以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法
【专利摘要】本发明公开了一种以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括制备鹅去氧胆酸、氧化、还原、纯化工序。本发明以猪胆汁作为提取原料，猪胆汁原料广泛易得，降低了制备成本，收益更高，经济效益良好；本发明以鹅去氧胆酸合成熊去氧胆酸时，以氯化钙为沉淀剂，避免了常规钡盐沉淀剂造成的环境污染，同时也简化了去沉淀工序。
【专利说明】以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法
[0001]
【技术领域】
[0002]本发明属于生物医药【技术领域】，涉及熊去氧胆酸的制备方法，具体涉及以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法。
【背景技术】
[0003]胆汁是人体或脊椎动物肝细胞连续分泌的产物，是一种具有苦味的粘滞性有色碱性液体，其成分除水以外，主要有胆汁酸、胆盐和胆色素，此外还有少量的胆固醇、脂肪酸、卵磷脂、电解质和蛋白质等。现今较常见的动物胆汁一般为禽类胆汁、猪胆汁、牛胆汁、熊胆汁以及蛇胆汁等等。胆汁酸是胆汁的主要成分，约占胆汁总量的50%~70%，胆汁的生理作用主要就是由胆汁酸来发挥，在作为药物时，胆汁酸可以用来解热、镇痉镇咳、调节血压、强心利胆、抑菌抗炎以及调节免疫等，且活性较强、副作用又小、价格低廉，因此受到广大用药者的欢迎。
[0004]在各种动物胆汁中，猪胆汁是最常见且产量最大的，自古代开始就被广泛应用于临床，如用猪胆汁治疗急性黄疸型传染性肝炎、百日咳、急性肠炎以及胃溃疡等，均能收到良好的治疗效果。猪胆汁中主要含胆汁酸类、胆色素、粘蛋白、脂类及无机物等，胆汁酸则主要包含猪去氧胆酸、猪胆酸、鹅去氧胆酸、3 α -羟基-6-氧-5 α -胆烷酸以及胆石酸等。其中猪去氧胆酸约占40%，鹅去氧胆酸约占25%。
[0005]熊去氧胆酸化学名为3 α，7 β - 二羟基_5 β -胆烷酸，分子式C24H49O4,分子量为392.58，为白色或微黄色粉末，易溶于乙醇、冰乙酸，稍溶于氯仿，几乎不溶于乙醚和水。熊去氧胆酸是1920年首先从熊胆汁中发现，1927年Shoda从熊胆汁中分离得到晶体，1937年确定其化学结构。天然熊去氧胆酸来源于熊胆汁，随着临床应用的需求量不断增加，天然熊去氧胆酸远远不能满足市场需求。杀熊取胆被国家明令禁止，因此，通过化学合成方法获得熊去氧胆酸变得越来越重要。最初`，人们成功以胆酸、去氧胆酸等为原料，合成了熊去氧胆酸，但此种方法反应步骤多，工艺复杂，产率低，很难进行产业化大规模生产。
[0006]近年来，以鹅去氧胆酸为原料，进行化学合成熊去氧胆酸工艺过程大大简化。而鹅去氧胆酸是鸡、鸭与鹅等家禽胆汁的主要成份，可以直接从鸭、鹅与鸡的胆汁中提取得到，生产工艺成熟，价格低廉。因此，以鹅去氧胆酸为原料生产熊去氧胆酸，特别是从来源广泛的猪胆汁中提取鹅去氧胆酸后再化学合成熊去氧胆酸，可以创造明显的经济效益和社会价值。
【发明内容】
[0007]本发明所要解决的技术问题是提供一种以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，该方法提取工艺简单，原料来源广泛易得，对环境污染小，产品纯度高。
[0008]为解决上述技术问题，本发明釆取的技术方案如下:
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入50%丙酸或60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入弱氧化剂，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于有机溶剂中，于75~85°C温度下与硅化剂反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0009]作为本发明的改进，上述步骤(2)的弱氧化剂为N-溴代丁二酰亚胺，其用量为I ~5wt%。
[0010]作为本发明进一步的改进，上述步骤(4)的有机溶剂为苯、甲苯、硝基苯、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和四氢呋喃的一种或多种。
[0011]更进一步地，上述步骤(4)的酸为5~10%硫酸或5~10%盐酸。
[0012]上述步骤(4)的硅化剂为二取代或三取代的烷基硅卤化物、二取代或三取代的硅脲或二烷基硅酰胺，优选为二甲基硅酰胺。
[0013]与现有技术相比，本发明的有益效果为:
本发明以猪胆汁作为提取原料，猪胆汁原料广泛易得，降低了制备成本，收益更高，经济效益良好；本发明以鹅去氧胆 酸合成熊去氧胆酸时，以氯化钙为沉淀剂，避免了常规钡盐沉淀剂造成的环境污染，同时也简化了去沉淀工序。
【专利附图】
【附图说明】
[0014]图1是本发明的工艺流程图。
【具体实施方式】
[0015]为便于理解本发明，本发明列举实施例如下。本领域技术人员应该明了，所述实施例仅仅用于帮助理解本发明，不应视为对本发明的具体限制。
[0016]下列实施例中，所使用的所有专业与科学用语与本领域技术熟练人员所熟悉的意义相同。
[0017]实施例1
如图1所示，以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入50%丙酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于四氢呋喃中，于75~85°C温度下与二甲基硅酰胺反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8%盐酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0018]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到18~20克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达98%。
[0019]实施例2
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于四氯化碳中，于75~85°C温度下与二甲基硅酰胺反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8%盐酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0020]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达95%。
