从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法
【专利摘要】本发明涉及一种复合氨基酸的分离提纯方法，尤其是涉及一种从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法。该方法包括下述的步骤：（1）预处理；（2）超声处理；（3）脱色；（4）除杂；（5）纯化；（6）溶解晶体，加入活性炭，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，烘干，得复合氨基酸晶体。本发明的有益效果是，通过复合酶和超声波共同作用于木槿叶，从从木槿叶中提取复合氨基酸，酶作用条件温和，而且还起到破壁的作用，使木槿叶中的氨基酸彻底的溶出的作用；超声波提取过程是一个物理过程，提取过程中无化学变化，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，缩短了破碎时间。
【专利说明】从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法
【技术领域】
[0001]本发明涉及一种复合氨基酸的分离提纯方法，尤其是涉及一种从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法。
[0002]【背景技术】
木槿，是锦葵科木槿属落叶灌木，原产东亚，主要分布于我国长江流域、黄河流域、珠江流域及朝鲜、日本等国，现在全球温带和亚热带地区均有栽培，是集药用、食用、观赏、绿化、纤维原料价值于一身的木本植物。
[0003]木槿叶的医药作用在我国早有记载，据《品江精要》载:主肠风，痢后热渴，据《本草江言》载:能除诸热，滑利能导各滞，善治赤白积痢，干涩不通，下坠欲解而不解，捣汁和生白酒温饮。 [0004]木槿嫩叶可食，做汤味鲜美，也可代茶饮，其叶中含丰富的营养成分与无机元素:蛋白质、氨基酸、脂肪、粗纤维、糖类和原花青素；还富含人体必需的微量元素，如钙、镁、铁、锌等。研究发现，木槿叶中水溶性蛋白质、氨基酸组分分析具有独特的性能，并优于一般的动植物蛋白质，是一种较理想的天然调理剂，有软化、调理、提高光泽、养发、护发等功能。木槿叶中营养成分与无机元素含量丰富，特别是氨基酸的含量，占木槿干粉的13%左右，可以作为氨基酸生产的来源之一，而木槿叶中含有的天然活性成分，可作为天然去污剂，成为洗发香波的主要原料之一。
[0005]我国氨基酸的生产起步较晚，由天然蛋白质水提取液中分离提取至今是氨基酸制备的主要来源之一。目前国内外从人发渣、猪毛渣、废羊皮、羽毛杆、猪血粉等动物蛋白中分离提取系列氨基酸的报道较多，但从植物中提取氨基酸的报道较少，尤其从木槿叶中提取氨基酸的研究更少，目前仅见有酸水解法的报道。氨基酸的用途广泛，主要用于饮食和补给品和制药，目前，全球饮食补给品对氨基酸的年需求量约为1500吨，注射用氨基酸年均约5000吨，制药用氨基酸年均约为1500吨，今后世界氨基酸需求量还要增长。
[0006]目前，对木槿花、叶、籽中化学活性成分的研究报道不多，而对于其活性成分的提取分离等研究就更是甚少。
【发明内容】
[0007]为了解决上述的技术问题，本发明提供了一种从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法。
[0008]本发明是通过下述的技术方案来实现的:
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，该方法包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，粉碎，过10-20目筛，得木槿叶粉
末；
(2)超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:10-20mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理40-50min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为Ig: 100-150mL, 70-80 °C条件下IOOrpm处理30-40min,过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2-4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附l_2h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200-300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0009]预处理步骤中，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为200-600目。
[0010]优选的，有机溶剂为无水乙醇。
[0011]从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°c温度下烘干，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为200-600目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:6-10的比例加入水,调节其温度至30-55°C，pH至5.5-6.5，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，所述的纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:1-4:1-4:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的1-3% ；`
超声处理:取步骤a所得木槿叶粉末按料液比为lg: 10-20mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理40-50min，上述的有机溶剂可以是无水乙醇；
(3)脱色:向步骤b所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 100-150mL, 70-80 °C条件下IOOrpm处理30-40min,过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤c所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2-4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤d所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附l_2h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200-300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0012]优选的，上述的步骤(2)中:酶处理的具体条件为，取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:6-10的比例加入水，调节其温度至40°C，pH至6，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:2:2:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2%。
[0013]先采用超微粉碎的方式将木槿叶粉碎至易于水解的细度，再加入复合酶系对木槿叶粉末进行水解，使氨基酸更好的溶出；再采用超声波的方法使木槿叶分子剧烈运动，增加其扩散速度，且由于前期酶解为后期的超声波提供了有利条件，酶解后超声波给予了木槿叶中各分子水解时各种化学键例如肽键等断裂所需要的能量，故超微粉碎、复合酶水解和超声波三者相结合的方法有利于氨基酸的溶出，提高了氨基酸的提取率。
[0014]步骤(2)中，超声处理的具体条件为，取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg: 15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min。
[0015]步骤(3)中，脱色条件具体为，向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75?条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5。采用酶处理和超声处理相结合的方法对木槿叶粉末进行处理，提取其中的氨基酸。
[0016]本发明的有益效果为: (1)通过复合酶和超声波共同作用于木槿叶，从木槿叶中提取复合氨基酸，酶作用条件温和，而且还起到破壁的作用，使木槿叶中的氨基酸彻底的溶出的作用；超声波提取过程是一个物理过程，提取过程中无化学变化，被浸提的生物活性物质在短时间内保持不变，缩短了破碎时间；
