用于疾病治疗的针对IL-1β和IL-18的抗体的制作方法

用于疾病治疗的针对IL-1β和IL-18的抗体的制作方法
【专利摘要】本发明涉及用于疾病治疗的组合物和方法。更具体而言，本发明涉及抗IL-1β和抗IL-18抗体，包括抗IL-1β和抗IL-18双特异性抗体，以及使用此类抗体治疗疾病的方法。
【专利说明】用于疾病治疗的针对丨L-1 (3和IL-18的抗体 本申请为2011年8月12日提交的，发明名称为"用于疾病治疗的针对IL-I 0和IL-18 的抗体"的PCT申请PCT/US2011/047532的分案申请，所述PCT申请进入中国国家阶段的日 期为2013年4月12日，申请号为201180049367. 7。 相关申请
[0001] 本非临时申请要求2010年8月13日提交的美国临时申请序列号61/373,760的 优先权的权益，以其整体引入作为参考。 发明领域
[0002] 本发明一般涉及抗IL-I 0和抗IL-18抗体，包括抗IL-I 0和抗IL-18双特异性 抗体和单克隆抗体，以及使用此类抗体用于疾病治疗的方法。 发明背景
[0003] 细胞因子的白细胞介素-I (IL-I)和IL-18家族通过起源机制、受体结构和所使用 的信号转导途径而相关。这些细胞因子合成为前体分子并在从细胞中释放之前或过程中由 胱天蛋白酶-1切割。NALP-3炎症小体（inflammasome)在产生活性胱天蛋白酶-1中至关 重要（Cassel等，2009;Ferrero_Miliani等，2007)。IL-1 家族含两种激动剂：IL_1 a 和 IL-I 0、一种特异性抑制剂：IL-1受体拮抗剂（IL-IRa)和两种受体：生物学上有活性的类 型IL-IR和无活性的类型II IL-lR(Arend等，2008)。IL-IRI和IL-33R均利用相同的互 作辅助蛋白质（IL-IRAcP)。IL-I和IL-IRa间的平衡在预防多种器官中的疾病方面是重 要的，并且在多种人疾病中已经牵涉到IL-I的过量产生。IL-18家族还包括特异性抑制剂 IL-18结合蛋白质（IL-18BP)，其在流动相中结合IL-18。IL-18受体与IL-I受体复合物类 似，包括单一配体结合链和不同的互作辅助蛋白质。IL-18在先天性和适应性免疫应答之间 提供了重要连接。
[0004] 疾病进展中可能涉及炎症小体活化和IL-I e /IL-18加工及分泌。基因组范围的 相关研宄显示了炎症小体在炎性肠病（IBD)中的作用。据报道在炎症小体-化合物NALP-3 中具有多态性的患者患有局限性回肠炎的风险升高（Ferrero-Miliani等，2007 ;Villani 等，2009)。此外，已报道控制胱天蛋白酶-1活化和IL-I 0 /IL-18加工的自噬组分Atgl611 和IRGM中的多态性与局限性回肠炎相关（Baldassano等，2007 ;Cadwell等，2008 ;Kuballa 等，2008 ;Saitoh等，2008)。独立研宄已报道了患有IBD的患者中升高的IL-I 0和IL-18 血清水平（Ludwiczek 等，2005 ;Ludwiczek 等，2004 ;Monteleone 等，1999)。人中的研宄 已进一步被临床前研宄所支持。据报道阻断IL-18或IL-I 0导致在所述疾病的临床前模 型中临床评分的改善（Ten Hove等，2001)。
[0005] 另外，已报道在患有糖尿病性视网膜病的患者的眼中具有升高水平的 IL-10 (Kowluru 和 Odenbach, 2004)〇 发明概述
[0006] 本发明提供抗IL-I e和抗IL-18抗体，包括例如抗IL-I e和抗IL-18双特异性抗 体，以及使用此类抗体用于疾病治疗的方法。在一些实施方案中，所述抗IL-I 0和抗IL-18 抗体为单克隆抗体，并同时或连续地向患者施用用于疾病治疗。在其他实施方案中，所述抗 IL-I 0和抗IL-18为双特异性抗体并向患者施用用于疾病治疗。在一些实施方案中，所述 疾病为炎症小体介导的疾病，例如炎症小体被活化的疾病。疾病实例包括免疫疾病和自身 免疫疾病，并包括炎性肠病（IBD)、年龄相关性黄斑变性（AMD)和2型糖尿病（T2D)。
[0007] 在一些实施方案中，本发明的抗IL-10和抗IL-18抗体阻断或中和IL-10和/ 或IL-18的活性，和/或结合IL-I 0和/或IL-18。在一些实施方案中，所述双特异性抗体 阻断或中和IL-I 0和/或IL-18的活性，和/或结合IL-I 0和/或IL-18。
[0008] 一方面，提供了在患者中治疗疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量 的： a. IL-I 0 /IL-18双特异性抗体；或 b. 结合IL-I 0和IL-18的抗体；或 c. 结合IL-I 0的抗体和结合IL-18的抗体； 其中a、b或c部分的所述抗体或多个抗体能够在细胞或组织中中和或阻断IL-I 0和 IL-18的活性。
[0009] 在一些实施方案中，所述方法中使用的抗体/抗体是人源化的。在一些实施方案 中，所述抗体为双功能抗体。
[0010] 在一些实施方案中，所述方法使用包含抗IL-I 0抗体和抗IL-18抗体的组合疗 法。在一个实施方案中，至少一种抗体是单克隆的。在一些实施方案中，每一种抗体均是单 克隆的。在一些实施方案中，同时或连续提供（c)部分的抗体。在一些实施方案中，在一小 时内施用所述抗体。
[0011] 在一些实施方案中，待治疗的疾病为免疫性疾病或自身免疫疾病或炎症或自身 炎症疾病。在一些实施方案中，疾病为炎症小体介导的疾病。在一些实施方案中，疾病为 IL-10相关疾病或IL-18相关疾病或IL-10/IL-18 0疾病。
[0012] 在一些实施方案中，疾病为年龄相关性黄斑变性（AMD)。在一些实施方案中，疾病 为2型糖尿病（T2D)。在一些实施方案中，疾病为炎性肠病（IBD)。在一些实施方案中，疾 病为局限性回肠炎（CD)。在一些实施方案中，疾病为溃疡性结肠炎（UC)。在一些实施方案 中，疾病为动脉粥样硬化。在一些实施方案中，疾病为心脏代谢疾病。在一些实施方案中， 疾病为纤维性狭窄局限性回肠炎（fibrostenosing Crohn' s disease)。
[0013] 在一些实施方案中，接受本方法治疗的患者还不对抗TNF疗法应答。
[0014] 在一些实施方案中，在患者中治疗疾病的方法包括向所述患者施用有效量的结合 IL-I 0的单克隆抗体和结合IL-18的单克隆抗体。
