙醇擦拭超净工作台并紫外灭菌20min。 37. °C恒温培养箱在使用前需用75%乙醇擦拭灭菌。2. 3菌的培养与查菌将5个菌种在超净工作台上、酒精灯环境下倒入装有液体培养基的三角瓶中，每种菌培养两份。将这10个三角瓶放入摇床37°C摇菌6h。显微镜做镜检后开始查菌，记录数据并计算菌浓度，若5个中方格总菌数为A，菌液稀释倍数为B，则Iml菌液中总菌数三 A/5 X 25 X 10000 X 13 = 50000AB2. 4样品液及滤纸片的制备将大叶蟹甲草叶挥发油配制成5mg/ml的溶液(可加O 4 μ L 二甲基亚砜助容)， 按 I : 2η 稀释成 2. 5mg/ml、I. 25mg/ml、0. 625mg/ml、0. 3125mg/ml 的溶液。将滤纸片用打孔器打成直径为6_的圆片，在超净工作台将滤纸片放进各梯度样品中浸泡2h。2. 5有菌琼脂平板的制备将稀释好的菌液与固体培养基混合并摇晃均匀，此时菌的浓度应达到 3. 6X 108CFU/ml。将有菌培养基依次倒入各培养皿中，晃动培养皿使培养基均匀地铺在培养皿底部，冷却至凝固。2. 6抑菌实验方法用记号笔在有菌琼脂平板上标号，将浸泡好的滤纸片用镊子夹出，放入写相应对照编号的培养皿中，每个样品做三个平行，放入37 °C恒温培养箱培养。3实验结果抑菌效果用抑菌圈直径DD表示(单位mm)。在抑菌实验结束后的第12h、24h、36h、48h观察菌的生长情况，测量抑菌圈直径并记录。见表I。表I大叶蟹甲草挥发油对5种细菌的抑制作用
权利要求
1.大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定方法，其特征在于包括以下步骤步骤⑴称取干燥的大叶蟹甲草叶粗粉I00g，经粉碎后置玻璃容器中，加 500ml-600ml蒸馏水浸泡5h_6h，超声lh，温度为30°C，功率为80W ；步骤(2):将(I)中大叶蟹甲草叶粗粉与浸泡液一同倒入挥发油提取器中，采用水蒸气蒸馏法提取4-5h，获得上面浮有挥发油的水溶液；步骤(3):将(2)中上面浮有挥发油的水溶液放出水层，用乙醚反复洗挥发油提取器， 使大叶蟹甲草叶挥发油充分溶解到乙醚中，将溶有挥发油的乙醚溶液倒入烧杯中，再向烧杯中加无水硫酸钠吸干水分，回收乙醚后即得到纯净的挥发油，密封，放入冰箱4°C保存备用；步骤(4):将步骤(3)中所得大叶蟹甲草叶挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为n-棕榈酸18. 98%, I-十三烯9. 89%，丁香烯环氧物8. 05%， ⑶十-环烯6. 04 %，9，12，15-十八碳三烯酸3. 84%，(_)_斯巴醇2. 97 %，贝壳杉烯 2. 83%，丁香烯 2. 12%。
2.如权利要求I所述的大叶蟹甲草叶挥发油用途，其特征在于用于制备抑制大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌的药物制剂。
全文摘要
本发明所属医药产品研究开发技术领域。本发明涉及大叶蟹甲草叶挥发油成分的分离鉴定和用途。称取干燥的大叶蟹甲草叶粗粉，经超声，水蒸气蒸馏法提取，获得挥发油；将所得挥发油用6890/5973N气相色谱与质谱联用仪分析，其主要化学成分为n-棕榈酸18.98％，1-十三烯9.89％，丁香烯环氧物8.05％，(S)十一环烯(6.04％)，9，12，15-十八碳三烯酸3.84％，(-)-斯巴醇2.97％，贝壳杉烯2.83％，丁香烯2.12％。本发明挥发油用于制备抑制大肠杆菌、链球菌、沙门氏菌、巴氏菌、金黄色葡萄球菌的药物制剂。
文档编号C11B1/10GK102585997SQ20121004272
公开日2012年7月18日 申请日期2012年2月20日 优先权日2012年2月20日
发明者侯欣池, 张崇禧, 张成城, 朱启光, 郑友兰 申请人:山东大学威海分校