专利名称：一种海兰地嗪的提取方法
技术领域：
本发明属于中药提取分离技术领域，特别涉及一种海兰地嗪的提取方法。
背景技术：
海兰地嗪(Hernandezine)，又名金丝马尾连碱甲，分子式为C39H44N2O7，分子量为652. 79，是一种异喹啉类生物碱，mp. 120_122°C。主要存在于毛茛科唐松草属植物中，如偏翅唐松草、金丝马尾连、波斯唐松草等多种植物中。金丝马尾连Thalictrum glandulosissimum(yin. et Gagn. )ff. T. Wang etS. H. Wang，别名多腺唐松草，分布在我国云南大理一代，海兰地嗪主要从金丝马尾连中提取分离得到。 药理研究表明，海兰地嗪体外对胶原、ADP、A23187和AA诱导的大鼠血小板聚集有明显的抑制作用，由于海兰地嗪不抑制AA诱导的大鼠血小板MD的生成，因而其抗血小板聚集作用与AA环氧酶代谢途径无关。马氏等试验表明，海兰地嗪能升高兔血小板cAMP水平，抑制凝血酶诱导的人血小板胞浆内游离钙浓度升高，结果提示海兰地嗪可能通过增加血小板cAMP水平和抑制细胞内钙水平而抑制血小板聚集。徐承熊等研究发现海兰地嗪还具有抗肿瘤活性，初步研究表明，海兰地嗪可使Gl细胞进入S期受阻，海兰地嗪对癌细胞主要起杀伤作用，作用24h后损伤不可逆。经文献检索，尚未发现海兰地嗪的工业化提取纯化方法的相关报道。
发明内容
本发明的目的在于提供一种海兰地嗪的提取方法。本发明是通过以下技术方案加以实现的
(1)将金丝马尾连原料粉碎，加0.4 -1. 2 %盐酸或硫酸水溶液浸泡3 - 5 h，超声处理30-60min,过滤得到提取液；
(2)提取液上阳离子交换树脂柱，先用去离子水洗至中性，再用碱性醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩；
(3)浓缩液调节pH至10-11，用氯仿萃取，取有机层，回收氯仿，干燥得到粗品；
(4)以正丁醇-丙醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离粗品中的海兰地嗪，收集目标成分，浓缩干燥得到海兰地嗪粗晶；
(5)粗晶采用制备型液相色谱分离，紫外在线检测，收集目标成分，低温干燥即得海兰地嗪纯品。步骤(2)中所述阳离子交换树脂可选D151、HZD-2或HD-8中的一种。步骤(2)中所述碱性醇溶液为pH9-ll的乙醇水溶液，其中乙醇的体积百分比浓度为 75-90%。步骤(4)中所述溶剂系统正丁醇-丙醇-ρΗ8· 5氨水的体积比为(6-8) : (1-2):(8-11 )，下相为固定相，上相为流动相。
步骤(5)中所述制备液相的流动相为甲醇-ο. 1%氨水溶液，体积比为77:23，紫外检测波长为208nm。本发明的有益效果是
(1)本发明采用酸水浸提，可有效减少杂质的溶出，采用超声处理，提取时间短、提率
闻;
(2)高速逆流色谱和制备型液相色谱结合进行分离纯化，分离效果好，产品纯度高，可实现工业自动化生产。
具体实施例方式 下面结合具体实施例对本发明进行说明。
实施例I :
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取2kg,加I. 0%盐酸水溶液浸泡4h,超声处理40min,过滤得到的提取液上HZD-2阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用8LpH10的85%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至10. 5，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为7:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为30ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为99. 1%的海兰地嗪。实施例2:
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取2kg,加O. 5%盐酸水溶液浸泡3h,超声处理45min,过滤得到的提取液上D-151阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用8LpH9的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至11. O，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为6:1:8混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为40ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98. 5%的海兰地嗪。实施例3:
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取5kg,加I. 2%硫酸水溶液浸泡5h,超声处理60min,过滤得到的提取液上HD-8阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用20LpHll的90%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至10.0，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为6:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为20ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为99. 3%的海兰地嗪。实施例4:
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取10kg，加O. 8%盐酸水溶液浸泡4h，超声处理50min，过滤得到的提取液上HZD-2阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用40LpH9的90%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至10. 2，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为8:1:8混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为45ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98. 2%的海兰地嗪。`实施例5:
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取10kg，加O. 4%硫酸水溶液浸泡5h，超声处理30min，过滤得到的提取液上HD-8阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用40LpHll的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至10. 8，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为8:2:10混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为35ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98. 8%的海兰地嗪。实施例6:
将金丝马尾连的干燥根粉碎，取20kg，加I. 0%硫酸水溶液浸泡3h，超声处理35min，过滤得到的提取液上D151阳离子交换树脂，先用去离子水洗至中性，再用80LpH10的75%乙醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调PH至11. 0，用氯仿萃取，取氯仿层，回收氯仿干燥得到粗品；取正丁醇、丙醇、PH8. 5氨水，按体积比为7:1:9混合，静置，分出上下相，以下相为固定相，上相为流动相，开启高速逆流色谱仪，调节转速调节850rpm，取上相溶解粗品注入色谱仪，控制流动相流速为2ml/min，收集海兰地嗪流分，浓缩、干燥得粗晶；用95%乙醇溶解，配成浓度为25mg/ml的溶液，经O. 45 μ m微滤膜过滤，得到样品溶液，以C8键合相为柱填料，粒径为10 μ m,柱长为15cm、直径为4cm,六通阀进样,进样体积为25ml,以甲醇-O. 1%氨水溶液为流动相，体积比为77:23，控制流速为30ml/min，紫外在线检测，检测波长为208nm，收集目标成分，低温干燥，得到纯度为98. 4%的海兰地嗪。
权利要求
1.一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于包括以下步骤 (1)将金丝马尾连原料粉碎，加0.4 -1. 2 %盐酸或硫酸水溶液浸泡3 - 5 h，超声处理30-60min,过滤得到提取液； (2)提取液上阳离子交换树脂柱，先用去离子水洗至中性，再用碱性醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩； (3)浓缩液调节pH至10-11，用氯仿萃取，取有机层，回收氯仿，干燥得到粗品； (4)以正丁醇-丙醇-水为溶剂系统，采用高速逆流色谱仪分离粗品中的海兰地嗪，收集目标成分，浓缩干燥得到海兰地嗪粗晶； (5)粗晶采用制备型液相色谱分离，紫外在线检测，收集目标成分，低温干燥即得海兰地嗪纯品。
2.根据权利要求I所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤(2)中所述阳离子交换树脂可选D151、HZD-2或HD-8中的一种。
3.根据权利要求I所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤(2)中所述碱性醇溶液为PH9-11的乙醇水溶液，其中乙醇的体积百分比浓度为75-90%。
4.根据权利要求I所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤(4)中所述溶剂系统正丁醇-丙醇-PH8. 5氨水的体积比为(6-8 ) : (1-2): (8_11)，下相为固定相，上相为流动相。
5.根据权利要求I所述的一种海兰地嗪的提取方法，其特征在于步骤(5)中所述制备液相的流动相为甲醇-O. 1%氨水溶液，体积比为77:23，紫外检测波长为208nm。
全文摘要
本发明公开了一种海兰地嗪的提取方法，它是将金丝马尾连原料粉碎，加0.4-1.2%盐酸或硫酸水溶液提取，提取液上阳离子交换树脂柱，先用去离子水洗至中性，再用碱性醇溶液洗脱，洗脱液减压浓缩，调pH10-11，用氯仿萃取，萃取液浓缩后再采用高速逆流色谱和制备型液相色谱分离，收集目标成分，低温干燥即得海兰地嗪产品。本发明能耗低，污染少，产品含量高，可达98%以上，为工业自动化生产提供了可能。
文档编号C07D491/18GK102875561SQ201210363078
公开日2013年1月16日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司