[0015] 另一方面，提供了在细胞或组织中中和或阻断IL-I 0和/或IL-18活性的方法， 所述方法包括使所述细胞或组织与结合IL-I 0的单克隆抗体和结合IL-18的单克隆抗体 接触，并由此中和或阻断所述活性。在一些实施方案中，同时或连续地施用抗体。在一些实 施方案中，细胞同时或连续地与结合IL-I 0的所述单克隆抗体和结合IL-18的所述单克隆 抗体接触。
[0016] 另一方面，提供了中和或阻断IL-10和IL-18活性的抗体。在一些实施方案中， 抗体为双特异性抗体。在一些实施方案中，抗体为人源化的。在一些实施方案中，抗体结合 IL-I 0 和 IL-18。 附图简述
[0017] 图1描述了针对IL-10和针对IL-18的配体和受体的实例。例如，信号可通 过经IL-I 0或IL-18的两条受体链的衔接而起始。认为胞内的Toll-白细胞介素受体 (Rexeptor)类（TIR)结构域导致转录因子NF-kB和APl的活化，所述转录因子NF-kB和APl 反过来增加了细胞因子的产生，最终导致保护性免疫、自身炎症病症或慢性炎症。
[0018] 图2描述了 IL-I 0/IL-18参与炎性肠病的假定模型的实例。由肠内微生物引起 的固有层巨噬细胞的刺激导致胱天蛋白酶-1的自催化活化，其反过来加工并分泌IL-I 0 和IL-18。IL-I 0和IL-18对多种免疫细胞起作用并诱导巨噬细胞中的促炎症反应细胞因 子、使T细胞向Thl和Thl7病原性T细胞极化并破坏上皮细胞屏障，使得更多的病原体能 够刺激巨噬细胞。
[0019] 图3描述了遗传学如何提示在局限性回肠炎中炎症小体活化的作用的实例。自噬 相关基因ATG16L1和IRGM及炎症小体调控基因N0D2和NALP3中的多态性导致升高的胱天 蛋白酶-1活化和IL-I 0和IL-18的分泌。
[0020] 图4 (A)为显示IL-I 0和IL-18mRNA的表达在来自Crohn氏和UC患者的结肠活 组织检查中升高的数据。数值基于Agilent基因平台上杂交信号的相对强度。（B)为显示 IL-I 0和IL-18在来自局限性回肠炎和UC患者的血清中升高的数据。
[0021] 图5为显示在发炎的结肠中IL-I 0和IL-18差异表达的数据。来自患有UC的患 者的结肠活组织检查的横向切片的免疫组织化学。用针对人IL-I 0和IL-18的抗体对切 片染色。尽管IL-I 0主要发现于位于透壁炎症位置的巨噬细胞中，但IL-18主要发现于位 于淋巴样滤泡的树突细胞中。在两种情况下，仅在炎症区域观察到染色。
[0022] 图6为显示来自在5天随意饮水中接受了 3. 5% DSS的小鼠的结肠中，IL-I 0和 IL-18的分泌升高的数据。
[0023] 图7为显示来自接受了过继性转移的⑶4+⑶45RBhi T细胞的小鼠的结肠中，升高 的IL-I 0和IL-18的分泌的数据。
[0024] 图8为显示来自用吡罗昔康处理的IL-10K0小鼠的结肠中，升高的IL-10和 IL-18的分泌的数据。
[0025] 图9为显示IL-IRl和ASC KO小鼠显示出DSS诱导的结肠炎显著降低的严重性的 数据。结肠评分来自缺乏IL-IRl、IL-18Ra和ASC的小鼠。
[0026] 图1〇显示11^11?1缺乏导致〇55诱导的结肠炎中11-10、11-18、11-17和1呖-(1 的显著降低。
[0027] 图11为显示IL-18R缺乏导致DSS诱导的结肠炎中IL-10和IL-12p40的水平显 著降低的数据。
[0028] 图12为显示ASC缺乏导致DSS诱导的结肠炎中IL-10、IL-18、IL-12p40和IL-17 的水平显著降低的数据。
[0029] 图13为获自不同小鼠IBD模型的离体结肠培养物中示例性细胞因子应答的概述。 [0030]图14为显示IL-I 0在AMD患者亚群的玻璃体中表达的数据。玻璃体收集自诊断 为湿性AMD、地理型萎缩症（geographic atrophy，GA)的患者或收集自患有黄斑皱裙或黄 斑裂洞的患者。使用ELISA测定来测定细胞因子水平。
[0031]图15为显示在持续曝光（light exposure)后的眼中升高的IL-I |3和胱天蛋白 酶-1表达的数据。（A)中小鼠暴露于恒定光（lSOOLux) 10天，随后取出眼；(B)中从视网膜 分离mRNA，并通过实时PCR测定IL-I 0mRNA水平；和（C)中在裂解缓冲液中将全眼均质化， 并将细胞提取物在SDS凝胶上分离、印迹并用针对鼠类胱天蛋白酶-1的抗体进行染色。
[0032] 图16为显示在IL-I 0感染的眼中IL-I 0原（pro-IL-1 0 )和胱天蛋白酶-1的表 达的数据。将表达成熟鼠类IL-I 0的腺伴随病毒（AAV)视网膜下注射。三周后，将小鼠暴 露于强光（5000Lux) (ILE ;强曝光）下6小时。处理眼1天后用于如图15中描述的IL-I |3 和胱天蛋白酶-1的Western印迹分析。
[0033] 图17为显示在小鼠眼中IL10过表达后升高的炎症和新血管发生的数据。（A)中， 白化小鼠接受视网膜下注射空AAV病毒或表达IL-I 0的病毒。三周后，用FITC溶液注射 小鼠并通过萦光素血管造影术扫描它们的眼。箭指示具有脉络膜新生血管（CNV)的区域。 (B)中，将眼摘出、固定并处理用于石蜡包埋和切片。用针对CD45的抗体对切片染色以显影 浸润免疫细胞（见插图）。在用空AAV载体视网膜下注射的小鼠中没有炎症。
[0034] 图18为显示感染有IL-I 0原的AAV眼显示出不依赖于胱天蛋白酶-1活性的炎 症的数据。如图17所述用AAV-IL-I 0原视网膜下注射胱天蛋白酶-1野生型或ko小鼠。 三周后，如所述摘出眼并处理。炎症发生不依赖于胱天蛋白酶-1活性。
[0035] 图19为显示AAV-ILl 0和AAV-IL-18显著降低暗适应ERG应答的数据。与 用空载体注射的小鼠相比，用AAV-IL-10和AAV-IL-18处理的小鼠的Electro Retino Grams (ERGs)在"a"和"b "波应答中显示出显著降低。
[0036] 图20为IL-10和IL-18在AMD中的生物学的概述，所述IL-10和IL-18用于开 发用于在非人动物（例如，小鼠）中的临床前研宄及用作人研宄的临床试剂的抗IL-10和 抗IL-18的中和抗体。
[0037] 图21为显示用基于ELISA的技术筛选抗IL-I 0中和抗体的方法实例的数据。
[0038] 图22为显示仓鼠抗小鼠IL-I 0杂交瘤亚型的中和活性的ELISA测定。
[0039] 图23为说明仓鼠抗小鼠抗IL-I 0抗体阻断活性的IC50值的表。
