专利名称：一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法
技术领域：
本发明属于天然产物分离领域，尤其是涉及一种采用高效液相制备色谱法从云木香根中同时制备云木香胺A和云木香胺B的方法。
背景技术：
云木香为菊科植物云木香lappa Clarke的根,别名木香、广木香,具有行气化滞、疏肝、健胃等功效，可治疗气滞、停食积聚、胸满腹胀、呕吐泻痢等病症。云木香中含有多种挥发油和生物碱类化合物。云木香胺A和云木香胺B是从云木香根中分离得到的倍半萜类生物碱化合物，这两个组分均具有抗溃瘍作用，云木香胺A在100mg/kg时,对由HCl/乙醇引起的大鼠胃溃疡抑制率为59. 8%，云木香胺B在50mg/kg时，对由HCl/乙醇引起的大鼠胃溃疡抑制 率为87. 2%。现有文献中对云木香中生物碱的相关研究报道相对较少，未见有同时制备云木香中倍半萜类生物碱的方法报道。
发明内容
本发明要解决的技术问题是提供一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，该方法操作简单，所得产品含量高。本发明是通过以下技术方案实现的
一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，其特征在于包含以下步骤
1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，药材与溶剂质量比例为I : (6-15)，合并提取液，减压浓缩得粗提取物；
2)将上述粗提取物悬溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩得浸膏；
3)将上述浸膏进行中压氧化镁柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，所得粗品用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至9. 5-10. 5，过滤，沉淀物用去离子水洗涤3-5次，得云木香总生物碱；
4)将上述云木香总生物碱用甲醇溶解，经制备液相色谱分离纯化，乙腈-水混合溶液洗脱，收集各色谱峰对应化合物流分，减压浓缩干燥得云木香胺A和云木香胺B。所述步骤2)中的乙酸乙酯用量为提取物体积的1-4倍量。所述步骤3)中的氧化镁目数为100-300目，柱层析洗脱条件为采用石油醚-丙酮按体积比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱。所述步骤4)中制备液相色谱采用普通C18柱，以体积比为75:25的乙腈和水混合溶剂为流动相，I. 5-4ml/min的流速。本发明的有益效果是本发明方法通过采用微波提取、溶剂萃取、中压氧化镁柱层析、结晶及制备液相色谱分离等步骤制备得到云木香胺A、云木香胺B、云木香胺C三种倍半萜类生物碱化合物，耗时短、得率高、操作简单，易于工业化。
具体实施例方式 下面将结合具体实施方式
进一步说明本发明，但本发明要求保护的范围并不局限于下列实施方式。实施例I :
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入10倍原料重量的85%乙醇溶液微波提取20分钟，提取液滤出，如此反复提取2次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用2倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至10. 2，过滤，沉淀物用去 离子水洗涤5次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，2. 5ml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。实施例2:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取20分钟，提取液滤出，如此反复提取3次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用I倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至9. 5，过滤，沉淀物用去离子水洗涤4次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，3. Oml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。实施例3
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入8倍原料重量的80%乙醇溶液微波提取15分钟，提取液滤出，如此反复提取3次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用4倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料100-200目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至10. O，过滤，沉淀物用去离子水洗涤3次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，I. 5ml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。实施例4:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分钟，提取液滤出，如此反复提取2次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用3倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料200-300目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至9. 8，过滤，沉淀物用去离子水洗涤4次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，3. 5ml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。 实施例5:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入6倍原料重量的70%乙醇溶液微波提取15分钟，提取液滤出，如此反复提取2次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用2倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料100-200目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至10. 5，过滤，沉淀物用去离子水洗涤5次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，4. Oml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。实施例6:
取云木香根50kg粉碎成粗粉投入微波提取罐中，加入15倍原料重量的90%乙醇溶液微波提取10分钟，提取液滤出，如此反复提取3次，合并提取液，滤液减压回收得到粗提取物，将粗提取物加水悬溶于水，用I. 5倍体积量的乙酸乙酯萃取4次，减压浓缩得乙酸乙酯浸膏，将乙酸乙酯浸膏用甲醇溶解湿法上样至填料100-200目的中压氧化镁柱，以石油醚-丙酮的混合溶剂，依次按体积比20:1、10:1、5:1、2:1、1:1进行梯度洗脱，分段收集各流分，将含云木香倍半萜类生物碱流分合并，减压回收溶剂至小体积，然后用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至10. O，过滤，沉淀物用去离子水洗涤3次，得云木香总生物碱；将云木香总生物碱加甲醇溶解，在C18反相制备柱上进行分离，乙腈-水(75:25，V/V)为流动相，2. Oml/min的流速，采用紫外在线检测，检测波长276nm。分别收集各色谱峰对应的化合物流分，减压真空干燥后得到云木香胺A和云木香胺B两种倍半萜类云木香生物碱。
权利要求
1.一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，其特征在于包含以下步骤 1)取云木香根粉碎，加7(T90%(V/V)乙醇水溶液微波提取2 3次，药材与溶剂质量比例为I : (6-15)，合并提取液，减压浓缩得粗提取物； 2)将上述粗提取物悬溶于水中，用乙酸乙酯萃取，萃取液减压浓缩得浸膏； 3)将上述浸膏进行中压氧化镁柱层析，用石油醚-丙酮梯度洗脱，收集各洗脱部分，然后进行薄层层析收集目标洗脱液，回收试剂至小体积，所得粗品用O. 2mol/L的盐酸水溶液提取3次，合并盐酸提取液，再用O. 5mol/L氨水溶液调节pH至9. 5-10. 5，过滤，沉淀物用去离子水洗涤3-5次，得云木香总生物碱； 4)将上述云木香总生物碱用甲醇溶解，经制备液相色谱分离纯化，乙腈-水混合溶液洗脱，收集各色谱峰对应化合物流分，减压浓缩干燥得云木香胺A和云木香胺B。
2.如权利要求I所述的一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，其特征在于所述步骤2)中的乙酸乙酯用量为提取物体积的1-4倍量。
3.如权利要求I所述的一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，其特征在于所述步骤3)中的氧化镁目数为100-300目，柱层析洗脱条件为采用石油醚-丙酮按体积比为20:1、10:1、5:1、2:1、1:1 进行梯度洗脱。
4.如权利要求I所述的一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法，其特征在于所述步骤4)中制备液相色谱采用普通C18柱，以体积比为75:25的乙腈和水混合溶剂为流动相，I.5-4ml/min 的流速。
全文摘要
本发明属于天然产物分离领域，提供了一种倍半萜类云木香生物碱单体的制备方法。制备方法包括乙醇溶液提取、有机溶剂萃取、中压氧化镁柱层析以及制备高效液相色谱纯化等步骤。本发明所得产品纯度高，质量好，制备方法简单，制备量大，易于产业化。
文档编号C07D405/06GK102863430SQ20121036283
公开日2013年1月9日 申请日期2012年9月26日 优先权日2012年9月26日
发明者苏刘花 申请人:南京泽朗农业发展有限公司