[0021]实施例3
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入2被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于氯仿中，于75~85°C温度下与三甲基硅脲反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8%盐酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0022]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~16克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达92%。
[0023]实施例4
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(I)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入5被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于硝基苯中，于75~85°C温度下与三甲基硅脲反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8%盐酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0024]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达93%。
[0025]实施例5
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；` (4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于甲苯中，于75~85°C温度下与三甲基硅脲反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8%硫酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0026]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到15~18克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达91%。
[0027]实施例6
以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，包括如下步骤:
(1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸；
(2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入3被％的N-溴代丁二酰亚胺，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸；
(3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物；
(4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于苯中，于75~85°C温度下与二甲基硅酰胺反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与8 %硫酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
[0028]在本实施例中，20克鹅去氧胆酸经过步骤(2)、(3)、(4)后，可合成得到12~16克(mp.191~193°C)熊去氧胆酸干燥品，再用乙醇结晶(mp.198~203°C ),纯度可达90%。
[0029] 申请人:声明，所属【技术领域】的技术人员在上述实施例的基础上，将上述实施例某组分的具体含量点值，与
【发明内容】
部分的技术方案相组合，从而产生的新的数值范围，也是本发明的记载范围之一，本申请为使说明`书简明，不再罗列这些数值范围。
【权利要求】
1.以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于，包括如下步骤: (1)制备鹅去氧胆酸:以猪胆汁为原料，提取胆红素后的母液制得总胆汁酸，加乙醇溶解后用氢氧化钠调PH至7.2~7.5，加入氯化钙溶液至沉淀完全，水洗沉淀得鹅去氧胆酸钙盐，加入50%丙酸或60%醋酸，40~50°C温度下加热使其完全溶解，再加入水中即析出鹅去氧胆酸； (2)氧化:将鹅去氧胆酸溶解于丙酮和水的混合溶液，再加入弱氧化剂，使鹅去氧胆酸转化为7-0-石胆酸； (3)还原:以仲丁醇为溶剂，金属钠为还原剂，在回流状态下，将步骤(2)的7-0-石胆酸还原为熊去氧胆酸和鹅去氧胆酸混合物； (4)纯化:将步骤(3)的熊去氧胆酸与鹅去氧胆酸混合物置于有机溶剂中，于75~85°C温度下与硅化剂反应，生成熊去氧胆酸硅醚固体沉淀，再将此固体于40~50°C温度下与酸反应，得到熊去氧胆酸纯品。
2.如权利要求1所述的以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于:所述步骤(2)的弱氧化剂为N-溴代丁二酰亚胺,其用量为I~5wt%。
3.如权利要求1所述的以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于:所述步骤(4)的有机溶剂为苯、甲苯、硝基苯、氯仿、二氯甲烷、四氯化碳和四氢呋喃的一种或多种。
4.如权利要求1所述的以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于:所述步骤(4)的酸为5~10%硫酸或5~10%盐酸。
5.如权利要求1所述的以猪胆汁为原料制备熊去氧胆酸的方法，其特征在于:所述步骤(4)的硅化剂为二取代或三取代的 烷基硅卤化物、二取代或三取代的硅脲或二烷基硅酰胺。
【文档编号】C07J9/00GK103804453SQ201310456980
【公开日】2014年5月21日 申请日期:2013年9月30日 优先权日:2013年9月30日
【发明者】孔艳飞 申请人:淮北市恒通生物科技有限公司