[0040] 图24为显示用于测定人和鼠类IL-I 0 /IL-18中和活性的细胞系的数据。
[0041] 图25为显示了（A)在用升高浓度的鼠类IL-10处理的NIH3T3细胞系中NF-kB受 体活性的剂量应答的数据；和（B)含IL-I 0中和Abs的杂交瘤上清液的阻断活性的数据。
[0042] 图26为通过噬菌体技术产生的示例性抗体的概述。筛选了在重链可变区（Vh)或 重链和轻链可变区两者（VhVJ中具有多样性的多种噬菌体展示文库。还筛选了合成文库 (YSGX)和肽文库，所述合成文库是使用富含酪氨酸、丝氨酸和甘氨酸的密码子来产生随机 化CDR的简化遗传密码子文库（Fellouse等，J Mol Biol，373, 924-940)，所述肽文库是设 计用于可能结合特异性肽序列的抗体文库。
[0043] 图27为显示在基于ELISA的中和测定中多种噬菌体抗体的锁定活性的数据。
[0044] 图28为描述示例性的事件顺序的卡通画，所述示例性的事件顺序导致胰脏0细 胞消亡和干扰抗IL-I 0 /IL-18中和抗体的潜在水平的。
[0045] 图29为实施例4中使用的实验方案的概图。
[0046] 图30为展示在吡罗昔康IL-10K0小鼠IBD模型中抗IL-I 0和/或抗IL18处理 的（A)组织学结肠评分结果和（B)视觉结肠评分结果的图形。还显示了 TNF-a阻断的结 果。抗IL-I 0和抗IL18联合治疗与TNF阻断等效。 发明详述
[0047] 本发明提供抗IL-ie和抗IL-18抗体，包括例如抗IL-ie和抗IL-18双特异性抗 体，以及使用此类抗体用于疾病治疗的方法。在一些实施方案中，抗IL-I 0和抗IL-18抗 体为单克隆抗体，并同时或连续地向患者施用用于疾病治疗。在其他实施方案中，抗IL-I 0 和抗IL-18为双特异性抗体并向患者施用用于疾病治疗。疾病实例包括免疫疾病和自身免 疫疾病，并包括炎性肠病（IBD)、年龄相关性黄斑变性（AMD)和2型糖尿病（T2D)。
[0048] 在一些实施方案中，本发明的抗IL-10和抗IL-18抗体阻断或中和IL-10和/ 或IL-18的活性，和/或结合IL-I 0和/或IL-18。
[0049] 此处引用的所有参考包括专利、申请和科学文献均以其整体引入作为参考。 一般技术
[0050] 此处描述或参考的技术和方法一般被本领域技术人员充分理解并经常使用 常规方法学来使用，例如，在 Sambrook 等，Molecular Cloning:A Laboratory Manual 第三片反(2001)Cold Spring Harbor Laboratory Press,Cold Spring Harbor, N. Y.； Current Protocols in Molecular Biology(F.M.Ausubel，等编辑，（2003));系列 Methods in Enzymology (Academic Press，Inc.):PCR 2: A Practical Approach (M. J. MacPherson、B. D. Hames 和 G. R. Taylor 编辑（1995))，Harlow 和 Lane，编辑（1988) Antibodies,A Laboratory Manual, and Animal Cell Culture (R. I. Freshney,编辑 (1987)) ;01igonucleotide Synthesis(M.J. Gait，编辑，1984) ;Methods in Molecular Biology, Humana Press ；Cell Biology: A Laboratory Notebook(J. E. CelIis，编 辑，1998)Academic Press ;Animal Cell Culture(R.I.Freshney)，编辑，1987); Introduction to Cell and Tissue Culture(J. P. Mather 和 R E. Roberts，1998)Plenum Press ；Cell and Tissue Culture: Laboratory Procedures (A. Doyle、J. B. Griff iths 和 D.G. Newell，编辑，1993-8) J. Wiley 和 Sons ;Handbook of Experimental Immunology(D. M. Weir 和 C.C. Blackwell，编辑）；Gene Transfer Vectors for Mammalian Cells (J. M. Miller 和 M.P.Calos，编辑，1987) ;PCR:The Polymerase Chain Reaction，（Mullis 等，编辑，1994) ;Current Protocols in Immunology(J.E. Coligan 等编辑，1991); Short Protocols in Molecular Biology (Wiley 和 Sons，1999) ；Immunobiology (C. A.Janeway 和 P.Travers，1997) ；Antibodies (P. Finch, 1997) ；Antibodies: A Practical Approach(D. Catty?，编辑，IRL Press，1988-1989) ;Monoclonal Antibodies:A Practical Approach (P. Shepherd 和 C.Dean，编辑，Oxford University Press，2000) ;Using Antibodies:A Laboratory Manual (E. Harlow和D.Lane(Cold Spring Harbor Laboratory Press，1999) ;The Antibodies (M. Zanetti 和 J.D. Capra，编辑，Harwood Academic Publishers，1995);和Cancer:Principles and Practice of 0ncology(V.T.DeVita 等编 辑，J.B. Lippincott Company，1993)中描述的广泛使用的方法学D 定义
[0051] 为了解释本说明书的目的，将使用以下定义并在任何适当的时候，以单数使用的 术语也将包括复数并且反之亦然。在下文阐明的任何定义与此处引入作为参考的任何文件 相冲突的情况下，以下文阐明的定义为准。
