专利名称：一种利用超高压技术制备地钱中金鱼草素的方法
技术领域：
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种金鱼草素的纯化方法，特别是涉及一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法。
背景技术：
地钱苔纲地钱目的代表种，是1753年由林奈命名的苔类植物之一，广布于全世界。别名，巴龙骨、脓痂草、米海苔、地衣；植物体呈叶状体扁平，带状，多回二歧分枝，淡绿色或深绿色，宽约I厘米，长可达10厘米，边缘略具波曲，多交织成片生长。背面具六角形气室，气孔口为烟突式，内有生多数直立的营养丝。叶状体的基本组织厚12 20层细胞；腹面具6列紫色鳞片，鳞片尖部有早心脏形的附着物；假根密生鳞片基部。雌雄异株。雄托圆盘状，波状浅裂成7 8瓣。雌托扁平，深裂成6 10个指状瓣无性繁殖借着生叶状体前端芽胞杯中的多细胞圆盘状芽胞大量繁殖。染色体数η = 8,9,10，11，12和18，多习生于阴湿土坡草丛下或溪边碎石上，有时也生长水稻田埂和乡间房层附近。可用于清热解毒，从地钱植物体中提纯的灰分中含有联苄、环脂和倍半萜烯。此类植物确切的早期化石于1961年在英国的侏罗纪地层中被发现。其主要化学成分为金鱼草素、木犀草素(Luteolin)、莽草酸 (Shikimic)、Indodeactic acid、朽1 樣酸、苹果酸、玻拍酸、2，3，5_Friindobenzoic acid、桂皮酸(Cinuamic acid)、葡萄糖、果糖、鹿糖和淀粉。
金鱼草素是以中国大兴安岭原始森林里所生长的野生地钱为原料，近年来，人们发现天然植物地钱中含有大量的金鱼草素，从中提取金鱼草素并且取得了可喜进展。金鱼草素具有解毒，祛阏，牛肌用于外用治烧烫伤，骨折，毒蛇咬伤，疮痈肿毒，臁疮，癣。国内提取金鱼草素技术大多是有机溶剂提取，虽然提取率高，但提取时间长；而采用的超高压技术制备金鱼草素，其技术远比有机溶剂提取效很高，在结合大孔树脂吸附技术，能有效的从地钱中提取金鱼草素，使其有效含量高达90%以上。
发明内容
本发明的目的在于克服常规技术提取率相对较低、提取纯度低等缺点，提供一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法。
为实现上述目的，本发明采用的技术方案是
一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其步骤如下
(1)将干地钱粉碎，加入乙醇，浸泡I小时后放入耐压袋中，在20°C条件下处理，超高压压力在200-400MPA之间，时间在4-8min，回收乙醇，在60°C 70°C真空干燥得金鱼草素粗提物；
(2)将所得金鱼草素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，吸附为静态吸附或动态吸附；
(3)用30% 90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液；
(4)将金鱼草素各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得金鱼草素半成品，其含量在30% 以上.
(5)将所得金鱼草素半成品粉末溶于甲醇，加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛， 干法上样，上工业级柱200-300目硅胶柱层析；
(6)以丙酮、甲醇在I 6 :1条件下进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)所得浓缩液在60V 80°C下进行真空干燥；
(8)将干燥后的产品用70% -80%乙醇溶解，浓缩到原体积的十分之一，放置过夜得晶体体分离晶体将剩余物用50% -60%乙醇溶解，再次浓缩，重结晶，如此反复两次，得到精制的金鱼草素，其含量在90%以上。
所述的步骤(I)中，干地钱粉碎后过40 80目筛。
所述的步骤⑴中，加入乙醇的浓度为80% -90%。
所述的步骤(I)中，加入乙醇的体积为物料粉碎体积的10-20倍
所述的步骤(2)中，所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、 S-8、D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
所述的步骤(8)中，加入乙醇的体积为干燥后产品的10-12倍。
本发明应用超高压技术和大孔吸附技术分离纯化金鱼草素，对金鱼草素的提取速度快，节省时间，提取率高，利用大孔树脂分离纯化分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30%以上的金鱼草素半成品和含量90%以上的金鱼草素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
本发明选用理化性质稳定、表面积较大、交换速度较快、机械强度高、抗污染能力强、热稳定性好的大孔吸附树脂，不容于酸、碱及有机媒，对有机物选择性较好，不受无机盐类及强离了低分子化含物存在的影响，可以通过物理吸附从溶液中有选择地吸附金鱼草素，吸附快、解析也快，吸附容量较大
具体实施例方式
实施例1 :一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其步骤如下
(I)将500g干地钱粉碎后过40目筛，加入10倍体积的浓度为80%的乙醇，浸泡 I小时后放入耐压袋中，在20°C条件下处理，超高压压力200MPA，时间4min，回收乙醇，在 60°C真空干燥得金鱼草素粗提物；
(2)将所得金鱼草素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的D4006型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；
(3)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测， 收集金鱼草素各阶段洗脱液；
(4)将金鱼草素各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得金鱼草素半成品，其含量在31.4% ；
(5)将所得金鱼草素半成品粉末溶于甲醇，加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样,上工业级柱200目硅胶柱层析；
(6)以丙酮、甲醇在1: 1、2 1、3 1、4 1、5 1、6 I条件下进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪、检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)所得浓缩液在60°C下进行真空干燥；
