专利名称：一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法
技术领域：
本发明属于天然药物化学领域，特别是涉及一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法。
背景技术：
含笑内酯(Micheliolide)属于倍半萜内酯类化合物,为愈创木烷型倍半萜内酯类化合物。分子式为C15H2tlO3,分子量为248. 32，为无色结晶，mp. 142_145°C。再木兰科植物黄兰 Mickelia champaca L.的根皮、台湾含笑#2.<^<97/<3 compressa (Maxim. ) Sarg.的根皮中均有分布。有报道发现含笑内酯在治疗白血病方面同小白菊内酯的效果几乎等同，且其对正常细胞无明显杀伤作用。研究发现含笑内酯及其衍生物可用于治疗如下癌症白血病、乳腺癌、前列腺癌、大肠癌或肺癌，另有报道含笑内酯还具有治疗肝癌、食道癌、胃癌、肠道癌、肾癌、口腔癌、何杰金淋巴癌、胰腺癌、直肠结肠癌等的用途。 现有制备含笑内酯的方法主要通过化学合成，中国专利申请号201010153685. 5公开了一种含笑内酯的制备方法，以小白菊内酯为原料，在适当有机溶剂中，在酸催化剂下制备得到含笑内酯，产率达60%以上。该方法副产物较多，不易分离，且重现性较差，不适用于工业化生产。
发明内容
本发明的目的在于解决现有技术的不足和缺陷，提供一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法。为了实现上述目的，本发明的技术方案如下
一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法，其特征在于包括以下步骤以台湾含笑为原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以无水甲醇为夹带剂，采用超临界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再将脱脂物用低碳醇热溶，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至适量体积，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩对应组分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶，得含笑内酯产品。所述超临界CO2萃取条件为萃取温度为45_60°C，萃取压力为23_34MPa，分离釜I温度为40-50°C，压力为8-10MPa，分离釜II温度为35_40°C，压力为4_6MPa，萃取时间为2-6h。所述石油醚脱脂，加入2-5倍萃取物体积量的石油醚加热回流脱脂1-3次，离心，分离固液，得脱脂物。所述低碳醇为C1-C4醇，优选乙醇、甲醇或异丙醇。所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇体积百分比为83%，水的体积百分比为17%的混合溶液。本发明优势在于方法采用超临界CO2萃取，提取效率高、能耗低、绿色环保；用制备液相直接分离纯化出高纯度的晶体，为大规模工业化生产提供了可能，大大节省了分离时间，提高了分离率。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施例。实施例I :
台湾含笑药材粉碎40目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为45°C，萃取压力为34MPa，分离釜I温度为40°C，压力为lOMPa，分离釜II温度为 38 0C，压力为4MPa。通入CO2流体，达到上述参数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取3. 5h，收集萃取液，回收甲醇，加入2倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取I次，离心除去液体，再将脱脂物用甲醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用O. 45 μ m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为95. 3%的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶3次，得纯度为98. 7%的含笑内酯产品。实施例2:
台湾含笑药材粉碎20目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为58°C，萃取压力为31MPa，分离釜I温度为50°C，压力为8MPa，分离釜II温度为40 0C，压力为6MPa。通入CO2流体，达到上述参数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取4h，收集萃取液，回收甲醇，加入3倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取3次，离心除去液体，再将脱脂物用异丙醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用O. 45 μ m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为95. 6%的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶2次，得纯度为99. 2%的含笑内酯产品。实施例3
台湾含笑药材粉碎40目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为46°C，萃取压力为24MPa，分离釜I温度为42°C，压力为9MPa，分离釜II温度为36 0C，压力为5MPa。通入CO2流体，达到上述参数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取5h，收集萃取液，回收甲醇,加入5倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取2次，离心除去液体，再将脱脂物用乙醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用O. 45 μ m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为96. 1%的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶3次，得纯度为98. 5%的含笑内酯产品。实施例4:
台湾含笑药材粉碎40目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定参数萃取温度为53°C，萃取压力为27MPa，分离釜I温度为48°C，压力为8MPa，分离釜II温度为35 0C，压力为4MPa。通入CO2流体，达到上述参数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取3h，收集萃取液，回收甲醇，加入4倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取3次，离心除去液体，再将脱脂物用异丙醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用0. 45 y m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为95. 8%的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶2次，得纯度为98. 2%的含笑内酯产品。实施例5:
台湾含笑药材粉碎40目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定參数萃取温度为60°C，萃取压カ为23MPa，分离釜I温度为43°C，压カ为lOMPa，分离釜II温度为380C，压カ为6MPa。通入CO2流体，达到上述參数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取6h，收集萃取液，回收甲 醇，加入2倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取2次，离心除去液体，再将脱脂物用こ醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用0. 45 y m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为95. 5%的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶4次，得纯度为98. 6%的含笑内酯产品。实施例6:
台湾含笑药材粉碎20目，取IOkg原料加入超临界CO2萃取釜中，开启设备，设定參数萃取温度为56°C，萃取压カ为33MPa，分离釜I温度为46°C，压カ为9MPa，分离釜II温度为360C，压カ为5MPa。通入CO2流体，达到上述參数后，以CO2液体22L/h流量萃取，并夹带无水甲醇3L/h，动态萃取2h，收集萃取液，回收甲醇，加入5倍萃取物体积的石油醚，加热回流提取I次，离心除去液体，再将脱脂物用甲醇加热溶解，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至原体积的1/3,以甲醇超声溶解配制成20mg/ml浓度的溶液,用0. 45 y m的尼龙膜滤过滤，用制备高效液相色谱仪分离纯化，甲醇-水(83:17)等梯度洗脱，收集响应组分旋转蒸发浓缩后，得到纯度为96. 3 %的含笑内酯晶体，再经石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶5次，得纯度为99. 5%的含笑内酯产品。
权利要求
1.一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法，其特征在于包括以下步骤以台湾含笑为原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以无水甲醇为夹带剂，采用超临界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再将脱脂物用低碳醇热溶，力口入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至适量体积，经制备液相ODS RP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩对应组分，石油醚-丙酮(2:1，V/V)重结晶，得含笑内酯产品。
2.根据权利要求I所述从台湾含笑中提取含笑内酯的方法，其特征在于所述超临界CO2萃取条件为萃取温度为45-60°C，萃取压力为23-34MPa，分离釜I温度为40_50°C，压力为8-10MPa，分离釜II温度为35-40°C，压力为4_6MPa，萃取时间为2_6h。
3.根据权利要求I所述从台湾含笑中提取含笑内酯的方法，其特征在于所述石油醚脱月旨，加入2-5倍萃取物体积量的石油醚加热回流脱脂1-3次，离心，分离固液，得脱脂物。
4.根据权利要求I所述从台湾含笑中提取含笑内酯的方法，其特征在于所述低碳醇为 C1-C4醇，优选乙醇、甲醇或异丙醇。
5.根据权利要求I所述从台湾含笑中提取含笑内酯的方法，其特征在于所述甲醇和水的混合溶液是指甲醇体积百分比为83%，水的体积百分比为17%的混合溶液。
全文摘要
本发明属于天然药物化学领域，公开了一种从台湾含笑中提取分离含笑内酯的方法。方法是以台湾含笑为原料，粉碎20-40目，加入萃取釜中，以无水甲醇为夹带剂，采用超临界CO2萃取，收集萃取液，回收甲醇，得萃取物，用石油醚回流脱除脂溶性杂质，再将脱脂物用低碳醇热溶，加入活性炭回流脱色，脱色液回收溶剂至适量体积，经制备液相ODSRP-C18反相柱进行纯化，以甲醇和水的混合溶液进行洗脱，浓缩对应组分，石油醚-丙酮(2∶1，V/V)重结晶，得含笑内酯产品。
文档编号C07D307/93GK102850310SQ20121036283
公开日2013年1月2日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司