[0052] 对于此处参考的分子（例如抗体和抗体结合的分子），"活性的"或"活性"指此类 分子的生物学、免疫学和/或功能活性。例如，在一些实施方案中，本发明的抗iL-ie和抗 IL-18抗体为结合IL-I 0和IL-18并因此具有结合活性的双特异性抗体。在另一实施方案 中，本发明的抗IL-I 0和抗IL-18抗体具有中和或阻断活性，即此类抗体可以中和或阻断 IL-10和/或IL-18的活性。
[0053] "affibody"指由肽键连接到Fc区的蛋白质的用途，其中使用所述蛋白质作为 支架来为靶分子提供结合表面。可通过诱变来改变结合表面以产生可以结合其他靶分 子或相同靶分子上的其他表位的蛋白质库。起始蛋白质通常为天然存在蛋白质，如葡萄 球菌蛋白A或IgG结合B结构域或由其衍生的Z蛋白质（参阅Nilsson等（1987)，Prot Eng 1，107-133,和美国专利号5，143,844)或其片段或衍生物。例如，可以从具有对靶 分子改变的结合亲和力的Z蛋白质变体中产生affibody，其中已通过随机诱变对Z蛋 白质的区段进行了突变以产生能够结合靶分子的变体文库。affibody的实例包括美国 专利号 6, 534, 628，Nord K 等，Prot Eng 8:601-608 (1995)和 Nord K 等，Nat Biotech 15:772-777(1997). Biotechnol Appl Biochem. 2008Jun ；50(Pt2):97-112〇
[0054] 此处的术语"抗体"以最广泛意义使用并指无论天然存在或改造的任何免疫球蛋 白（Ig)分子，和其任何片段、突变体、变体或衍生物，只要其展示出所需的生物学活性（例 如表位结合活性）。抗体的实例包括但不限于单克隆抗体、多克隆抗体、多特异性抗体、抗体 片段、单结构域抗体、章鱼抗体和DVD抗体。在一个实施方案中，本发明的抗体包括至少一 个可变结构域。在另一实施方案中，本发明的抗体为双特异性抗体。
[0055] -般而言，根据重链恒定域的氨基酸序列可将免疫球蛋白分为不同类别。已描述 了五个主要类别的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM。这些可进一步分为亚类（同种 型），例如186-1、1 §6-2、1§4-1、1§4-2等。对于1§4、04、6和1对应于每一免疫球蛋白类 别的重链恒定域可分别定义为a、S、e、Y和y。不同类别的免疫球蛋白的亚基结构和 三维构型是公知的并一般描述于，例如Abbas等，2000, Cellular and Mol. Immunology第4 版中。抗体可以是更大的融合分子的部分，所述融合分子由抗体与一个或多个其他蛋白质 或肽共价或非共价连接而形成。
[0056] 在一个实施方案中，本发明的抗体具有减少的（更少的）二硫键。在一个实施方案 中，本发明的抗体包含其中使得至少一个半胱氨酸残基不能形成二硫键的铰链区，其中二 硫键优选为分子间的，优选在两个重链之间。可以以本领域已知的多种合适的方法（此处 描述了其中一些方法，包括但不限于缺失半胱氨酸残基或用另一种氨基酸替代半胱氨酸） 使得铰链半胱氨酸不能形成二硫键。
[0057] 根据上下文，短语"抗IL-I 0抗体和/或抗IL-18抗体/多个抗体"指（1)抗 IL-I 0抗体、或⑵抗IL-18抗体、或（3)抗IL-I 0抗体和抗IL-18抗体的组合（S卩，两种 抗体）、或（4)结合IL-I 0和IL-18的抗体。
[0058] "亲和力成熟的"抗体是指与不具有那些改变的亲本抗体相比，在其一个或多个 CDR中具有使得抗体对抗原亲和力得以改善的一个或多个改变的抗体。优选的亲和力成 熟的抗体会对靶抗原具有纳摩尔级或甚至皮摩尔级的亲和力。通过已知的方法来产生 亲和力成熟的抗体。例如，参阅Marks等，1992,Biotechnology10:779-783,其描述了 通过可变重链（Vh)和可变轻链（VJ结构域改组的亲和力成熟。例如，CDR和/或构架残 基的随机诱变描述于：例如，Barbas,等，1994,Proc. Nat. Acad. Sci, USA91:3809-3813; Shier 等，1995, Gene 169:147-155 ;Yelton 等，1995,J.Immunol. 155:1994-2004 Jackson 等，1995,J.Immunol. 154(7) :3310-9;和 Hawkins 等，1992,J.Mol. Biol. 226:889-896。
[0059]"激动剂抗体"或"激动性抗体"是指结合并活化抗原（如受体）的抗体。一般地， 激动剂抗体的受体活化能力会与受体的天然激动剂配体的受体活化能力至少在质量上类 似（并可能在数量上基本上类似）。
[0060] "抗体片段"指包含完整抗体的部分（优选为完整抗体的抗原结合区或可变 区）的抗体。抗体片段的实例包括Fab、Fab'、F(ab'）2和Fv片段；双体（Db);串联 双体（taDb)、线性抗体（参阅美国专利号5, 641，870,实施例2 ;Zapata等，Protein Eng. 8(10) :1057-1062(1995));单臂抗体、小体（minibody)、单链抗体分子；和从抗体片段 形成的多特异性抗体（例如，包括但不限于Db-Fc、taDb-Fc、taDb-CH3和（scFV)4-Fc)。
[0061] 在一些实施方案中，抗体片段仅包含完整抗体的部分，其中该部分保留当所述部 分存在于完整抗体中时的正常相关功能的至少一种，并可能保留大多数的功能或所有的功 能。在另一实施方案中，本发明的抗体片段包含恒定区的充分部分以允许具有降低的二硫 键能力（例如如此处描述改变了其中正常参与重链间二硫键的至少一个铰链半胱氨酸）的 重链二聚化（或多聚化）。在一实施方案中，抗体片段包含完整抗体的抗原结合位点或可 变域并因此保留结合抗原的能力。在另一实施方案中，抗体片段，例如包含Fc区的抗体片 段，保留了当Fc区存在于完整抗体中时与Fc区正常相关的至少一种生物学功能，如FcRn 结合、抗体半衰期调整、ADCC功能、和/或补体结合（例如，其中抗体具有对ADCC功能或补 体结合必需的糖基化谱）。抗体片段的实例包括但不限于线性抗体；单链抗体分子；和从抗 体片段形成的多特异性抗体。