(8)将干燥后的产品用10倍体积的70%乙醇溶解，浓缩到原体积的十分之一，放置过夜得晶体分离晶体将剩余物用50%乙醇溶解，再次浓缩，重结晶，如此反复两次，得到精制的金鱼草素，其含量在91. 2%
实施案例2 :—种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其步骤如下
(I)将500g干地钱粉碎后过50目筛，加入15倍体积的浓度为85%的乙醇，浸泡 I小时后放入耐压袋中，在20°C条件下处理，超高压压力300MPA，时间6min，回收乙醇，在 60°C真空干燥得金鱼草素粗提物；
(2)将所得金鱼草素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的NKA-9型树脂，吸附为静态吸附或动态吸附；
(3)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液；
(4)将金鱼草素各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得金鱼草素半成品，其含量在32.3% ；
(5)将所得金鱼草素半成品粉末溶于甲醇，加适量硅胶搅拌，烘干过60目筛，干法上样,上工业级柱200目硅胶柱层析；
(6)以丙酮、甲醇在1: 1、2 1、3 1、4 1、5 1、6 I条件下进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)所得浓缩液在65 °C下进行真空干燥；
(8)将干燥后的产品用12倍体积的75%乙醇溶解，浓缩到原体积的十分之一，放置过夜得晶体；分离晶体将剩余物用55%乙醇溶解，再次浓缩，重结晶，如此反复两次，得到精制的金鱼草素，其含量有93. 7%。
实施案例3 :—种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其步骤如下
(I)将500g干地钱粉碎后过80目筛，加入20倍体积的浓度为90%的乙醇，浸泡 I小时后放入耐压袋中，在20°C条件下处理，超高压压力400MPA，时间8min，回收乙醇，在 70°C真空上燥得金鱼草素粗提物；
(2)将所得金鱼草素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，所用的大孔树脂为天津南开大学所生产的AB-8H型树脂，吸附为静态吸附或动 态吸附；
(3)用30%、40%、50%、60%、70%、80%、90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液；
(4)将金鱼草素各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得金鱼草素半成品，其含量在 34. 2% ；
(5)将所得金鱼草素半成品粉末溶于甲醇，加适量硅胶搅拌，烘干过80目筛，干法上样,上工业级柱200目硅胶柱层析；(6)以丙酮、甲醇在1: 1、2 1、3 1、4 1、5 1、6 I条件下进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；
(7)所得浓缩液在80°C下进行真空干燥；
(8)将干燥后的产品用12倍体积的80%乙醇溶解，浓缩到原体积的十分之一，放置过夜得晶体；分离晶体将剩余物用60%乙醇溶解，再次浓缩，重结晶，如此反复两次，得到精制的金鱼草素，其含量为91. 5%。
权利要求
1.一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其步骤如下(1)将干地钱粉碎，加入乙醇，浸泡I小时后放入耐压袋中，在20°c条件下处理，超高压压力200-100MPA之间，时间4-8min，回收乙醇，在60°C 70°C真空干燥得金鱼草素粗提物；(2)将所得金鱼草素粗提物用大孔吸附树脂进行吸附，吸附为静态吸附或动态吸附；(3)用30% 90%不同浓度的乙醇对大孔吸附树脂进行洗脱，用薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液；(4)将金鱼草素各阶段洗脱液浓缩，回收乙醇，得金鱼草素半成品，其含量在30%以上；(5)将所得金鱼草素半成品粉末溶于甲醇，加适量硅胶搅拌，烘干过60-80目筛，干法上样,上工业级柱200-300目硅胶柱层析；(6)以丙酮、甲醇在I 6 I条件下进行梯度洗脱，薄层色谱法跟踪检测，收集金鱼草素各阶段洗脱液，减压浓缩，回收溶剂；(7)所得浓缩液在60°C 80°C下进行真空干燥；(8)将干燥后的产品用70%-80%乙醇溶解，浓缩到原体积的十分之一，放置过夜得晶体；分离晶体将剩余物用50% -60%乙醇溶解，再次浓缩，重结晶，如此反复两次，得到精制的金鱼草素，其含量在90%以上。所述的步骤(2)中所用的大孔吸附树脂为天津南开大学所产生的X-5、NKA-9、S-8、 D3520、D4006、H103、D4020、AB-8H和NKA-1I型树脂中的一种，吸附为静态吸附或动态吸附。
2.根据权利要求1所述的利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其特征是所述的步骤(I)中，干地钱粉碎后过40 80目筛。
3.根据权利要求2所述的利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其特征是在所述的步骤(I)中，加入乙醇的浓度为80% -90%。
4.根据权利要求3所述的利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其特征是所述的步骤(I)中，加入乙醇的体积为地钱粉碎体积的10 20倍。
5.根据权利要求4所述的利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法，其特征是所述步骤(8)中，加入乙醇的体积为干燥后产品的10-12倍。
全文摘要
本发明属于天然有机化学领域，涉及一种利用超高压技术和大孔吸附树脂富集纯化地钱中金鱼草素的方法。其特点是应用超高压技术对金鱼草素的提取速度快，节省时间，提取率高；利用大孔吸附技术分离纯化金鱼草素，对金鱼草素的吸附选择性良好，吸附快解析也快，吸附容量较大，分离效果明显，提取纯度高，可以得到含量30％以上的金鱼草素半成品和含量90％以上的金鱼草素终产品，克服了常规提取率相对较低、提取纯度低的缺点。
文档编号C07D307/83GK103030615SQ20121059562
公开日2013年4月10日 申请日期2012年12月13日 优先权日2012年12月13日
发明者万莉, 姚德坤, 张亚红, 姚德利, 鲁桂凤 申请人:大兴安岭林格贝有机食品有限责任公司