三碘代甲状腺素半抗原发光标记物及合成方法
【专利摘要】本发明公开了一种三碘代甲状腺素半抗原发光标记物及合成方法，所述三碘代甲状腺素半抗原发光标记物合成方法包括步骤：A)制备三氟乙酰胺粗品；B)制备三氟乙酰胺；C)制备三氟乙酰胺；D)制备三碘代甲状腺素甲酯；E)制备三碘代甲状腺素甲酯；F)制备三碘代甲状腺素甲酯；G)制备目标产物吖啶标记三碘代甲状腺素甲酯。本发明提出了一种新型用于化学发光法检测三碘代甲状腺素的化合物及合成路线和方法，此类小分子的标记物易于纯化，能够工业化生产，并且提高了检测灵敏度。解决以往检测试剂所用的蛋白类大分子化合物，价格昂贵，生产过程中易产生差异等缺点。
【专利说明】三碘代甲状腺素半抗原发光标记物及合成方法
【技术领域】
[0001] 本发明属于有机合成领域，尤其是涉及三碘代甲状腺素半抗原发光标记物的合成 方法。
【背景技术】
[0002] 化学发光免疫分析是世界范围内发展非常迅速的非放射性免疫分析技术，是继酶 免技术、放免技术、荧光免疫技术之后发展起来的一种超高灵敏度的微量检测技术。它具有 灵敏度高、线性范围宽、操作简便快速、标记物稳定性好、无污染、结果稳定等优点，是目前 免疫定量分析最理想的方法。在化学发光免疫分析中，常用发光物质包括鲁米诺、异鲁米 诺、B丫陡酯、1，2_二氧杂环丁烧化合物（l，2-dioxetanecompound)。其中异鲁米诺和Π丫陡酯 作为示踪分子直接标记，属于闪光型化学发光反应。鲁米诺和1，2-二氧杂环丁烷化合物依 靠酶作为示踪分子标记，属于酶促辉光型化学发光反应。1，2-二氧杂环丁烷化合物是最新 的超灵敏的碱性磷酸酶底物，在适宜的缓冲液中，随着碱性磷酸酶的催化水解作用，1，2-二 氧杂环丁烷化合物分解发出强度很高的光信号，信号可持续20个小时以上，是理想的化学 发光物质。国外生产厂家研制出以碱性磷酸酶为标记物，1，2-二氧杂环丁烷化合物为底物 的试剂盒，与之相匹配的有DPC、Beckman、BioMerieux、Olympus全自动化学发光系统。化 学发光是化学物质在特定化学反应中产生的光辐射。通过高能中间体的分解在化学反应中 激发单态分子形成，分子被激发后回到基态，其中部分的能量以发光形式释放出来。因此， 任何一个化学发光反应包括两个过程：激发和发光过程。一些激发态分子能量也会通过系 间串跃和系内串跃而消失。
[0003] 化学发光作为国外近年广泛使用的免疫分析技术，它具有高灵敏度，检测线性范 围宽和无污染等特点。目前化学发光免疫分析中主要有鲁米诺，异鲁米诺，吖啶和环二氧乙 烷衍生物（如AMPPD，csro等）等系统。其中吖啶体系统中三碘代甲状腺素的检测多用竞 争法实现，但常规试剂盒中所用竞争抗原多为蛋白类大分子，此类物质价格昂贵，生产过程 易产生差异，影响下游使用。
[0004] 现有测定三碘代甲状腺素试剂盒中多采用蛋白类三碘代甲状腺素标记物，此类标 记物不易纯化，生产批间差异大，价格昂贵，直接提高了单位检测成本。
【发明内容】
[0005] 本发明提出一种新型用于化学发光法检测三碘代甲状腺素的化合物及合成路线 和方法，此类小分子的标记物易于纯化，能够工业化生产，并且提高了检测灵敏度。解决以 往检测试剂所用的蛋白类大分子化合物，价格昂贵，生产过程中易产生差异等缺点。
[0006] 本发明合成了一种新型用于化学发光法检测三碘代甲状腺素的化合物，具有如下 的化学结构式：
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【权利要求】
1. 一种三碘代甲状腺素半抗原发光标记物，具有如下所示的化学结构式：
2. -种合成权利要求1所述三碘代甲状腺素半抗原发光标记物的方法，包括步骤： A) 将双壬基三胺化溶于乙腈中加入三氟乙酸乙酯，室温搅拌过夜，用薄层色谱法监测 反应结束，减压浓缩，抽干，得三氟乙酰胺粗品； B) 将三氟乙酰胺粗品用乙腈溶解，先加入三乙胺，再加入丁二酸酐，室温搅拌过夜，减 压浓缩后用柱层析法纯化，得三氟乙酰胺； C) 将三氟乙酰胺用乙腈溶解，先加入羟基琥珀酰亚胺，再加入EDC. HC1，室温搅拌过 夜，用薄层色谱法监测反应结束后用柱层析法纯化，得三氟乙酰胺； D) 将化合物T3用无水甲醇溶解；加入SOCl2加热回流搅拌过夜，减压浓缩，抽干，得三 碘代甲状腺素甲酯； E) 将三氟乙酰胺与三碘代甲状腺素甲酯溶于DMF中，室温搅拌过夜，用薄层色谱法监 测反应结束后用柱层析法纯化，得目标产物三碘代甲状腺素甲酯； F) 将三碘代甲状腺素甲酯溶于甲醇再加水，加入碳酸钾室温搅拌反应，液相色谱监测 反应，室温搅拌反应过夜，经制备色谱纯化，得三碘代甲状腺素甲酯； G) 将三碘代甲状腺素甲酯溶于无水DMF中，加入DIPEA，将吖啶酯加入反应液，室温搅 拌反应，液相色谱监测反应结束后，经制备色谱纯化得目标产物吖啶标记三碘代甲状腺素 甲酯。
3. 如权利要求2所述的三碘代甲状腺素半抗原发光标记物的方法，其特征是：步骤A) 所述双壬基三胺由双（六甲撑）三胺或者二丙基三胺替换。
4. 如权利要求2所述的三碘代甲状腺素半抗原发光标记物的方法，其特征是：步骤B) 所述丁二酸酐由戊二酸酐替换。
5. 如权利要求2所述的三碘代甲状腺素半抗原发光标记物的方法，其特征是：步骤G) 所述吖啶酯由NSP-DMAE-NHS或者NSP-SA-NHS吖啶酯化物替换。
【文档编号】C07D219/04GK104262250SQ201410441542
【公开日】2015年1月7日 申请日期:2014年9月1日 优先权日:2014年9月1日
【发明者】任琪, 谈宇清, 宫磊 申请人:深圳市美凯特科技有限公司