[0062] "抗体依赖的细胞介导的细胞毒性"和"ADCC"指细胞介导的反应，其中表达FcR 的非特异性细胞毒性细胞（如自然杀伤（NK)细胞、嗜中性粒细胞和巨噬细胞）识别靶细 胞上的结合抗体并随后导致靶细胞裂解。介导ADCC的主要细胞NK细胞仅表达FeYRIII， 而单核细胞表达FeyRI、FeyRII和FeyRIII。造血细胞上FcR的表达概述于Ravetch 等，1991，Annu. Rev. Immunol9:457-92的第464页的表3。为了评估目标分子的ADCC活 性，可进行如美国专利号5, 500, 362或5, 821，337中描述的体外ADCC测定。对于此类测定 有用的效应细胞包括外周血单核细胞（PBMC)和自然杀伤（NK)细胞。或者，或此外，可在体 内例如在如Clynes等，1998,PNAS(USA)95:652-656中公开的动物模型中评估目标分子的 ADCC活性。
[0063] 术语"抗IL-I0抗体"和"结合IL-I0的抗体"指这样的抗体，所述抗体能够以 足够的亲和力结合IL-I0从而使抗体用作为靶定IL-I0的诊断剂和/或治疗剂。在一个 实施方案中，例如通过放射免疫测定法（RIA)所测定，抗IL-I0抗体对不相关的非IL-I0 蛋白质的结合程度低于抗体对IL-I0结合的约10%。在某些实施方案中，抗IL-I0抗体 结合在来自不同物种的IL-I0间保守的IL-I0的表位。
[0064] 术语"抗IL-18"抗体和"结合IL-18的抗体"指这样的抗体，所述抗体能够以足够 的亲和力结合IL-18从而使抗体用作为靶定IL-18的诊断剂和/或治疗剂。在一个实施方 案中，例如通过放射免疫测定法（RIA)所测定，抗IL-18抗体对不相关的非IL-18蛋白质的 结合程度低于抗体对IL-18结合的约10%。在某些实施方案中，抗IL-18抗体结合在来自 不同物种的IL-18间保守的IL-18的表位。
[0065] 此处所用"自身免疫疾病"为源自并指向个体自身组织的非恶性疾病或病症。此处 描述的自身免疫疾病明确排除恶性或癌性疾病或状况，尤其排除B细胞淋巴瘤、急性淋巴 细胞性白血病（ALL)、慢性淋巴细胞性白血病（CLL)、多毛细胞白血病和慢性原始粒细胞性 白血病。自身免疫疾病或病症的实例包括但不限于年龄相关性黄斑变性（AMD)、炎症应答如 包括银肩病和皮炎（例如特应性皮炎）在内的炎症性皮肤病；全身性硬皮病和硬化症；与 炎性肠病（如局限性回肠炎和溃疡性结肠炎）相关的应答；呼吸窘迫综合征（包括成人呼 吸窘迫综合征；ARDS);皮炎；脑膜炎；脑炎；眼色素层炎；结肠炎；肾小球肾炎；过敏性状况 如湿瘆和哮喘和涉及T细胞浸润及慢性炎症应答的其他状况；动脉粥样硬化；白细胞粘附 缺陷；类风湿性关节炎；系统性红斑狼疮（SLE);狼疮肾炎（LN);糖尿病（例如I型糖尿病 或胰岛素依赖型糖尿病）；多发性硬化；Reynaud氏综合征；自身免疫性甲状腺炎；变应性 脑脊髓炎；Sjorgen氏综合征；幼年型糖尿病；及与急性和迟发性超敏感性（由通常发现于 结核病、结节病、多发性肌炎、肉芽肿病和血管炎中的细胞因子和T淋巴细胞介导）相关的 免疫应答；恶性贫血（艾迪生病）；涉及白细胞渗出的疾病；中枢神经系统（CNS)炎性病症； 多器官损伤综合征；溶血性贫血（包括但不限于cryoglobinemia或Coombs阳性贫血）；重 症肌无力；抗原抗体复合物介导的疾病；抗肾小球基底膜疾病；抗磷脂综合征；过敏性神经 炎；格雷夫斯病；Lambert-Eaton肌无力综合征；类天疱疮大疱；大疱性天疱疮；自身免疫 性多内分泌病；莱特病；硬汉综合征；贝赫切特病；巨细胞性动脉炎；免疫复合物肾炎；IgA 肾病；IgM多发性神经病；免疫性血小板减少性紫癜（ITP)或自身免疫性血小板减少症等。
[0066] AMD在老年人中是严重不可逆的视力丧失的主导原因（例如参阅Bressler(2004) JAMA291:1900-01)。其特征在于广谱的临床和病理学发现，包括公知为玻璃疣的苍白黄 斑、视网膜色素上皮细胞（RPE)的破裂、脉络膜新生血管形成（CNV)和盘状黄斑变性。该 疾病的表现可分为两种形式：非渗出性（干燥的）和渗出性（湿性的或新生血管的）。 最近，用于治疗湿性AMD的几种疗法已被批准一使用维替泊芬(Visudyne?)的光动力 学疗法；VEGF结合适体，pegaptantib(Macugen?);和抗VEGF抗体片段，雷珠单抗 (ranibizumab) (Lucentis?)。
[0067] 此处所用的"自身炎症疾病"指共有相似特征，具体为发热的一组罕见的遗传免 疫介导的病症。自身炎症疾病特征为不存在高滴度的自身抗体、感染或抗原特异T淋巴 细胞情况下的再发性无刺激性炎症。示例性自身炎症疾病包括但不限于家族性地中海热 (FMF);肿瘤坏死因子（TNF)受体相关周期热综合征（TRAPS);高免疫球蛋白血症D和周期 热综合征（HIDS);全身发病少年原发性关节炎（斯提耳病）；cryopyrin相关周期性综合征 (CAPS);家族感冒自身炎症综合征（familial cold autoinflammatory syndrome);穆-韦 二氏综合征；白介素-1受体拮抗剂缺乏（DIRA);和新生儿发病多系统炎症疾病（NOMID)/ 慢性婴儿神经学皮肤和关节（CINCA)综合征。
[0068] 自身免疫和自身炎症疾病具有共同的特征，所述特征在于两组病症由免疫系统攻 击身体自身组织所致，并还导致增加的炎症。两者间的区别特征为自身炎症疾病中缺乏 (高滴度）自身抗体。
[0069] "生物学活性的"或"功能性的"免疫球蛋白为能够在结构、调控、生物化学或生物 物理事件中发挥一种或多种其天然活性的免疫球蛋白。例如，生物学活性的抗体可具有特 异结合抗原的能力并且该结合可诱导或改变细胞学或分子事件如信号转导或酶活性。生物 学活性的抗体还可阻断受体的配体活化或以激动剂抗体作用。抗体发挥一种或多种其天然 活性的能力依赖于几个因素，包括多肽链正确的折叠和装配。
[0070] "结合亲和力"一般指分子（例如，抗体）的单一结合位点与其结合配偶体（例如， 抗原）间非共价相互作用的总和的强度。分子X对其配偶体Y的亲和力一般以解离常数 (Kd)代表。可通过本领域公知的普通方法，包括此处描述的那些方法来测定亲和力。低亲 和力抗体微弱地结合抗原并趋于容易解离，而高亲和力抗体结合抗原更为紧密并保持结合 更为长久。
[0071] "生物分子"指核酸、蛋白质、碳水化合物、脂质及其组合物。在一个实施方案中，生 物分子存在于自然界中。
[0072] "阻断"抗体或"拮抗剂"抗体是抑制或降低它结合的抗原的生物学活性的一种抗 体。此类阻断可通过任何方法而发生，例如通过干扰：配体与受体的结合、受体复合物形成、 受体复合物中酪氨酸激酶受体的酪氨酸激酶活性和/或受体中酪氨酸激酶残基的磷酸化 或由受体磷酸化的酪氨酸激酶残基。优选的阻断抗体或拮抗剂抗体基本上或完全抑制抗原 的生物学活性。