(2)利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、搅拌作用等可加速植物有效成分的溶出，从而提高了提取率，节约了溶剂。
【具体实施方式】
[0017]下面结合具体实施例对本发明作更进一步的说明，以便本领域的技术人员更了解本发明，但并不因此限制本发明。
[0018]实施例1
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°c温度下烘干，粉碎，过20目筛，得木槿叶粉末；
(2)超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75°C条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:3，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附1.5h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:250mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0019]按照茚三酮显色分光光度法测定氨基酸含量，计算产品提取率；以下实施例的计算方法均同。
[0020]复合氨基酸的提取率为7.98%。
[0021]实施例2 从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，粉碎，过20目筛，得木槿叶粉末；
(2)超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:10mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理40min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg:1OOmL, 70°C条件下IOOrpm处理30min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附Ih后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜,析出晶体,倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0022]复合氨基酸的提取率为8.26%。
[0023]实施例3
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，粉碎，过10目筛，得木槿叶粉末；
(2)超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:20mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理50min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 150mL,80°C条件下IOOrpm处理40min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附Ih后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜,析出晶体,倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0024]复合氨基酸的提取率为8.29%。
[0025]实施例4
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为400目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:8的比例加入水，调节其温度至40°C，pH至6，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，所述的纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:2:2:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2% ；
超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75°C条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步 骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:3，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附1.5h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:250mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0026]复合氨基酸的提取率为11.34% 。
[0027]实施例4中，采用复合酶系对木槿叶粉末进行水解，其余条件与实施例1完全相同。
[0028]实施例4与实施例1相比较，其氨基酸提取率更高，这是因为酶解为超声提取提供了有利条件，使木槿叶中的氨基酸彻底的溶出，从而提高氨基酸的提取效率。
[0029]对比例I
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，将木槿叶粉碎至粒度为400目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:8的比例加入水，调节其温度至40°C，pH至6，加入果胶酶、酸性蛋白酶两者的复合酶，果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:4:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2% ；
超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75°C条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:3，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)得溶液加入阳离子交换树脂，吸附1.5h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜,析出晶体,倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:250mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0030]复合氨基酸的提取率为8.79%。
[0031]对比例2
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，将木槿叶粉碎至粒度为400目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:8的比例加入水，调节其温度至40°C，pH至6，加入纤维素酶、果胶酶两者的复合酶，纤维素酶、果胶酶的重量比例为:
4:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2% ；超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75°C条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:3，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附1.5h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:250mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0032]复合氨基酸的提取率为9.13%。
[0033]从以上的结果对比看，实施例4的效果要优于对比例I和对比例2的效果，纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶复合酶系处理时氨基酸的提取效率更高。
[0034]实施例5
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为200目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:6的比例加入水，调节其温度至35°C，pH至5.5，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:1:1:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2% ；
超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:1OmL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理40min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: IOOmL, 70°C条件下IOOrpm处理30min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附Ih后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜,析出晶体,倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
[0035]实施例6
从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，包括下述的步骤:
(1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为600目，得木槿叶粉末；
(2)提取:
酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:10的比例加入水，调节其温度至55°C，pH至6.5，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:4:4:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的3% ；
超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:20mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理50min ；
(3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 150mL,80°C条件下IOOrpm处理40min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ；
(5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附2h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜,析出晶体,倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体；
(6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为Ig:300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
【权利要求】
1.从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，该方法包括下述的步骤: (1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，60-80°C温度下烘干，粉碎，过10-20目筛，得木槿叶粉末； (2)超声处理:取步骤(1)所得木槿叶粉末按料液比为lg:10-20mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理40-50min ； (3)脱色:向步骤(2)所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 100-150mL, 70-80 °C条件下IOOrpm处理30-40min,过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ； (4)除杂:向步骤(3)所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2-4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ； (5)纯化:取步骤(4)所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附l_2h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体； (6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200-300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
2.如权利要求1所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的预处理步骤中，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为200-600目。
3.如权利要求1所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为无水乙醇。
4.如权利要求1所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的方法包括下述的步骤: (1)预处理:采摘新鲜木槿叶，风干，70°C温度下烘干，采用超微粉碎，将木槿叶粉碎至粒度为200-600目，得木槿叶粉末； (2)提取: 酶处理:取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:6-10的比例加入水,调节其温度至30-55°C，pH至5.5-6.5，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，所述的纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:1-4:1-4:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的1-3% ； 超声处理:取步骤a所得木槿叶粉末按料液比为lg: 10-20mL的比例加入水或有机溶剂, 250W的功率下超声波处理40-50min ； (3)脱色:向步骤b所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 100-150mL, 70-80 °C条件下IOOrpm处理30-40min,过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ； (4)除杂:向步骤c所得溶液中加入无水乙醇，溶液与无水乙醇体积比为1:2-4，过滤，滤液减压浓缩至原体积的1/5 ； (5)纯化:取步骤d所得溶液加入阳离子交换树脂，吸附l_2h后用蒸馏水洗脱至溶液对茚三酮呈阳性，再用氨水洗脱至洗脱液对茚三酮呈阴性，收集洗脱液，减压浓缩至有晶体析出时放入冰箱过夜，析出晶体，倾出上清液继续浓缩析出晶体,合并两次晶体； (6)用水溶解晶体，加入活性炭，活性炭与溶液的质量体积比为lg:200-300mL，搅拌过滤，放入冰箱中过滤，析出氨基酸晶体，40°C烘干，得复合氨基酸晶体。
5.如权利要求4所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中:酶处理的具体条件为，取步骤(1)中的木槿叶粉末，按木槿叶粉末与水1:6-10的比例加入水，调节其温度至40°C，pH至6，加入纤维素酶、果胶酶、酸性蛋白酶三者的复合酶，所述的纤维素酶、果胶酶和酸性蛋白酶的重量比例为:2:2:1 ;所述的复合酶的总重占木槿叶粉末的2%。
6.如权利要求4所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤(2)中，超声处理的具体条件为，取步骤a所得木槿叶粉末按料液比为lg:15mL的比例加入水或有机溶剂，250W的功率下超声波处理45min。
7.如权利要求6所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的有机溶剂为无水乙醇。
8.如权利要求4所述的从木槿叶中分离提取复合氨基酸的方法，其特征在于，所述的步骤(3)中，脱色条件具体为，向步骤b所得溶液中加入活性炭脱色，活性炭与溶液的质量体积比为lg: 120mL, 75?条件下IOOrpm处理35min,过滤,滤液减压浓缩至原体积的1/5。
【文档编号】C07B63/00GK103642862SQ201310629821
【公开日】2014年3月19日 申请日期:2013年12月2日 优先权日:2013年12月2日
【发明者】张成如 申请人:济南开发区星火科学技术研究院