[0073] 术语"癌症"和"癌的"指或描述哺乳动物中的生理状况，所述生理状况的典型特征 为不受调控的细胞生长。癌症的实例包括但不限于癌、淋巴瘤、母细胞瘤、肉瘤和白血病。此 类癌症的更具体实例包括鳞状细胞癌、小细胞肺癌、非小细胞肺癌、肺部腺癌、肺部鳞状细 胞癌、腹膜癌、肝细胞癌、胃肠癌、胰腺癌、成胶质细胞瘤、宫颈癌、卵巢癌、肝癌、膀胱癌、肝 细胞瘤、乳腺癌、结肠癌、结肠直肠癌、子宫内膜或子宫癌、唾液腺癌、肾癌、肝癌、前列腺癌、 外阴癌、甲状腺癌、肝癌和多种类型的头与颈癌。
[0074] 术语"嵌合的"抗体指这样的抗体以及此类抗体的片段（只要它们展示出所需的 生物学活性），所述抗体中部分重和/或轻链与来自特定物种的或属于特定抗体类或亚类 的抗体中的对应序列相同或同源，而所述链的其余部分与来自另外物种的或属于另外抗 体类或亚类的抗体中的对应序列相同或同源（例如见美国专利号4, 816, 567和Morrison 等，1984, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 81:6851-6855) 〇
[0075] 如此处所用，表述"细胞"、"细胞系"和"细胞培养物"可互换使用并且所有此类指 示均包括后代。因此，单词"转化体"和"转化细胞"包括原代个体细胞以及从中产生的与 转移数无关的培养物。还应理解由于有意的或无意的突变，所有后代可能在DNA含量上不 能精确一致。包括了具有与如针对原始转化细胞所筛选的功能或生物学活性相同的功能或 生物学活性的突变体后代。当需要明确的指示时，从上下文中可以明确确定。
[0076] 表述"控制序列"指在特定宿主生物中表达有效连接的编码序列必需的DNA序列。 适合于原核生物的控制序列例如包括启动子、任选的操纵子序列、以及核糖体结合位点。已 知真核细胞利用启动子、多腺苷酸化信号、以及增强子。
[0077] 此处所用的"糖尿病"是动物中影响碳水化合物、脂肪和蛋白质代谢的慢性病症。 糖尿病是成年人中失明、肾衰竭和下肢截肢的主导原因并且是心血管疾病和中风的主要风 险因素。I型糖尿病（或胰岛素依赖型糖尿病（"IDDM")或幼年型糖尿病）占所有糖尿病情 况中的约10%。该疾病特征在于胰腺e细胞的胰岛素分泌功能的进行性丧失。该特征还 被其起源在于胰脏疾病中的非原发性、或"次级"糖尿病所共有。I型糖尿病与以下临床体 征或症状相关，例如持续性升高的血糖浓度或高血糖；多尿；烦渴和/或饮食过量；慢性微 血管并发症如视网膜病、肾病和神经病；以及大血管并发症如可导致失明、肾终末期疾病、 截肢和心肌梗塞的高脂血症和高血压。
[0078] II型糖尿病（非胰岛素依赖性糖尿病或NIDDM)是涉及葡萄糖代谢失调和受损的 胰岛素敏感性的代谢病症。II型糖尿病一般在成人期发生并且与身体无法利用或产生足量 胰岛素相关。除了在靶定组织中观察到的胰岛素抵抗之外，患有II型糖尿病的患者具有相 对的胰岛素缺乏一一即，对于给定的血糖浓度患者具有低于预期的胰岛素水平。II型糖尿 病特征在于以下临床体征或症状，例如持续性升高的血糖浓度或高血糖；多尿；烦渴和/或 饮食过量；慢性微血管并发症如视网膜病、肾病和神经病；以及大血管并发症如可导致失 明、肾终末期疾病、截肢和心肌梗塞的高脂血症和高血压。X综合征，也称为胰岛素抵抗综合 征（IRS)、代谢综合征或代谢综合征X，在约2%的诊断冠状导管插入术中被意识到。尽管经 常不是，但它代表了发生II型糖尿病和心血管疾病的综合征或风险因素，包括例如葡萄糖 耐量异常（IGT)、禁食葡萄糖量降低（IFG)、高胰岛素血症、胰岛素抵抗、异常脂血症（例如 高甘油三酯、低HDL)、高血压和肥胖症。
[0079] "病症"是会从用治疗性抗体或多个抗体治疗中获益的任何状况。这包括慢性和 急性病症或疾病，所述病症或疾病包括使哺乳动物易于产生所讨论的病症的那些病理学状 况。在一些实施方案中，所述病症为癌、炎症、免疫、自身炎症或自身免疫疾病。
[0080] 此处将"胞外域"定义为跨膜多肽的在细胞外部的区域，如FcR。
[0081] 术语"Fc受体"或"FcR"用于描述结合抗体的Fe区的受体。
[0082] 此处术语"Fc区"用于定义免疫球蛋白重链的C末端区，包括天然序列Fe区和变 体Fe区。在一个实施方案中，Fe区包含CH2结构域和/或CH3结构域。尽管免疫球蛋白重 链的Fe区的边界可能变化，但人IgG重链Fe区一般定义为从Cys226或从Pr 〇230位的氨 基酸残基至其羧基端的一段。例如在抗体产生或纯化过程中，或通过对编码抗体重链的核 酸进行重组改造去除Fe区的C末端赖氨酸（根据EU编号系统为残基447)。因此，完整抗 体的组合物可包含去除所有K447残基的抗体群、不去除K447残基的抗体群、和具有含有或 不含有K447残基的抗体混合物的抗体群。此处所用的"Fc复合物"指两个CH2结构域和/ 或两个CH3结构域，其中CH2结构域和/或CH3结构域通过非肽键的相互作用而连接到一 起。
[0083] "构架区"（FR)指除⑶R残基之外的那些可变域残基。每一 IgG可变域通常具有 四个FR，鉴定为FR1、FR2、FR3和FR4。如果根据Kabat定义CDR，轻链FR残基位于大约残 基 1-23 (LCFRl)、35-49 (LCFR2)、57-88 (LCFR3)和 98-107 (LCFR4)，而重链 FR 残基位于重 链残基中的大约残基 1-30(HCFR1)、36-49(HCFR2)、66-94(HCFR3)和 103-113(HCFR4)。如 果⑶R包含来自高变环的氨基酸残基，轻链FR残基位于轻链中的大约残基1-25 (LCFRl)、 33-49 (LCFR2)、53-90 (LCFR3)和97-107 (LCFR4)，而重链FR残基位于重链残基中的大约残 基 1-25 (HCFRI)、33-52 (HCFR2)、56-95 (HCFR3)和 102-113 (HCFR4)。在一些情况下，当 CDR 包含来自如Kabat定义的CDR以及高变环的氨基酸时，FR残基将相应调整。例如，当CDRHl 包含氨基酸H26-H35时，重链FRl残基在1-25位而FR2残基在36-49位。
[0084] "功能性Fe区"具有天然序列Fe区的"效应子功能"。示例性的"效应子功能"包括 Clq结合；补体依赖细胞毒性；Fe受体结合；抗体依赖细胞介导的细胞毒性（ADCC);吞噬作 用；细胞表面受体（如B细胞受体；BCR)的下调等。此类效应子功能一般需要Fe区与结合 域（如抗体可变域）组合并且可使用多种测定法评估，例如本文中公开的测定法。"天然序 列Fe区"包含与自然中发现的Fe区的氨基酸序列相同的氨基酸序列。天然序列人Fe区包 含天然序列人IgGlFc区（非A和A同种异型）；天然序列人IgG2Fc区；天然序列人IgG3Fc 区；和天然序列人IgG4Fc区以及其天然发生的变体。"变体Fe区"包含由于此处定义的至 少一处"氨基酸修饰"而与天然序列Fe区不同的氨基酸序列。变体Fe区与天然序列Fe区 或亲本抗体的Fe区相比可以具有至少一处氨基酸替换，并可以例如在天然序列Fe区或亲 本抗体的Fe区中具有从一处至约十处氨基酸替换或从约一处至约五处氨基酸替换。变体 Fe区可具有与天然序列Fe区和/或亲本抗体的Fe区至少约80 %的同一性，并且可以与其 具有至少约90%的同一性，或与其具有至少约95%的同一性。
[0085] 术语"全长抗体"、"完整抗体"和"全部抗体"在此处互换使用，用于指以其基本上 完整的形式存在的抗体，而不是下文定义的抗体片段。该术语尤其指具有重链和Fe区的抗 体。本发明的抗体变体例如可以是全长抗体。而且，全长抗体例如可以是人的、人源化的、 嵌合的和/或亲和力成熟的。
[0086] 此处所用的"铰链区"及其变化形式包括本领域已知的涵义，其被图示于例如 Janeway等，1999,Immuno Biology:The Immune System in Health and Disease, Elsevier Science Ltd.，NY?第 4 版；Bloom 等，1997，Protein Science，6:407_415;Humphreys 等，1997, J. Immunol. Methods, 209:193-202。
[0087] "同源性"定义为在比对序列并引入空位（如需要，以获得最大的百分比同源性） 之后，氨基酸序列变体中相同的残基的百分比。用于比对的方法和计算机程序在本领域是 公知的。一个此类计算机程序为"Align 2,"作者为Genentech, Inc.并与用户文件于1991 年12月10日一同提交于位于华盛顿哥伦比亚特区的美国国家版权局（United States Copyright Office, Washington, D. C. 20559)〇
[0088] 如此处所用术语"宿主细胞"（或"重组宿主细胞"）指通过引入外源多核苷酸如重 组质粒或载体已经被遗传改变的或能够被遗传改变的细胞。应当理解此类术语旨在不仅仅 指特定的个体细胞，还指该细胞的后代。因为由于突变或环境影响而在后代中可能发生某 些修饰，所以此类后代事实上可能与亲代细胞不完全相同，但仍包括于此处所用的术语"宿 主细胞"的范围之内。
[0089] "人共有构架"是在选择的人免疫球蛋白 '或Vh构架序列中代表最经常出现的氨 基酸残基的构架。一般而言，从可变域序列的亚群中选择人免疫球蛋白序列。一般 而言，序列亚群是如Kabat中的亚群。在一个实施方案中，对于'，亚群是如Kabat中的亚 群kappa I。在一个实施方案中，对于Vh，亚群是如Kabat中的亚群III。
[0090] 当提及可变域中的残基（轻链的大约残基1-107和重链的残基1-113)时，一 般使用 Kabat 编号系统（例如 Kabat 等，Sequences of Immunological Interest?第 5 版.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, Md. (1991))〇当 提及免疫球蛋白重链恒定区中的残基时，一般使用"EU编号系统"或"EU索引"（例如报告 于Kabat等中的EU索引，上文）。"如Kabat中的EU索引"指人IgGlEU抗体的残基编号。 除非此处另有所指，抗体可变域中残基编号的参考指Kabat编号系统的残基编号。除非此 处另有所指，抗体恒定域中残基编号的参考指EU编号系统的残基编号（例如参阅美国临时 申请号60/640, 323, EU编号的图）。
[0091] 天然发生的基础4-链抗体单元是由两条相同的轻（L)链和两条相同的重（H)链 组成的异四聚糖蛋白（IgM抗体由5个基础异四聚体单元与称为J链的额外多肽组成，并由 此含有10个抗原结合位点，而分泌的IgA抗体可以多聚化以形成含有2-5个基础4-链单元 与J链的多价装配物）。在IgG的情况中，4-链单元一般约为150, 000道尔顿。每个L链 通过一个共价二硫键与H链连接，而两个H链根据H链同种型通过一个或多个二硫键彼此 连接。每个H和L链还具有规则间隔的链内二硫键。每个H链在N末端具有可变域（V h)， 对于每个a和Y链而言其后具有三个恒定域（Ch)，而对于y和e同种型而言其后具有 四个Ch结构域。每个L链在N末端具有可变域（V J，随后在其另一末端具有恒定域（Q)。 八与Vh对齐，而C ^与重链的第一个恒定域（ChI)对齐。相信特定氨基酸残基形成轻链和重 链可变域之间的界面。％与^的配对一起形成了单一抗原结合位点。对于不同类型抗体的 结构和性质，参阅例如，Basic and Clinical Immunology,第 8版，Daniel P. Stites, Abba I.Terr and Tristram G. Parslow(编辑），Appleton&Lange, Norwalk, CT, 1994，第71 页和 第6章。
[0092] 根据其恒定域的氨基酸序列可将来自任何脊椎动物物种的L链归为称作K和入 的两种完全不同类型之一。根据其重链（Ch)恒定域的氨基酸序列，可将免疫球蛋白归为不 同的种类或同种型。存在五类免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，分别具有称为a、S、 Y、 e和^的重链。基于<^序列和功能上的相对微小差异，可将Y和a类进一步分为亚 类，例如人表达以下亚类：IgGl、IgG2、IgG3、IgG4、IgAl和IgA2。
[0093] "人效应子细胞"指表达一种或多种FcR并行使效应子作用的白细胞。在一些实 施方案中，细胞表达至少Fe Y RIII并行使ADCC效应子作用。介导ADCC的人白细胞的实例 包括外周血单核细胞（PBMC)、自然杀伤（NK)细胞、单核细胞、细胞毒素T细胞和嗜中性粒 细胞。可以如此处描述从天然来源例如从血液或PBMC(外周血单核细胞）中分离效应子细 胞。
[0094] 非人（例如，鼠类的）抗体的"人源化的"形式是含有来自非人免疫球蛋白最小 序列的嵌合抗体。对于大多数部分，人源化抗体是人免疫球蛋白（受体抗体），其中来自受 体的高变区的残基由非人物种（供体抗体）如具有想要的特异性、亲和力和能力的小鼠、 大鼠、兔或非人灵长类的高变区的残基所替代。在一些情况下，人免疫球蛋白的Fv构架区 (FR)残基由相应的非人残基所替代。此外，人源化抗体可包含在受体抗体或在供体抗体 中未发现的残基。进行这些修饰以进一步改进抗体性能。一般而言，人源化的抗体会包含 至少一个、和通常两个可变域的基本上所有部分，其中所有或基本上所有的高变环对应于 非人免疫球蛋白的那些高变环并且所有或基本上所有的FR区为人免疫球蛋白序列的那些 FR区。人源化抗体任选还会包含至少部分免疫球蛋白恒定区（Fe)，通常为人免疫球蛋白 的恒定区。其他细节参阅 Jones 等，Nature 321:522-525(1986) ;Riechmann 等，Nature 332:323-329(1988);和 Presta, Curr. Op. Struct. Biol. 2:593-596 (1992)。
[0095] "人抗体"是这样的抗体，所述抗体具有对应于由人产生的抗体的氨基酸序列和/ 或已使用用于产生此处公开的人抗体的任何技术来制备。该定义明确排除了含非人抗原结 合残基的人源化抗体。
[0096] 如此处所用，术语"高血糖病症"指所有形式的糖尿病及由胰岛素抵抗导致的病 症，如I型和II型糖尿病，以及严重胰岛素抵抗、高胰岛素血症、和高脂血症、如肥胖受试 者，及胰岛素抵抗性糖尿病，如Mendenhall氏综合征、Werner综合征、矮妖精貌综合征、月旨 肪缺乏性糖尿病和其他脂肪萎缩。此处公开的特定高血糖病症是糖尿病，尤其是I型和II 型糖尿病。"糖尿病"本身指涉及胰岛素产生或利用不充足的碳水化合物代谢的进行性疾病 并且特征在于高血糖和糖尿。
[0097] 当在此处使用时，术语"高变区"、"HVR"或"HV"指在序列上高变的和/或形 成结构上确定的环的抗体可变域的区域。一般而言，抗体包含六个HVR ;三个在Vh(H1、 H2、H3)中，三个在'(L1、L2、L3)中。在天然抗体中，H3和L3展示出六个HVR的最 大的多样性，并且尤其认为H3在赋予抗体精细特异性上起了独特的作用。例如参阅 Xu 等，Immunity 13:37-45(2000) ;Johnson 和 Wu，Methods in Molecular Biology 248:1-25 中（Lo，ed.，Human Press，Totowa，NJ，2003)。然而，存在许多仅具有重链而缺 少轻链的天然存在的和改造的功能抗体的实例。例如参阅Hamers-Casterman等，Nature 363:446-448 (1993) ;Sheriff 等，Nature Struct. Biol. 3:733-736 (1996) 〇
[0098] 许多HVR描述正在使用中并包含于此此处。Kabat互补决定区（⑶R)基于序列变 异性并且是最常用的（Kabat等，Sequences of Proteins of Immunological Interest,第 5版.Public Health Service, National Institutes of Health, Bethesda, MD. (1991))〇 Chothia 则指结构环的位置（Chothia 和 Lesk J. Mol. Biol. 196:901-917(1987))。AbM HVR 代表了 Kabat HVR和Chothia结构环间的折衷，并由Oxford Molecular's AbM抗体建模软 件所使用。"接触(contact) " HVR基于对可获得的复合物晶体结构的分析。来自这些HVR 中的每一个的残基显示在下文。
【权利要求】
1. 在患者中治疗疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的： a. IL-1 0 /IL-18双特异性抗体；或 b. 结合IL-1 0和IL-18活性的抗体；或 c. 结合IL-1 0的抗体和结合IL-18的抗体； 其中部分a、b或c的所述抗体能够在细胞或组织中中和或阻断IL-1 0和IL-18活性。
2. 权利要求1的方法，其中所述抗体是人源化的。
3. 权利要求1的方法，其中部分（b)的所述抗体是双功能抗体。
4. 权利要求1的方法，其中部分（c)的至少一种抗体是单克隆的。
5. 权利要求1的方法，其中部分（c)的每个抗体是单克隆的。
6. 权利要求1的方法，其中部分（c)的所述抗体同时或连续施用。
7. 权利要求6的方法，其中所述抗体在1小时内施用。
8. 权利要求1的方法，其中所述疾病是免疫疾病或自身免疫疾病或炎症或自身炎症疾 病。
9. 权利要求1的方法，其中所述疾病是炎症小体介导的疾病。
10. 权利要求1的方法，其中所述疾病是IL-1 0相关疾病。
11. 权利要求1的方法，其中所述疾病是IL-18相关疾病。
12. 权利要求1的方法，其中所述疾病是IL-1 0 /IL-18相关疾病。
13. 权利要求8的方法，其中所述疾病是年龄相关性黄斑变性（AMD)。
14. 权利要求8的方法，其中所述疾病是2型糖尿病（T2D)。
15. 权利要求8的方法，其中所述疾病是炎性肠病（IBD)。
16. 权利要求15的方法，其中所述IBD是局限性回肠炎（CD)。
17. 权利要求15的方法，其中所述IBD是溃疡性结肠炎（UC)。
18. 权利要求1的方法，其中所述患者对抗TNF治疗未产生应答。
19. 在患者中治疗疾病的方法，所述方法包括向所述患者施用有效量的结合IL-113的 单克隆抗体和结合IL-18的单克隆抗体。
20. 在细胞或组织中中和或阻断IL-1 0和/或IL-18活性的方法，所述方法包括使所 述细胞或组织与结合IL-1 0的单克隆抗体和结合IL-18的单克隆抗体接触，并由此中和或 阻断所述活性。
21. 权利要求19的方法，其中结合IL-1 0的所述单克隆抗体和结合IL-18的所述单克 隆抗体同时或连续施用。
22. 权利要求20的方法，其中所述细胞同时或连续与结合IL-1 0的所述单克隆抗体和 结合IL-18的所述单克隆抗体接触。
23. 中和或阻断IL-1 0和IL-18活性的抗体。
24. 权利要求1的抗体，其中所述抗体是双特异性抗体。
25. 权利要求1的抗体，其中所述抗体是人源化的。
26. 权利要求1的抗体，其中所述抗体结合IL-1 0和IL-18。
【文档编号】C07K16/24GK104474546SQ201410753624
【公开日】2015年4月1日 申请日期:2011年8月12日 优先权日:2010年8月13日
【发明者】M·范路克伦康佩齐 申请人:弗·哈夫曼-拉罗切有限公司